Модификация структуры ДНК плазмиды рАТV8 у трансгенных мышей. 2. Физическое картирование автономного трансгенома и секвенирование клонированных фрагментов его модифицированного участка

Показано существование в некоторых сублиниях трансгенных мышей экстрахромосомного транс-генома, производного плазмиды pATV8. Анализ его структуры и биологических свойств обнаружил, что нативность бактериальной части pATV8 – гена устойчивости к ампициллину и стартовой точки репликации сохранилась, а...

Full description

Saved in:

Bibliographic Details
Published in:	Биополимеры и клетка
Date:	1997
Main Authors:	Чащина, Л.И., Крисан, К.В., Матковский, В.И., Соломко, А.П.
Format:	Article
Language:	Russian
Published:	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 1997
Subjects:	Геном и его регуляция
Online Access:	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155641
Tags:	Add Tag No Tags, Be the first to tag this record!
Journal Title:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Cite this:	Модификация структуры ДНК плазмиды рАТV8 у трансгенных мышей. 2. Физическое картирование автономного трансгенома и секвенирование клонированных фрагментов его модифицированного участка / Л.И. Чащина, К.В. Крисан, В.И. Матковский, А.П. Соломко // Биополимеры и клетка. — 1997. — Т. 13, № 5. — С. 397-402. — Бібліогр.: 23 назв. — рос.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

_version_	1860105461585412096
author	Чащина, Л.И. Крисан, К.В. Матковский, В.И. Соломко, А.П.
author_facet	Чащина, Л.И. Крисан, К.В. Матковский, В.И. Соломко, А.П.
citation_txt	Модификация структуры ДНК плазмиды рАТV8 у трансгенных мышей. 2. Физическое картирование автономного трансгенома и секвенирование клонированных фрагментов его модифицированного участка / Л.И. Чащина, К.В. Крисан, В.И. Матковский, А.П. Соломко // Биополимеры и клетка. — 1997. — Т. 13, № 5. — С. 397-402. — Бібліогр.: 23 назв. — рос.
collection	DSpace DC
container_title	Биополимеры и клетка
description	Показано существование в некоторых сублиниях трансгенных мышей экстрахромосомного транс-генома, производного плазмиды pATV8. Анализ его структуры и биологических свойств обнаружил, что нативность бактериальной части pATV8 – гена устойчивости к ампициллину и стартовой точки репликации сохранилась, а провирусная область исходной плазмиды существенно модифицировалась. Произошла элиминация части провирусной ДНК и транспозиция новой последовательности. Наблюдаемые регулярная митотическая и мейотическая сегрегация, а также стабильная репликация экстрахромосомного трансгенома зависят, скорее всего, от приобретенного фрагмента геномной ДНК мыши. Доказано існування у деяких сублініях трансгенних мишей екстрахромосомного трансгеному, похідного плазміди pATV8. Аналіз його структури та біологічних властивостей виявив, що нативність бактеріальної частини рАТV8 – гена стійкості до ампіциліну і стартової точки реплікації зберіглася, а провірусна область вихідної плазміди суттєво модифікувалась. Здійснилися елімінація частини провірусної ДНК і транспозиція нової послідовності. Регулярна мітотична і мейотична сегрегація, що спостерігалася, а також стабільна реплікація екстрахромосомного трансгеному залежить, скоріш за все, від придбаного фрагмента геномної ДНК миші The existence of extrachromosomal transgenome in several substrains of transgenic mice was shown. This transgenome is a modified pATV8 plasmid. Analysis of its structure and biological properties demonstrated that the ori and ampicillin resistance regions of bacterial part of pATV8 did not change, but the proviral part of initial plasmid had severely modified. Partial elimination of proviral DNA and transposition of new sequence occured. It seems that stable mitotic and meiotic segregation of exlrachromosomal transgenome and its stable replication depends upon the acquired fragment of mouse genomic DNA.
