Фізико-хімічні властивості поліедрину вірусу ядерного поліедрозу лунчастого шовкопряду, Selenephera lunigera
Поліедрин отримано розчиненням поліедрів «лужним» (рН 10,5) та «оцтовокислим» (67 % CH3COOH) способами. За допомогою електрофорезу в поліакриламідному гелі показано, що «оцтовокислий» поліедрин являє собою один компонент, а «лужний» складаться з вихідного компонента та його фрагментів. При ультрацен...
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Біополімери і клітина |
|---|---|
| Datum: | 2001 |
| Hauptverfasser: | , , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Ukrainian |
| Veröffentlicht: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
2001
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155839 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Фізико-хімічні властивості поліедрину вірусу ядерного поліедрозу лунчастого шовкопряду, Selenephera lunigera / Е.А. Козлов, Т.Л. Левітіна, М.Т. Бобровська, М.Н. Овандер // Біополімери і клітина. — 2001. — Т. 17, № 5. — С. 401-405. — Бібліогр.: 26 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-155839 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Козлов, Е.А. Левітіна, Т.Л. Бобровська, М.Т. Овандер, М.Н. 2019-06-17T14:01:31Z 2019-06-17T14:01:31Z 2001 Фізико-хімічні властивості поліедрину вірусу ядерного поліедрозу лунчастого шовкопряду, Selenephera lunigera / Е.А. Козлов, Т.Л. Левітіна, М.Т. Бобровська, М.Н. Овандер // Біополімери і клітина. — 2001. — Т. 17, № 5. — С. 401-405. — Бібліогр.: 26 назв. — укр. 0233-7657 DOI:http://dx.doi.org/10.7124/bc.0005CB https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155839 577.322:578.841 Поліедрин отримано розчиненням поліедрів «лужним» (рН 10,5) та «оцтовокислим» (67 % CH3COOH) способами. За допомогою електрофорезу в поліакриламідному гелі показано, що «оцтовокислий» поліедрин являє собою один компонент, а «лужний» складаться з вихідного компонента та його фрагментів. При ультрацентрифугуванні «оцтовокислого» поліедрину в 67 %- CH3COOH виявляється один компонент з коефіцієнтом седиментації 1,9 S, а при ультрацентрифугуванні «лужного» поліедрину в розчинах з рН 10,5 виявляються три олігомерних компоненти з коефіцієнтами седиментації 13S (70 %), 19S (20 %) та 23 S (10 %). Дансил-методом виявлено, иір препарат «лужного» білка містить шість N-кінцевих залишків амінокислот – Met, Val, Ile, Leu, Thr, Lys. «Оцтовокислий» білок не містить вільної N-кінцевої аміногрупи. Карбоксипептидаза А +В відщеплює від «оцтовокислого» білка лише один залишок – тирозин. Побудовано пептидну карту «лужного» поліедрину і визначено амінокислотний склад «оцтовокислого». Полиэдрин получен растворением полиэдров «щелочным» (рН 10,5) и «уксуснокислым» (67 %-я СН3СООН) методами. С помощью электрофореза в полиакриламидном геле установлено, что «уксуснокислый» полиэдрин содержит один компонент, а «щелочной» – исходный компонент и его фрагменты Ультрацентрифугированием показано, что «уксуснокислый» полиэдрин в 67 %-й СН3СООН образует один компонент с коэффициентом седиментации 1,9 S, а «щелочной» полиэдрин в растворах при рН 10,5 образует три олигомерных компонента с коэффициентами седиментации 13S (70 %), 19S (20 %) и 23S (10 %). Дансил-методом выявлено, что препарат «щелочного» белка содержит шесть N-концевых остатков аминокислот, а «уксуснокислый белок» не содержит свободной N-концевой аминогруппы. Построена пептидная карта «щелочного» полиэдрина и определен аминокислотный состав «уксуснокислого». The polyhedrin was obtained by polyhedra dissolution according to the alkaline (pH 10.5) and acetic acid (67 % CH^COOH) methods. It was shown by polyacrilamid gel electrophoresis that acetic polyhedrin contained one component of molecular weight (m. w.) 25000 while alkaline polyhedrin contained 28500-component and its fragments of m. w. 8000, 10000, 14000, 19000, 25000. It was shown by ultracentrifugation that acetic acid polyhedrin revealed in 67 % CH3COOH one monomer component with sedimentation coefficient of 1,9S and alkaline polyhedrin revealed in pHW.5 solution three oligomeric components with sedimentation coefficients of 13S (70 %), 19S (20 %) and 23S (JO %). It was shown by the