Клонирование автономно реплицирующихся последовательностей ДНК генома человека
Клонированы фрагменты суммарной ДНК генома человека из лейкоцитов и клеток плаценты, способные обеспечивать автономное состояние клонирующего вектора pYF40 (в который они заключались) в Saccharomyces cerevisiae. Получены два фрагмента соответствующих молекулярных масс: 6,5 (из лейкоцитов) и 3,4 тыс....
Saved in:
| Published in: | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Date: | 1994 |
| Main Authors: | , , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1994
|
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155403 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Клонирование автономно реплицирующихся последовательностей ДНК генома человека / Е.С. Федоренко, Д.М. Иродов, Л.И. Лихачева, С.М. Подольская, В.А. Кордюм // Биополимеры и клетка. — 1994. — Т. 10, № 3-4. — С. 93-99. — Бібліогр.: 19 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859645873285234688 |
|---|---|
| author | Федоренко, Е.С. Иродов, Д.М. Лихачева, Л.И. Подольская, С.М. Кордюм, В.А. |
| author_facet | Федоренко, Е.С. Иродов, Д.М. Лихачева, Л.И. Подольская, С.М. Кордюм, В.А. |
| citation_txt | Клонирование автономно реплицирующихся последовательностей ДНК генома человека / Е.С. Федоренко, Д.М. Иродов, Л.И. Лихачева, С.М. Подольская, В.А. Кордюм // Биополимеры и клетка. — 1994. — Т. 10, № 3-4. — С. 93-99. — Бібліогр.: 19 назв. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Биополимеры и клетка |
| description | Клонированы фрагменты суммарной ДНК генома человека из лейкоцитов и клеток плаценты, способные обеспечивать автономное состояние клонирующего вектора pYF40 (в который они заключались) в Saccharomyces cerevisiae. Получены два фрагмента соответствующих молекулярных масс: 6,5 (из лейкоцитов) и 3,4 тыс. п. н. (из клеток плаценты), обладающие высокой трансформирующей способностью в пекарских дрожжах (10²–10³ трансформантов на 10 мкг плазмидной ДНК). Выявлена продолжительная экспрессия гена аро-А1 человека в составе экстрахромосомных рекомбинантных ДНК, содержащих клонированные автономно реплицирующиеся АР-последовательности в культуре клеток.
Клоновано фрагменти сумарної ДНК геному людини iз лейкоцитів i клітин плаценту здатні забезпечувати автономний стан клонуючого вектора pYF40 (у який ix вміщено) в Saccharomyces cerevisiae. Отримано два фрагменти відповідних молекуляриних мас 6,5 (iз лейкоцитів) i 3,4 тис. п. н. (iз клітин плаценти), яким притаманна висока трансформуюча здатність у пекарських дріжджах (10²–10³ трансформантів на 10 мкг плазмщної ДНК). Виявлено продовжену експреаю гена аро~А1 людини у складі екстрахромосомних рекомбінантих ДНК, що міетять клоновані АР-послідовності, які автономно реплікуються.
In this study we cloned two fragments of total DNA of human genome from leukocytes and placental cells, which capable provide of autonomously state of pYF40 cloning vector (in which there was consisted) in Sacch. cerevisiae. The obtained fragments have in l ength: 6,5 (from leukocyte) and 3,4 kb (from placental cells), respectively. This fragments can provide high transformation in yeast (10²–10³) transformants (10 ng plasmid DNA). We have obtained long expression of apo-Al human gene carried by extrachromosomal recombinant DNA, which contain cloned ARSs (autonomously replications sequences).
