Конструювання штамів — надпродуцентів формальдегіддегідрогенази метилотрофних дріжджів Hansenula polymorpha

Конструювання штамів — надпродуцентів формальдегіддегідрогенази метилотрофних дріжджів Hansenula polymorpha

Для генно-інженерного конструювання надпродуцента глутатіонзалежної формальдегіддегідро­генази (ФдДГ) обрано термотолерантні метилотрофні дріжджі Н. polymorpha NCYC 495 (leul-l). Ген FLD1 з власним промотором введено у плазміду інтегративного типу pYTl, яка містила ген LEU2 Saccharomyces cerevisiae,...

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:
Bibliographische Detailangaben
Veröffentlicht in:Біополімери і клітина
Datum:2005
Hauptverfasser: Демків, О.М., Парижак, С.Я., Красовська, О.С., Стасик, О.В., Гайда, Г.З., Сибірний, А.А., Гончар, М.В.
Format: Artikel
Sprache:Ukrainian
Veröffentlicht: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 2005
Schlagworte:
Молекулярна та клітинна біотехнології
Online Zugang:https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155876
Tags: Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Назва журналу:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Zitieren:Конструювання штамів — надпродуцентів формальдегіддегідрогенази метилотрофних дріжджів Hansenula polymorpha / О.М. Демків, С.Я. Парижак, О.С. Красовська, О.В. Стасик, Г.З. Гайда, А.А. Сибірний, М.В. Гончар // Біополімери і клітина. — 2005. — Т. 21, № 6. — С. 525-530. — Бібліогр.: 14 назв. — укр.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-155876
record_format dspace
spelling Демків, О.М.
Парижак, С.Я.
Красовська, О.С.
Стасик, О.В.
Гайда, Г.З.
Сибірний, А.А.
Гончар, М.В.
2019-06-17T14:47:47Z
2019-06-17T14:47:47Z
2005
Конструювання штамів — надпродуцентів формальдегіддегідрогенази метилотрофних дріжджів Hansenula polymorpha / О.М. Демків, С.Я. Парижак, О.С. Красовська, О.В. Стасик, Г.З. Гайда, А.А. Сибірний, М.В. Гончар // Біополімери і клітина. — 2005. — Т. 21, № 6. — С. 525-530. — Бібліогр.: 14 назв. — укр.
0233-7657
DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000710
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155876
577.21:577.152.1 + 661.727.1
Для генно-інженерного конструювання надпродуцента глутатіонзалежної формальдегіддегідро­генази (ФдДГ) обрано термотолерантні метилотрофні дріжджі Н. polymorpha NCYC 495 (leul-l). Ген FLD1 з власним промотором введено у плазміду інтегративного типу pYTl, яка містила ген LEU2 Saccharomyces cerevisiae, з подальшим включенням цього гена у геном штаму-реципіента leul-I. Здійснено селекцію інтегративних трансформантів за ознаками прототрофності по лейцину та резистентності до підвищених концентрацій формальдегіду (до 15 мМ) у ростовому середовищі. Визначено оптимальні умови культивування штамів для досягнення максимального рівня синтезу ФдДГ. Відібрано кращий трансформант як перспективний продуцент ФдДГ з активністю до 4 мкмоль·хв⁻¹· мг⁻¹ білка у безклітинному екстракті.
Для генно-инженерного конструирования сверхпродуцента глутатионзависимой формальдегиддегидрогеназы (ФдДГ) выбра­ны термотолерантные метилотрофные дрожжи Н. polymor­pha NCYC 495 (leul-1). Ген FLD1 с собственным промотором был введен в плазмиду интегративного типа pYTl, содержа­щую ген LEU2 Saccharomyces cerevisiae, с последуюищм вклю­чением целевого гена в геном штамма-реципиента leul-1. Проведена селекция интегративных трансформантов по при­знакам прототрофности по лейцину и резистентости к повы­шенным концентрациям формальдегида (до 15 мМ) в росто­вой среде. Определены оптимальные условия культивирования штаммов для достижения максимального уровня синтеза ФдДГ. Выбран лучший трансформант как перспективный продуцент ФдДГ (с активностью до 4 мкмоль·мин⁻¹ ·мг⁻¹ белка в бесклеточном экстракте).
The thermotolerant methylotrophic yeast H. polymorpha NCYC 495 (leu1-1) was chosen for genetic construction of the strain, over-producing glutathione-dependent formaldehyde dehydrogenase (FdDH). FLD1 gene with its own promoter was inserted into an integrative plasmid pYT1 containing LEU2 gene of Saccharomyces cerevisiae (as a selective marker) and the constructed vector was used for multi-copy integration of the target gene into genome of leu1-1 recipient cells. Selection of the strains was carried out by leucine prototrophy, as well as by resistance to elevated concentrations of formaldehyde in the medium (up to 15 mM). The optimal cultivation conditions for the selected strains were established which resulted in maximal synthesis of the target enzyme. The best recombinant strain was chosen as a perspective over-producer of FdDH (with the protein activity of 4 mmoles × min⁻¹ ×mg⁻¹ in cell-free extract).
