Регуляція вуглецевими субстратами промотору гена алкогольоксидази у мутантів дріжджів Hansenula polymorpha з пошкодженою катаболітною репресією
У мутантів метилотрофних дріжджів H. polymorpha з пошкодженою катаболітною репресією проаналізовано регуляцію синтезу власної пероксисомної алкогольоксидази та гетерологічної секретованої глюкозооксидази вуглецевими субстратами. Встановлено, що мутації, які ведуть до надсинтезу ферментів на середови...
Saved in:
| Published in: | Біополімери і клітина |
|---|---|
| Date: | 2002 |
| Main Authors: | , , |
| Format: | Article |
| Language: | Ukrainian |
| Published: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
2002
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155821 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Регуляція вуглецевими субстратами промотору гена алкогольоксидази у мутантів дріжджів Hansenula polymorpha з пошкодженою катаболітною репресією / О.Г. Стасик, О.В. Стасик, А.А. Сибірний // Вiopolymers and Cell. — 2002. — Т. 18, № 2. — С. 155-160. — Бібліогр.: 14 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859593437123182592 |
|---|---|
| author | Стасик, О.Г. Стасик, О.В. Сибірний, А.А. |
| author_facet | Стасик, О.Г. Стасик, О.В. Сибірний, А.А. |
| citation_txt | Регуляція вуглецевими субстратами промотору гена алкогольоксидази у мутантів дріжджів Hansenula polymorpha з пошкодженою катаболітною репресією / О.Г. Стасик, О.В. Стасик, А.А. Сибірний // Вiopolymers and Cell. — 2002. — Т. 18, № 2. — С. 155-160. — Бібліогр.: 14 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Біополімери і клітина |
| description | У мутантів метилотрофних дріжджів H. polymorpha з пошкодженою катаболітною репресією проаналізовано регуляцію синтезу власної пероксисомної алкогольоксидази та гетерологічної секретованої глюкозооксидази вуглецевими субстратами. Встановлено, що мутації, які ведуть до надсинтезу ферментів на середовищі з глюкозою, є специфічними щодо субстратної регуляції промотору алкогольоксидази. Отримані мутантні штами є перспективними продуцентами гетерологічних білків.
Carbon source regulation of the alcohol oxidase and heterologous glucose oxidase synthesis in mutants of the methylotrophic yeast Hansenula polymorpha impaired in catabolite repression was analyzed. It was shown that the mutations causing the enzymes oversynthesis in glucose medium are specific in respect to substrate regulation of the alcohol oxidase promoter. The mutants isolated are promising hosts for production of foreign proteins.
У мутантов метилотрофних дрожжей Н. polymorpha с поврежденной катаболитной репрессией проанализирована регуляция синтеза пероксисомной алкогольоксидазы и гетерологической глюкозооксидази углеродными субстратами. Установено, что мутации, приводящие к суперсинтезу ферментов в среде с глюкозой, являются специфическими по отношению к субстратной регуляции промотора алкогольоксидазы. Полученные мутантные штаммы являются перспективными продуцентами гетерологических белков.
|
| first_indexed | 2025-11-27T18:49:00Z |
| format | Article |
| fulltext |
ISSN 0233-7657. Біополімери і клітина. 2002. Т. 18. № 2
Регуляція вуглецевими субстратами
промотору гена алкогольоксидази у
мутантів дріжджів Hansenula polymorpha
з пошкодженою катаболітною репресією
О. Г. Стасик, О. В. Стасик, А. А. Сибірний
Інститут біології клітини НАН України
Вул. Драгоманова, 14/16, Львів, 79005, Україна
E-mail: stasyk@biochem.lviv.ua
У мутантів метилотрофних дріжджів Я. polymorpha з пошкодженою катаболітною репресією
проаналізовано регуляцію синтезу власної пероксисомної алкогольоксидази та гетерологічної
секретованої глюкозооксидази вуглецевими субстратами. Встановлено, що мутації, які ведуть до
надсинтезу ферментів на середовищі з глюкозою, є специфічними щодо субстратної регуляції
промотору алкогольоксидази. Отримані мутантні штами є перспективними продуцентами
гетерологічних білків.