|
| first_indexed | 2025-12-07T13:28:15Z |
| format | Article |
| fulltext |
УДК 577.218
Е. С. Федоренко, Д. М. Иродов,
Л. И. Лихачева, С. М. Подольская, В. А. Кордюм
КЛОНИРОВАНИЕ АВТОНОМНО РЕПЛИЦИРУЮЩИХСЯ
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ ДНК ГЕНОМА ЧЕЛОВЕКА
Клонированы фрагменты суммарной ДНК генома человека из лейкоцитов и клеток
плаценты, способные обеспечивать автономное состояние клонирующего вектора pYF40
(в который они заключались) в Saccharomyces cerevisiae. Получены два фрагмента
соответствующих молекулярных масс: 6,5 (из лейкоцитов) и 3,4 тыс. п. н. (из клеток
плаценты), обладающие высокой трансформирующей способностью в пекарских дрож
жах (Ю1—103 трансформантов на 10 мкг плазмидной ДНК). Выявлена продолжитель
ная экспрессия гена аро-А1 человека в составе экстрахромосомных рекомбинантных
ДНК, содержащих клонированные автономно реплицирующиеся АР-последовательности
в культуре клеток.
Введение. Для создания бифункциональных векторных систем исполь
зуется широкий спектр вирусов, обеспечивающих интеграцию в хромо
сому, клонирование и экспрессию чужеродных последовательностей
ДНК в клетках животных [1, 2]. Единственным, но существенным не
достатком этого подхода является относительная неспецифическая ин
теграция вирусных последовательностей в хромосому и связанная с
ней опасность онкогенной трансформации клеток-мишеней [3—5]. Для
предотвращения онкогенного эффекта, опосредованного вирусными по
следовательностями, предлагается применение автономных векторных
систем, не содержащих вирусной ДНК. Внехромосомная транскрипция
маркерных генов в этих векторах осуществима лишь при их независи
мой от хромосомы репликации [6—8]. С помощью автономной экс
прессии вводимого чужеродного генетического материала открывает
ся принципиальная возможность создания молекулярных конструкций
с заданным временем жизни. Важной особенностью репликативных
векторов является их универсальность, т. е. пригодность для решения
широкого круга задач, в том числе и для попыток блокирования ВИЧ-
инфекции генноинженерными методами. Как следует из независимых
публикаций, репликация у АР-последовательностей характеризуется
низкой видовой специфичностью [9—11]. Чаще всего АР-последова-
тельности одних эукариот способны к репликации в других, что помо
гает при их поиске. Из литературы известна возможность получения
последовательностей, автономно реплицирующихся как в дрожжах,
так и в клетках млекопитающих. В представленной работе клониро
ваны АР-последовательности генома человека, обеспечивающие авто
номную репликацию рекомбинантных ДНК в дрожжах и в культуре
клеток человека.
Материалы и методы. Ш т а м м ы . П л а з м и д ы . Условия куль
тивирования. В работе использовали дефектный по рекомбинации бак
териальный штамм Escherichia coll DH1 (F~, rec Al, end Al, gur A96,
thi-1, Sup E44, A,~), а также ауксотрофный по лейцину и гистидину
штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae LL-20 (Leu2-3; Leu2-112;
His3-15; His3-ll). Для наработки биомассы клетки Е. coli культивиро
вали в среде на основе аминопептида (завод медпрепаратов, Санкт-
Петербург) [12]. Дрожжи выращивали в полноценной питательной
€•' Е. С. ФЕДОРЕНКО, Д. М. ИРОДОВ, Л. И. ЛИХАЧЕВА, С. М. ПОДОЛЬСКАЯ,
В. Д. КОРДЮМ, 1994
ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 3—4 93
среде YPD (1,5 %-й пептон, 1 %-й дрожжевой экстракт, 2 %-я глюко
за), для селекции трансформантов использовали среду (Yeast nitrogen
base, «Difco», USA; 2 %-я глюкоза, 20 мкг/мл триптофана и 20 мкг/мл
метионина) с добавлением аминокислот лейцина и гистидина
(20 мкг/мл). Твердые среды содержали дополнительно 1,5 %-й агар-
агар для Е. coli и 2 %-й — для S. cerevisiae. Клетки 5. cerevisiae транс
формировали с помощью ацетата лития [13]. В работе использована
культура перевиваемых фибробластов человека. Трансфекцию осу
ществляли методом кальциево-фосфатной преципитации, клетки после
Рис. 1. Физическая карта плазмиды pYE92. Плазм,ид,а состоит из вектора pBR322 по
EcoRI-саяту которого ©строена 2 мкм ДНК дрожжей, являющаяся автономным ,региш-
коном. По BamHl-сшту находится маркерный ген /us3.