Dansyl method that alkaline protein contained six N-terminal amino acid residues: Met, Val, Leu, Thr, Lys while Acetic acid polyhedrin had no N-terminal NH2-group. The peptide map of alkaline polyhedrin was prepared, and amino acid composition of acetic acid polyhedrin was determined. uk Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Біополімери і клітина Структура та функції біополімерів Фізико-хімічні властивості поліедрину вірусу ядерного поліедрозу лунчастого шовкопряду, Selenephera lunigera Physicochemical properties of the polyhedrin of Selenephera lunigera nuclear polyhedrosis virus Физико-химические свойства полиэдрина вируса ядерного полиэдроза лунчатого шелкопряда, Selenephera lunigera Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Фізико-хімічні властивості поліедрину вірусу ядерного поліедрозу лунчастого шовкопряду, Selenephera lunigera |
| spellingShingle |
Фізико-хімічні властивості поліедрину вірусу ядерного поліедрозу лунчастого шовкопряду, Selenephera lunigera Козлов, Е.А. Левітіна, Т.Л. Бобровська, М.Т. Овандер, М.Н. Структура та функції біополімерів |
| title_short |
Фізико-хімічні властивості поліедрину вірусу ядерного поліедрозу лунчастого шовкопряду, Selenephera lunigera |
| title_full |
Фізико-хімічні властивості поліедрину вірусу ядерного поліедрозу лунчастого шовкопряду, Selenephera lunigera |
| title_fullStr |
Фізико-хімічні властивості поліедрину вірусу ядерного поліедрозу лунчастого шовкопряду, Selenephera lunigera |
| title_full_unstemmed |
Фізико-хімічні властивості поліедрину вірусу ядерного поліедрозу лунчастого шовкопряду, Selenephera lunigera |
| title_sort |
фізико-хімічні властивості поліедрину вірусу ядерного поліедрозу лунчастого шовкопряду, selenephera lunigera |
| author |
Козлов, Е.А. Левітіна, Т.Л. Бобровська, М.Т. Овандер, М.Н. |
| author_facet |
Козлов, Е.А. Левітіна, Т.Л. Бобровська, М.Т. Овандер, М.Н. |
| topic |
Структура та функції біополімерів |
| topic_facet |
Структура та функції біополімерів |
| publishDate |
2001 |
| language |
Ukrainian |
| container_title |
Біополімери і клітина |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Physicochemical properties of the polyhedrin of Selenephera lunigera nuclear polyhedrosis virus Физико-химические свойства полиэдрина вируса ядерного полиэдроза лунчатого шелкопряда, Selenephera lunigera |
| description |
Поліедрин отримано розчиненням поліедрів «лужним» (рН 10,5) та «оцтовокислим» (67 % CH3COOH) способами. За допомогою електрофорезу в поліакриламідному гелі показано, що «оцтовокислий» поліедрин являє собою один компонент, а «лужний» складаться з вихідного компонента та його фрагментів. При ультрацентрифугуванні «оцтовокислого» поліедрину в 67 %- CH3COOH виявляється один компонент з коефіцієнтом седиментації 1,9 S, а при ультрацентрифугуванні «лужного» поліедрину в розчинах з рН 10,5 виявляються три олігомерних компоненти з коефіцієнтами седиментації 13S (70 %), 19S (20 %) та 23 S (10 %). Дансил-методом виявлено, иір препарат «лужного» білка містить шість N-кінцевих залишків амінокислот – Met, Val, Ile, Leu, Thr, Lys. «Оцтовокислий» білок не містить вільної N-кінцевої аміногрупи. Карбоксипептидаза А +В відщеплює від «оцтовокислого» білка лише один залишок – тирозин. Побудовано пептидну карту «лужного» поліедрину і визначено амінокислотний склад «оцтовокислого».
Полиэдрин получен растворением полиэдров «щелочным» (рН 10,5) и «уксуснокислым» (67 %-я СН3СООН) методами. С помощью электрофореза в полиакриламидном геле установлено, что «уксуснокислый» полиэдрин содержит один компонент, а «щелочной» – исходный компонент и его фрагменты Ультрацентрифугированием показано, что «уксуснокислый» полиэдрин в 67 %-й СН3СООН образует один компонент с коэффициентом седиментации 1,9 S, а «щелочной» полиэдрин в растворах при рН 10,5 образует три олигомерных компонента с коэффициентами седиментации 13S (70 %), 19S (20 %) и 23S (10 %). Дансил-методом выявлено, что препарат «щелочного» белка содержит шесть N-концевых остатков аминокислот, а «уксуснокислый белок» не содержит свободной N-концевой аминогруппы. Построена пептидная карта «щелочного» полиэдрина и определен аминокислотный состав «уксуснокислого».