Вступ. Катаболітна репресія є одним з основних
механізмів регуляції експресії генів вуглецевими
субстратами у дріжджів. Молекулярні механізми
репресії залишаються маловивченими, особливо що
стосується перших етапів передачі сигналу репресії
від вуглецевих субстратів-ефекторів до промоторів
відповідних генів [1—3] . У метилотрофних дріж
джів синтез ключових пероксисомних та цитозоль-
них ферментів метаболізму метанолу є регульова
ним. За оптимальних умов безперервної культури
при індукції метанолом пероксисомна алкогольок-
сидаза (АОХ), перший фермент утилізації метано
лу, може складати до ЗО % від загальної кількості
клітинного білка. Проте у клітин, вирощених на
глюкозному або етанольному середовищі, промотор
АОХ ( Р А 0 Х ) є повністю репресованим [4 ] . Ро
зуміння молекулярних механізмів такої регуляції є
цікавим для фундаментальних та прикладних до
сліджень. Так, на основі Р А 0 Х у дріжджів Я . poly
morpha розроблено і впроваджено у виробництво
систему експресії гетерологічних білків медичного
та біотехнологічного значення [5] .
© О. Г. СТАСИК, О. В. СТАСИК, А. А. СИБІРНИЙ. 2002
Мета даної роботи — дослідити регуляцію Р А 0 Х
різними вуглецевими субстратами у мутантів Я .
polymorpha з пошкодженою катаболітною репре
сією. Використовуючи як модель експресію гетеро-
логічного білка під Р А 0 Х > порівняти катаболітну
регуляцію синтезу власних і чужорідних білків з
різною локалізацією у Я . polymorpha.
Матеріали і методи Штами. У роботі викори
стовували штами Я . polymorpha дикого типу NCYC
495-8 (ІеиЮ), NCYC 495 (leul-J) та NCYC 495
(met6)> люб'язно надані д-ром П. Садбері (Шеф-
філдський університет, Велика Британія), а також
мутанти, нечутливі до катаболітної репресії, —
gcrl-2 ІеиЮ [ 4 ] , ЕАО (ІеиЮ) [ 6 ] . Умови гібри
дизації штамів описано раніше [7 ] .
Середовища та умови культивування. Штами
Я. polymorpha інкубували при температурі 37 °С у
багатому середовищі YPD (1 %-й дріжджовий екс
тракт, 2 %-й бактопептон, 1 %-ва глюкоза) та
мінеральному середовищі YNB (0,67 % Yeast Nit
rogen Base («Difco», США)). Концентрація вугле
цевих ростових субстратів становила 1 %, факторів
росту (лейцин, метіонін) — 40 мг/мл. Для штамів,
що експресують секретовану глюкозооксидазу As
pergillus niger (GOD), до середовища додавали фос-
155
mailto:stasyk@biochem.lviv.ua
СТАСИК О. Г., СТАСИК О. В., СИБІРНИЙ А. А.
EcoRl
Рис. 1. Схема інтегративного вектора рОН1у який містить касету
експресії гена глюкозооксидази A. niger (GOD) під промотором
гена алкогольоксидази (Рдох) polymorpha
фатний буфер (рН 6,0) у кінцевій концентрації
100 мМ для стабілізації GOD у культуральному
середовищі. Біомасу дріжджів визначали фотоколо-
риметрично при 590 нм і виражали в перерахунку
на мг/мл сухої маси клітин.