first_indexed	2025-12-07T17:30:55Z
format	Article
fulltext	ISSN 0233-7657. Б и о п о л и м е р ы и клетка . 1997. Т. 13, № 5 Модификация структуры ДНК плазмиды рАТУ8 у трансгенных мышей. 2. Физическое картирование автономного трансгенома и секвенирование клонированных фрагментов его модифицированного участка Л. И. Чащина, К. В. Криеан, В. И. Матковский, А. П. Соломко Институт молекулярной биологии и генетики Н А Н У к р а и н ы 252143, Киев , ул. Академика Заболотного, 150 Показано существование в некоторых сублиниях трансгенных мышей экстрахромосомного транс- генома, производного юшзмиды pATVS. Анализ его структуры и биологических свойств обнаружил, что нативность бактериальной части pATVS — гена устойчивости к ампициллину и стартовой точки репликации сохранилась, а провирусная область исходной плазмиды существенно модифици ровалась. Произошла элиминация части провирусной ДНК и транспозиция новой последовательно сти. Наблюдаемые регулярная митотическая и мейотическая сегрегация, а также стабильная репликация экстрахромосомного трансгенома зависят, скорее всего, от приобретенного фрагмен та геномной ДНК мыши. Введение. В настоящее время для изучение функ ционирования генома в целом, а т акже взаимодей ствия отдельных его частей и регуляции экспрессии генов широко используется трансгеноз. Этот метод позволяет создать модельную систему, с помощью которой можно исследовать перенесенные гены в процессе онтогенеза, следить за их дальнейшей судьбой, контролировать влияние на метаболизм р е ц и п и е н т а . К р о м е и с с л е д о в а т е л ь с к и х ц е л е й , трансгеноз применяется для решения прикладных задач биотехнологии и медицины. Однако имеются два принципиальных препятствия, ограничиваю щих применение трансгеноза. Первое — это деста билизация генома реципиента. Она вызвана реак цией генома реципиента на присутствие гетероло- гичных нуклеотидных последовательностей (НП) и выражается в повышении количества малых гете рогенных кольцевых Д Н К в клетках [1 ], а также в появлении мутаций в результате интеграции трансгена [2 ]. Уменьшить дестабилизацию генома © Л. И. Ч А Ш И Н А , К, В. К Р И С А Н , В. И. МАТК.ОВСКИЙ, А. П. С О Л О М К О , 1997 при трансгенозе позволяет применение в качестве донорской Д Н К конструкций, существующих экст- рахромосомио. Вторым препятствием является мо дификация или элиминация трансгенов. Одними из первых этот эффект наблюдали авторы работы [3] . Они описали модификацию плазмиды, содержащей нуклеотидную последовательность pBR322 и виру са SV40, в клетках пермиссивной для вируса кле точной линии. Интактный вирус саркомы Рауса кур (RSV) в клетках мышей также подвергался модификациям в виде точечных и протяженных делеций [4] . Мы исследовали поведение плазмиды pATVS [5 ] , состоящей из плазмиды pBR322D и встроенной в нее провирусной Д Н К RSV (рис. 1), которую микроинеъцировали в зиготы мышей. Был выделен ряд сублиний трансгенных мышей, содержащих траксген в экстрахромосомном или интегрирован ном в геном состоянии. В обоих случаях произошли существенные перестройки Н П трансгенома [6—8 J. Настоящая работа посвящена изучению моди ф и к а ц и й , произошедших в экстра хромосомной форме трансгенома. 397 Ч А Ш И Н А Л. И. И Д Р . Pvul Рис. 1. Карта плазмиды pATVS, З а ш т р и х о в а н н а я область — pBR322 Материалы и методы. Выделение суммарной ДНК мыши. Органы или ткани мышей измельчали, затем гомогенизировали в буфере (150 мМ NaCl , 10 мМ EDTA, 50 мМ трис-HCl, рН 8,0). Клетки лизировали добавлением DS-Na до 1 % и прогре ванием при температуре 50 °С в течение 20 мин. После этого добавляли N a C I 0 4 до 1 М. Далее белки двукратно экстрагировали смесью фенол — хлоро форм (1:1) и осаждали Д Н К этанолом. Осадок растворяли в 10 мМ трис-HCl, рН 5,2, и добавляли РНКазу и проназу до концентрации 100 м к г / м л каждой. После обработки в течение 30 мин препа раты осаждали этанолом и использовали для транс формации. Выделение автономно реплицирующейся ДНК. Плазмиду «спасали», трансфицируя компе тентные клетки Escherichia coli штаммов DH5a, JM 109 или XLl-Blue суммарной Д Н К мыши в количе стве 20 мкг. Трансформацию проводили по стан дартной методике [9 ]. Длительность теплового шо ка (при t = 42 °С) составляла 90 с. Клоны отбирали после выращивания на среде, содержащей ампи циллин в концентрации 40 м к г / м л . Выделение плазмидной ДНК. Осажденные цен трифугированием бактериальные клетки