Окись азота в регенерирующей печени крыс

Окись азота в регенерирующей печени крыс

Содержание окиси азота в регенерирующей печени крыс определяли по интенсивно­сти сигнала электронного парамагнитного резонанса (ЭПР), вызванного мононитрозилъным комплексом железа с диэтилтиокарбаматом (ДЭТК). В качестве «ловушки» для продуцируемой эндогенно окиси азота служили предобразованные in v...

Повний опис

Збережено в:
Бібліографічні деталі
Опубліковано в: :Биополимеры и клетка
Дата:1995
Автори: Оболенская, М.Ю., Ванин, А.Ф., Мордвинцев, П.И., Дэкер, К.
Формат: Стаття
Мова:Russian
Опубліковано: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 1995
Онлайн доступ:https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155672
Теги: Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:Окись азота в регенерирующей печени крыс / М.Ю. Оболенская, А.Ф. Ванин, П.И. Мордвинцев, К. Дэкер // Биополимеры и клетка. — 1995. — Т. 11, № 2. — С. 76-81. — Бібліогр.: 26 назв. — рос.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-155672
record_format dspace
spelling Оболенская, М.Ю.
Ванин, А.Ф.
Мордвинцев, П.И.
Дэкер, К.
2019-06-17T10:09:05Z
2019-06-17T10:09:05Z
1995
Окись азота в регенерирующей печени крыс / М.Ю. Оболенская, А.Ф. Ванин, П.И. Мордвинцев, К. Дэкер // Биополимеры и клетка. — 1995. — Т. 11, № 2. — С. 76-81. — Бібліогр.: 26 назв. — рос.
0233-7657
DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0003E3
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155672
547.963.3
Содержание окиси азота в регенерирующей печени крыс определяли по интенсивно­сти сигнала электронного парамагнитного резонанса (ЭПР), вызванного мононитрозилъным комплексом железа с диэтилтиокарбаматом (ДЭТК). В качестве «ловушки» для продуцируемой эндогенно окиси азота служили предобразованные in vivo ком­плексы внутриклеточного негемового железа с введенным ДЭТК. Установлено что изменения содержания окиси азота коррелируют с периодичностью регенерационного процесса. Первое повышение в содержании окиси азота наблюдается через час после частичной гепатэктомии (ЧГЭ), совпадая по времени с первичными ответами реакции печени на повреждение. Второй, более выраженный подъем, отмечается через 6 ч после ЧГЭ, когда гепатоциты входят в клеточный цикл, и определяется преимущест­венно паренхимными клетками. Последующий спад совпадает с максимумом ДНК-синтетической активности. Постепенное повышение содержания окиси азота наблю­дается в течение периода охватывающего конец первого и начало второго клеточных циклов гепатоцитов, а также переход непаренхимных клеток от состояния покоя к делению.
Вміст окису азоту у регенеруючій печінці щурів визначали по інтенсивності сигналу електронного парамагнітного резонансу (ЕПР), викликаного мононітрозильним комп­лексом заліза з діетилтіокарбаматом (ДЕТК). «Пасткою» для продукованого ендогенно окису азоту слугували передутворені in vivo комплекси внутрішньоклітинного негемового заліза з введеним ДЕТК. Встановлено, що зміни вмісту окису азоту ко­релюють з періодичністю регенераційного процесу. Перше підвищення рівня вмісту окису азоту спостерігається через годину після часткової гепатектомії (ЧГЕ), збі­гаючись у часі з первинними відповідями реакції печінки на пошкодження. Друге, більш виразне підвищення, відмічається через 6 год після ЧГЕ, коли гепатоцити вступають до клітинного циклу, і визначається переважно паренхімними клітинами. Наступний спад відповідає максимуму ДНК-синтетичної активності. Поступове зро­стання вмісту окису азоту спостерігається протягом періоду, що охоплює кінець першого та початок другого клітинного циклу гепатоцитів, а також перехід непаренхімних клітин від стану спокою до ділення.