Рис. 2. Физическая карта плазмиды pYF40 — производной плазмиды pYF92 с удален
ной 2 м.км ДНК
Рис. З. Физическая карта плазмиды pV073, которая является производной плазмиды
pUC18 с делетироваеным районом «ядовитых» последовательностей ~600 \п. «. и с
пнактивированным /acZ-геном
Рис. 4. Физическая карта плазмиды рА401—производной плазмиды pUC18, в полилин
кере кото-рой клонированы: по EcoRI-сайту — репликой генома кукурузы (~1,2 тыс.
п. «.), по BamH 1-сайту Л/и-фрагмент (300 п. н.) и по Pstl-tcaury — ген белка АроА!
инкубации снимали с матрасов 0,2 %-м раствором Версена [14], плаз-
мидную ДНК выделяли с помощью щелочного лизиса и фенол-хлоро
формной экстракцией. Для конструирования клонирующего вектора
применяли дрожжевой репликативный вектор pYF92 на основе плаз
миды pBR322, содержащий омикронную ДНК и полученный из Ин-та
биохимии и физиологии микроорганизмов АН РФ (рис. 1). Клониру
ющий вектор pYF40 получен удалением последовательности омикрон-
ной ДНК по EcoRI-сайтам (рис. 2). Плазмида pV073, не содержащая
«ядовитых» последовательностей, получена из плазмиды pUC18 выре
занием полилинкера по PvuII-саиту и двунаправленным экзогенным
гидролизом нуклеазой Ва131 с делегированием области, прилежащей
к ori, и инактивированием /acZ-гена с последующим встраиванием то
го же полилинкера (рис. 3). Ряд плазмид: pWTB, pWTC, pWTM соз-
94 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. Л§ 3 - 4
дан путем субклонирования по £со/?/-сайтам трех фрагментов соот
ветствующих молекулярных масс (3,5; 2 и 1 тыс. п. н.), составляющих
клонированный лейкоцитарный фрагмент ДНК генома человека
(6,5 тыс. п. н.), в плазмиду pWTA, полученную из плазмиды pV073
встраиванием по SmaZ-сайту Лро-Л/-гена. Положительным контролем
в работе служила плазмида рА401, которая, кроме маркерного аро-А1-
гена, содержит АР-последовательность генома кукурузы (рис. 4) [15].
А н а л и з н у к л е и н о в ы х к и с л о т . Полученные фрагменты
тестировали на принадлежность к геному человека DOT-гибридиза-
Рис. 5. Авторадоотрам.ма DOT-гибродизацш хромосомной ДНК хориана человека: 1 —
pYF92-his~; 2 — pBR322; 3 — pYF440-his~; 4 — ДНК хориона человека; 5 — pYF441
Рис. 6. Уровни частоты трансформации дрожжей суммарными препаратами рекомби-
нантных ДНК из лейкоцитов ;и клеток плаценты человека: / — положительный контроль
(pYF92), 2 — рекомбинанты с фрагментами лейкоцитарной ДНК; 3 — рекомбинанты с
фрагментами ДНК 'плаценты; 4 — отрицательный контроль (pYF40)
цией с хромосомной ДНК хориона человека. В качестве отрицатель
ного контроля использована плазмида pBR322. Все зонды были мече
ны 32P-dCTP (рис. 5).