Конструювання вектора рОНІ для інтегра
тивної трансформації. Методи рекомбінантних
ДНК використовували, як описано [8 ] . Касету
експресії з вектора pWG31, який містив РАох *
АОХ
термінатор, ген GOD з A. niger та секреторну
MF-a лідерну послідовність з Saccharomyces се-
revisiae [ 9 ] , клонували в унікальний ВатНІ сайт
човникової плазміди pYTl [10] з утворенням рОНІ
(рис 1). Для ефективної інтеграції рОНІ у геном
реципієнтного штаму шляхом гомологічної реком
бінації вектор лінеаризували по StuI сайту в об
ласті Р А 0 Х . Штами Я . polymorpha трансформували
методом електропорації [11] .
Визначення активності ферментів. Актив
ність АОХ визначали в пермеабілізованих кліти
нах, згідно з описаним раніше методом [12] , і
виражали в мкмоль-хв"1 -мг 1 сухої маси клітин.
Активність GOD аналізували в 50 мМ фосфатному
буфері (рН 6,0), що містив 3 мМ о-діанізидин,
2,5 од/мл пероксидази хрону та 0,06 мл культу-
рального середовища. Реакцію запускали додаван
ням 0,06 мл 2 М D-глюкози. Реакційну суміш
інкубували при температурі 30 °С. Зупиняли ре
акцію додаванням 0,34 мл концентрованої HCL
Оптичну густину реакційної суміші визначали спе
ктрофотометрично при 525 нм. Активність фермен
ту виражали в од/мл культурального середовища.
Визначення GOD методом прямої заливки на
чашках. Клітини, вирощені на YPD, переносили
методом реплік на середовища з різними джерела
ми вуглецю та інкубували протягом 2—3 діб. Чаш
ки заливали 10 мл реакційної суміші для GOD, яка
містила 50-мМ фосфатний буфер (рН 6,0), 3 мМ
о-діанізидин, 100 мМ D-глюкозу, 2,5 од/мл перок
сидази хрону та 0,3 %-й агар. Колонії, що секре-
тують GOD, утворювали гало червоного кольору.
Інші методи. Для УФ-мутагенезу використо
вували дозу опромінення, яка забезпечувала 10 %
виживання клітин. Електрофорез білків в SDS-
поліакриламідному гелі проводили згідно з методи
кою [13] . Умови та методи електронно-мікроско
пічного дослідження клітин описано раніше [14] .
Результати і обговорення. Нами ізольовано та
генетично і біохімічно проаналізовано мутанти Я .
polymorpha з пошкодженою глюкозною катаболіт
ною репресією [4 ]. Мутанти gcrl {glucose catabolite
repression) були здатні рости на середовищі з мета
нолом у присутності токсичного неметаболізова-
ного аналога глюкози, 2-дезоксиглюкози, і прояв
ляли плейотропний фенотип [4 ]. Характерною осо
бливістю gcrl мутантів є конститутивний синтез
АОХ у середовищі з глюкозою. В цій роботі про
аналізовано ріст і кінетику активності АОХ при
інкубації мутанта gcrl-2 та штаму дикого типу на
інших вуглецевих субстратах.
Встановлено, що, крім репресії глюкозою, у
gcrl-2 мутанта пошкоджено репресію синтезу АОХ
у середовищах з манозою, дисахаридом трегало-
зою, а також підвищений в порівнянні зі штамом
дикого типу синтез ферменту в середовищі з кси
лозою (рис. 2, б, г, е). Поряд з цим мутант не
відрізняється від штаму дикого типу за репресією
АОХ такими субстратами, як етанол, фруктоза,
мальтоза і сахароза. В усіх випадках пошкодження
репресії корелює із сповільненням росту gcrl-2 на
відповідному вуглецевому субстраті (рис 2) . Нами
клоновано відповідний ген GCR1 методом функ
ціональної комплементації і встановлено, що він
кодує білок, гомологічний транспортерам глюкози,
з можливою сенсорною функцією. Таким чином,
різниця в ефекті різних цукрів на синтез АОХ у
gcrl-2 може бути зумовлена диференційованою
участю продукту гена GCR1 у їхньому транспорті
та передачі сигналу репресії.
