Влияние алкилирующего агента МННГ на мутагенный эффект экзогенной рекомбинантной ДНК
В работе исследована возможная мутагенная активность трех рекомбинантных плазмид pBR322ins, pAins, pGins. Через три дня после трансфекции клеток китайского хомячка в случае двух (pBR322ins, pAins) из них обнаружен мутагенный эффект. Частота мутантов уменьшалась к девятому дню после трансфекции. М...
Saved in:
| Published in: | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Date: | 1995 |
| Main Authors: | , , , , , , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1995
|
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155656 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Влияние алкилирующего агента МННГ на мутагенный эффект экзогенной рекомбинантной ДНК / Л.Л. Лукаш, С.В. Подольская, Е.М. Сухорада, Е.В. Костецкая, И.Е. Костецкий, И.С. Варзанова, Ю.В. Пацковский, И.В. Вавилина, С.В. Дейс // Биополимеры и клетка. — 1995. — Т. 11, № 1. — С. 87-91. — Бібліогр.: 17 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859604909033259008 |
|---|---|
| author | Лукаш, Л.Л. Подольская, С.В. Сухорада, Е.М. Костецкая, Е.В. Костецкий, И.Е. Варзанова, И.С. Пацковский, Ю.В. Вавилина, И.В. Дейс, С.В. |
| author_facet | Лукаш, Л.Л. Подольская, С.В. Сухорада, Е.М. Костецкая, Е.В. Костецкий, И.Е. Варзанова, И.С. Пацковский, Ю.В. Вавилина, И.В. Дейс, С.В. |
| citation_txt | Влияние алкилирующего агента МННГ на мутагенный эффект экзогенной рекомбинантной ДНК / Л.Л. Лукаш, С.В. Подольская, Е.М. Сухорада, Е.В. Костецкая, И.Е. Костецкий, И.С. Варзанова, Ю.В. Пацковский, И.В. Вавилина, С.В. Дейс // Биополимеры и клетка. — 1995. — Т. 11, № 1. — С. 87-91. — Бібліогр.: 17 назв. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Биополимеры и клетка |
| description | В работе исследована возможная мутагенная активность трех рекомбинантных плазмид pBR322ins, pAins, pGins. Через три дня после трансфекции клеток китайского хомячка в случае двух (pBR322ins, pAins) из них обнаружен мутагенный эффект. Частота мутантов уменьшалась к девятому дню после трансфекции. Мутагенная активность рекомбинантных плазмид, по-видимому, зависит от присутствия нуклеотидных последовательностей, происходящих от исходных плазмид, а не от гена инсулина из генома человека. В случае pAins, скорее всего, она определяется присутствием Alu-последовательности, которая переклонирована из плазмиды. pALl. Алкилирующий агент МННГ усиливал мутагенный эффект экзогенных ДНК на 10-е сутки после трансфекции.
В роботі досліджено можливу мутагенну активність трьох рекомбінантних плазмід pBR322ins, pAins, pGins. Через три доби після трансфекції клітин китайського хом'ячка у випадку двох (pBR322ins, pAins) із них помічено мутагенну дію. Частота муталтів зменшувалася протягом дев'яти днів після трансфекції. Мутагенна активність рекомбінантних плазмід, очевидно, залежить від присутності нуклеотидних послідовностей, які походять від вихідних плазмід, а не від гена інсуліну із геному людини. У випадку pAins, скоріш за все, вона визначається присутністю Alu-послідовності, яка переклонована з плазміди рAL1. Алкілуючий агент МННГ підсилював мутагенну дію екзогенних ДНК на 10-й день після трансфекції.