Биологическую активность клонированных фрагментов ДНК гено
ма человека проверяли по отличию в частоте трансформации контроль
ной плазмидой pYF40 (рис. 6), которая составляла 1 —10 трансфор
мантов на 10 мкг пДНК. Как положительный контроль репликативной
трансформации использовали плазмиду pYF92 (103 трансформантов
на 10 мкг пДНК).
Биологическую активность полученных фрагментов ДНК в куль
туре клеток человека определяли, выделяя плазмидную ДНК из транс-
фектантов после 240 ч инкубирования с последующей трансфекцией
Е. coll.
Наличие продукта маркерного гена аро-А1 тестировали в среде,
отобранной через определенные промежутки времени (48, 96, 168,
240 ч), методом сэндвич-ИФА с использованием поликлональных ан
тител кролика к белку Аро-А1. Белок Аро-А1 человека получали по
методу [16], кролей иммунизировали, вводя подкожно в несколько то
чек на спине 100 мкг белка Аро-А1 с полным адъювантом Фрейнда.
С недельным интервалом осуществляли еще две инъекции белка с не
полным адъювантом Фрейнда, а также бустер-инъекцию без адъюван-
та в краевую вену уха. Через 7—8 дней отбирали кровь, содержащую
специфические антитела к Аро-А1 человека. Антитела из сыворотки
крови очищали двухкратным высаливанием 33 %̂ -м раствором суль
фата аммония с последующей ионообменной хроматографией на
ДЭАЭ-целлюлозе [17]. Конъюгат «антитела к Аро-А1 человека+пер-
оксидаза хрена» получали по методу [18].
Результаты и обсуждение. Для клонирования АР-последователь-
ностей ДНК генома человека созданы суммарные смеси рекомбинан-
тов на основе плазмиды pYF40y содержащих £со/?/-фрагменты плацен
тарной ДНК генома человека. Для обогащения редко встречающими
ся последовательностями, смеси проводили через Е. coll. После селек-
ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 3—4 о -
тивной трансфекции дрожжей у варианта с обогащенным препаратом
рекомбинантов выявлен повышенный уровень трансформации относи
тельно нижнего (отрицательного) контроля (рис. 6).
На рис. 6 представлены результаты анализа уровней трансформа
ций дрожжей контрольными плазмидами ДНК и рекомбинантами с
ДНК генома человека. При скринировании около 100 трансформантов
из каждой группы опытов (плацентарная хромосомная ДНК, лейкоци
тарная хромосомная ДНК) выявлены четыре рекомбинантные моле
кулы, содержащие вставки разных размеров (рис. 7, дорожки 4—7).
Совпадение по электрофоретической подвижности ^соД/'-рестриктов
(длиной 5,35 тыс. п. н., рис. 7, дорожки 4—7) и 5атЯ/-рестриктов (до
рожки 10—13) рекомбинантных плазмид с такими же рестриктами ис
ходной плазмиды pYF40 доказывает расположение вставок в клони-
r f £ ' 3 4 3 В 7 * $ .W ft 'tt f$
Рис. 7. Электрофореграмма рестрицированных плазмид по сайтам: %-HindIII (до
рожка 1, контроль), EcoRI (2—7) и BatnHI (8—13): 2, 8 — pYF92; 3, 9 — pYF40; 4,
10 — pYF440; 5, ll — pYF441; 6, 12 — pYF442; 7, 13—pYF443
рующем векторе. Полученные плазмиды обозначены как pYF440,
pYF442 (содержащие фрагменты лейкоцитарной хромосомной ДНК,
рис. 7, дорожки 4 и 6) и pYF441, pYF443 (содержащие фрагменты пла
центарной хромосомной ДНК, рис. 7, дорожки 5 и 7).