The polyhedrin was obtained by polyhedra dissolution according to the alkaline (pH 10.5) and acetic acid (67 % CH^COOH) methods. It was shown by polyacrilamid gel electrophoresis that acetic polyhedrin contained one component of molecular weight (m. w.) 25000 while alkaline polyhedrin contained 28500-component and its fragments of m. w. 8000, 10000, 14000, 19000, 25000. It was shown by ultracentrifugation that acetic acid polyhedrin revealed in 67 % CH3COOH one monomer component with sedimentation coefficient of 1,9S and alkaline polyhedrin revealed in pHW.5 solution three oligomeric components with sedimentation coefficients of 13S (70 %), 19S (20 %) and 23S (JO %). It was shown by the Dansyl method that alkaline protein contained six N-terminal amino acid residues: Met, Val, Leu, Thr, Lys while Acetic acid polyhedrin had no N-terminal NH2-group. The peptide map of alkaline polyhedrin was prepared, and amino acid composition of acetic acid polyhedrin was determined.
|
| issn |
0233-7657 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155839 |
| citation_txt |
Фізико-хімічні властивості поліедрину вірусу ядерного поліедрозу лунчастого шовкопряду, Selenephera lunigera / Е.А. Козлов, Т.Л. Левітіна, М.Т. Бобровська, М.Н. Овандер // Біополімери і клітина. — 2001. — Т. 17, № 5. — С. 401-405. — Бібліогр.: 26 назв. — укр. |
| work_keys_str_mv |
AT kozlovea fízikohímíčnívlastivostípolíedrinuvírusuâdernogopolíedrozulunčastogošovkoprâduselenepheralunigera AT levítínatl fízikohímíčnívlastivostípolíedrinuvírusuâdernogopolíedrozulunčastogošovkoprâduselenepheralunigera AT bobrovsʹkamt fízikohímíčnívlastivostípolíedrinuvírusuâdernogopolíedrozulunčastogošovkoprâduselenepheralunigera AT ovandermn fízikohímíčnívlastivostípolíedrinuvírusuâdernogopolíedrozulunčastogošovkoprâduselenepheralunigera AT kozlovea physicochemicalpropertiesofthepolyhedrinofselenepheralunigeranuclearpolyhedrosisvirus AT levítínatl physicochemicalpropertiesofthepolyhedrinofselenepheralunigeranuclearpolyhedrosisvirus AT bobrovsʹkamt physicochemicalpropertiesofthepolyhedrinofselenepheralunigeranuclearpolyhedrosisvirus AT ovandermn physicochemicalpropertiesofthepolyhedrinofselenepheralunigeranuclearpolyhedrosisvirus AT kozlovea fizikohimičeskiesvoistvapoliédrinavirusaâdernogopoliédrozalunčatogošelkoprâdaselenepheralunigera AT levítínatl fizikohimičeskiesvoistvapoliédrinavirusaâdernogopoliédrozalunčatogošelkoprâdaselenepheralunigera AT bobrovsʹkamt fizikohimičeskiesvoistvapoliédrinavirusaâdernogopoliédrozalunčatogošelkoprâdaselenepheralunigera AT ovandermn fizikohimičeskiesvoistvapoliédrinavirusaâdernogopoliédrozalunčatogošelkoprâdaselenepheralunigera |
| first_indexed |
2025-11-25T23:28:46Z |
| last_indexed |
2025-11-25T23:28:46Z |
| _version_ |
1850581550159101952 |
| fulltext |
ISSN 0233-7657. Біополімери і клітина. 2001. Т. 17. № 5
Физико-химические свойства полиэдрина вируса
ядерного полиэдроза лунчатого шелкопряда,
Selenephera lunigera
Э. А. Козлов, Т. Л. Левитина, М. Т. Бобровская, Μ. Н. Овандер
Институт молекулярной биологии и генетики HAH Украины
Ул. Академика Заболотного, 150, Киев, 03143, Украина
Полиэдрин получен растворением полиэдров «щелочным» (рН 10,5) и «уксуснокислым» (67 %-я
СН3СООН) методами. С помощью электрофореза в полиакриламидном геле установлено, что
«уксуснокислый» полиэдрин содержит один компонент, а «щелочной» — исходный компонент и его
фрагменты Ультрацентрифугированием показано, что «уксуснокислый» полиэдрин в 67 %-й
СНъСООН образует один компонент с коэффициентом седиментации 1,9 S, а «щелочной»
полиэдрин в растворах при рН 10,5 образует три олигомерных компонента с коэффициентами
седиментации 13S (70 %), 19S (20 %) и 23S (10 %). Дансил-методом выявлено, что препарат
«щелочного» белка содержит шесть N-концевых остатков аминокислот, а «уксуснокислый белок»
не содержит свободной N-концевой аминогруппы. Построена пептидная карта «щелочного»
полиэдрина и определен аминокислотный состав «уксуснокислого».