Для аналізу регуляції експресії гетерологічних
білків під Р А 0 Х у gcr мутантів нами сконструйовано
штами-продуценти секретованої GOD гриба A. ni
ger. Вихідним штамом був Я. polymorpha ЕАО
156
РЕГУЛЯЦІЯ ПРОМОТОРУ ГЕНА АЛКОГОЛЬОКСИДАЗИ
Рис. 2. Регуляція різними вуглецевими субстратами активності пероксисомної АОХ у Я. polymorpha (а, в, д — штам дикого типу;
6\ г, е — мутант gcrl-2; кінетика росту — суцільна лінія; кінетика активності АОХ — штрихова лінія): а, б — етанол (7, 7'); ксилоза
(2, 2'); метанол (З, З'); в, г — маноза(/, 7'); глюкоза (2, 2'); фруктоза ( і , 3'); д, е — трегалоза (7, 7'); сахароза (2, 2'); мальтоза
( і , і ')
(ІеиЮ). Його отримано як похідний від gcr7-2
внаслідок введення вторинних мутацій, які під
вищували рівень конститутивної експресії АОХ у
середовищі з глюкозою [6 ] . Такий комплекс му
тацій зумовлює біогенез збільшених у розмірах
пероксисом у клітинах, вирощених на глюкозному
середовищі (рис. 3) .
Шляхом схрещування мутанта ЕАО (ІеиЮ) зі
штамом дикого типу NCYC 495 (leul-1) і відбору
рекомбінантних gcr штамів з leuJ-J міткою ви-
157
СТАСИК О. Г., СТАСИК О. В., СИБІРНИЙ А. А.
Рис. 3. Електронні мікро-
фотофафії клітин штамів
Н. polymorphs а — штам
дикого типу, метанол;
б — штам дикого типу,
глюкоза; б — gcrl-2, глю
коза; г — ЕАО (ІеиЮ),
глюкоза. Умовні позна
чення: П — пероксисома;
В — вакуоля; М — міто-
хондрія; Я — ядро
ділено штам ЕА02 (leul-J). Для підвищення ефек
тивності інтегративної трансформації сконструйо
вано вектор рОНІ з касетою експресії GOD (див.
«Матеріали і методи») (рис. 1). Вектор містив ген
LEU2 S. cerevisiae, що комплементує ауксотрофний
дефект у leul-1 штамів Я . polymorphs Активність
секретованої GOD у прототрофних трансформантів
штаму дикого типу і Е А 0 2 визначали методом
прямої заливки на чашках. Відібрано штам Е А 0 2 -
1, який продукував GOD з високою активністю на
середовищі з глюкозою і залишався мітотично ста
більним протягом тривалої інкубації у неселектив-
них умовах. ЕА02-1 характризувався відсутністю
АОХ активності і, як наслідок, втратив здатність
рости на метанольному середовищі. Ген АОХ, імо
вірно, був ушкоджений при інтеграції касети екс
пресії GOD в області Р А 0 Х .
Встановлено, що експресія гетерологічного
ферменту у рекомбінантного штаму ЕА02-1 ін
дукується метанолом, глюкозою та ксилозою і
водночас репресується сахарозою (рис 4, а, б).