Полученные плазмиды были использованы в дальнейшей работе
по тестированию их биологической активности (репликации) в дрож
жах. Наивысшая трансформирующая способность в дрожжах из ре
комбинантов обнаружена у плазмиды pYF440—10~3 трансформантов
на 10 мкг ДНК (рис. 8). Она содержит вставку из лейкоцитов, состо
ящую из трех £'со/?/-фрагментов размерами 3,5; 2 и 1 тыс. п. н., что
не позволило однозначно идентифицировать АР-последовательность
(рис. 7, дорожка 4). У остальных рекомбинантов выявлены более низ
кие уровни трансформации, сравнимые с контролем.
Для доказательства принадлежности полученных АР-последова-
тельностей к геному человека была проведена DOT-гибридизация
(рис. 5). В качестве зонда использовали нативную суммарную ДНК
хориона. Отрицательным контролем служила плазмида pBR322. Для
исключения фона неспецифического связывания ДНК из тестируемых
плазмид был удален his3-veu. Как видно из рисунка, положительную
реакцию выявлено у плазмиды pYF92-his~, содержащей омикронную
ДНК дрожжей [19], видимо, имеющую гомологию с геномной ДНК
человека, скорее всего, из-за наличия консенсуса репликации и при
легающих к нему областей.
Для более детального тестирования полученных фрагментов из
лейкоцитарной ДНК генома человека было проведено субклонирова-
96 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 3 - 4
ние каждого £со/?/-фрагмента отдельно друг от друга в вектор, очи
щенный от эукариотических сейленсеров («ядовитых» последователь
ностей, ингибирующих эукариотические регуляторные элементы) и со
держащий маркерный ген аро-А1 человека. Полученными конструкци
ями трансфицировали культивируемые фибробласты кожи человека.
Результаты, представленные на рис. 9, показывают, что мак
симальный уровень белка Аро-А1 человека, секретируемого в
культуральную среду, тестировался после 168 ч инкубирования
трансфектантов.
По белку максимальный всплеск наблюдался в варианте с плаз-
мидой pWTB, содержащей наибольший субклонированный EcoRI-фраг-
мент. Сниженный уровень Аро-А1у тестирующийся во всех рекомби-
нантах после 240 ч инкубирования, свидетельствует об уменьшении
Рис. 8. Различие в уровнях трансформации дрожжей полученными реком-бинантными
плазмидами: 1 — pYF92; 2 — pYF440; 3 — pYF441; 4 — pYF40; 5 — pYF442; 6 — pYF443
Рис. 9. Диаграмма зависимости уровней белка Apo-Al в культуральной среде от вида
рекомбинантных молекул
количества биологически активных матриц плазмидной ДНК с мар
керным геном аро-А1. Диаграмма, представленная на рис. 9, показы
вает частоту трансформации Е. coll плазмидной ДНК, выделенной из
трансфицированных фибробластов кожи человека после 240 ч инку
бации культуры. Наибольшее количество трансформантов (~10 2 на
1 мкг пДНК) наблюдалось в опыте с плазмидой pWTM, содержащей
наименьший субклонированный EcoRI-фрагмент. Отличие на два по
рядка от контроля частоты трансформации доказывает преимущество
длительного персистирования именно данного рекомбинанта, включа
ющего субклонированный £со7?/-фрагмент лейкоцитарной ДНК гено
ма человека ( ~ 1 тыс. п. н.). В опыте использовали плазмиду рА401
с АР-последовательностью из генома кукурузы. Как видно из рис. 9,
по белковому уровню и частоте трансформации данная конструкция
уступает рекомбинантам с фрагментами ДНК генома человека. У ва
рианта с плазмидой pWTC, содержащей субклонированный EcoRI-
фрагмент размером ~2 тыс. п. н., обнаружен сравнимый с плазми
дой pWTB всплеск синтеза белка Аро-А1, хотя уровни трансформаций
Е. coli этими двумя плазмидами сопоставимы с контролем. Получен
ные данные указывают на то, что субклонированные £со/?/-фрагменты
ДНК генома человека (3,5 и 2 тыс. п. н. соответственно) несут в себе
или являются частью регуляторных элементов транскрипции.