The possible mutagenic activity of three recombinant plasmids pBR322ins, pAins, pGins has been investigated in this work. In three days after transfection two (pBR322ins, pAins) out of three recombinant plasmids revealed mutagenic effect in Chinese hamster cells. The mutation frequency decreased to ninth day after transfection. The mutagenic activity of recombinant plasmids presumably depends an the presence of nucleotide sequences which were coming from parental plasmids but not on insulin gene from human genome. Mutagenic activity of pAins probably was determined by the presence of Alu sequence that was recloned from plasmid pALl. The alkylating agent MNNG increased the mutagenic effect of exogeneaus DNA on 10th day after transfection.
|
| first_indexed | 2025-11-28T02:28:11Z |
| format | Article |
| fulltext |
УДК 575.155:575.224.46
Л. Л. Лукаш, С. В. Подольская, Е. М. Сухорада,
Е. В. Костецкая, И. Е. Костецкий, И. С. Варзанова,
Ю. В. Пацковский, И. В. Вавилина, С. В. Дейс
ВЛИЯНИЕ АЛКИЛИРУЮЩЕГО
АГЕНТА МННГ НА МУТАГЕННЫЙ ЭФФЕКТ
ЭКЗОГЕННОЙ РЕКОМБИНАНТНОЙ ДНК
В работе исследована возможная мутагенная активность трех рекомбинантных плаз
мид pBR322ins, pAins, pGins. Через три дня после трансфекции клеток китайского хо
мячка в случае двух (pBR322ins, pAins) из них обнаружен мутагенный эффект. Ча
стота мутантов уменьшалась к девятому дню после трансфекции. Мутагенная актив
ность рекомбинантных плазмид, по-видимому, зависит от присутствия нуклеотидных
последовательностей, происходящих от исходных плазмид, а не от гена инсулина из
генома человека. В случае pAins, скорее всего, она определяется присутствием Alu-
последовательности, которая переклонирована из плазмиды. pALl. Алкилирующий
агент МННГ усиливал мутагенный эффект экзогенных ДНК на 10-е сутки после
трансфекции.
Введение. Цель настоящей работы состояла в оценке влияния экзоген
ных рекомбинантных молекул на спонтанный и химический мутагенез
в культивируемых клетках млекопитающих. Эти рекомбинантные ДНК
были сконструированы специально для разработки подходов к генной
терапии инсулинзависимого сахарного диабета. Их функциональная ак
тивность тестировалась в соответствующих модельных системах. Пер
воочередным было изучение возможной мутагенной активности трех
рекомбинантных плазмид pBR322ins, pAins, pGins, содержащих ген
препроинсулина из генома человека, и исходных плазмид, которое ис
пользовались для их конструирования. Вторая задача заключалась в
оценке совместного мутагенного эффекта экзогенной ДНК и простого
алкилирующего агента М-метил-Ы'-нитро-Ы-нитрозогуанидина (МННГ).
Материалы и методы. В качестве модельной системы использова
ли клетки китайского хомячка Blld-li-FAF28, клон 237. Эффективность
клонирования этих клеток колебалась от опыта к опыту в пределах от
20 до 70 %. Клетки культивировали в стандартной среде Игла с до
бавлением 10 % эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота и
антибиотиков. Для селекции мутантяых клеток применяли селектив
ную среду, в которую добавляли 6-меркаптопурин (6-МП) в концент
рации 30 или 60 мкг/мл. Эксперименты по мутагенезу детально опи
саны [1,2] .
Конструирование рекомбинантных молекул и тестирование их функ
циональной активности осуществляли по [3]. В качестве источника ге
на препроинсулина человека использовали рестрикционный фрагмент
Bglll-TaqI [4].
Экзогенную ДНК (10 мкг/мл) вводили в клетки с помощью каль
ций-фосфатного метода [5, 6]. В ряде экспериментов использовали
ДНК, метилированную с помощью диметилсульфата [7].
Алкилирующим агентом МННГ в концентрации 2—4 мкМ клетки
обрабатывали через 3 ч после трансфекции.
