Уридиндифосфат-N- ацетил мурамил- L-аланил-D -глютaмат: мезо-2, 6-диаминопимелатлигазная активность в экстрактах клеток Bacillus subtilis, Streptococcus bovis и Enterococcus faecium
В экстрактах клеток В. subtilis, S. bovis, E. faecium обнаружена УДФ-N-ацетилмурамил-L-аланил-О-глютамат: мезо-2,6-ДАП-лигазная активность. УДФ-N-ацетилмурамил-L-аланил-В-глютамат: мезо-2,6-ДАП-лигаза В. subtilis выделена и очищена гель-фильтрацией и ионообменной хроматографией. Молекулярная масса ф...
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Datum: | 1991 |
| Hauptverfasser: | , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Russian |
| Veröffentlicht: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1991
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155908 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Уридиндифосфат-N- ацетил мурамил- L-аланил-D -глютaмат: мезо-2, 6-диаминопимелатлигазная активность в экстрактах клеток Bacillus subtilis, Streptococcus bovis и Enterococcus faecium / Е.О. Кальчева, М.М. Файзиев, С.С. Малюта // Биополимеры и клетка. — 1991. — Т. 7, № 6. — С. 91-95. — Бібліогр.: 12 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-155908 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Кальчева, Е.О. Файзиев, М.М. Малюта, С.С. 2019-06-17T15:23:07Z 2019-06-17T15:23:07Z 1991 Уридиндифосфат-N- ацетил мурамил- L-аланил-D -глютaмат: мезо-2, 6-диаминопимелатлигазная активность в экстрактах клеток Bacillus subtilis, Streptococcus bovis и Enterococcus faecium / Е.О. Кальчева, М.М. Файзиев, С.С. Малюта // Биополимеры и клетка. — 1991. — Т. 7, № 6. — С. 91-95. — Бібліогр.: 12 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000305 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155908 577.15 В экстрактах клеток В. subtilis, S. bovis, E. faecium обнаружена УДФ-N-ацетилмурамил-L-аланил-О-глютамат: мезо-2,6-ДАП-лигазная активность. УДФ-N-ацетилмурамил-L-аланил-В-глютамат: мезо-2,6-ДАП-лигаза В. subtilis выделена и очищена гель-фильтрацией и ионообменной хроматографией. Молекулярная масса фермента, определенная методом гель-фильтрации, составляет 120 000. В екстрактах клітин В. subtilis, S. bovis, ?. faecium виявлена УДФ^-ацетилмураміл- L-аланіл-D-глютамат: мезо-2, 6-ДАП-лігазна активність. УДФ-N-ацетилмураміл-L-аланіл-D-глютамат: мезо-2, 6-ДАП-лігаза В. subtilis виділена і очищена гель-фільтрацією та іонообмінною хроматографією. Молекулярна маса ферменту, визначена методом гель- фільтрації, становить 120 000. Uridine-diphosphate-N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamate: meso-2, 6-diaminopimelate ligase activity was found in extracts of B. subtilis, S. bovis, E. faecium. UDP-N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamate: meso-2, 6-diaminopimelate ligase from B. subtilis was purified by gel-filtration and ion-exchange chromatography. The molecular weight of enzyme as determined by gel-filtration is 120000. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Структура и функции биополимеров Уридиндифосфат-N- ацетил мурамил- L-аланил-D -глютaмат: мезо-2, 6-диаминопимелатлигазная активность в экстрактах клеток Bacillus subtilis, Streptococcus bovis и Enterococcus faecium Уридиндифосфат-N-ацетил-мураміл-L-аланіл-D-глютамат: мезо-2,6,діамінопімелатлігазна активність в екстрактах клітин Bacillus subtilis, Streptococcus bovis і Enterococcus faecium Uridine-diphosphate-N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-d-glutamate: meso-2, 6-diaminopimelate ligase activity in extracts of Basillus subtilis, Streptococcus bovis and Enterococcus faecium Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Уридиндифосфат-N- ацетил мурамил- L-аланил-D -глютaмат: мезо-2, 6-диаминопимелатлигазная активность в экстрактах клеток Bacillus subtilis, Streptococcus bovis и Enterococcus faecium |