ресуспен- дировали в буфере (25 мМ трис-HCl, рН 7,5; 10 мМ EDTA; 50 мМ глюкоза) , лизировали двой ным объемом раствора 0,2 М N a O H ; 1 % DS-Na и обрабатывали З М ацетатом натрия , рН 5,2 (1,5 объема от первого раствора). После депротеиниза- ции смесью фенол - - хлороформ (1:1) и осаждения этанолом плазмидную Д Н К использовали для рас щепления рестриктазами и сиквенирования. Рестрикционное картирование. Для картиро вания использовали рестриктазы фирм «Amersham» (Великобритания) и «Ferraentas» (Литва) в услови ях, рекомендованных производителями. Рестрик- ционные фрагменты разделяли с помощью электро фореза в 1,2 % - м агарозном геле. В качестве маркера применяли Д Н К фага лямбда, расщеплен ную рестриктазами EcoRl и HindiIL Блот-гибридизация. После разделения в ага розном геле Д Н К (около 0,5 мкг) переносили на нитроцеллюлозный фильтр в буфере 10*SSC (1,5 М NaCl; 0,15 М цитрат натрия) и фиксировали ульт рафиолетом. Д Н К для зонда (0,2 мкг) метили 3 2 P - d A T P с помощью рассеянной затравки. Гибри дизацию проводили по стандартной методике [9 ]. Клонирование фрагментов экстрахромосом ной ДНК мыши. Клонировали отдельные рестрик- ционные фрагменты, выделенные из агарозного геля, а также использовали метод «short gun». Лигирование осуществляли в течение ночи при 5 °С. Определение нуклеотидной последовательно сти. Нуклеотидную последовательность определя ли по методу дидезокситерминации (Сэнгера) [10] . Секвенировали одно- и двухцепочечную Д Н К , Фрагменты распределяли в 8 % - м акриламидном геле. Результаты и обсуждение . Известно, что при инфицировании вирусами непермиссивных хозяев вирусные геномы часто не интегрируют в хромосо мы хозяина, а существуют в виде эписом [11 ], При выборе Д Н К pATV8 в качестве донорской предпо лагалось, что наличие в ней провирусной Д Н К RSV позволит плазмиде в клетках мышей существовать экстрахромосомно. Кроме того, благодаря особен ностям входящих в ее состав Н П pATV8 представ л ял а интерес для выяснения условий взаимодейст вия гетерологичных геномов. Трансгенных мышей поколения F 0 скрещивали с нормальными мышами той ж е линии. Анализ результатов скрещиваний показал , что часть транс генных мышей передавала трансген потомству по менделевскому типу наследования, что свидетель ствует об интеграции введенной Н П в геном мы шей. У другой части трансгенных мышей менделев- ское наследование трансгена отсутствовало: от 80 до 100 % потомков содержали трансген. Это позво лило предположить, что у таких мышей трансген либо существует в эстрахромосомном состоянии, 398 М О Д И Ф И К А Ц И Я С Т Р У К Т У Р Ы Д Н К П Л А З М И Д Ы pATV8 У М Ы Ш Е Й либо произошла интеграция, как минимум, в две негомологичные хромосомы. Для проверки первого предположения из раз личных тканей и органов (печень, мозг, кожа) трансгенных мышей сублинии В-6, в которой пред полагалось наличие трансгенома в эстрахромосом ном состоянии, были выделены суммарные Д Н К , которыми трансфицировали компетентные клетки Е. coli, после чего их выращивали на среде, содер жащей ампициллин. Выделенная из устойчивых к ампициллину трансформантов плазмида (обозначенная рВ. 6.5 по названию первой сублинии мышей, в которой ее обнаружили) отличалась от исходной pATVS по размеру (pATVS— 14 тыс. п. н,, рВ.6.5 — 5,3 т ы с п. н.) . Необходимо отметить, что данный метод «спасения» плазмиды не позволяет получить фор мы трансгеномов, возможно, существующие в кле тках мышей автономно, но утратившие в результа те модификации бактериальную стартовую точку репликации или селективный маркер (в нашем случае — ген устойчивости к ампициллину) . Очередным этапом работы было рестрикцион- ное картирование плазмиды рВ.6.5. Использовали следующие рестриктазы: Hindlll, BamHI, EcoRI, JEcoRV, PstI, Pvul, PvuII, Bgll, Clal, Aval, XbaL Полученная физическая карта плазмиды представ лена на р и с 2. В результате модификации рАТУ8 Aval Рис. 2. Карта плазмиды рВ.6.5. З а ш т р и х о в а н м о д и ф и ц и р о в а н ный участок. Стрелками указаны направления секвенирования утрачены сайты расщепления для рестриктаз Bglll, Sail и KpnL Обнаружены новые сайты расщепле ния для Aval, Pvul, Ncol, EcoRI, Hindlll и XbaL Сайты узнавания для рестриктаз EcoRI, Hindlll и Xbal имелись и в pATVS, но их взаимное располо жение было иным. При сравнении взаимного расположения сай тов рестрикции рВ.6.5 и pATV8 выяснилось, что в исходной плазмиде утеряна существенная часть провирусных и бактериальных