Результаты и обсуждение. В табл. 1 представлены частоты мутан
тов, резистентных к 6-меркаптопурину (МП), обнаруженные в кон-
•§) Л . Л. Лукаш, С. В. Подольская, Е. М. Сухорада, Е. В. Костецкая, И. Е. Костецкий,
И. С. Варзанова, Ю. В. Пацковский, И. В. Вавилина, С. В. Дейс, 1995
ISSN 0233-7667. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1995. Т. 11. № 1 87
трольных и опытных вариантах. Через три дня после трансфекции кле
ток китайского хомячка в случае двух {pBR322ins, pAins) из трех ре-
комбинантных плазмид наблюдался мутагенный эффект. Для третьей
рекомбинантной плазмиды pGins он выявлен не был. После трансфек-
ции клеток первыми двумя плазмидами частота мутантов соответствен
но в два и четыре раза превышала контрольный уровень (14 и 36 ин
дуцированных мутантов на 105 жизнеспособных клеток, образующих
клоны). Согласно критерию Фишера, различие между контролем и
опытом высокодостоверно (Р<0,001). Мутагенный эффект pAins об
наружен нами ранее при Использовании другого метода трансфекции
i[9]. Частота мутантов уменьшалась к девятому дню после транс
фекции.
Мутагенная активность рекомбинантных плазмид, по-видимому,
зависит от присутствия нуклеотидных последовательностей, происхо
дящих от исходных плазмид, а не от гена препроинсулина человека.
Для pAins, вероятно, она определяется присутствием Alu-последова-
тельности из генома человека, которая переклонирована из плаз
миды рАЫ.
Показан синергидный мутагенный эффект при совместном дейст
вии на клетки экзогенной ДНК и МННГ через 8—10' дней после обра
ботки клеток (табл. 2). К этому времени мутагенный эффект реком-
бинантных и исходных плазмид уже «е обнаруживался. МННГ без
ДНК вызывал статистически достоверный мутагенный эффект, который
существенно увеличивался при совместном действии на клетки алки-
лирующего агента и ДНК (30—50 индуцированных мутантов на 105
жизнеспособных клеток). При использовании метилированной ДНК
синергидный эффект еще ярче выражен (70—100 индуцированных му
тантов на 105 жизнеспособных клеток).
Т а б л и ц а 1
Частота мутантов, устойчивых к 6-меркаптопурину, индуцированных
рекомбинантными ДНК в клетках китайского хомячка
Вариант
Число обна
руженных
колоний
Эффективность
клонирования
во время се
лекции
Число мутантов
на 105 клонируе
мых клеток
Число индуци
рованных мутан
тов на 105 кло
нируемых клеток
Контроль
ins
PJBR322
pBR322ins
pGins
pUC18
pAins
Контроль
ins
pBR322
pBR322ins
pGins
pUC18
pAins*
Контроль
pBR322
pBR322ins
pGins
pUC18
pALl
pAins
11
12
17
21
11
8
44
9
22
9
22
9
8
8
17
21
27
17
22
43
38
' Время экспрессии -
0,26
0,19
0,18
0,19
0,25
0,20
0,20
9 дней
0,28
0,60
0,43
0,77
0,39
0,35
0,18
3 дня
0,19
Oil 4
0,17
0,16
0,23
0,17
0,14
- 3 дня
8,46
12,63 .
18,89
22,10
8,80
8,89
44,00
6,43
7,33
4,19
5,71
4,61
4,57
9,88
17,89
30,00
31,76
21,25
19,13
50,59
54,28
—
4,17
10,43
,'3,64
0,34
0,43
35,54
—.
0,90
—2,24
—0,74
—1,82
—1,86
3,45
12Д1
13,87
3,36
1,24
32,70
36.39
>0,05
< 0,001
<0,001
>0,05
>0,05
<0,001
>0,05
>0,05
>0,05
>0,05
>0,05
>0,05
<0,001
<0,001
>0,05
>0,05
<0„001
<0,001
П р и м е ч а н и е . Концентрация ДНК 10 мкг/мл. В каждом варианте изучено 5- 10ь
клеток. * Исследовано 4,5-10s клеток.