Введение. Ранее в нашей лаборатории определены
физико-химические свойства нескольких белков
тел включений (ТВ) бакуловирусов [1—6] и уста-
новлена полная аминокислотная последователь-
ность белка ТВ шести вирусов ядерного полиэдроза
(ВЯП) (полиэдрины): тутового (Bombyxmori) [7],
непарного (Porthetria dispar) [7 ], кольчатого (Ma-
lacosoma neustria) [8] шелкопрядов, большой во-
щиной моли (Galleriamellonella) [7], озимой (Agro-
tis segetum) [7 ] и капустной (Mamestra brassicae)
совок [9 ]. Кроме этого, были выяснены физико-хи-
мические свойства [4] и полная аминокислотная
последовательность белка ТВ вируса гранулеза
(ВГ) (гранулин) озимой совки (A segetum) [10].
ВЯП и ВГ составляют две группы одного семейства
бакуловирусов. Для выяснения особенностей физи-
ко-химических свойств и аминокислотных последо-
вательностей, а также филогенетических взаимоот-
ношений первичных структур белков ТВ двух
групп вирусов одного семейства необходимо иссле-
довать, по крайней мере, 10 белков в каждой
группе. В настоящем сообщении приведены резуль-
© Э. А. КОЗЛОВ, Т. Л. ЛЕВИТИНА, М. Т. БОБРОВСКАЯ,
Μ. Н. ОВАНДЕР, 2001
таты изучения физико-химических свойств очеред-
ного полиэдрина ВЯП S. Iunigera.
Материалы и методы. Полиэдрин получали
растворением полиэдров двумя методами. «Щелоч-
ной» метод — полиэдры растворяли при рН 10,5
(0,01 M Na2CO3 + 0,05 M NaCD в течение 2 ч или
в 0,1 н. NaOH в течение 30 мин при комнатной
температуре и далее, как описано ранее [1 ] («ще-
лочной» белок). «Уксуснокислый» метод — полиэд-
ры растворяли в 67 %-й CH3COOH в течение 1 ч
при комнатной температуре и далее, как в работе
[1] («уксуснокислый» белок).
Электрофорез в 10 %-м полиакриламидном
геле (ПААГ) в присутствии DS-Na проводили, как
описано нами ранее [2 ]. Аналитическое ультрацен-
трифугирование осуществляли на ультрацентрифу-
ге MOM 31706 (Венгрия) при температуре 25 °С с
использованием Шлирен-оптики. Седиментацию
осуществляли в двухсекторной ячейке при скорости
вращения ротора 50000 об/мин. Концентрация бел-
ка составляла 0,6 %. Восстановление и карбокси-
метилирование «щелочного» полиэдрина, получен-
ного при рН 10,5 (S-BKM-полиэдрин), проводили
по методу [11]· Расщепление S-BKM-полиэдрин
расщепляли трипсином («Worthington», США) по
401
КОЗЛОВ Э. А. И ДР.
методу [12]. Пептидное картирование проводили,
как описано в работе [13], на сконструированном в
нашей лаборатории приборе [14]. Содержащие
триптофан пептиды на карте находили по методу
[15]. N-концевой остаток в белке определяли дан-
сил-методом [16]; С-концевой— с помощью кар-
боксипептидазы А+В («Worthington») [17]. Амино-
кислотный состав выясняли на анализаторе ВС-200
(«Віосаі», Германия) по стандартной методике [4].
Цистеин определяли на окисленном по методу [18 ]
белке. Наличие триптофана в белке устанавливали
по числу триптофансодержащих пятен на пептид-
ной карте. Содержание РНК в растворах щелочно-
го полиэдрина определяли орциновой реакцией
[19].
Результаты и обсуждение. На рис. 1 приведе-
ны результаты электрофореза в ПААГ двух препа-
ратов полиэдрина. Как видно, «уксуснокислый»
полиэдрин содержит один компонент с молекуляр-
ной массой (м. м.) 28500 (рис. 1, а), а «щелочной»,
полученный при рН 10,5, — шесть компонентов с
м. м. 28500, 25000, 19000, 14000, 10000 и 8000
(рис. 1, б). Как показано нами ранее на других
полиэдринах [1—4], пять компонентов образуются
в результате расщепления полипептидной цепи с м.
м. 28500 протеазой, содержащейся в полиэдрах.
Очевидно, что полиэдры ВЯП S. Iunigera не пред-
ставляют исключения. По тому факту, что в ре-
зультате расщепления получается такое же число
компонентов с одними и теми же молекулярными
массами, можно сделать вывод о том, что расщеп-
ление полипептидной цепи полиэдрина ВЯП S.
