Дослідження неканонічних комплексів еукаріотного фактора елонгації 1А з тРНКТyr та тирозил-тРНК синтетазою. Роль окремих доменів синтетази у взаємодії з тРНК

• Veröffentlicht in: Біополімери і клітина
• Datum: 2005
• Hauptverfasser: Футерник, П.В., Ольжак, К., Пшикорська, А., Корнелюк, О.І., Негруцький, Б.С.
• Format: Artikel
• Sprache: Ukrainian
• Veröffentlicht: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 2005
• Schlagworte: Структура та функції біополімерів
• Online Zugang: https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155850
• Назва журналу: Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
• Zitieren: Дослідження неканонічних комплексів еукаріотного фактора елонгації 1А з тРНКТyr та тирозил-тРНК синтетазою. Роль окремих доменів синтетази у взаємодії з тРНК / П.В. Футерник, К. Ольжак, А. Пшикорська, О.І. Корнелюк, Б.С. Негруцький // Біополімери і клітина. — 2005. — Т. 21, № 5. — С. 400-406. — Бібліогр.: 29 назв. — укр.

Методом аналізу затримки смуги в полікриламідному гелі делеційних мутантів з'ясовано роль окремих доменів тирозил-тРНК синтетази (TyrRS) у взаємодії з тРНК Ідентифіковано сайт TyrRS, відповідальний за зв'язування гомологічної тРНКTyr. Цей сайт формується, в основному, каталітичним модулем TyrRS (TyrRS-ΔС). Проте специфічність зв'язування повнорозмірної TyrRS виявилася суттєво вищою у порівнянні із зв'язуванням тРНКTyr каталітичним модулем TyrRSΔC. Окремий С-модуль також зберігає здатність до зв'язування тРНКTyr, однак з досить низькою спорідненістю. Отже, припускається можливість залучення цитокінподібного С-модуля ТугRS до зв'язування тРНК у повнорозмірній ТугRS. Досліджено формування неканонічного потрійного комплексу тРНКTyr з еЕРІА*GDP. Ми детектували також формування неканонічного четвертинного комплексу еЕР1А*GDP*тРНКTyr*TyrRS. Найвірогідніше, що основний внесок до цієї взаємодії робить каталітичний домен TyrRS, тому що TyrRS-ΔC також здатна формувати четвертинний комплекс. Ці дані свідчать на користь існування універсального механізму каналю- вання тРНК, оскільки є вже третім прикладом формування таких незвичних комплексів з різними тРНК. Методом анализа задержки полосы в полиакриламидном геле делеционных мутантов определена роль отдельных доменов тирозил-тРНК синтетазы (TyrRS) во взаимодействии с тРНК Определен сайт TyrRS, ответственный за связывание гомологичной тРНКTyr, формирующийся, в основном, каталиическим модулем TyrRS (TyrRS-ΔC). Тем не менее, сродство к тРНК полноразмерной TyrRS оказалось выше, чем катали­тического модуля TyrRS-AC. Отдельный С-модуль также со­храняет способность к связыванию тРНКTyr, но с достаточно низким сродством, что предполагает возможность вовлече­ния и цитокиноподобного С-модуля TyrRS в связывание тРНК в полноразмерной TyrRS. Показано сформирование неканониче­ского тройного комплекса тРНКTyr с eEF1A*GDP. Мы детек­тировали также формирование неканонического четвертично­го комплекса eEFlA*GDP*mPHK *TyrRS. Наиболее веро­но, что основной вклад в это взаимодействие вносит каталиический домен TyrRS, поскольку TyrRS-ΔC также способна формировать четвертичный комплекс. Эти данные свидетель­ствуют в пользу существования универсального механизма ченнелинга тРНК. A role of different domains of bovine tyrosil-tRNA synthetase (TyrRS) in the interaction with homologous tRNA has been determined by the method of tRNA band retardation in polyacrylamide gel. The site of TyrRS responsible for the binding of tRNATyr is found to be formed mostly by the catalytic domain of TyrRS (TyrRS-ΔC). At the same time, the full-length TyrRS is found to bind tRNA stronger than TyrRS-DC. Cytokine-like C-domain of TyrRS also has tRNA-binding properties but much weaker than TyrRS-ΔC suggesting its possible involvement in tRNA binding as well. The formation of non-canonical ternary complex of tRNATyr and eEF1A*GDP has been shown. Also, the formation of quaternary complex of eEF1A*GDP*tRNATyr*TyrRS is detected. The catalytic domain of TyrRS appears to be responsible for this interaction, because the TyrRS-DC also is found to form the complex with eEF1A*GDP*tRNATyr. These data support the universality of the tRNA channeling mechanism.