88 ISSN 0233-7667. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1995. Т. 11. № 1
Таким образом, рекомбинантные ДНК могут реально влиять на
мутационный процесс в культивируемых клетках млекопитающих. Ра
нее нами было показано, что в присутствии рекомбинантной плазмиды
pBR325, содержащей трансформирующую область онкогенного бычье
го аденовируса типа З (БАВ-3) или раннюю область вируса герпеса
простого типа 1 (ВПГ-1), также увеличивалась частота мутантов, ре
зистентных к 6-МП [10, 11]. Мутагенная активность в этих случаях,
по-видимому, обусловлена наличием вирусных трансформирующих ге
нов, так как исходная плазмида pBR325 не влияла на уровень генных
мутац'ий по локусу ГФРТ в сторону увеличения. В то же время ре-
стрикционный фрагмент ДНК, включающий трансформирующую об
ласть БАВ-3, также вызывал возрастание уровня индуцированных му
тантов [12].
Результаты этой работы свидетельствуют о том, что бактериаль
ной плазмиде pBR322 присуща мутагенная активность. Это, скорее
всего, зависит от определенной нуклеотидной последовательности. Дру
гая бактериальная плазмида pUC18 не проявляла подобной активнос
ти. В то же время очень похожая плазмида pUC!9, имеющая после
довательность из 51 пары нуклеотидов в другой ориентации, была му
тагенной для клеток китайского хомячка [9].
Мутагенные свойства рАЫ 'и pAins, вероятно, зависят от присут
ствия Alu-последовательности из генома человека.
Наличие экзогенной ДНК в клетках, особенно метилированной,
делало их более чувствительными к мутагенному действию МННГ.
В присутствии любой ДНК и МННГ наблюдался синергидный мута
генный эффект. Эти данные согласуются с ранее полученными для
других рекомбинантных ДНК и МННГ [14]. Таким образом, этот фе-
Таблица 2
Частота мутантов, резистентных к 6-меркаптопурину, индуцированных совместным
действием ДНК и МННГ на клетки китайского хомячка
Вариант
Число
мутант-
ных ко
лоний
Эффективность
клонирования
во время се
лекции
Число мутан
тов на 10*
жизнеспо
собных
клеток
Число индуци
рованных му
тантов на 10s
жизнеспособных
клеток
Число ин
дуцирован
ных мутан
тов без
эффекта
МННТ
Контроль*
ins
pUC18**
pALl
pAins
pGins**
МННГ
ms+МННГ
PUC18+MHHT***
pALl+МННГ
рЛт^+МННГ
pGins+ШіНГ
Контроль
pAins
mpAins
МННГ
pAins+mmT
mpAins+МННГ
Контроль
pAins
mpAins
МННГ
рАш+мнаг tnpAins+
+МННГ***
ЗО
10
7
3
3
7
113
101
55
100
86
ПО
2
3
3
65
97
40
20
31
1,1
104
184
124
0,71
0,46
0,69
0,64
0,62
0,82
0,58
0,27
0,26
0,29
0,28
0,40
0,28
0,15
0,36
0,26
одо 0,18
0,41
0,38
0,27
0,37
0,43
0,22
4,22
4,35
2,54
0,94
0,97
2,13
19,48
74,81
47,01
68,96
61,43
55,00
1,43
4,00
1,67
50,00
97,00
155,56
9,76
16,31
8,15
56,22
85,58
126,25
—
0,13
—1,68
—3,28
—3,25
—2,09
15,26
70,59
42,79
64,74
57,21
50,78
—
2,57
0,24
48,57
95,57
154,13
—
6,55
—1,61
46,46
75,82
115,49
—
—.
—
—
—
—
—
55,33
27,53
49,48
41,95
35,52
—
—
—
—
47,00
105,43
—
.—
—
—
29,36
69,03
Прим є чани е. Концентрация ДНК 10 мкг/мл, МННГ — 4 мкМ. В большинстве ва
риантов изучено яо 5-Ю6 клеток. Разница между совместным эффектом двух факторов
и эффектам МННГ статистически достоверна, Р<0,001. mpAins — метилированная
ДНК. плазмиды pAins. * Исследовано Ь10в; ** 4,0-10* и *** 4,5-108 клеток.