Субклонированный £со/?/-фрагмент размером ~ 1 тыс. п. н. в сос
таве плазмиды pWTM, судя по трансформации,— автономно реплици
рующаяся последовательность, способная поддерживать генетические
ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 3 - 4 7 — 4-860 97
матрицы маркерного гена в большом количестве копий относительно
других рекомбинантов. Это позволяет тестировать белковый продукт
(apo-Al человека) на более высоком уровне относительно контроля.
Е. С. Федоренко, Д. М. ]родов, Л. 1. Лихачова, С. М. Подольеька, В. А. Кордюм
КЛОНУВАННЯ ПОСЛ1ДОВНОСТЕЙ ДНК ГЕНОМУ ЛЮДИНИ,
ЯК1 АВТОНОМНО РЕШНКУЮТЬСЯ
Р е з ю м е
Клоновано фрагменти сумарно!' ДНК геному людини i3 лейкащтв i кл1тин плаценту
здатш забезпечувати автономний стан клонуючого вектора pYF40 (у який ix вм1щено;
в Saccharomyces cerevisiae. Отрнмано два фрагменти вщгювдаих молекуля-ринх мае:
6,5 (i3 лейкощгпв) i 3,4 тис. п. н. (i3 китин плаценти), яким притаманна висока транс-
формуюча здатнкть у пекарських др1жджах (102—103 траноформантьв на 10 мкг
плазмщно!' ДНК). Виявлено продовжену експреаю гена аро~А1 людини у склад! екстра-
xipoMiocoMHHx рекомбшамших ДНК, що мгетять клоноваш АР-пюсл1ДОВ1ност1, як! авто
номно реплжуються.
У. 5. Fedorenko, D. М. Irodov, L. I. Lihacheva, S. M. Podolskaya, V. A. Kordium
CLONING OF HUMAN ARSs
S u m m a r y
In this study we cloned two fragments of total DNA of human genome from leukocytes
and placental cells, which capable provide of autonomously state of pYF40 cloning vec
tor (in which there was consisted) in Sacch. cerevisiae. The obtainec fragments have
in length: 6,5 (from leukocyte) and 3,4 kb (from placental cells), respectively. This
fragments can provide high transformation in yeast (102—103) transformants (10 \ig
plasmid DNA).
We have obtained long expression of apo-Al human gene carried by extrachromo-
somal recombinant DNA, which contain cloned ARSs (autonomously replications
sequences).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Duesberg P. H. Transforming genes of retroviruse//Quant. Biol. Cold Spring Har
bor Symp.—1980.—44.—P. 13—29.
2. Sorge J., Wright D., Erdman V. D. Amphotropic retrovirus vector system for human'
cell gene transfer//Mol. and Cell. Biol.— 1984.— 4.— P. 1730—1737.
3. Myers R. M., Tjian R. Construction and analysis of simian virus 40 origins defective
in tumor antigene binding and DNA replication / / Proc. Nat. Acad. Sci. USA.—
"1980.—77.— P. 6491—6493.
4. Hanahan D., Lane D., Lipsich L. Characteristic of an SV40-plasmid recombinant and
its movement into and out of the genome of a murine cell//Cell.—1980.— 21.—
P. 127—139.
5. Graham F. L. Biological activity of tumor virus DNA//Adv. Cancer Res.—1977.—
25.—P. 1—51.
6. O'Hare K-, Benist C, Breathnach R. Transformation of mouse fibroblasts to metotre-
xate resistance by a recombinant plasmid expressing a prokaryotic dehydrofolate re
ductase//Proc. Nat. Acad. Sci. USA.—1981.—78.—P. 1527—1531.
7. Mellon P., Parker V.t Glusmen Y., Maniatis T. Identification of DNA seguence requi
red for transcription of the human L/-globin gene in new SV40 host-vector system//
Cell.—1981.—28.—P. 279—288.