последовательно стей. Сайты для рестриктаз Bglll, КрпІ и Sail, имеющиеся в исходной плазмиде pATV8 и отсутст вующие в рВ.6.5, находились для Bglll в генах gag и src, для КрпІ — в гене рої провирусной части pATV8, что указывает на л о к а л и з а ц и ю делетиро- ванных Н П . Сайт для рестриктазы Sail находился в гене устойчивости к тетрациклину бактериальной части pATV8. Причины избирательной элиминации провирусной Д Н К можно объяснить различной ре- комбинационной способностью вирусных генов. Появление дополнительных сайтов рестрикции мо жет свидетельствовать о внутримолекулярных пе рестройках рАТ¥8 или о встраивании фрагмента чужеродной Д Н К . Избирательная э л и м и н а ц и я Н П трансгенов от мечена авторами ряда работ. Т а к , провирусные Н П в плазмиде, содержащей часть pBR322 (ori репли кации и ген устойчивости к ампициллину) , ген тимидинкиназы вируса простого герпеса и сдвоен ный длинный концевой повтор (LTR) RSV, после введения в зиготы мышей элиминировались и заме щались геномной Д Н К мыши примерно такого же размера [12] . При введении в зиготы мышей высокоонкоген- ного обезьяньего аденовируса наблюдалась элими нация части провирусной Д Н К как левого ее кон ца, содержащего онкоген [13] , так и правого [14] . Таким образом, модификации трансгенов на блюдаются достаточно часто. Механизм этих явле ний не вполне ясен. Возможно, здесь играет опре деленную роль негомологическая рекомбинация. Предположение о наличии в рВ.6.5. фрагмента геномной Д Н К мыши позволяет объяснить стабиль ную репликацию и сегрегацию трансгена в мышах. Встроившийся фрагмент может содержать хромо сомную стартовую точку репликации Д Н К мыши и обеспечивать репликацию плазмиды в клетках мы шей в экстрахромосомном состоянии (есть данные о том, что ori репликации pBR322 гомологична ori SV40 и может узнаваться эукариотической Д Н К - полимеразой [15] , однако маловероятно, что при этом возможна столь длительная и стабильная репликация) . Интересные данные получены А. П. Козловым 399 Ч А Ш И Н А Л. И. И Д Р . и соавт. [16]: показано, что плазмида рАТ153, микроинъецированная в ранние зародыши вьюна, изменяется на самых ранних стадиях развития. Вначале хозяйская зндонуклеаза линеаризует пла зми д у , а затем образуются высокомолекулярные конкатамеры разрезанной по случайным сайтам pATJ53, При этом до стадии ранней гаструлы трансген интенсивно реплицируется, а затем эли минируется [16 J. Образовавшийся в нашем случае ARS-элемент (ARS — autonomously replicating sequence) пред ставляет повышенный интерес благодаря наличию бактериальной стартовой точки репликации и се лективного маркера — гена устойчивости к ампи циллину, что облегчает его исследование. Что касается мейотической и митотической сегрегации трансгена, то она могла происходить двояко; простым делением между материнской и дочерней клетками при кариокинезе либо при уча стии веретена деления. Последнее возможно при наличии в составе трансгена центромерных после довательностей [17] . Н П , обеспечивающие репли кацию и сегрегацию трансгена, могут находиться в составе транспозированного фрагмента Д Н К мыши. Подобная «адаптация» трансгена описана для плазмиды, содержащей Н П рВЕЗ22 и ген большого Т-антигена вируса полиомы [ 11 ]. Эту плазмиду микроинъецировали в зиготы мышей, а затем у взрослых особей были обнаружены ее модифициро ванные формы. Они отличались от материнской утратой или глубокой перестройкой вирусных Н П и наличием вставки геномной Д Н К мыши. Батери- альная часть плазмиды практически не подверглась перестройкам. В трансгенных бабочках тутового шелкопряда происходит модификация плазмиды, содержащей фрагмент pBR322 и 1,5 LTR вируса RSV, При этом в плазмиду встраивается участок геномной Д Н К шелкопряда, содержащий эволюционно консерва тивные повторяющиеся последовательности [18] . Вставка фрагмента в трансген могла произойти вследствие а) интеграции последнего в хромосом ную Д Н К мыши и последующей неверной эксци- зии; б) негомологичной рекомбинации с хромосом ной или экстрахромосомной Д Н К (которая, впро чем, имеет хромосомное происхождение) . В составе экстрахромосомных Д Н К обнаружены как повторя ющиеся, так и уникальные Н П . Многие экстрахро мосомные Д Н К могут реплицироваться во внехро- мосомном состоянии [19] . Кроме того, их количе с т в о п р и т р а н с г е н о з е в о з р а с т а е т , н а ч т о указывалось выше. Возможность рекомбинации в экстрахромосомном