ISSN 0233-7667. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1995. Т. 11. № 1 7 — 4-935 89
номен не зависит от мутагенной способности самой ДНК. Мы пред
полагаем, что наличие большого числа молекул двунитчатой ДНК
(особенно метилированной) в клетке ингибирует специфическую О6-
аЛКИЛгуанин-ДНК-алкилтрансферазную активность (АГТ). Известно,.
что двунитчатая ДНК является хорошим субстратом для этого белка,
причем он специфически взаимодействует с О6-метилгуанином [15],.
перенося метильную группу на собственный цистеиновый остаток. При
этом происходит необратимое связывание, способствующее инактива
ции фермента. Свободный 06-метилгуанин, присутствующий в культу-
ральной среде, по-видимому, ингибирует ферментативную активность
не столь активно. Несколько лет тому назад было показано, что сво
бодный Об-метилгуанин, хотя и увеличивал мутагенную активность
МННГ, но не столь радикально, как в наших исследованиях [16]. Еще
более эффективным ингибитором репарации является 06-бензилгуанин,
с помощью которого удалось показать доминирующую роль АГТ-ак-
тивности в репарации повреждений, индуцированных МННГ в нор
мальных фибробластах человека [17]. Об-бензилгуанин практически
полностью подавляет АГТ-активность и позволяет выявлять полный
мутагенный эффект алкилирующего агента МННГ.
Л. Л. Лукаш, С. В. Подольська, О. М. Сухорада. К- В. Костецька, І. Є. Костецький,
I. С. Варзанова, Ю. В. Пацковський, І. В. Вавіліна, С. В. Дейс
ВПЛИВ АЛКІЛУЮЧОГО АГЕНТА МННГ НА МУТАГЕННИЙ ЕФЕКТ
ЕКЗОГЕННОЇ РЕКОМБІНАНТНОІ ДНК
Р е з ю м е
В роботі досліджено можливу мутагенну активність трьох рекомбінантних плазмід
pBR322ins, pAins, pGins. Через три доби після трансфекції клітин китайського хом'яч
ка у випадку двох (pBR322ins, pAins) із них помічено мутагенну дію. Частота мутал-
тів зменшувалася протягом дев'яти днів після трансфекції. Мутагенна активність
рекомбінантних плазмід, очевидно, залежить від присутності нуклеотидних послідов
ностей, які походять від вихідних плазмід, а не від гена інсуліну із геному людини. У
випадку pAins, скоріш за все, вона визначається присутністю Alu-послідовності, яка
переклонована з плазміди рАЫ. Алкілуючий агент МННГ підсилював мутагенну дію
екзогенних ДНК на 10-й день після трансфекції.
L. L. Lukash, S. V. Podolskaya, Н. М. Suhorada, К. V. Kostetskaya, І. E. Kostetsky,
І. S. Varzanova, Yu. V. Patskovsky, I. V. Vavilina, S. V. Deis
THE INFLUENCE OF ALKYLATING AGENT MNNG
ON MUTAGENIC EFFECT OF EXOGENEOUS RECOMBINANT DNA
S u m m a r y
The possible mutagenic activity of three recombinant plasmids pBR322ins, pAins, pGins
has been investigated in this work. In three days after transfection two (pBR322ins,
pAins) out of three recombinant plasmids revealed mutagenic effect in Chinese hamster
cells. The mutation frequency decreased to ninth day after transfection. The mutagenic
activity of recombinant plasmids presumably depends an the presence of nucleotide se
quences which were coming from parental plasmids but not on insulin gene from human
genome. Mutagenic activity of pAins probably was determined by the presence of Alu
sequence that was recloned from plasmid pALl. The alkylating agent MNNG increased
the mutagenic effect of exogeneeus DNA on 10th day after transfection.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Lukash L. L., Buzhievskaya T. I., Varshaver N. В., Shapiro N. I. Oncogenic adeno
virus as mutagen for Chinese hamster cells in vitro // Somat. Cell. Genet.— 1981.—
7, N 2.—P. 133—146.
2. Бужиевская Т. И., Лукаш Л. Л., Подольская С. В. Экспериментальные модели
для изучения мутагенеза и трансформации, индуцированных вирусами и нуклеи-
90 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1995. Т. 11. № 1
новыми кислотами // Методы молекуляр. биологии.— Киев : Наук, думка, 1986.—
С. 147—158.