| spellingShingle |
Уридиндифосфат-N- ацетил мурамил- L-аланил-D -глютaмат: мезо-2, 6-диаминопимелатлигазная активность в экстрактах клеток Bacillus subtilis, Streptococcus bovis и Enterococcus faecium Кальчева, Е.О. Файзиев, М.М. Малюта, С.С. Структура и функции биополимеров |
| title_short |
Уридиндифосфат-N- ацетил мурамил- L-аланил-D -глютaмат: мезо-2, 6-диаминопимелатлигазная активность в экстрактах клеток Bacillus subtilis, Streptococcus bovis и Enterococcus faecium |
| title_full |
Уридиндифосфат-N- ацетил мурамил- L-аланил-D -глютaмат: мезо-2, 6-диаминопимелатлигазная активность в экстрактах клеток Bacillus subtilis, Streptococcus bovis и Enterococcus faecium |
| title_fullStr |
Уридиндифосфат-N- ацетил мурамил- L-аланил-D -глютaмат: мезо-2, 6-диаминопимелатлигазная активность в экстрактах клеток Bacillus subtilis, Streptococcus bovis и Enterococcus faecium |
| title_full_unstemmed |
Уридиндифосфат-N- ацетил мурамил- L-аланил-D -глютaмат: мезо-2, 6-диаминопимелатлигазная активность в экстрактах клеток Bacillus subtilis, Streptococcus bovis и Enterococcus faecium |
| title_sort |
уридиндифосфат-n- ацетил мурамил- l-аланил-d -глютaмат: мезо-2, 6-диаминопимелатлигазная активность в экстрактах клеток bacillus subtilis, streptococcus bovis и enterococcus faecium |
| author |
Кальчева, Е.О. Файзиев, М.М. Малюта, С.С. |
| author_facet |
Кальчева, Е.О. Файзиев, М.М. Малюта, С.С. |
| topic |
Структура и функции биополимеров |
| topic_facet |
Структура и функции биополимеров |
| publishDate |
1991 |
| language |
Russian |
| container_title |
Биополимеры и клетка |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Уридиндифосфат-N-ацетил-мураміл-L-аланіл-D-глютамат: мезо-2,6,діамінопімелатлігазна активність в екстрактах клітин Bacillus subtilis, Streptococcus bovis і Enterococcus faecium Uridine-diphosphate-N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-d-glutamate: meso-2, 6-diaminopimelate ligase activity in extracts of Basillus subtilis, Streptococcus bovis and Enterococcus faecium |
| description |
В экстрактах клеток В. subtilis, S. bovis, E. faecium обнаружена УДФ-N-ацетилмурамил-L-аланил-О-глютамат: мезо-2,6-ДАП-лигазная активность. УДФ-N-ацетилмурамил-L-аланил-В-глютамат: мезо-2,6-ДАП-лигаза В. subtilis выделена и очищена гель-фильтрацией и ионообменной хроматографией. Молекулярная масса фермента, определенная методом гель-фильтрации, составляет 120 000.
В екстрактах клітин В. subtilis, S. bovis, ?. faecium виявлена УДФ^-ацетилмураміл- L-аланіл-D-глютамат: мезо-2, 6-ДАП-лігазна активність. УДФ-N-ацетилмураміл-L-аланіл-D-глютамат: мезо-2, 6-ДАП-лігаза В. subtilis виділена і очищена гель-фільтрацією та іонообмінною хроматографією. Молекулярна маса ферменту, визначена методом гель- фільтрації, становить 120 000.
Uridine-diphosphate-N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamate: meso-2, 6-diaminopimelate ligase activity was found in extracts of B. subtilis, S. bovis, E. faecium. UDP-N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-glutamate: meso-2, 6-diaminopimelate ligase from B. subtilis was purified by gel-filtration and ion-exchange chromatography. The molecular weight of enzyme as determined by gel-filtration is 120000.