8. Mitrani-Rozerbaum S., Maroteaux L., Могу Y. Indusable expression of the human in
terferon gene linked to a bovine papilloma virus DNA vector and maintained extra-
chromosomally in mouse cells//Mol. and Cell. Biol.—1983.—3.—P. 233—240.
9. Di Maio D., Maniatis T. Intact bovine papilloma virus-human DNA recombinant plas-
mides that propagate as episomes is mouse cells and bacteria / / Eukaryotic viral vec
tors /Ed . Y. Gluzman.—New York: Cold Spring Harbor. Lab., 1982.—P. 93—97.
10. Оганесян Н. А., Чепурной А. И., Вельнов В. В. и др. Изучение стабильности гиб
ридных плазмид, реплицирующихся в Sac. cerevisiae за счет фрагментов вируса по
лисомы //Молекуляр. биология.—(1984.—18, № 1.— С. 21—29.
11. Montiel J. F., Norburu C. J. et al. Characterization of human chromosomal DNA se
quences which replicate autonomously in Sacch. cerevisiae // Nucl. Acids Res,—
1984.—12, N 2.—P. 1049—1053.
98 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 3 - 4
12. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование.—- М.: Мир,
1984.—384 с.
13. Гловер Д. Новое в клонировании ДНК. Методы.—М.: Мир, 1989.—229 с.
14. Адаме Р. Методы культуры клеток для биохимиков.— М.: Мир, 1983.— С. 54—
56.
15. Шульженко В. Н., Кордюм В. А. Клонирование последовательностей ДНК генома
кукурузы, способных к автономной репликации в Saccharomyces cerevisiae / / Био
полимеры и клетка.—'1987.—3, № 5.— С. 270—274.
16. Климов А. М., Усатенко М. С., Денисенко А. Д. и др. Выделение аполипопротеинов
A-I, А-П и Е и их оценка с помощью ракетного иммуноэлектрофореза в плазме
крови больных с дис-ос-липопротеинемией//Биохимия.—1981.— №4.— С. 590—•
602.
17. Zevy H. В., Sober H. A. A simple chromatographic method for preparation of gamma
globulin//Proc. Soc. Exp. Biol, and Med.—1960.—103.—P. 250—252.
18. Wilson W. В., Nakane P. K. Immunofluorescence and related staining techniques//
Eds W. Knapp et al.—Amsterdam, 1978.—P. 215—224.
19. Jayaram M., Li Y. Y., Broach J. R. The yeast plasmid 2 u.m circle encodes components
required for its high copy propagaton//Cell.—1983.—34.— P. 95—104.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики HAH Украины, Киев Получено 22.02.94
ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 3—4 7 * 99
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-155403 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7657 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T13:28:15Z |
| publishDate | 1994 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Федоренко, Е.С. Иродов, Д.М. Лихачева, Л.И. Подольская, С.М. Кордюм, В.А. 2019-06-16T19:14:08Z 2019-06-16T19:14:08Z 1994 Клонирование автономно реплицирующихся последовательностей ДНК генома человека / Е.С. Федоренко, Д.М. Иродов, Л.И. Лихачева, С.М. Подольская, В.А. Кордюм // Биополимеры и клетка. — 1994. — Т. 10, № 3-4. — С. 93-99. — Бібліогр.: 19 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0003B5 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155403 577.218 Клонированы фрагменты суммарной ДНК генома человека из лейкоцитов и клеток плаценты, способные обеспечивать автономное состояние клонирующего вектора pYF40 (в который они заключались) в Saccharomyces cerevisiae. Получены два фрагмента соответствующих молекулярных масс: 6,5 (из лейкоцитов) и 3,4 тыс. п. н. (из клеток плаценты), обладающие высокой трансформирующей способностью в пекарских дрожжах (10²–10³ трансформантов на 10 мкг плазмидной ДНК). Выявлена продолжительная экспрессия гена аро-А1 человека в составе экстрахромосомных