3. Kordyum V. A., Frolkis V. /., Lukash L. L. et at. Gene therapy of mass pathologies//
Biopolymers and Cell.—1993.—9, N 4.—P. 63—104.
4. Неборачко Л. #., Лукаш Л. Л., Трояновский Б. М. и др. Изучение возможности
экспрессии экзогенного гена инсулина человека в культивируемых клетках млеко
питающих // Биополимеры и клетка.— 1989.— 5, № 2.— С. 58—61.
5. Graham F. L., Van der Eb A. J. A new technique for the assay of infectivity of
human adenovirus 5 DNA // Virology.—1973.—52, N 3.—P. 456—467.
6. Van der Eb A. I., Graham F. L. Assay of transforming activity of tumor virus
DNA // Meth. Enzymol.— 1980.— 65, N 3.—P. 826—839.
7. Leng M., Rosilio C., Boudet J. Etude des effects de la methylation sur le comporte-
ment de l'acide deoxyribonucleique // Biochim. et biophys. acta.—1968.—174, N 2.—
P. 674—684.
8. Domoradski J., Pegg A. E., Dolan M. E. et at. Correlation between 06-methyltrans-
ferase activity and resistance of human cells to the cytotoxic and mutagenic effects
of N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine / / Carcinogenesis.— 1984.— 5.— P. 1641—
1647.
9. Рубашевский E. Л., Пацковский Ю. В., Подольская С. В. и др. Индукция мутаций
резистентности к 6-меркаптопурину в клетках китайского хомячка под действием
рекомбинантной плазмиды pAnis, содержащей ген инсулина человека // Цитология
и генетика.— 1993 — 27, № 3 — С. 63—«в.
10. Lukash L. L., Varshaver N. В., Buzhievskaya Т. I., Shapiro N. I. The oncogene oi
BAV-3 as a mutagen // J. Cell. Sci.— 1985.— 78.— P. 97—103.
11. Buzhievskaya T. I., Lukash L. L., Rubashevsky E. L. Mutagenic and transforming
action of some viruses, genes and recombinant molecules // Biotechnology (PA 17604,
USA).— Lancaster : Curr. progr. techn. publ. Co., 1991.—P. 133—156.
12. Lukash L. L., Buzhievskaya T. I. Role of early genes in mutagenesis // Ibid.—
P. 119—131.
13. Рубашевский E. Л., Пацковский Ю. В., Лысенко Е. Ф. и др. Мутагенный эффект
рекомбинантной плазмиды pBR322ins, содержащей нативный и измененный ген
инсулина человека // Цитология и генетика.— 1993.— 27, № 4.— С. 44—51.
14. Лукаш Л. Л. Корреляция мутагенеза и злокачественной трансформации. Эволю
ционные аспекты // Генетические последствия загрязнения окружающей среды.—
Киев : Наук, думка, 1989.— С. 121-^143.
15. Dolan М. Е., Pegg A. E. Extent of formation of 06-methylthymine in calf thymus
DNA methylated by N-methyl 1-N-nitrosourea and lack of repair of this product by
rat liver 06-alkylguanine DNA-alkyltransferase // Carcinogenesis.— 1985.— 6.—
P. 1611—1614.
16. Domoradski J., Pegg A. E., Maher A. E. et at. Depletion of 06-alkylguanine-DNA
methyltransferase in human cells increases the mutagenic response to N-methyl-N'-
nitro-N-nitrosoguanidine// Ibid.—P. 1823—1826.