Nitric oxide (NO) production in the regenerating liver was estimated from the intensity of the electron paramagnetic resonance signal of the mononitrosyl complexes of iron and diethylthiocarbamate (DETC). Preformed complexes of intracellular non-heme Fe²⁺ and added DETC served as a trap for endogeneously produced NO. The data revealed dynamic changes of NO production temporally connected with the time periodicity of the liver regeneration. The first increase of NO production occurred ca. 1 h after partial hepatectomy (PHE) coinciding with the rapid response of the liver to injury. The second more pronounced production of NO was observed about 6 h after PHE, when the hepa-tocytes entered the first cell cycle, and originated mainly from them. The following minimum of NO synthesis coincided with the maximal rate of DNA synthesis. The third gradual rise of NO production was seen at the end of the investigated period, covering G2+M phases and the transit from the first to the second cell cycle of the hepatocytes and the entrance of nonparenchymal cells into the proliferation.
ru
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
Биополимеры и клетка
Окись азота в регенерирующей печени крыс
Окис азоту у регенеруючій печінці щурів
Nitric oxide production by the regenerating rat liver
Article
published earlier
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
title Окись азота в регенерирующей печени крыс
spellingShingle Окись азота в регенерирующей печени крыс
Оболенская, М.Ю.
Ванин, А.Ф.
Мордвинцев, П.И.
Дэкер, К.
title_short Окись азота в регенерирующей печени крыс
title_full Окись азота в регенерирующей печени крыс
title_fullStr Окись азота в регенерирующей печени крыс
title_full_unstemmed Окись азота в регенерирующей печени крыс
title_sort окись азота в регенерирующей печени крыс
author Оболенская, М.Ю.
Ванин, А.Ф.
Мордвинцев, П.И.
Дэкер, К.
author_facet Оболенская, М.Ю.
Ванин, А.Ф.
Мордвинцев, П.И.
Дэкер, К.
publishDate 1995
language Russian
container_title Биополимеры и клетка
publisher Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
format Article
title_alt Окис азоту у регенеруючій печінці щурів
Nitric oxide production by the regenerating rat liver
description Содержание окиси азота в регенерирующей печени крыс определяли по интенсивно­сти сигнала электронного парамагнитного резонанса (ЭПР), вызванного мононитрозилъным комплексом железа с диэтилтиокарбаматом (ДЭТК). В качестве «ловушки» для продуцируемой эндогенно окиси азота служили предобразованные in vivo ком­плексы внутриклеточного негемового железа с введенным ДЭТК. Установлено что изменения содержания окиси азота коррелируют с периодичностью регенерационного процесса. Первое повышение в содержании окиси азота наблюдается через час после частичной гепатэктомии (ЧГЭ), совпадая по времени с первичными ответами реакции печени на повреждение. Второй, более выраженный подъем, отмечается через 6 ч после ЧГЭ, когда гепатоциты входят в клеточный цикл, и определяется преимущест­венно паренхимными клетками. Последующий спад совпадает с максимумом ДНК-синтетической активности. Постепенное повышение содержания окиси азота наблю­дается в течение периода охватывающего конец первого и начало второго клеточных циклов гепатоцитов, а также переход непаренхимных клеток от состояния покоя к делению. Вміст окису азоту у регенеруючій печінці щурів визначали по інтенсивності сигналу електронного парамагнітного резонансу (ЕПР), викликаного мононітрозильним комп­лексом заліза з діетилтіокарбаматом (ДЕТК). «Пасткою» для продукованого ендогенно окису азоту слугували передутворені in vivo комплекси внутрішньоклітинного негемового заліза з введеним ДЕТК. Встановлено, що зміни вмісту окису азоту ко­релюють з періодичністю регенераційного процесу. Перше підвищення рівня вмісту окису азоту спостерігається через годину після часткової гепатектомії (ЧГЕ), збі­гаючись у часі з первинними відповідями реакції печінки на пошкодження. Друге, більш виразне підвищення, відмічається через 6 год після ЧГЕ, коли гепатоцити вступають до клітинного циклу, і визначається переважно паренхімними клітинами. Наступний спад відповідає максимуму ДНК-синтетичної активності. Поступове зро­стання вмісту окису азоту спостерігається протягом періоду, що охоплює кінець першого та початок другого клітинного циклу гепатоцитів, а також перехід непаренхімних клітин від стану спокою до ділення. Nitric oxide (NO) production in the regenerating liver was estimated from the intensity of the electron paramagnetic resonance signal of the mononitrosyl complexes of iron and diethylthiocarbamate (DETC). Preformed complexes of intracellular non-heme Fe²⁺ and added DETC served as a trap for endogeneously produced NO. The data revealed dynamic changes of NO production temporally connected with the time periodicity of the liver regeneration. The first increase of NO production occurred ca. 1 h after partial hepatectomy (PHE) coinciding with the rapid response of the liver to injury. The second more pronounced production of NO was observed about 6 h after PHE, when the hepa-tocytes entered the first cell cycle, and originated mainly from them. The following minimum of NO synthesis coincided with the maximal rate of DNA synthesis. The third gradual rise of NO production was seen at the end of the investigated period, covering G2+M phases and the transit from the first to the second cell cycle of the hepatocytes and the entrance of nonparenchymal cells into the proliferation.