рекомбинантных ДНК, содержащих клонированные автономно реплицирующиеся АР-последовательности в культуре клеток. Клоновано фрагменти сумарної ДНК геному людини iз лейкоцитів i клітин плаценту здатні забезпечувати автономний стан клонуючого вектора pYF40 (у який ix вміщено) в Saccharomyces cerevisiae. Отримано два фрагменти відповідних молекуляриних мас 6,5 (iз лейкоцитів) i 3,4 тис. п. н. (iз клітин плаценти), яким притаманна висока трансформуюча здатність у пекарських дріжджах (10²–10³ трансформантів на 10 мкг плазмщної ДНК). Виявлено продовжену експреаю гена аро~А1 людини у складі екстрахромосомних рекомбінантих ДНК, що міетять клоновані АР-послідовності, які автономно реплікуються. In this study we cloned two fragments of total DNA of human genome from leukocytes and placental cells, which capable provide of autonomously state of pYF40 cloning vector (in which there was consisted) in Sacch. cerevisiae. The obtained fragments have in l ength: 6,5 (from leukocyte) and 3,4 kb (from placental cells), respectively. This fragments can provide high transformation in yeast (10²–10³) transformants (10 ng plasmid DNA). We have obtained long expression of apo-Al human gene carried by extrachromosomal recombinant DNA, which contain cloned ARSs (autonomously replications sequences). ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Клонирование автономно реплицирующихся последовательностей ДНК генома человека Клонування послідовностей ДНК геному людини, які автономно реплікуються Cloning of human ARSs Article published earlier |
| spellingShingle | Клонирование автономно реплицирующихся последовательностей ДНК генома человека Федоренко, Е.С. Иродов, Д.М. Лихачева, Л.И. Подольская, С.М. Кордюм, В.А. |
| title | Клонирование автономно реплицирующихся последовательностей ДНК генома человека |
| title_alt | Клонування послідовностей ДНК геному людини, які автономно реплікуються Cloning of human ARSs |
| title_full | Клонирование автономно реплицирующихся последовательностей ДНК генома человека |
| title_fullStr | Клонирование автономно реплицирующихся последовательностей ДНК генома человека |
| title_full_unstemmed | Клонирование автономно реплицирующихся последовательностей ДНК генома человека |
| title_short | Клонирование автономно реплицирующихся последовательностей ДНК генома человека |
| title_sort | клонирование автономно реплицирующихся последовательностей днк генома человека |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155403 |
| work_keys_str_mv | AT fedorenkoes klonirovanieavtonomnorepliciruûŝihsâposledovatelʹnosteidnkgenomačeloveka AT irodovdm klonirovanieavtonomnorepliciruûŝihsâposledovatelʹnosteidnkgenomačeloveka AT lihačevali klonirovanieavtonomnorepliciruûŝihsâposledovatelʹnosteidnkgenomačeloveka AT podolʹskaâsm klonirovanieavtonomnorepliciruûŝihsâposledovatelʹnosteidnkgenomačeloveka AT kordûmva klonirovanieavtonomnorepliciruûŝihsâposledovatelʹnosteidnkgenomačeloveka AT fedorenkoes klonuvannâposlídovnosteidnkgenomulûdiniâkíavtonomnoreplíkuûtʹsâ AT irodovdm klonuvannâposlídovnosteidnkgenomulûdiniâkíavtonomnoreplíkuûtʹsâ AT lihačevali klonuvannâposlídovnosteidnkgenomulûdiniâkíavtonomnoreplíkuûtʹsâ AT podolʹskaâsm klonuvannâposlídovnosteidnkgenomulûdiniâkíavtonomnoreplíkuûtʹsâ AT kordûmva klonuvannâposlídovnosteidnkgenomulûdiniâkíavtonomnoreplíkuûtʹsâ AT fedorenkoes cloningofhumanarss AT irodovdm cloningofhumanarss AT lihačevali cloningofhumanarss AT podolʹskaâsm cloningofhumanarss AT kordûmva cloningofhumanarss |