Iunigera происходит в тех же центрах, что и у
других ВЯП. Несмотря на то, что большая часть
белка расщеплена протеазой полиэдров (рис. 1, б),
-28500
—25000
-19000
-14000
—10000
- 8000
Рис. 1. Электрофорез в ПА-
АГ полиэдрина ВЯП S. Iu-
nigera: а — препарат, полу-
ченный растворением в
67 %-й CH3COOH; б —
препарат, полученный рас-
творением полиэдров при
рН 10,5
Рис. 2. Седиментограммы полиэдрина ВЯП S. Iunigera (снимки
сделаны через 30 (а) и 60 (б) мин после достижения макси-
мального числа оборотов (50000 об/мин)): а — препарат, полу-
ченный при растворении полиэдров при рН 10,5 (0,01 M
Na2CO3 + 0,05 M NaCD; б — препарат, полученный при раство-
рении в 67 %-й CH3COOH. Концентрация белка 0,6 %
90 % массы полиэдрина, как показало ультрацен-
трифугирование, остается при растворении полиэд-
ров при рН 10,5 в виде ассоциата с коэффициентом
седиментации 13S (м. м. 350000, додекамер, пик 7,
рис. 2, а). Около 10 % полиэдрина образуют более
крупные ассоциаты с коэффициентами седимента-
ции 19S и 23S (пики 2 и J на рис. 2, а, соответст-
венно). Очевидно, расщепление полиэдрина в не-
скольких центрах не ведет к изменению конформа-
ции полипептидной цепи и распаду главного
ІЗБ-компонента при рН 10,5. Только повышение
рН до значения 12 (0,01 M NaOH) приводит к
полному распаду ассоциатов (при ультрацентрифу-
гировании в 0,01 M NaOH пик не образуется,
данные не приведены).
Нерасщепленный полиэдрин (рис. 1, а) при
ультрацентрифугировании в 67 %-й уксусной кис-
лоте очень медленно образует седиментирующий
пик с коэффициентом седиментации 1,9S (рис. 2,
б). Аналогичную картину при ультрацентрифуги-
ровании в 0,1 н. NaOH показывает «щелочной»
белок, полученный растворением полиэдров в 0,1
н. NaOH (данные не приведены).
Из вышеизложенного следует, что полиэдрин
ВЯП S. Iunigera проявляет в растворах характерные
для белков ТВ бакуловирусов физико-химические
свойства [1—6]: диссоциация кристалла полиэдров
при растворении их при рН 10,5 происходит через
дискретные 34S-, 23S-, 198-компоненты до устой-
чивого в широком диапазоне рН (от 3,0 до 11,0)
ІЗБ-компонента полиэдрина; диссоциация до 2S-
мономера происходит в экстремальных условиях
(67 %-я CH3COOH или 0,1 н. NaOH). Вероятно,
такие свойства обусловлены особенностями амино-
кислотного состава белков ТВ. В таблице приведен
402
ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПОЛИЭДРИНА ВЯП S. LUNIGERA
аминокислотный состав полиэдрина ВЯП S. Iu-
nigera. Как и все изученные нами [7—10] белки
ТВ, полиэдрин ВЯП S. Iunigera на 60 % состоит из
гидрофобных (Val, Met, Не, Leu, Ala) аминокислот
и аминокислотных остатков, способных в гидро-
фобном окружении образовывать водородные связи
(Asp, Asn, Glu, Gin, Ser, Thr). Известно, что
именно водородные связи в гидрофобном окруже-
нии вносят основной вклад в белково-белковые
взаимодействия [20].
Как показала положительная орциновая реак-
ция, растворы полиэдрина ВЯП 5. Iunigeray так же
как и исследованные нами полиэдрины других ВЯП
[5, 21, 22], содержат РНК. Наличие в растворах
«щелочного» полиэдрина при рН 10,5 целой поли-
пептидной цепи (рис. 1, б) дает основание предпо-
ложить, что какая-то часть полиэдрина в полиэд-
рах ВЯП S. Iunigera ассоциирована с РНК. Ассоци-
Рис. 3. Пептидная карта триптического гидролизата S-BKM —
полиэдрина ВЯП S. Iunigeray полученного при растворении при
рН 10,5. Темные пятна — триптофансодержащие пептиды
Аминокислотный состав полиэдрина ВЯП S. Iunigera
Аминокислота
Состав
Аминокислота
Моль на моль белка с
м. м. 28500 Принято в остатках
Asp 31,3 31
Thr 10,7 и
Ser 10,3 11
Glu 26,2 26
Pro 15,1 15
Gly 13,8 14
Ala 11,9 12
1/2Cys* 1,8 2
Val 15,4 16
Met 5,5 6
lie 11,3 12
Leu 19,5 20
Tyr 14,7 15
Phe 15,0 15
Trp** — 4
His 7,0 7
Lys 13,9 14
Arg 14,6 15
Всего 246
П р и м е ч а н и е . *Определен в виде цистеиновой кислоты на
окисленном белке; **обнаружен по числу триптофансодержа-
щих пятен на пептидной карте.