Таким чином, регуляція синтезу GOD у штаму
ЕА02-1 збігається з регуляцією АОХ у мутанта
gcrl-2 на середовищах з даними джерелами вугле
цю (рис. 2) . Аналіз активності секретованої GOD в
культуральному середовищі показав, що при ін
кубації ЕА02-1 у глюкозному середовищі вона є
дещо нижчою порівняно з такою штаму дикого
типу в метанольному середовищі (0,62 і 0,85 од/мл
відповідно) (рис. 4, а). Слід зазначити, що у
вихідного реципієнтного штаму ЕА02 (leul-J) ак
тивність АОХ при інкубації на глюкозному середо
вищі була у 4—5 разів вищою (6,7 од/мг) , ніж при
інкубації з метанолом (1,6 од/мг) . Причиною такої
відмінності може бути специфіка секреції гетеро-
лоїічної GOD, а також конверсія цим ферментом
позаклітинної глюкози до глюконової кислоти, яка
не утилізується Я. polymorphs поряд з нагромад
женням іншого токсичного продукту реакції — пе
рекису водню (даних не наведено). При інкубації з
ксилозою, яка не є субстратом GOD, експресія
гетерологічного білка була в 4 рази вищою
(3,6 од/мл) , ніж при індукції штаму дикого типу
метанолом.
158
РЕГУЛЯЦІЯ ПРОМОТОРУ ГЕНА АЖОГОЛЬОКСИДАЗИ
Рис. 4. Відносна активність GOD у культуральному середовищі
після Інкубації штамів Н. polymorpha з різними джерелами
вуглецю протягом 110 год (активність ферменту у штаму дикого
типу, індукованого метанолом, прийнята за 100 % і відповідає
0,86 од/мл) (а: 1 — дикий тип, 2 — ЕА02-1; 3 — ЕА02-1-Н) і
електрофореграма культурального середовища продуцентів, ін-
кубованих протягом 60 год на різних вуглецевих субстратах (б:
J — білкові маркери (кДа); 2 — очищена GOD A. niger (стан
дарт); J —ЕА02-1 (ксилоза, 3,6 од. GOD/мл); 4 — ЕА02-1
(глюкоза, 0,45 од. GOD/мл); 5 — ЕА02-1 (метанол, 0,95 од.
GOD/мл); 6 — дикий тип (метанол, 0,72 од. GOD/мл); 7 —
дикий тип (глюкоза))
отримано мутанти з підвищеною експресією GOD
на глюкозному середовищі. Метод відбору надпро-
дуцентів GOD базувався на спостереженні, що
після інкубації протягом чотирьох діб на чашках з
глюкозним середовищем, у якому не підтримували
постійне рН, активність ферменту у вихідного шта
му ЕА02-1 різко знижувалася. За таких умов
відібрано колонії з підвищеною активністю GOD.
Штам ЕА02-1-11 виявляв у чотири рази вищу
активність гетерологічного ферменту в глюкозному
середовищі порівняно з диким типом, інкубованим
з метанолом (рис 4, а). Крім цього, отриманий
надпродуцент характеризувався зміненою регу
ляцією експресії GOD і секретував великі кількості
ферменту на середовищі з сахарозою.
Схрещуванням штаму ЕА02-1-11 зі штамом
дикого типу NCYC495 \met6) одержано реком-
бінантний штам з відновленою високою активністю
АОХ як на середовищі з глюкозою, так і сахарозою
(даних не наведено). Отже, у даного штаму збере
глася регуляція Р А О х» характерна для ЕА02-1-11 .
Таким чином, мутації, які спричинюють під
вищення конститутивної експресії Р А О х> мають різ
ний вплив на його регуляцію вуглецевими субстра
тами. Встановлення природи цих мутацій буде
предметом наших подальших досліджень. Отримані
мутанти з пошкодженою катаболітною репресією
Р А 0 Х є перспективними для екпресії інших гетеро
логічних білків на дешевих цукрах — нетрадицій
них для Я , polymorpha вуглецевих субстратах.
Автори висловлюють глибоку подяку О. Р. Ку-
лачковському за допомогу в проведенні електрон
но-мікроскопічних досліджень.