17. Lukash L. L., Boldt J., Pegg A. E. et at. Effect of 06-alkylguanine DNA-alkyltrans
ferase on the frequency and spectrum of mutations induced by N-methyl-N'-nitro-
N-nitrosoguanidine in the HPRT gene of diploid human fibroblasts // Mutat. Res.—
1991.—250.—P. 397—409.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики Получено 30 08.94
НАН Украины, Киев
ISSN 0233-7667. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1995. Т. И. № 1 91
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-155656 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7657 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-11-28T02:28:11Z |
| publishDate | 1995 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Лукаш, Л.Л. Подольская, С.В. Сухорада, Е.М. Костецкая, Е.В. Костецкий, И.Е. Варзанова, И.С. Пацковский, Ю.В. Вавилина, И.В. Дейс, С.В. 2019-06-17T09:53:26Z 2019-06-17T09:53:26Z 1995 Влияние алкилирующего агента МННГ на мутагенный эффект экзогенной рекомбинантной ДНК / Л.Л. Лукаш, С.В. Подольская, Е.М. Сухорада, Е.В. Костецкая, И.Е. Костецкий, И.С. Варзанова, Ю.В. Пацковский, И.В. Вавилина, С.В. Дейс // Биополимеры и клетка. — 1995. — Т. 11, № 1. — С. 87-91. — Бібліогр.: 17 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0003D8 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155656 575.155:575.224.46 В работе исследована возможная мутагенная активность трех рекомбинантных плазмид pBR322ins, pAins, pGins. Через три дня после трансфекции клеток китайского хомячка в случае двух (pBR322ins, pAins) из них обнаружен мутагенный эффект. Частота мутантов уменьшалась к девятому дню после трансфекции. Мутагенная активность рекомбинантных плазмид, по-видимому, зависит от присутствия нуклеотидных последовательностей, происходящих от исходных плазмид, а не от гена инсулина из генома человека. В случае pAins, скорее всего, она определяется присутствием Alu-последовательности, которая переклонирована из плазмиды. pALl. Алкилирующий агент МННГ усиливал мутагенный эффект экзогенных ДНК на 10-е сутки после трансфекции. В роботі досліджено можливу мутагенну активність трьох рекомбінантних плазмід pBR322ins, pAins, pGins. Через три доби після трансфекції клітин китайського хом'ячка у випадку двох (pBR322ins, pAins) із них помічено мутагенну дію. Частота муталтів зменшувалася протягом дев'яти днів після трансфекції. Мутагенна активність рекомбінантних плазмід, очевидно, залежить від присутності нуклеотидних послідовностей, які походять від вихідних плазмід, а не від гена інсуліну із геному людини. У випадку pAins, скоріш за все, вона визначається присутністю Alu-послідовності, яка переклонована з плазміди рAL1. Алкілуючий агент МННГ підсилював мутагенну дію екзогенних ДНК на 10-й день після трансфекції. The possible mutagenic activity of three recombinant plasmids pBR322ins, pAins, pGins has been investigated in this work. In three days after transfection two (pBR322ins, pAins) out of three recombinant plasmids revealed mutagenic effect in Chinese hamster cells. The mutation frequency decreased to ninth day after transfection. The mutagenic activity of recombinant plasmids presumably depends an the presence of nucleotide sequences which were coming from parental plasmids but not on insulin gene from human genome. Mutagenic activity of pAins probably was determined by the presence of Alu sequence that was recloned from plasmid pALl. The alkylating agent MNNG increased the mutagenic effect of exogeneaus DNA on 10th day after transfection. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Влияние алкилирующего агента МННГ на мутагенный эффект экзогенной рекомбинантной ДНК Вплив алкілуючого агента МННГ на мутагенний ефект екзогенної рекомбінантної ДНК The influence of alkylating agent MNNG on mutagenic effect of exogeneous recombinant DNA Article published earlier |