ацию полиэдрина ВЯП В. mori и G. mellonella с
РНК мы описали ранее [21, 22]. Не исключено,
что 18S, 23S и 34Б-компоненты, обнаруживаемые
при ультрацентрифугировании при рН 10,5 «ще-
лочных» препаратов полиэдрина (рис. 2, а, и [5]),
представляют собой РНП-комплексы.
На основании представленных результатов мо-
жно сделать вывод о том, что предполагаемые нами
ранее для полиэдрина ВЯП [5 ] белково-белковые и
белково-нуклеиновые взаимодействия обусловлены
характерными особенностями первичной структуры
полиэдринов. Мы провели исследования, предшест-
вующие выяснению аминокислотной последова-
тельности полиэдрина ВЯП S. Iunigera. Полиэдрин
с целой полипептидной цепью («уксуснокислый»
полиэдрин) не обнаруживает свободной N-конце-
вой аминогруппы. В то же время полиэдрин, обра-
ботанный 0,1 н. NaOH (растворение полиэдров в
0,1 н. NaOH), содержит на N-конце остаток Met.
Очевидно, у полиэдрина ВЯП S. Iunigera на N - k o h -
це находится формил-метионин, что было обнару-
жено нами ранее на полиэдринах ВЯП P. dispar, А.
segetum [7], М. neustria [8], М. brassicae [9].
«Щелочной» полиэдрин, полученный при рН 10,5,
содержит пять N-концевых остатков аминокислот
(Val, lie, Leu, Thr, Lys), что подтверждает его
расщепление протеазой полиэдров (рис. 1, б). Kap-
боксипептидаза А+В отщепляет от «уксуснокисло-
го» белка только Туг. Очевидно, что на третьем
месте от С-конца располагается остаток Pro, как
это показано нами для других полиэдринов [7—
10].
На рис. 3 приведена пептидная карта трипти-
ческого гидролизата S-BKM «щелочного» полиэдри-
на, полученного при рН 10,5. На карте насчитыва-
403
КОЗЛОВ Э. А. И ДР.
ется 35 нингидрин-положительных пятен, из них
пять дают положительную реакцию на триптофан.
Пептидная карта очень сходна с таковыми картами
других полиэдринов [5, 13, 23—25]. Число 35
несколько превышает теоретическое триптических
пептидов (по суммарному содержанию остатков
Lys + Arg их 30, таблица). Однако это подтвержда-
ет ограниченное расщепление полипептидной цепи
полиэдрина ВЯП S. lunigera протеазой полиэдров.
Как известно, протеаза полиэдров обладает химот-
рипсиноподобной активностью [5, 26], т. е. она
расщепляет некоторые триптические пептиды. При
дальнейшем исследовании строения триптических
пептидов, полученных на основании пептидных
карт, можно будет выяснить центры расщепления
полипептидной цепи полиэдрина ВЯП S. Iunigera
протеазой полиэдров.
Е. A. Koslov, Т. L Levitina, М. Т. Bobrovskaya, М. N. Ovander
Physicochemical properties of the polyhedrin of Selenephera
lunigera nuclear polyhedrosis virus
Summary
The polyhedrin was obtained by polyhedra dissolution according to
the alkaline (pH 10.5) and acetic acid (67 % СН3СООН) methods.
It was shown by polyacrilamid gel electrophoresis that acetic
polyhedrin contained one component of molecular weight (m. w.)
25000 while alkaline polyhedrin contained 28500-component and its
fragments of m. w. 8000, 10000, 14000, 19000, 25000. It was
shown by ultracentrifugation that acetic acid polyhedrin revealed in
67 % CH3COOH one monomer component with sedimentation
coefficient of 1,9 S and alkaline polyhedrin revealed in pH10.5
solution three oligomeric components with sedimentation coefficients
of 13S (70 %), 19S (20 %) and 23S (10 %). It was shown by the
Dansyl method that alkaline protein contained six N-terminal
amino acid residues: Met, Vai9 Leu, Thr, Lys while Acetic acid
polyhedrin had no N-terminal NH2-group. The peptide map of
alkaline polyhedrin was prepared, and amino acid composition of
acetic acid polyhedrin was determined.