Автори вдячні за фінансову підтримку роботи INTAS (грант 03-51-6278) і NATO (Linkage grant LST.NUKR.CLG 980621).
uk
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
Біополімери і клітина
Молекулярна та клітинна біотехнології
Конструювання штамів — надпродуцентів формальдегіддегідрогенази метилотрофних дріжджів Hansenula polymorpha
Конструирование штаммов — сверхпродуцентов формальдегиддегидрогеназы метилотрофных дрожжей Hansenula polymorpha
Construction of methylotrophic yeast Hansenula polymorpha strains over-producing formaldehyde dehydrogenase
Article
published earlier
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
title Конструювання штамів — надпродуцентів формальдегіддегідрогенази метилотрофних дріжджів Hansenula polymorpha
spellingShingle Конструювання штамів — надпродуцентів формальдегіддегідрогенази метилотрофних дріжджів Hansenula polymorpha
Демків, О.М.
Парижак, С.Я.
Красовська, О.С.
Стасик, О.В.
Гайда, Г.З.
Сибірний, А.А.
Гончар, М.В.
Молекулярна та клітинна біотехнології
title_short Конструювання штамів — надпродуцентів формальдегіддегідрогенази метилотрофних дріжджів Hansenula polymorpha
title_full Конструювання штамів — надпродуцентів формальдегіддегідрогенази метилотрофних дріжджів Hansenula polymorpha
title_fullStr Конструювання штамів — надпродуцентів формальдегіддегідрогенази метилотрофних дріжджів Hansenula polymorpha
title_full_unstemmed Конструювання штамів — надпродуцентів формальдегіддегідрогенази метилотрофних дріжджів Hansenula polymorpha
title_sort конструювання штамів — надпродуцентів формальдегіддегідрогенази метилотрофних дріжджів hansenula polymorpha
author Демків, О.М.
Парижак, С.Я.
Красовська, О.С.
Стасик, О.В.
Гайда, Г.З.
Сибірний, А.А.
Гончар, М.В.
author_facet Демків, О.М.
Парижак, С.Я.
Красовська, О.С.
Стасик, О.В.
Гайда, Г.З.
Сибірний, А.А.
Гончар, М.В.
topic Молекулярна та клітинна біотехнології
topic_facet Молекулярна та клітинна біотехнології
publishDate 2005
language Ukrainian
container_title Біополімери і клітина
publisher Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
format Article
title_alt Конструирование штаммов — сверхпродуцентов формальдегиддегидрогеназы метилотрофных дрожжей Hansenula polymorpha
Construction of methylotrophic yeast Hansenula polymorpha strains over-producing formaldehyde dehydrogenase
description Для генно-інженерного конструювання надпродуцента глутатіонзалежної формальдегіддегідро­генази (ФдДГ) обрано термотолерантні метилотрофні дріжджі Н. polymorpha NCYC 495 (leul-l). Ген FLD1 з власним промотором введено у плазміду інтегративного типу pYTl, яка містила ген LEU2 Saccharomyces cerevisiae, з подальшим включенням цього гена у геном штаму-реципіента leul-I. Здійснено селекцію інтегративних трансформантів за ознаками прототрофності по лейцину та резистентності до підвищених концентрацій формальдегіду (до 15 мМ) у ростовому середовищі. Визначено оптимальні умови культивування штамів для досягнення максимального рівня синтезу ФдДГ. Відібрано кращий трансформант як перспективний продуцент ФдДГ з активністю до 4 мкмоль·хв⁻¹· мг⁻¹ білка у безклітинному екстракті. Для генно-инженерного конструирования сверхпродуцента глутатионзависимой формальдегиддегидрогеназы (ФдДГ) выбра­ны термотолерантные метилотрофные дрожжи Н. polymor­pha NCYC 495 (leul-1). Ген FLD1 с собственным промотором был введен в плазмиду интегративного типа pYTl, содержа­щую ген LEU2 Saccharomyces cerevisiae, с последуюищм вклю­чением целевого гена в геном штамма-реципиента leul-1. Проведена селекция интегративных трансформантов по при­знакам прототрофности по лейцину и резистентости к повы­шенным концентрациям формальдегида (до 15 мМ) в росто­вой среде. Определены оптимальные условия культивирования штаммов для достижения максимального уровня синтеза ФдДГ. Выбран лучший трансформант как перспективный продуцент ФдДГ (с активностью до 4 мкмоль·мин⁻¹ ·мг⁻¹ белка в бесклеточном экстракте). The thermotolerant methylotrophic yeast H. polymorpha NCYC 495 (leu1-1) was chosen for genetic construction of the strain, over-producing glutathione-dependent formaldehyde dehydrogenase (FdDH). FLD1 gene with its own promoter was inserted into an integrative plasmid pYT1 containing LEU2 gene of Saccharomyces cerevisiae (as a selective marker) and the constructed vector was used for multi-copy integration of the target gene into genome of leu1-1 recipient cells. Selection of the strains was carried out by leucine prototrophy, as well as by resistance to elevated concentrations of formaldehyde in the medium (up to 15 mM). The optimal cultivation conditions for the selected strains were established which resulted in maximal synthesis of the target enzyme. The best recombinant strain was chosen as a perspective over-producer of FdDH (with the protein activity of 4 mmoles × min⁻¹ ×mg⁻¹ in cell-free extract).