|
| issn |
0233-7657 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155908 |
| citation_txt |
Уридиндифосфат-N- ацетил мурамил- L-аланил-D -глютaмат: мезо-2, 6-диаминопимелатлигазная активность в экстрактах клеток Bacillus subtilis, Streptococcus bovis и Enterococcus faecium / Е.О. Кальчева, М.М. Файзиев, С.С. Малюта // Биополимеры и клетка. — 1991. — Т. 7, № 6. — С. 91-95. — Бібліогр.: 12 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT kalʹčevaeo uridindifosfatnacetilmuramillalanildglûtamatmezo26diaminopimelatligaznaâaktivnostʹvékstraktahkletokbacillussubtilisstreptococcusbovisienterococcusfaecium AT faizievmm uridindifosfatnacetilmuramillalanildglûtamatmezo26diaminopimelatligaznaâaktivnostʹvékstraktahkletokbacillussubtilisstreptococcusbovisienterococcusfaecium AT malûtass uridindifosfatnacetilmuramillalanildglûtamatmezo26diaminopimelatligaznaâaktivnostʹvékstraktahkletokbacillussubtilisstreptococcusbovisienterococcusfaecium AT kalʹčevaeo uridindifosfatnacetilmuramíllalaníldglûtamatmezo26díamínopímelatlígaznaaktivnístʹvekstraktahklítinbacillussubtilisstreptococcusbovisíenterococcusfaecium AT faizievmm uridindifosfatnacetilmuramíllalaníldglûtamatmezo26díamínopímelatlígaznaaktivnístʹvekstraktahklítinbacillussubtilisstreptococcusbovisíenterococcusfaecium AT malûtass uridindifosfatnacetilmuramíllalaníldglûtamatmezo26díamínopímelatlígaznaaktivnístʹvekstraktahklítinbacillussubtilisstreptococcusbovisíenterococcusfaecium AT kalʹčevaeo uridinediphosphatenacetylmuramyllalanyldglutamatemeso26diaminopimelateligaseactivityinextractsofbasillussubtilisstreptococcusbovisandenterococcusfaecium AT faizievmm uridinediphosphatenacetylmuramyllalanyldglutamatemeso26diaminopimelateligaseactivityinextractsofbasillussubtilisstreptococcusbovisandenterococcusfaecium AT malûtass uridinediphosphatenacetylmuramyllalanyldglutamatemeso26diaminopimelateligaseactivityinextractsofbasillussubtilisstreptococcusbovisandenterococcusfaecium |
| first_indexed |
2025-11-26T22:59:23Z |
| last_indexed |
2025-11-26T22:59:23Z |
| _version_ |
1850779375437348864 |
| fulltext |
IBM-compatible personal computer is described. Presented software package allows to
compare the results obtained by the new method with the traditional ones. A sufficient
criteria for protein classification have been developed.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Dayhoff Af. О. Atlas of protein sequence and structure.—Washington, 1973.— SuppL
1.— P. 112.
2. Fitch W. MMargoliash E. Construction of phylogenetic trees / / Science.— 1967.—
155, N 2 .—P. 279—284.
3. Вапник В. H. Восстановление зависимостей по эмпирическим данным.— Μ . : Наука,
1979.—340 с.
4. Классификация и идентификация токсических полипептидов методом распознавания
образов / И . И. Парилис, Г. Jl. Буссель, JL Я. Юкельсон, Д. X. Х а м и д о в / / М о л е к у -
ляр. биология.— 1988.—22, № 6.—С. 1697—1701.
5. Сравнительный анализ факторов роста нервов (ФРН) с применением компьютер-
ных п р о г р а м м / И . И. Парилис, Р. С. Салихов, Д. Б. Мирходжаев и д р . / / Д о к л .
АН УзССР.— 1990.— 11, № 1.—С. 53—55.
6. Aihta Ф. Дж. Эволюция : Молекулярная биология предлагает эффективные методы
реконструкции филогении / / Журн. общ. биологии.— 1986.— 47, № 4.— С. 479—493.
7. Selhy М. /., Edwards R. H., Rutter W. J. Cobra NGF : structure and evolutionary com-
parison /"/ Neurosci. Res.— 1987,— 18, N 2.— C. 293—298.
8. Homology between snake venom sarafotoxins and mammalian endothelins / D. Graur,
A. Bdolah, Z. Wollberg, E. K o c h v a / / I s r . J. Zool.— 1988/1989.—35.—P. 171 — 175.
9. Tnmiya N., Maeda N., Cogger H. G. Neurotoxins from the venoms of the sea snakes
Hydrophis ornatus and Hydrophis lapemoides /./ Biochem. J.— 1983.— 213, N 1.—
P. 30—38.
10. Зыкова Τ. Α., Козловская Э. П. Аминокислотная последовательность нейротоксина
1 и:* актинии Radianthus macrodactylus / / Биоорг. химия.— 1989.— 15, № 10.—
С. 1301 — 1306.
Ин-т биохимии АН УзССР, Ташкент Получено 26.03.91
УДК 577.15
Е. О. Кяльчева, Μ. М. Файзиев, С. С. Малюта
УРИДИНДИФОСФАТ-N-
А Ц Е Т И Л МУРАМИЛ- L-АЛАНИЛ-D -ГЛЮТAMAT:
ME Ό 2, 6 -ДИАМИНОПИМЕЛАТЛИГАЗНАЯ АКТИВНОСТЬ
В ЭКСТРАКТАХ КЛЕТОК BACILLUS SUBTILIS,
STREPTOCOCCUS BOVIS И ENTEROCOCCUS FAECIUM
В экстрактах клеток В. subtilis, S. bovis, Ε. faecium обнаружена УДФ-Ы-ацетилмура-
мил-Ь-аланил-О-глютамат: мезо-2,6-ДАП-лигазная активность. УДФ-Ы-ацетилмурамил-
Ь-аланил-В-глютамат: мезо-2,6-ДАП-лигаза В. subtilis выделена и очищена гель-фильт-
рациеч и ионообменной хроматографией. Молекулярная масса фермента, определенная
методом гель-фильтрации, составляет 120 000.