E. А. Козлов., Т. Л. Левітіна, Μ. Т. Бобровська, Μ. Μ. Овандер
Фізико-хімічні властивості поліедрину вірусу ядерного
поліедрозу лунчастого шовкопряду, Selenephera lunigera
Резюме
Поліедрин отримано розчиненням поліедрів «лужним» (рН
10,5) та «оцтовокислим» (67 % CH3COOH) способами. За
допомогою електрофорезу в поліакриламідному гелі показано,
иіо «оцтовокислий» поліедрин являє собою один компонент, а
«лужний» складаться з вихідного компонента та його фраг-
ментів. При ультрацентрифугуванні «оцтовокислого» полі-
едрину в 67 %- CH3COOH виявляється один компонент з
коефіцієнтом седиментації 1,9 S, а при ультрацентрифугу-
ванні «лужного» поліедрину в розчинах з рН 10,5 виявляються
три олігомерних компоненти з коефіцієнтами седиментації
13S (70 %), 19S (20 %) та 23 S (10 %). Дансил-методом
виявлено, иір препарат «лужного» білка містить шість N-
кінцевих залишків амінокислот — Met, Val, Ile, Leu, Thr, Lys.
«Оцтовокислий» білок не містить вільної N-кінцевої амі-
ногрупи. Карбоксипептидаза А +В відщеплює від «оцтовокис-
лого» білка лише один залишок — тирозин. Побудовано пеп-
тидну карту «лужного» поліедрину і визначено амінокислот-
ний склад «оцтовокислого».
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Kozlov Ε. Α., Sidorova Ν. M., Serebryani S. Β. Proteolytic
cleavage of Polyhedral protein during dissolution of Inclusion
bodies of the Nuclear Polyhedrosis viruses of Bombyx mori and
Galleria mellonella under alkaline conditions / / J . Invert.
Pathol.—1975.—25, N 1.—P. 97—101.
2. Козлов Э. Α., Левитина Т. JI., Гусак Η. M., Ларионов Г.
В., Веремейченко С. H., Серебряный С. Б. Сравнительные
биохимические исследования полиэдренных белков ви-
русов ядерного полиэдроза / / Бпохимия.—1978.—43,
№ 12.—С. 2189—2195.
3. Эглите Г. К., Козлов Э. А., Левитина Т. Л. Физико-
химические свойства полиэдренного белка вируса ядерного
полиэдроза кольчатого шелкопряда Malacosoma neustria 11
Молекуляр. биология (Киев).—1981.—Вып. 29.—С. 49—
52.
4. Козлов Э. А., Левитина Т. Л., Гусак Н. M., Серебряный С.
Б. Некоторые физико-химические свойства белка тел
включений вируса ядерного полиэдроза и вируса гранулеза
озимой совки Agrotis segetum Il Биополимеры и клетка.—
1985.—1, № 3.—С. 121—124.
5. Kozlov Ε. A., Levitina Т. L, Gusak N. М. The primary
structure of Baculovirus inclusion body proteins. Evolution and
structure-function aspects / / Curr. Top. Microbiol, and Im-
munol.—1986.—131.—P. 135—164.
6. Мирошниченко О. С., Бобровская Μ. Т., Штерпите М. В.,
Ермакова Н. И., Козлов Э. А. Исследование некоторых
физико-химических свойств полиэдрина вируса ядерного
полиэдроза (ВЯП) лугового мотылька, Pyrausta sticticalis
I l Биополимеры и клетка.—1993.—9, № 5.—С. 25—29.
7. Козлов Э. А., Левитина Т. Л., Гусак Я. M., Роднин Н. В.,
Атепалихина С. А., Пальчиковская Л. И. Выяснение
полной аминокислотной последовательности полиэдрина
вируса ядерного полиэдроза (ВЯП) озимой совки (Agrotis
segetum) и уточнение первичной структуры полиэдринов
ВЯП тутового (Bombyx mori), непарного (Porthetria dispar)
шелкопрядов и большой вощинной моли (Galleria mellonel-
la) 11 Биополимеры и клетка.—1991.—7, № 1.—С. 75—
82.
8. Козлов Э. А., Роднин Н. В., Пальчиковская Л. И., Леви-
тина Т. Л., Бобровская М. Т., Радомский Η. Ф. Первич-
ная структура полиэдрина вируса ядерного полиэдроза
кольчатого шелкопряда Malacosoma neustria 11 Биоорг.
химия.—1994.—20, № 5.—С. 543—545.
9. Пальчиковская Л. И., Левитина Т. Л., Бобровская М. Т.,
Овандер М. H., Кацман М. С., Козлов Э. А. Ускоренный
метод определения первичной структуры высокогомоген-
ных белков. Полная аминокислотная последовательность
полиэдрина (ВЯП) капустной совки, Mamestra brassicae 11
Биополимеры и клетка.—1993.—9, № 4.—С. 44—49.