issn 0233-7657
url https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155672
citation_txt Окись азота в регенерирующей печени крыс / М.Ю. Оболенская, А.Ф. Ванин, П.И. Мордвинцев, К. Дэкер // Биополимеры и клетка. — 1995. — Т. 11, № 2. — С. 76-81. — Бібліогр.: 26 назв. — рос.
work_keys_str_mv AT obolenskaâmû okisʹazotavregeneriruûŝeipečenikrys
AT vaninaf okisʹazotavregeneriruûŝeipečenikrys
AT mordvincevpi okisʹazotavregeneriruûŝeipečenikrys
AT dékerk okisʹazotavregeneriruûŝeipečenikrys
AT obolenskaâmû okisazotuuregeneruûčíipečíncíŝurív
AT vaninaf okisazotuuregeneruûčíipečíncíŝurív
AT mordvincevpi okisazotuuregeneruûčíipečíncíŝurív
AT dékerk okisazotuuregeneruûčíipečíncíŝurív
AT obolenskaâmû nitricoxideproductionbytheregeneratingratliver
AT vaninaf nitricoxideproductionbytheregeneratingratliver
AT mordvincevpi nitricoxideproductionbytheregeneratingratliver
AT dékerk nitricoxideproductionbytheregeneratingratliver
first_indexed 2025-11-24T18:47:53Z
last_indexed 2025-11-24T18:47:53Z
_version_ 1850486956786450432
fulltext УДК 547.963.3 М. Ю. Оболенская, А. Ф. Ванин, П. И. Мордвинцев, К. Дэкер ОКИСЬ АЗОТА В РЕГЕНЕРИРУЮЩЕЙ ПЕЧЕНИ КРЫС Содержание окиси азота в регенерирующей печени крыс определяли по интенсивно­ сти сигнала электронного парамагнитного резонанса (ЭПР), вызванного мононитро- зилъным комплексом железа с диэтилтиокарбаматом (ДЭТК). В качестве «ловушки» для продуцируемой эндогенно окиси азота служили предобразованные in vivo ком­ плексы внутриклеточного негемового железа с введенным ДЭТК. Установлено что изменения содержания окиси азота коррелируют с периодичностью регенерационного процесса. Первое повышение в содержании окиси азота наблюдается через час после частичной гепатэктомии (ЧГЭ), совпадая по времени с первичными ответами реакции печени на повреждение. Второй, более выраженный подъем, отмечается через 6 ч после ЧГЭ, когда гепатоциты входят в клеточный цикл, и определяется преимущест­ венно паренхимными клетками. Последующий спад совпадает с максимумом ДНК- синтетической активности. Постепенное повышение содержания окиси азота наблю­ дается в течение периода охватывающего конец первого и начало второго клеточных циклов гепатоцитов, а также переход непаренхимных клеток от состояния покоя к делению. Введение Частичная синхронизация процессов, наблюдаемая в регене­ рирующей печени крыс, делает ее удобной моделью для изучения роли предполагаемых участников этого процесса. К числу последних отно­ сится окись азота, простейший внутри- и межклеточный медиатор, об­ ладающий высокой реактивностью. Ее участие в процессе регенерации представляется весьма вероятным, поскольку ЧГЭ провоцирует функ­ ционирование многих соединений, являющихся либо регуляторами син­ теза окиси азота, либо мишенями для нее. К ним относятся некротиче­ ский фактор опухолей (ФНО-а), индуктор синтеза окиси азота в гепа- тоцитах и Купферовских клетках [1, 2], синтез которого повышается после ЧГЭ [3]; рибонуклеотидредуктаза, лимитирующий фермент син­ теза ДНК, ингибируемый окисью азота [4]; активируемая окисью азо­ та гуанилатциклаза [5]; ранние ответные реакции па повреждение, та­ кие как приток форменных элементов крови к месту повреждения, ад­ гезия тромбоцитов и т. д. (см. обзор [6]). Содержание окиси азота в образцах печени определяли с помощью метода ЭПР по интенсивности сигнала, создаваемого мононитрозиль- ным комплексом железа с ДЭТК (МНКЖ — ДЭТК). В качестве «ло­ вушки» для окиси азота использовали предобразованные in vivo ком­ плексы из эндогенного железа и привнесенного ДЭТК [7]. Изменения в содержании окиси азота коррелируют с периодичностью регенераци­ онного процесса [8] и, в частности, ДНК-синтетическая активность на­ блюдается на фоне низкого содержания окиси азота, не отличающегося от ее содержания в интактной печени. Материалы и методы. П о д г о т о в к а о б р а з ц о в п е ч е н и . В опытах использовали самок крыс линии ВИСТАР (150—170 г), на­ ходящихся на полном рационе и голодавших в течение 24 ч до экстир­ пации печени. 