Електрофорез білків культурального середори-
ща показав, що GOD, секретована Н. polymorpha,
має вищу молекулярну масу (86 кДа), ніж білок,
виділений з A niger (75 кДа), за рахунок гіпер-
глікозилювання [9 ] , яке не впливає на активність
ферменту (рис. 4, б). Кількість білка GOD в
культуральному середовищі клітин, вирощених на
різних субстратах, за даними білкового електрофо
резу, узгоджується з ферментативною активністю
GOD (рис. 4). Найкращим вуглецевим субстратом
для експресії GOD у штамів з пошкодженою ре
пресією Р А 0 Х є ксилоза. Крім цього, GOD є єдиним
білком, що секретується рекомбінантними штама-
ми-продуцентами. Таким чином, його можна ви
ділити з культурального середовища у високоочи-
щеному стані.
Методом УФ-мутагенезу штаму ЕА02-1 нами
О. G. Stasyk, О. V. Stasyk, A. A. Sibirny
Carbon source regulation of the alcohol oxidase promoter in mutants
of the methylotrophic yeast Hansenula polymorpha impaired in
catabolite repression
Summary
Carbon source regulation of the alcohol oxidase and heterologous
glucose oxidase synthesis in mutants of the methylotrophic yeast
Hansenula polymorpha impaired in catabolite repression was ana
lyzed. It was shown that the mutations causing the enzymes
oversynthesis in glucose medium are specific in respect to substrate
regulation of the alcohol oxidase promoter. The mutants isolated are
promising hosts for production of foreign proteins.
О. Г. Стасык, О. В. Стасык, А. А. Сибирный
Регуляция углеродными субстратами промотора гена
алкогольоксидазы у мутантов дрожжей Hansenula polymorpha
с поврежденной катаболитной репрессией
Резюме
У мутантов метилотрофних дрожжей Н. polymorpha с по-
159
file:///met6
СТАСИК О. Г., СТАСИК О. В., СИБІРНИЙ А. А.
врежденной катаболитной репрессией проанализирована регу
ляция синтеза пероксисомной алкогольоксидазы и гетерологи-
ческой глюкозооксидази углеродными субстратами* Установ
лено, что мутации, приводящие к суперсинтезу ферментов в
среде с глюкозой, являются специфическими по отношению к
субстратной регуляции промотора алкогольоксидазы. Полу
ченные мутантные штаммы являются перспективными про
дуцентами гетерологических белков.
ПЕРЕЛІК ЛІТЕРАТУРИ
1. Сибирный А А , Титоренко В. И. Молекулярные меха
низмы катаболитной регуляции у дрожжей.—M.: ВИНИ
ТИ, 1990.—214 с. (Итоги науки и техники; Сер. Молеку-
ляр. биология; Т. 33).
2. Gancedo /. М. Yeast carbon catabolite repression / / Microbiol.
Мої. Biol. Rev.—1998.—62.—P. 334—361.
3. Thevelein J. M. Signal transduction in yeast / / Yeast—
1994.—10, N 22.—P. 1753—1790.
4. Стасык О. В., Кшеминская Г. Я , Кулачковский А Р.,
Сибирный А. А. Мутанты метилотрофных дрожжей Нап-
senula polymorpha с поврежденной катаболитной репрес
сией / / Микробиология.—1997.—66, № 6.—С. 755—760.
5. Faber К. N.t HarderW., Ab G.t Veenhuis M. Hansenula
polymorpha: a yeast of commercial and scientific interest / /
Yeast—1995.—11.—P. 1331—1344.
6. Gonchar M. V., Maidan M. M., Moroz О. M., Woodward /.
R., Sibirny A. A. Microbial O 2 - and H2C>2-electrod sensors for
alcohol assays based on the use of permeabilized yeast cells as
the sensitive bioelements / / Biosensors and Bioelectronics.—
1998.—13.—P. 945—952.
7. Gleeson M. A., Sudbery P. E. Genetic analysis in the
methylotrophic yeast Hansenula polymorpha II Yeast—
1988.—4.—P. 293—303.
8. Sambrook Fritsch E. F.t Maniatis T. Molecular cloning: A
laboratory manual.—New York: Cold Spring Harbor Lab.
press, 1989.—452 p.