состоянии показана в модель ном эксперименте [20] . Нами определена Н П части модифицированно го участка. На основании полученной рестрикцион- ной карты для секвестрования использовали фраг менты расщепления плазмиды рВ.6.5 рестриктаза- ми: PstI (фрагменты размером 2,5; 1,9 и 0,9 тыс. п. н . ) , PstI + BamHI (0,75 тыс. п. н . ) . Схема секвест рования представлена на р и с 2. Полученная НП1 приведена на рис. 3. Проведен также поиск гомологии этих Н П с таковыми банка данных «GenBank». Оказалось, что последовательности Н П 2 и Н П З имеют высокую гомологию с геном env провирусной Д Н К RSV. Это свидетельствует о том, что данные Н П представля ют собой остатки провирусной Д Н К RSV, входив шей в состав pATVS, Являются ли отдельные заме ны нуклеотидов ошибками секвенирования или то ч е ч н ы м и м у т а ц и я м и , п о к а ж у т д а л ь н е й ш и е исследования. Исходя из данных рис. 2 можно предположить, что в промежутке между последова тельностями Н П 2 и Н П З , которые являются частя ми гена env, находится последовательность того же гена. Это также подтверждается сходством рассто яний между данными Н П и соответствующими им участками провирусной Д Н К RSV. Последовательность 4 гомологична Н П гена устойчивости к тетрациклину плазмиды pBR322 от BamHI сайта (5 ' -конец гена) . Отмечено, что при культивировании плазмиды pBR322 в непермиссив- ной системе перестройки в виде делеций в первую очередь затрагивают 3 ' -конец гена устойчивости к тетрациклину и прилегающие участки (В. В. К а ц и - мон, личное сообщение). Для этой последовательности поиск не выявил сколько-нибудь значительной гомологии с Н П ви русов, бактерий и грызунов. Поскольку в банке данных представлены далеко не все Н П грызунов, 5 ' -CTGCAGTGGCTGATGGCTTCTGACGTGGTGGACTACTACAGGAGAGCCGCAG CGTCGACCGCCTCTCGACTGGGACTGGTGGTTTCTCCACCTACCTGTTAGTCCTGA A G A T T G A T T T C T G C A T T G C G G A T C T G G T G T G G A T C T G A T C C T T C G C A G C T A A C - 3 ' Рис. 3 . Неидентифицированная нуклеотидная последовательность (НП1) плазмиды рВ.6.5 400 можно предположить, что данная Н П является неизвестным фрагментом геномной Д Н К мыши. Поиск функциональных блоков в исследуемой Н П показал наличие некоторой гомологии с «горячими точками» рекомбинации иммуноглобулиновых ге нов мыши, которые, в свою очередь, сходны с ^-последовательностями, необходимыми для реком бинации с участием гесВС-ДНКазы у прокариот [21, 22 ] . Возможно, эти Н П совместно с прилегаю щими участками хромосомы образовывали блок, обеспечивающий амплификацию определенной ча сти генома мыши. Кроме того, в последовательно сти 1 имеются открытые рамки считывания. Что касается биологических эффектов трансге- ноза, то в нашем случае интересно было бы связать их с экспрессией генов, входящих в состав плазми ды pATV8. Поскольку причастность бактериальных генов pATVS к формированию фенотипа трансген ных животных маловероятна, фенотипические про явления трансгеноза можно объяснить наличием в трансгене оставшихся фрагментов провирусной Д Н К RSV или интеграцией трансгена в геном мышей. Интеграция могла произойти вблизи генов, существенных для развития зародыша на самых ранних стадиях онтогенеза. Это могло нарушить метаболизм и дифференцировку некоторых типов клеток [23 ], после чего в одной из сублиний трансген делетировался из генома, замкнулся в кольцевую молекулу и продолжал существовать автономно. Возможно, при этом и произошла деле- ция части молекулы трансгена. Изучение закономерностей взаимодействия ге- терологичных геномов позволит прогнозировать по ведение трансгенов и предотвращать их модифика ции. Это расширит использование трансгеноза и откроет новые возможности его применения. Л. 1. Чащина, К, В. Крисан, В. Й. Матковський, О. П. Соломко Модифікація структури Д Н К плазміди pATVS у трансгенних мишей . 