| spellingShingle | Влияние алкилирующего агента МННГ на мутагенный эффект экзогенной рекомбинантной ДНК Лукаш, Л.Л. Подольская, С.В. Сухорада, Е.М. Костецкая, Е.В. Костецкий, И.Е. Варзанова, И.С. Пацковский, Ю.В. Вавилина, И.В. Дейс, С.В. |
| title | Влияние алкилирующего агента МННГ на мутагенный эффект экзогенной рекомбинантной ДНК |
| title_alt | Вплив алкілуючого агента МННГ на мутагенний ефект екзогенної рекомбінантної ДНК The influence of alkylating agent MNNG on mutagenic effect of exogeneous recombinant DNA |
| title_full | Влияние алкилирующего агента МННГ на мутагенный эффект экзогенной рекомбинантной ДНК |
| title_fullStr | Влияние алкилирующего агента МННГ на мутагенный эффект экзогенной рекомбинантной ДНК |
| title_full_unstemmed | Влияние алкилирующего агента МННГ на мутагенный эффект экзогенной рекомбинантной ДНК |
| title_short | Влияние алкилирующего агента МННГ на мутагенный эффект экзогенной рекомбинантной ДНК |
| title_sort | влияние алкилирующего агента мннг на мутагенный эффект экзогенной рекомбинантной днк |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155656 |
| work_keys_str_mv | AT lukašll vliâniealkiliruûŝegoagentamnngnamutagennyiéffektékzogennoirekombinantnoidnk AT podolʹskaâsv vliâniealkiliruûŝegoagentamnngnamutagennyiéffektékzogennoirekombinantnoidnk AT suhoradaem vliâniealkiliruûŝegoagentamnngnamutagennyiéffektékzogennoirekombinantnoidnk AT kosteckaâev vliâniealkiliruûŝegoagentamnngnamutagennyiéffektékzogennoirekombinantnoidnk AT kosteckiiie vliâniealkiliruûŝegoagentamnngnamutagennyiéffektékzogennoirekombinantnoidnk AT varzanovais vliâniealkiliruûŝegoagentamnngnamutagennyiéffektékzogennoirekombinantnoidnk AT packovskiiûv vliâniealkiliruûŝegoagentamnngnamutagennyiéffektékzogennoirekombinantnoidnk AT vavilinaiv vliâniealkiliruûŝegoagentamnngnamutagennyiéffektékzogennoirekombinantnoidnk AT deissv vliâniealkiliruûŝegoagentamnngnamutagennyiéffektékzogennoirekombinantnoidnk AT lukašll vplivalkíluûčogoagentamnngnamutagenniiefektekzogennoírekombínantnoídnk AT podolʹskaâsv vplivalkíluûčogoagentamnngnamutagenniiefektekzogennoírekombínantnoídnk AT suhoradaem vplivalkíluûčogoagentamnngnamutagenniiefektekzogennoírekombínantnoídnk AT kosteckaâev vplivalkíluûčogoagentamnngnamutagenniiefektekzogennoírekombínantnoídnk AT kosteckiiie vplivalkíluûčogoagentamnngnamutagenniiefektekzogennoírekombínantnoídnk AT varzanovais vplivalkíluûčogoagentamnngnamutagenniiefektekzogennoírekombínantnoídnk AT packovskiiûv vplivalkíluûčogoagentamnngnamutagenniiefektekzogennoírekombínantnoídnk AT vavilinaiv vplivalkíluûčogoagentamnngnamutagenniiefektekzogennoírekombínantnoídnk AT deissv vplivalkíluûčogoagentamnngnamutagenniiefektekzogennoírekombínantnoídnk AT lukašll theinfluenceofalkylatingagentmnngonmutageniceffectofexogeneousrecombinantdna AT podolʹskaâsv theinfluenceofalkylatingagentmnngonmutageniceffectofexogeneousrecombinantdna AT suhoradaem theinfluenceofalkylatingagentmnngonmutageniceffectofexogeneousrecombinantdna AT kosteckaâev theinfluenceofalkylatingagentmnngonmutageniceffectofexogeneousrecombinantdna AT kosteckiiie theinfluenceofalkylatingagentmnngonmutageniceffectofexogeneousrecombinantdna AT varzanovais theinfluenceofalkylatingagentmnngonmutageniceffectofexogeneousrecombinantdna AT packovskiiûv theinfluenceofalkylatingagentmnngonmutageniceffectofexogeneousrecombinantdna AT vavilinaiv theinfluenceofalkylatingagentmnngonmutageniceffectofexogeneousrecombinantdna AT deissv theinfluenceofalkylatingagentmnngonmutageniceffectofexogeneousrecombinantdna |