9. Hodgkins M., Mead D.f Balance D. J., Goodey A., Sudbery
P. Expression of the glucose oxidase gene from Aspergillus
niger in Hansenula polymorpha and its use as a reporter gene
to isolate regulatory mutants / / Yeast.—1993.—9.—P. 625—
635.
10. Tan X , Waterham H R.t Veenhuis A/., Cregg J. M. The
Hansenula polymorpha PER8 gene encodes a novel pero
xisomal integral membrane protein involved in proliferation / /
J. Cell. Biol.—1995.—128.—P. 307—319.
11. Faber K. N., Haima P., Harder W., Veenhuis M., Geert A. B.
Highly-efficient electrotransformation of the yeast Hansenula
polymorpha II Curr. Genet—1994.—25.—P. 305—310.
12. Sibirny A. A., Titorenko V. /., Efremov B. D., Tolstorukov I.
I. Multiplicity of mechanisms of carbon catabolite repression
involved in the synthesis of alcohol oxidase in the methylo
trophic yeast Pichia pinus II Yeast—1987.—3, N 4.—
P. 233—241.
13. Laemmli U. K. Cleavage of structural proteins during the
assembly of the head of bacteriophage T4 / / Nature.—1970.—
227.—P. 680—685.
14. Сибирный А. А , Витвицкая О. Я., Кулачковский А Р.,
Убийвовк В. М. Селекция и свойства мутантов метило-
трофных дрожжей Hansenula polymorpha с поврежденной
алкогольоксидазой / / Микробиология.—1989.—58, № 4.—
С. 634—641.
УДК 582.282.23:575.224
Надійшла до редакції 12.11.01
160
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-155821 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7657 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-11-27T18:49:00Z |
| publishDate | 2002 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Стасик, О.Г. Стасик, О.В. Сибірний, А.А. 2019-06-17T13:38:31Z 2019-06-17T13:38:31Z 2002 Регуляція вуглецевими субстратами промотору гена алкогольоксидази у мутантів дріжджів Hansenula polymorpha з пошкодженою катаболітною репресією / О.Г. Стасик, О.В. Стасик, А.А. Сибірний // Вiopolymers and Cell. — 2002. — Т. 18, № 2. — С. 155-160. — Бібліогр.: 14 назв. — укр. 0233-7657 DOI:http://dx.doi.org/10.7124/bc.0005F8 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155821 582.282.23:575.224 У мутантів метилотрофних дріжджів H. polymorpha з пошкодженою катаболітною репресією проаналізовано регуляцію синтезу власної пероксисомної алкогольоксидази та гетерологічної секретованої глюкозооксидази вуглецевими субстратами. Встановлено, що мутації, які ведуть до надсинтезу ферментів на середовищі з глюкозою, є специфічними щодо субстратної регуляції промотору алкогольоксидази. Отримані мутантні штами є перспективними продуцентами гетерологічних білків. Carbon source regulation of the alcohol oxidase and heterologous glucose oxidase synthesis in mutants of the methylotrophic yeast Hansenula polymorpha impaired in catabolite repression was analyzed. It was shown that the mutations causing the enzymes oversynthesis in glucose medium are specific in respect to substrate regulation of the alcohol oxidase promoter. The mutants isolated are promising hosts for production of foreign proteins. У мутантов метилотрофних дрожжей Н. polymorpha с поврежденной катаболитной репрессией проанализирована регуляция синтеза пероксисомной алкогольоксидазы и гетерологической глюкозооксидази углеродными субстратами. Установено, что мутации, приводящие к суперсинтезу ферментов в среде с глюкозой, являются специфическими по отношению к субстратной регуляции промотора алкогольоксидазы. Полученные мутантные штаммы являются перспективными продуцентами гетерологических белков. uk Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Біополімери і клітина Матеріали конференції Регуляція вуглецевими субстратами промотору гена алкогольоксидази у мутантів дріжджів Hansenula polymorpha з пошкодженою катаболітною репресією Carbon source regulation of the alcohol oxidase promoter in mutants of the methylotrophic yeast Hansenula polymorpha impaired in catabolite repression Регуляция углеродными субстратами промотора гена алкогольоксидазы у мутантов дрожжей Hansenula polymorpha с поврежденной катаболитной репрессией Article published earlier |