2. Фізичне картування автономного трансгеному і секвенування клонованих фрагментів його модифікованої д ілянки Резюме Л оказано існування у деяких сублініях трансгенних мишей екстрахромосомного трансгеному, похідного плазміди pATVS. Аналіз його структури та біологічних властивостей виявив, що нативність бактеріальної частини рАТУ8 —гена стій кості до ампіциліну і стартової точки реплікації зберіглхгся, а провірусна область вихідної плазміди суттєво модифікува лася. Здійснилися елімінація частини провірусної ДНК і транс позиція нової послідовності. Регулярна мітотична і мейотич на сегрегація, що спостерігалася, а також стабільна реплі кація екстрахромосомного трансгеному залежить, скоріш за все, від придбаного фрагмента геномної ДНК миті М О Д И Ф И К А Ц И Я С Т Р У К Т У Р Ы Д Н К П Л А З М И Д Ы pATV8 У М Ы Ш Е Й L. L Chashchina, К. V. Krysan, V. I. Matkovsky, A. P. Solomko Structure rear rangement of plasmid pATV8 in transgenic mice. 2. Physical mapping of autonomous t ransgenome and sequencing of cloned fragment of its modified region Summary The existence of extrachromosomal transgenome in several sub strains of transgenic mice was shown. This transgenome is a modified pATV8 plasmid. Analysis of its structure and biological properties demonstrated that the ori and ampicillin resistance regions of bacterial part of pATV8 did not change, but the proviral part of initial plasmid had severely modified. Partial elimination of proviral DNA and transposition of new sequence occured. It seetns that stable mitotic and meiotic segregation of extrachromosomal transgenome and its stable replication depends upon the acquired fragment of mouse genomic DNA. С П И С О К Л И Т Е Р А Т У Р Ы 1. Wiberg F. C , Sunnerhagen P., Bjursele G. New, small circular DNA in transfected mammalian ceils / / Мої. and Cell. B io l .—1986.—6, N 2 . — C . 6 3 5 — 6 6 2 . 2. Hunter DJ.y Gurney E. G. T h e genomic instability associated with integrated Simian Virus 40 DNA is depended on the origin of replication and early control region / / J. V i ro l .—1994 .—68, N 2 . — P . 7 8 7 — 7 9 6 . 3 . Razzaque A., Mizusawa H., Seidman M. M. Rear rangement and mutagenesis of a shutt le vector plasmid after passage in mammalian cells / / P roc . Nat . Acad . Sci. USA. — 1983 .—80, N 1 0 . — P . 3 0 1 5 — 3 0 1 9 . 4. Газарян К. Г., Гольцов В. А., Набирочкин С. В. и др. Введение последовательностей Д Н К вируса саркомы Рауса в геномы д р о з о ф и л ы и м ы ш и путем м и к р о и н ъ е к ц и й в я й ц е к л е т к и / / М о л е к у л я р , б и о л о г и я . — 1 9 8 5 . — 1 9 . — С. 7 6 0 — 7 6 6 . 5. Katz R. А., Отег С. A., Weis J. И. et al. Restriction endonuclease and nucleotide sequence analyses of molecularly cloned imintegrated avian tumor vims DNA: Structure of large terminal repeats in circle junctions / / J. Vi ro l .—1982 .—42, N 1.—P. 3 4 6 — 3 5 1 . 6. Соломко А. П., Рындич А. В., Тшпок Т. Г. Трансгенные м ы ш и , полученные на основе плазмид pATV8 и pBR322 // Б и о п о л и м е р ы и к л е т к а . — 1 9 8 8 . — 4 , № 5 .—С. 18—24. 7. Solomko А. P., Morozova L. М., Vagina /. N. et. al. Transgenic mice with integrated sequences of RSV provirus DNA / / G e n o m e . — 1 9 8 8 . - 3 0 , Suppl . 1.—P. 8. Чащина Л. И., Петренко А. И., Вагина И. Н., Соломко А, П. М о д и ф и к а ц и я структуры Д Н К плазмид рАТУ8 у транс генных м ы ш е й , 1. Исследование структуры интегриро ванного трансгенома и биологические э ф ф е к т ы трансгеноза / / Б и о п о л и м е р ы и к л е т к а . — 1 9 9 7 . — 1 3 , № 4 . — С . 323— 327. 9. Маниатис Т., Фрич М., Сэмбрук Ф. Молекулярное клони рование .—М.: Мир, 1983 .—480 с. 10. Sanger F., Nicklen S., Coulson A. R. DNA sequencing with chain-termination inhibitors / / P roc . Nat. Acad. Sci. USA.— 1977 .—74, N 1 2 . — P . 5 4 6 3 — 5 4 6 7 . 11 . Rassoulzadegan M., Leopold P., Vailly J.7 Cuzin F. Germ line transmission of autonomous genetic elements in transgenic mouse strain / / C e l l . — 1 9 8 6 . — 4 6 , N 4 . — P . 5 1 3 — 5 1 9 . 12. Тарантул В. 3., Кучерявый В. В., Макарова И. В. и др. Клонирование фрагмента Д Н К трансгеномной м ы ш и , со д е р ж а щ е г о интегрированную рекомбинантную плазмиду / / Молекуляр . биология .—!986 .—20 , № 1 С . 2 7 8 — 2 8 6 . ' 401 ЧАЩИНА Л. И. И Д Р . 13. Кузнецова Е. Д., Андреева Л. Е., Серова И. А. и др. Новые данные о характере структурных изменений аденовируса обезьян SA7, микроинъецированного в зиготы мышей / / Молекуляр. генетика.—1988.—-1.—С. 6—10. 14. Тарантул В. 3., Кузнецова Е. Д., Газарян К. Г. Харак теристика участков генома трансгенных животных , приле гающих к интегрированным последовательностям ч у ж е родной Д Н К / / Молекуляр . биология ,—1989 .—23 , № 4 .— С. 1036—1041 . 15. Goldberg Е. Z. , Naroditsky В. S., Felgenhauer Р. Е. et al Replication of heterologous DNA in Xenopus laevis oocytes / / FEBS Le t t — 1 9 8 1 . — 1 2 1 . — P . 2 1 5 — 2 1 8 . 16. Козлов А. П., Решетников В. Л., Корж В. Д . , Нейфах А. А. Чужеродная Д Н К в развивающихся зародышах вьюна Misgurnus fossilis L. II Молекуляр. биология .