10. Kozlov Ε. A., Rodnin Ν. V., Levitina Т. L, Gusak N. M.,
Radomskij N. F., Palchikovskaya L I. The amino acid
sequence determination of a Granulin and Polyhedrin from two
Baculoviruses infecting Agrotis segetum Il Virology.—1992.—
189, N 1.—P. 320—323.
11. Серебряный С. Б., Кавсан В. M., Кибирев В. К, Кацман
М. С. Серусодержащие аминокислоты полиэдренного бел-
ка вируса желтухи тутового шелкопряда / / Химия природ,
соединений.—1968.—№ 3.—С. 174—178.
12. Козлов Э. А., Кириленко М. Т., Левитина Т. Л., Гудкова
Л. В., Дегтярь Р. Г., Солодова Ε. В. Триптические
404
пептиды каталазы гриба Penicillium vitale. 1. Разделение и
аминокислотный состав растворимых пептидов / / Био-
полимеры и клетка.—1987.—3, № 5.—С. 240—245.
13. Козлов Э. А., Левитина Т. Л., Радавский Ю. Л., Согуляева
В. MСидорова Η. MСеребряный С. Б. Определение
молекулярного веса белка тел включений вируса ядерного
полиэдроза тутового шелкопряда, Bombyx mori // Био-
химия.—1973.—38, № 5 — С. 1015—1019.
14. Кавсан В. M., Мороз Л. В., Серебряный С. Б. Приспо-
собление для горизонтального высоковольтного электро-
фореза на бумаге упрощенной конструкции / / Укр. био-
хим. журн.—1968.—40, № 1.—С. 104—106.
15. Easiy С. W. Combination of specific colour reactions useful in
the peptide mapping techniques / / Biochim. et biophys.
acta.—1965.—107, N 2.—P. 386—388.
16. Weiner A. M., Plott T., Weber R. Amino-terminal sequence
analysis of proteins, purified on a nanomole scale by gel
electrophoresis / / J. Biol. Chem.-1972.—247, N 10.—
P. 3242—3251.
17. Guidotty G. The action carboxypeptidase A and B on the
separated A and B chains of normal adult human hemoglobin
/ / Biochim. et biophys. acta.—1960.—42, N 2.—P. 177—179.
18. Hirs C. H. W. Determination of cystein as cystic acid 11 Meth.
Enzymol.—1967.—11.—P. 59—62.
19. Мейбаум В. В. Определение пентоз в нуклеотидах и
нуклеозидах посредством реакции Биаля / / Биохимия.—
1945.—10, № 4.—С. 353—359.
20. Шахман X. Третичная структура белков / / Биосинтез
белка и его регуляция / Под ред. Я. М. Варшавского.—M.:
Мир, 1967.—С. 349—397.
ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПОЛИЭДРИНА ВЯП S. LUNIGERA
21. Козлов Э. А., Согуляева В. M., Левитина Т. Л., Верещак
В. А., Серебряный С. Б. Очистка полиэдренного белка
вируса ядерного полиэдроза тутового шелкопряда и иссле-
дование процессов его ассоциации—диссоциации в раст-
ворах / / Биохимия.—1969.—34, № 4.—С. 679—685.
22. Козлов Э. А., Сидорова Η. MСеребряный С. Б. Полу-
чение и физико-химические свойства полиэдренного белка
вируса ядерного полиэдроза большой вощинной моли (G.
mellonella) 11 Биохимия.—1974.—39, № 1.—С. 130—134.
23. Козлов Э. А., Левитина Т. Л., Согуляева В. MСереб-
ряный С. Б. Разделение и аминокислотный состав трипси-
новых пептидов белка тел включений вируса ядерного
полиэдроза тутового шелкопряда Bombyx mori 11 Био-
химия.—1973.—38, № 6.—С. 1215—1220.
24. Kozlov Е. A, Levitina Т. L·, Sidorova N. M., Radavski Yu. L.,
Serebryani S. В. Comparative chemical studies of the poly-
hedral proteins of the Nuclear polyhedrosis of Bombyx mori
and Galleria mellonella / / J. Invert. Pathol.—1975.—25,
N 1.—P. 103—107.
25. Сидорова Η. M., Козлов Э. Α., Серебряный С. Б. Раз-
деление и аминокислотный состав растворимых в кислых
условиях трипсиновых пептидов белка тел включений
вируса ядерного полиэдроза большой вощинной моли <G.
mellonella) 11 Биохимия.—1976.—41, № 5.—С. 781—786.
26. Eppstein D. A., Thoma J. A. Alkaline protease associated with
the matrix protein of a virus infecting the cabbage looper 11
Biochem. and Biophys. Res. Communs.—1975.—62, N 3.—
P. 478—484.
УДК 577.322:578.841
Надійшла до редакції 06.07.2000
405
|