2/3 печени удаляли согласно [9], экстирпацию печени проводили с 8 до 10 ч утра в указанные ниже сроки в течение 37 ч с момента операции. За 30 мин до экстирпации печени животным вводи­ ли внутрибрюшинно 4%-й раствор ДЭТК в 0,9 %-м NaCl из расчета 0,1 мл на 100 г массы. Образцы печени брали вблизи и вдали от места повреждения. Измельченную ткань помещали в трубочки (04,9 мм, длина 40 мм), замораживали в жидком азоте и хранили в нем до ЭПР- ф М. Ю. ОБОЛЕНСКАЯ, А. Ф. ВАНИН, П. И. МОРДВИНЦЕВ, К. ДЭКЕР, ,1995 76 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1995. Т. 11. № 2 спектроскопии. Источник происхождения окиси азота контролировали с помощью конкурентного ингибитора ферментативного окисления L- аргинина, №-мононитро-1-аргинина (МНА) (см. обзор [6]), который вводили дважды до забоя животных за 60 и 45 мин в расчете 1,0 мл 1 %-го МНА в 0,9 %-м NaCl на 100 г массы тела. Э П Р - с п е к т р о с к о п и я . Спектры ЭПР снимали на радиоспек­ трометре ЭПР Varian E9 при частоте 9300 Гц, мощности 10 мВт и ко­ лебаниях амплитуды 0,1—0,5 мТ. Ко­ личественное содержание МНКЖ — ДЭТК в образцах оценивали двойной интеграцией, используя в качестве стандарта стабильный нитроксильный радикал 2,2',6,6'-тетраметилпипери- дол-1-оксил. К о н т р о л ь э ф ф е к т и в н о с ­ т и «л о в у ш к и». Образцы печени после ЭПР-спектроскопии обрабаты­ вали в течение 30 мин газообразной окисью азота под давлением 200 мм рт. ст. Окись азота (99,8 %) (МЭССЕР Грисхайм, Райнфельд, Германия) очищали вакуумной пере­ гонкой при 0,01 мм рт. ст. В ы д е л е н и е г е п а т о ц и т о в и н е п а р е н х и м н ы х к л е т о к . «Грубое» фракционирование клеток печени на паренхимные и непарен- химпые осуществляли дифференциаль­ ным центрифугированием после пер­ фузии печени in situ 0,05 %-м раство­ ром коллагеназы [10]. Количество клеток и их витальность определяли в гемоцитометре с 0,2 %-м трипановым они им. Аликвоты клеточных суспензий замораживали для ЭПР-спектро­ скопии. Рис. Г. ЭПР-опект,ры образцов регенерирую­ щей печени крыс через 12 (а, в) и 6 ч (б) по­ сле ЧГЭ без предварительного введения МНА (а, б) и после введения МНА {б) Результаты и обсуждение. ЭПР-с п е к т р ы о б р а з ц о в п е ч е ­ ни к р ы с п о с л е в в е д е н и я Д Э Т К . Типичный спектр ЭПР об- разцов печени, в которых происходит синтез окиси азота, представлен на рис. 1, а, б. В них различаются сигналы от: МНКЖ — ДЭТК с ве­ личинами gj_ =2,035, £ц =2,012 и триплетом сверхтонкой структуры при £±; комплексов Си2+ — ДЭТК с четырехкомпонентной сверхтон­ кой структурой (Л, £, В, Г); свободных радикалов, g = 2,0; комплексов Мо5+ с g—1,97 и восстановленных железосерных белков, g = l , 9 4 [11]. Вторая компонента комплекса Си2+ — ДЭТК (Б) налагается на сиг­ нал МНКЖ — ДЭТК и частично маскирует его. Интенсивность сигна­ ла МНКЖ — ДЭТК определяли по его третьей компоненте сверхтон­ кой структуры при g, на которую не налагаются никакие линии ЭПР- спектра образцов печени. На рис. ],в, представлен ЭПР-спектр образ­ цов регенерирующей печени крыс, которым, кроме ДЭТК, вводили МНА. Отсутствие сигнала МНКЖ — ДЭТК по сравнению с выражен­ ным сигналом у аналогичных животных, которым не вводили МНА (рис. 1,а, б), подтверждает то, что определяемая окись азота образу­ ется в результате ферментативного окисления L-аргинипа. ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1995. Т. 11. № 2 77 Контроль эффективности «ловушки» дал положительные результа­ ты. После обработки образцов печени газообразной окисью азота ин­ тенсивность ЭПР-сигналов от МНКЖ — ДЭТК возросла ппимерно в 20 раз (данные не приведены). Это свидетельствует о том, что пред- образованных комплексов Fe2+—ДЭТК достаточно для захвата обра­ зующейся окиси азота. О б р а з о в а н и е о к и с и а з о т а и п е р и о д и ч н о с т ь в п р о ц е с с е в о с с т а н о в л е н и я п е ч е н и . Хотя истинные мишени действия окиси азота и регуляторы ее синтеза в динамике регенераци- онного процесса пока неизвестны, общее представление о роли этого соединения можно составить путем сравнения динамики изменений ее содержания с периодичностью процесса в целом. Наиболее изученная 0 12 3 10 20 М v Ю 15 20 25 JO Рис. 2. Содержание окиси азота в образцах печени в разные .cjpo-ки после ЧГЭ Рис. 3. Интенсивность синтеза ДНК в регенерирующей печени крыс [21] временная характеристика процесса связана с периодами наиболее синхронизированного первого клеточного цикла гепатоцитов, продолжа­ ющегося около 30 ч с момента ЧГЭ [12]. Купферовские и эндотели- альные клетки синусоидов вступают в клеточный цикл друг за другом и после гепатоцитов [13]. Период от ЧГЭ до начала S-фазы гепатоцитов выделяется как пред- синтетический (около 12—14 ч). Его, в свою очередь, ориентировочно подразделяют на три фазы — «проверка ситуации» с реакциями ран­ него ответа на травму (0,5—1 ч после ЧГЭ), метаболическая переори­ ентировка клеток с приобретением ими готовности к пролиферации (~1—4 ч после ЧГЭ) и фаза, сходная с Gi ( ~ 4 ~ 12 ~ 1 4 ч после ЧГЭ) [8, 14, 15]. Первый подъем в повышении синтеза окиси азота отмечается через час после ЧГЭ (рис. 2), совпадая по времени с пер­ вой стадией пререпликативного периода. Некоторые из наблюдаемых изменений в это время можно рассматривать в качестве потенциальных регуляторов или мишеней действия окиси азота. Среди них появление транскрипционных факторов, связывающихся с хВ-сайтами [16]; ок- систресс, вызванный травмой, и ответная реакция на него, где окись азота может выступать как агент, нейтрализующий восстановление производных кислорода [6]; повышение и понижение экспресси генов, кодирующих соответственно ФНО-а и тканеспецифический цитохром P450J [3, 8], а также вся цепь событий в области повреждения — хе­ мотаксис клеток крови, тромбообразование и последующая тромборе- зистентность, которые регулируются окисью азота, продуцируемой в том числе и тромбоцитами [6], и т. д. Следующее, более выраженное повышение уровня образования оки­ си азота совпадает по времени с переходом гепатоцитов из фазы мета­ болической переориентировки в Gi-подобный период. «Грубое» фрак­ ционирование печени на паренхимные и непаренхимные клетки пока­ зало, что основным продуцентом окиси азота являются гепатоциты. После преинкубации с ДЭТК in vivo (30 мин) и процесса выделения клеток (~40—45 мин) определяется до 1,6 нмоль окиси азота на 1,ЗХ 78 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1995. Т. II . X* 2 ХЮ8 гепатоцитов (количество клеток, примерно соответствующее 1 г ткани) [17], т. е. величины, сходные