—1988 .—22 , № 6.—С. 1614—1623 . 17. Huxley С. Mammalian artlfical chromosomes: a new tool for gene therapy / / Gene T h e r a p y . — 1 9 9 4 . — 1 , N 1.—P. 7—12. 18. Николаев А. И., Чкопия Т. Т., Эристави-Кафиани К. А., Тарантул В. 3. Анализ «спасенной» плазмиды из транс- генного тутового шелкопряда / / Б и о п о л и м е р ы и клетка .— 1992.—8, № 3 .—С. 7 6 — 8 6 . 19. Сальников К. В. Экстрахромосомная Д Н К в клетках мле копитающих / / Ц и т о л о г и я . — 1 9 9 0 . — 3 2 , № 11 .—С. 1061 — 1071. 20. Puchta Н., Kocher S., Hohn В. Extrachromosomal homologous DNA recombination in plant cells is fast and is not affected by CpG-methylat ion / / Мої. and Cell. B io l .—1992.—12 , N 8.— P . 3372—3379 . 2 1 . Kobori /. A., Strauss E., Minard R.f Hood L. Molecular analysis of the hotspot of recombination in the murine major h i s t o c o m p a t i b i l i t y c o m p l e x / / S c i e n c e . — 1 9 8 6 . — 2 3 4 , N 4 7 7 3 . — P . 1 7 3 - 1 7 9 . 22. Kiyama R., Matsui #., О is hi M. A repetitive DNA family (Sau ЗА family) in human chromosomes: extrachromosomal DNA and DNA polymorphism / / P roc . Nat . Acad. Sci. USA.— 1986 .—83 , N 1 3 . — P . 4 6 6 5 — 4 6 6 9 . 23 . Wagner E. F>, Cavarrubia L., Stewart T. A. Prenatal lethalities in mice homozygous for human growth hormone gene sequen ces integrated in germ line / / C e l l . — 1 9 8 8 . — 3 5 . — P . 647— 655 . У Д К 577.218 Поступила в р е д а к ц и ю 15.01.97 402
id	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-155641
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
issn	0233-7657
language	Russian
last_indexed	2025-12-07T17:30:55Z
publishDate	1997
publisher	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
record_format	dspace
spelling	Чащина, Л.И. Крисан, К.В. Матковский, В.И. Соломко, А.П. 2019-06-17T09:23:03Z 2019-06-17T09:23:03Z 1997 Модификация структуры ДНК плазмиды рАТV8 у трансгенных мышей. 2. Физическое картирование автономного трансгенома и секвенирование клонированных фрагментов его модифицированного участка / Л.И. Чащина, К.В. Крисан, В.И. Матковский, А.П. Соломко // Биополимеры и клетка. — 1997. — Т. 13, № 5. — С. 397-402. — Бібліогр.: 23 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.00049D https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155641 577.218 Показано существование в некоторых сублиниях трансгенных мышей экстрахромосомного транс-генома, производного плазмиды pATV8. Анализ его структуры и биологических свойств обнаружил, что нативность бактериальной части pATV8 – гена устойчивости к ампициллину и стартовой точки репликации сохранилась, а провирусная область исходной плазмиды существенно модифицировалась. Произошла элиминация части провирусной ДНК и транспозиция новой последовательности. Наблюдаемые регулярная митотическая и мейотическая сегрегация, а также стабильная репликация экстрахромосомного трансгенома зависят, скорее всего, от приобретенного фрагмента геномной ДНК мыши. Доказано існування у деяких сублініях трансгенних мишей екстрахромосомного трансгеному, похідного плазміди pATV8. Аналіз його структури та біологічних властивостей виявив, що нативність бактеріальної частини рАТV8 – гена стійкості до ампіциліну і стартової точки реплікації зберіглася, а провірусна область вихідної плазміди суттєво модифікувалась. Здійснилися елімінація частини провірусної ДНК і транспозиція нової послідовності. Регулярна мітотична і мейотична сегрегація, що спостерігалася, а також стабільна реплікація екстрахромосомного трансгеному залежить, скоріш за все, від придбаного фрагмента геномної ДНК миші The existence of extrachromosomal transgenome in several substrains of transgenic mice was shown. This transgenome is a modified pATV8 plasmid. Analysis of its structure and biological properties demonstrated that the ori and ampicillin resistance regions of bacterial part of pATV8 did not change, but the proviral part of initial plasmid had severely modified. Partial elimination of proviral DNA and transposition of new sequence occured. It seems that stable mitotic and meiotic segregation of exlrachromosomal transgenome and its stable replication depends upon the acquired fragment of mouse genomic DNA. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Геном и его регуляция Модификация структуры ДНК плазмиды рАТV8 у трансгенных мышей. 2. Физическое картирование автономного трансгенома и секвенирование клонированных фрагментов его модифицированного участка Модифікація структури ДНК плазміди pATV8 у трансгенних мишей. 2. Фізичне картування автономного трансгеному і секвенування клонованих фрагментів його модифікованої ділянки Structure rearrangement of plasmid pATV8 in transgenic mice. 2. Physical mapping of autonomous transgenome and sequencing of cloned fragment of its modified region Article published earlier