| spellingShingle | Регуляція вуглецевими субстратами промотору гена алкогольоксидази у мутантів дріжджів Hansenula polymorpha з пошкодженою катаболітною репресією Стасик, О.Г. Стасик, О.В. Сибірний, А.А. Матеріали конференції |
| title | Регуляція вуглецевими субстратами промотору гена алкогольоксидази у мутантів дріжджів Hansenula polymorpha з пошкодженою катаболітною репресією |
| title_alt | Carbon source regulation of the alcohol oxidase promoter in mutants of the methylotrophic yeast Hansenula polymorpha impaired in catabolite repression Регуляция углеродными субстратами промотора гена алкогольоксидазы у мутантов дрожжей Hansenula polymorpha с поврежденной катаболитной репрессией |
| title_full | Регуляція вуглецевими субстратами промотору гена алкогольоксидази у мутантів дріжджів Hansenula polymorpha з пошкодженою катаболітною репресією |
| title_fullStr | Регуляція вуглецевими субстратами промотору гена алкогольоксидази у мутантів дріжджів Hansenula polymorpha з пошкодженою катаболітною репресією |
| title_full_unstemmed | Регуляція вуглецевими субстратами промотору гена алкогольоксидази у мутантів дріжджів Hansenula polymorpha з пошкодженою катаболітною репресією |
| title_short | Регуляція вуглецевими субстратами промотору гена алкогольоксидази у мутантів дріжджів Hansenula polymorpha з пошкодженою катаболітною репресією |
| title_sort | регуляція вуглецевими субстратами промотору гена алкогольоксидази у мутантів дріжджів hansenula polymorpha з пошкодженою катаболітною репресією |
| topic | Матеріали конференції |
| topic_facet | Матеріали конференції |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155821 |
| work_keys_str_mv | AT stasikog regulâcíâvuglecevimisubstratamipromotorugenaalkogolʹoksidaziumutantívdríždžívhansenulapolymorphazpoškodženoûkatabolítnoûrepresíêû AT stasikov regulâcíâvuglecevimisubstratamipromotorugenaalkogolʹoksidaziumutantívdríždžívhansenulapolymorphazpoškodženoûkatabolítnoûrepresíêû AT sibírniiaa regulâcíâvuglecevimisubstratamipromotorugenaalkogolʹoksidaziumutantívdríždžívhansenulapolymorphazpoškodženoûkatabolítnoûrepresíêû AT stasikog carbonsourceregulationofthealcoholoxidasepromoterinmutantsofthemethylotrophicyeasthansenulapolymorphaimpairedincataboliterepression AT stasikov carbonsourceregulationofthealcoholoxidasepromoterinmutantsofthemethylotrophicyeasthansenulapolymorphaimpairedincataboliterepression AT sibírniiaa carbonsourceregulationofthealcoholoxidasepromoterinmutantsofthemethylotrophicyeasthansenulapolymorphaimpairedincataboliterepression AT stasikog regulâciâuglerodnymisubstratamipromotoragenaalkogolʹoksidazyumutantovdrožžeihansenulapolymorphaspovreždennoikatabolitnoirepressiei AT stasikov regulâciâuglerodnymisubstratamipromotoragenaalkogolʹoksidazyumutantovdrožžeihansenulapolymorphaspovreždennoikatabolitnoirepressiei AT sibírniiaa regulâciâuglerodnymisubstratamipromotoragenaalkogolʹoksidazyumutantovdrožžeihansenulapolymorphaspovreždennoikatabolitnoirepressiei |