с полученными на ткани методом ЭПР. Как было показано ранее, этому событию предшествует в регене­ рирующей печени повышенное образование ФНО-а [3], который явля­ ется сильным индуктором независимой от ионов Са2+ NO-синтазы в ге- патоцитах [1]. Весьма вероятно, что этот фермент и ответствен за воз­ растание образования окиси азота на этом этапе. Среди возможных последствий образования окиси азота в это вре­ мя можно выделить регуляцию кровотока и регуляцию гуанилатцик- лазы. Печень в этом периоде имеет плотную структуру и интенсивный темно-красный цвет, которые впоследствии сменяются «воздушной» структурой и желтовато-розовым цветом. Содержание гуанозинмоно- фосфата, продукта гуанилатциклазной активности, повышено [18], что потенциально стимулирует синтез РНК, способствуя вхождению клеток в клеточный цикл [19]. Недавние исследования на макрофагоподобных клетках показали, что окись азота обеспечивает прохождение клетка­ ми некой критической точки в течение Gi-периода [20]. Существует ли она в регенерирующей печени, остается неясным. Содержание определяемой окиси азота снижается к концу Gi-фазы у гепатоцитов, достигает минимальных значений, когда синтез ДНК становится выраженным (рис. 3) [21], и коррелирует с наименьшим содержанием гуанозинмонофосфата [18]. Эти результаты соответству­ ют известным ранее данным по ингибирующему действию окиси азота на синтез ДНК [22], которое частично объясняется взаимодействием окиси азота с железом, необходимым для полноценного функциониро­ вания рибонуклеотидредуктазы [4] и p34cdc2 [23], регуляторов G\-пе­ рехода в эукариотических клетках. Последнее в исследуемый период повышение синтеза окиси азота приходится на конец первого, начало второго клеточных циклов гепа­ тоцитов и на переход непаренхимных клеток печени к пролиферации [13]. Оно совпадает с возросшей чувствительностью печени к дейст­ вию нитрозосоединений [24], со снижением в ткани гема [24] и ком­ плексно связанного негемового железа, связь которого с лигандами ослабляется [25], с возросшим содержанием гуанозинмонофосфата [18]. Какое место эти события занимают в цепи явлений, ведущих к. завершению цикла, в настоящее время еще не выяснено. На других клетках показано, что поддержание определенного уровня окиси азота представляется важным. Его превышение задерживают макрофагопо- добные клетки в С2-фазе [20]. Изменения синтеза окиси азота в регенерирующей печени ,\арак- терны для восстановительного процесса. Их последовательность сохра­ няется и при 24-4 голоде, предшествующем экстирпации печени, хотя абсолютное значение показателей меньше, а также при «квази» регене­ рации, вызванной введением сублетальных доз циклогексимида [26]. Анализируя полученные данные, нужно учитывать, что абсолютные значения содержания окиси азота в тканях, определяемые методом ЭПР, могут быть занижены в силу разных причин, которые подробно разбирались в работе [2]. Однако, несмотря на это, такой подход да­ ет возможность оценить синтез окиси азота по основному продукту ре­ акции, а не по ее естественным производным и впервые прямым мето­ дом показать периодичность изменений ее содержания in vivo. М. Ю. Оболенська, О. Ф. Ванін, П. I. Мордвинцев, К. Декер ОКИС АЗОТУ У РЕГЕНЕРУЮЧІЙ ПЕЧІНЦІ ЩУРІВ Р е з ю м е Вміст окису азоту у регенеруючій печінці щурів визначали по інтенсивності сигналу електронного парамагнітного резонансу (ЕПР), викликаного мононітрозильним комп­ лексом заліза з діетилтіокарбаматом (ДЕТК). «Пасткою» для продукованого ендо- ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1995. Т. 11. № 9 79 генно окису азоту слугували передутворені in vivo комплекси внутрішньоклітинного негемового заліза з введеним ДЕТК. Встановлено, що зміни вмісту окису азоту ко­ релюють з періодичністю регенераційного процесу. Перше підвищення рівня вмісту окису азоту спостерігається через годину після часткової гепатектомії (ЧГЕ), збі­ гаючись у часі з первинними відповідями реакції печінки на пошкодження. Друге, більш виразне підвищення, відмічається через б год після ЧГЕ, коли гепатоцити вступають до клітинного циклу, і визначається переважно паренхімними клітинами. Наступний спад відповідає максимуму ДНК-синтетичної активності. Поступове зро­ стання вмісту окису азоту спостерігається протягом періоду, що охоплює кінець першого та початок другого клітинного циклу гепатоцитів, а також перехід непарен- хімних клітин від стану спокою до ділення. М. Yu. Obolenskaya, A. F. Vanin, P. I. Mordvintcev, K. Decker NITRIC OXIDE PRODUCTION BY THE REGENERATING RAT LIVER S u m m a r y Nitric oxide (NO) production in the regenerating liver was estimated from the intensity of the electron paramagnetic resonance signal of the mononitrosyl complexes of iron and diethylthiocarbamate (DETC). Preformed complexes of intracellular non-heme Fe2+ and added DETC served as a trap for endogeneously produced NO. The data revealed dynamic changes of NO production temporally connected with the time periodicity of the liver regeneration. The first increase of NO production occurred ca. 1 h after partial hepatectomy (PHE) coinciding with the rapid response of the liver to injury. The second more pronounced production of NO was observed about 6 h after PHE, when the hepa- tocytes entered the first cell cycle, and originated mainly from them. The following minimum of NO synthesis coincided with the maximal rate of DNA synthesis. The third gradual rise of NO production was seen at the end of the investigated period, covering G2+M phases and the transit from the first to the second cell cycle of the hepatocytes and the entrance of nonparenchymal cells into the proliferation. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Curran R. D., Biliar T. R., Stuehr D. J. et at. Multiple cytokines are required to induce hepatocyte nitric oxide production and inhibit total protein synthesis // Ann. Surg.—1990.—212.—P. 462—469. 2. Gaillard Т., Mulsch A., Busse R. et at. Regulation of nitric oxide production by stimulated rat Kupffer cells // Pathobiol.—1991.—59.—P. 280—283. 3. Obolenskaya M. Yu., Bernauer H., Decker K. Do Kupffer cells take part in trigge­ ring liver regeneration? // Cells of the hepatic sinusoid / Eds. D. L. Knook, E. Wis- se.—Leiden, 1993.—Vol. 4.—P. 76—78. 4. Lepoivre M., Chenais В., Yapo A. et at. Alterations of ribonucleotide reductase activity following induction of the nitrite-genetating pathway in adenocarcinoma cells // J. Biol. Chem.—1990.—265.—P. 14143—14149. 5. Rappopori R. M., Murad F. Agonist induced endothelium-dependent relaxation in rat thoracic aorta may be mediated through cyclic GMP // Circ. Res.— 1983.— 52.— P. 352—357. 6. Moncada S., Palmer R. M. J., Higgs E. A. Nitric oxide: physiology, pathophysiology, and pharmacology // Pharmacol. Rev.—1991.—43.—P. 109—142. 7. Vanin A. F., Mordvintcev P. L, Kleschev A. L. Appearance of nitrogen oxide in ani­ mal tissues in vivo H Stud. Biophys.—1984.—102.—P. 135—142. 