spellingShingle	Модификация структуры ДНК плазмиды рАТV8 у трансгенных мышей. 2. Физическое картирование автономного трансгенома и секвенирование клонированных фрагментов его модифицированного участка Чащина, Л.И. Крисан, К.В. Матковский, В.И. Соломко, А.П. Геном и его регуляция
title	Модификация структуры ДНК плазмиды рАТV8 у трансгенных мышей. 2. Физическое картирование автономного трансгенома и секвенирование клонированных фрагментов его модифицированного участка
title_alt	Модифікація структури ДНК плазміди pATV8 у трансгенних мишей. 2. Фізичне картування автономного трансгеному і секвенування клонованих фрагментів його модифікованої ділянки Structure rearrangement of plasmid pATV8 in transgenic mice. 2. Physical mapping of autonomous transgenome and sequencing of cloned fragment of its modified region
title_full	Модификация структуры ДНК плазмиды рАТV8 у трансгенных мышей. 2. Физическое картирование автономного трансгенома и секвенирование клонированных фрагментов его модифицированного участка
title_fullStr	Модификация структуры ДНК плазмиды рАТV8 у трансгенных мышей. 2. Физическое картирование автономного трансгенома и секвенирование клонированных фрагментов его модифицированного участка
title_full_unstemmed	Модификация структуры ДНК плазмиды рАТV8 у трансгенных мышей. 2. Физическое картирование автономного трансгенома и секвенирование клонированных фрагментов его модифицированного участка
title_short	Модификация структуры ДНК плазмиды рАТV8 у трансгенных мышей. 2. Физическое картирование автономного трансгенома и секвенирование клонированных фрагментов его модифицированного участка
title_sort	модификация структуры днк плазмиды ратv8 у трансгенных мышей. 2. физическое картирование автономного трансгенома и секвенирование клонированных фрагментов его модифицированного участка
topic	Геном и его регуляция
topic_facet	Геном и его регуляция
url	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155641
work_keys_str_mv	AT čaŝinali modifikaciâstrukturydnkplazmidyratv8utransgennyhmyšei2fizičeskoekartirovanieavtonomnogotransgenomaisekvenirovanieklonirovannyhfragmentovegomodificirovannogoučastka AT krisankv modifikaciâstrukturydnkplazmidyratv8utransgennyhmyšei2fizičeskoekartirovanieavtonomnogotransgenomaisekvenirovanieklonirovannyhfragmentovegomodificirovannogoučastka AT matkovskiivi modifikaciâstrukturydnkplazmidyratv8utransgennyhmyšei2fizičeskoekartirovanieavtonomnogotransgenomaisekvenirovanieklonirovannyhfragmentovegomodificirovannogoučastka AT solomkoap modifikaciâstrukturydnkplazmidyratv8utransgennyhmyšei2fizičeskoekartirovanieavtonomnogotransgenomaisekvenirovanieklonirovannyhfragmentovegomodificirovannogoučastka AT čaŝinali modifíkacíâstrukturidnkplazmídipatv8utransgennihmišei2fízičnekartuvannâavtonomnogotransgenomuísekvenuvannâklonovanihfragmentíviogomodifíkovanoídílânki AT krisankv modifíkacíâstrukturidnkplazmídipatv8utransgennihmišei2fízičnekartuvannâavtonomnogotransgenomuísekvenuvannâklonovanihfragmentíviogomodifíkovanoídílânki AT matkovskiivi modifíkacíâstrukturidnkplazmídipatv8utransgennihmišei2fízičnekartuvannâavtonomnogotransgenomuísekvenuvannâklonovanihfragmentíviogomodifíkovanoídílânki AT solomkoap modifíkacíâstrukturidnkplazmídipatv8utransgennihmišei2fízičnekartuvannâavtonomnogotransgenomuísekvenuvannâklonovanihfragmentíviogomodifíkovanoídílânki AT čaŝinali structurerearrangementofplasmidpatv8intransgenicmice2physicalmappingofautonomoustransgenomeandsequencingofclonedfragmentofitsmodifiedregion AT krisankv structurerearrangementofplasmidpatv8intransgenicmice2physicalmappingofautonomoustransgenomeandsequencingofclonedfragmentofitsmodifiedregion AT matkovskiivi structurerearrangementofplasmidpatv8intransgenicmice2physicalmappingofautonomoustransgenomeandsequencingofclonedfragmentofitsmodifiedregion AT solomkoap structurerearrangementofplasmidpatv8intransgenicmice2physicalmappingofautonomoustransgenomeandsequencingofclonedfragmentofitsmodifiedregion

Institution

Similar Items