issn 0233-7657
url https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155876
citation_txt Конструювання штамів — надпродуцентів формальдегіддегідрогенази метилотрофних дріжджів Hansenula polymorpha / О.М. Демків, С.Я. Парижак, О.С. Красовська, О.В. Стасик, Г.З. Гайда, А.А. Сибірний, М.В. Гончар // Біополімери і клітина. — 2005. — Т. 21, № 6. — С. 525-530. — Бібліогр.: 14 назв. — укр.
work_keys_str_mv AT demkívom konstruûvannâštamívnadproducentívformalʹdegíddegídrogenazimetilotrofnihdríždžívhansenulapolymorpha
AT parižaksâ konstruûvannâštamívnadproducentívformalʹdegíddegídrogenazimetilotrofnihdríždžívhansenulapolymorpha
AT krasovsʹkaos konstruûvannâštamívnadproducentívformalʹdegíddegídrogenazimetilotrofnihdríždžívhansenulapolymorpha
AT stasikov konstruûvannâštamívnadproducentívformalʹdegíddegídrogenazimetilotrofnihdríždžívhansenulapolymorpha
AT gaidagz konstruûvannâštamívnadproducentívformalʹdegíddegídrogenazimetilotrofnihdríždžívhansenulapolymorpha
AT sibírniiaa konstruûvannâštamívnadproducentívformalʹdegíddegídrogenazimetilotrofnihdríždžívhansenulapolymorpha
AT gončarmv konstruûvannâštamívnadproducentívformalʹdegíddegídrogenazimetilotrofnihdríždžívhansenulapolymorpha
AT demkívom konstruirovanieštammovsverhproducentovformalʹdegiddegidrogenazymetilotrofnyhdrožžeihansenulapolymorpha
AT parižaksâ konstruirovanieštammovsverhproducentovformalʹdegiddegidrogenazymetilotrofnyhdrožžeihansenulapolymorpha
AT krasovsʹkaos konstruirovanieštammovsverhproducentovformalʹdegiddegidrogenazymetilotrofnyhdrožžeihansenulapolymorpha
AT stasikov konstruirovanieštammovsverhproducentovformalʹdegiddegidrogenazymetilotrofnyhdrožžeihansenulapolymorpha
AT gaidagz konstruirovanieštammovsverhproducentovformalʹdegiddegidrogenazymetilotrofnyhdrožžeihansenulapolymorpha
AT sibírniiaa konstruirovanieštammovsverhproducentovformalʹdegiddegidrogenazymetilotrofnyhdrožžeihansenulapolymorpha
AT gončarmv konstruirovanieštammovsverhproducentovformalʹdegiddegidrogenazymetilotrofnyhdrožžeihansenulapolymorpha
AT demkívom constructionofmethylotrophicyeasthansenulapolymorphastrainsoverproducingformaldehydedehydrogenase
AT parižaksâ constructionofmethylotrophicyeasthansenulapolymorphastrainsoverproducingformaldehydedehydrogenase
AT krasovsʹkaos constructionofmethylotrophicyeasthansenulapolymorphastrainsoverproducingformaldehydedehydrogenase
AT stasikov constructionofmethylotrophicyeasthansenulapolymorphastrainsoverproducingformaldehydedehydrogenase
AT gaidagz constructionofmethylotrophicyeasthansenulapolymorphastrainsoverproducingformaldehydedehydrogenase
AT sibírniiaa constructionofmethylotrophicyeasthansenulapolymorphastrainsoverproducingformaldehydedehydrogenase
AT gončarmv constructionofmethylotrophicyeasthansenulapolymorphastrainsoverproducingformaldehydedehydrogenase
first_indexed 2025-12-02T12:22:46Z
last_indexed 2025-12-02T12:22:46Z
_version_ 1850862471444692992

Ähnliche Einträge