8. Оболенская М. Ю., Прима В. И., Герасимова В. В., Платонов О. М. Частичное ограничение экспрессии генома — компонент перестройки его работы в регенериру­ ющей печени млекопитающих // Биополимеры и клетка.— 1989.— 5.— Р. 79—88. 9. Higgins G. М., Anderson R. М. Experimental pathology of the liver. 1. Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal // Arch. Pathol.— 1931.—12.—P. 186—202. 10 Kawada N., Klein #., Decker K. Eicosanoid-mediated contractility of hepatic stella­ te cells // Biochem. J.—1992.—285.—P. 367—371. 11. Kubrina L. N., Caldwell W. S., Mordvintcev P. L et at. // Biochim. et biophys. acta.— 1990.— P. 233—237. 12. Tsanev R. Cell cycle and liver function // Results and problems in cell differenti­ ation.—Berlin : Springer, 1975.—Vol. 7.—P. 197—248. 13. Widman J. J., Fahimi H. D. Proliferation of mononuclear phagocytes (Kupffer cells) and endothelial cells in regenerating rat liver // Americ. J. Pathol.—1975.— 80, N 2.—P. 349—360. 14. Яковлев A. IO. Динамическое резервирование гепатоцитов — механизм, обеспечи­ вающий специфические функции в регенерирующей печени // Цитология.— 1979.— 21._С. 1243—1252. 80 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1995. Т. П. № 2 15. Fausto N., Mead J. E. Regulation of liver growth: protooncogenes and transforming growth factors // Lab. Investing.— 1989.—60.—P. 4—13. 16. Tewari M., Dobrzanski P., Mohn K. /., et al. Rapid induction in regenerating liver of RL/IF-1 (an IkB that inhibits NF-kB RelB-p50, and c-Rel-p50) and PHF, a novel kB site-binding complex // Мої. and Cell. Biol.—1992.—12.—P. 2898—2908. 17. Hoffman F., Decker K. Comparative metabolic studies on liver sinusoidal cells and different types of macrophages // Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem.— 1979.— 360.— P. 905—912. 18. Goridis C., Zwiller J., Reutter W. Guanylate cyclase activity and cyclic nucleotide concentrations during liver regeneration after experimental injury // Biochem. J.— 1977.—164.—P. 33—39. 19. Weinstein Y., Chambers D. N., Bourne H. R.f Melmpon K. L. Cyclic GMP stimula­ tes lymphocyte nucleic acid synthesis // Nature.— 1974.— 251.— P. 352—353. 20. Takagi K., Isobe Y., Yasukawa K. et al. Nitric oxide blocks the cell cycle of mouse macrophage-like cells in the early G2+M p h a s e / / FEBS Lett.— 1994.— 340.— P. 159—162. 21. Оболенская М. Ю. Возрастные особенности синтеза ДНК в регенерирующей пе­ чени белых крыс // Цитология.— 1976.— 29.— С. 857—861. 22. Lepoivre M., Boudbid Н., Petit J. F. Antiproliferative activity of interferon combi­ ned with lipopolysaccharide on murine adenocarcinoma: dependence on an L-argini- ne metabolism with production of nitrite and citrulline // Cancer Res.— 1989.— 49.— P. 1970—1976. 23. Pines J., Hunter T. p34cdc2: the S and M kinase // New Biol.—1990.—2(5).— P. 389—401. 24. Briggs R. G., Derubertis F. R. Increased responsiveness of the hepatic guanylate cyclase guanosine S'S'-monophosphate system to nitroso guanidine following partial hepatectomy // Biochim. et biophys. acta.—1990.—628.—P. 425—437. 25. Оболенська М. Ю., Герасимова В. В. Роль комплексно зв'язаного заліза в поділі клітини // Укр. біохім. журн.— 1972.— 5.— С 577—579. 26. Ванин А. Ф., Митрохин Ю. Н., Мордвинцев П. И., Говоров И. Н. Появление окси­ да азота в печени крыс при разных колебаниях биосинтеза белка и ДНК, вызван­ ных циклогексимидом в сублетальной дозе. // Докл. АН СССР.— 1990.— 315.— С. 1267—1270. Ин-т молекуляр. биологии и генетики Получено 9.06.94 НАН Украины, Киев ISSN 0203-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1995. Т. 11. № 26—4-962 81

Схожі ресурси