Введен ие. Мезо-диаминопимелиновая кислота (мезо-ДАП) является не-
посредственным предшественником лизина в его биосинтетическом пу-
ти и в то же время — важным компонентом пептидогликана бактери-
альной клеточной стенки (рис. 1). Декарбоксилирование мезо-ДАП
в лизин осуществляется ферментом мезо-ДАП-декарбоксилазой (ЕС
4.1.1.20), а включение мезо-ДАП в состав УДФ-К-ацетилмурамил-три-
пептида катализируется УДФ-К-ацетилмурамил-^ :аланил-Ь-глютамат:
мезо-2,6-ДАП-лигазой (ЕС 6. 3. 2. 13). ДАП-лигазная активность обна-
руживается в клетках бактерий, клеточная стенка которых содержит
мезо-ДАП [1, 2] . В настоящее время указанный фермент выделен из
Corynebacterium xerosis [3], В. eereus [4], Escherichia coli [5]; пока-
зана его способность функционировать как в прямом, так и в обратном
С) Е. о . КАЛЬЧЕВА, Μ. М. ФАЙЗИЕВ, С. С. МАЛЮТА, 1991
92 ~ ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1991. Т. 7. № 6
направлениях. В ходе обратной реакции происходит выщепление ме-
зо-ДАП из УДФ-ЬІ-ацетилмурамил-трипептида, что сопровождается об-
разованием АТФ:
УДФ-И-ацетилмурамил-трипептид -f- АДФ -j- Фн^УДФ-И-ацетил-
мурамил-1 -А1а- / ) -С1и+мезо-ДАП+АТФ.
В стандартных условиях скорость обратной реакции составляет
лишь малый процент от реакции в прямом направлении [4] . Однако
в экстрактах исследуемых нами микроорганизмов В. subtilis, 5. bouis
I
ι
I
T
удФ-Н-ацетилглюкозамин
УДФ-И-ацетилглюкозамин-енолпирубат
I J
' УДФ-N- ацетилмурамилобая кислота
ί І
t \
L L-ДДП УДФ-Ν-ацетилмурамил-L-Діа
' \ \
мезо-ДАП УДФ-^-ацетилмурамил-L-Ala-D-Glu
Рис. 1. Схематическое изображение пути биосинтеза пептидогликана [13]
и Е. faecium д а ж е при неспецифических ферментативных условиях на-
блюдалось образование спектрофотометрически тестируемого количест-
ва мезо-ДАП. С помощью методов гель-фильтрации и ионообменной
хроматографии мы очистили фермент, катализирующий накопление ме-
зо-ДАП в экстрактах клеток В. subtilis, до гомогенного состояния и ус-
тановили его молекулярную массу.
Материалы и методы. Ш т а м м ы и с р е д ы . В работе использо-
ваны следующие бактериальные штаммы; В. subtilis S H g W , который
культивировали на среде Spizizen [6] ; S. bovis А 0 2 4 / 8 5 и Е. faecium
AL6, выращенные на модифицированной нами среде Henderson and
Snell [7], содержащей ( г / л ) : глюкозу 20, цитрат Na 20, К2НРО4 5У
NH4Cl 3, ацетат Na 1, M g S O 4 0,1, гидролизат казеина 0,1. Инкубация
при 37 °С.
П о л у ч е н и е б е с к л е т о ч н ы х э к с т р а к т о в . Бактериаль-
ные клетки после отделения от культуральной среды центрифугирова-
нием и промыванием 0,15 M фосфатным буфером, рН 7,1, суспендиро-
вали в буфере того же состава. Клеточные стенки разрушали ультра-
звуком с частотой 20 кГц 3 раза по 30 с на установке «MSE» (Англия) .
Полученный гомогенат центрифугировали либо 20 мин при 15 000 gy
либо 60 мин при 100 000 g. Образовавшийся супернатант использовали
в качестве бесклеточного экстракта.
Выделение ДАП-лигазы В. subtilis осуществляли согласно реко-
мендациям Michaud et al. [5] , после чего ферментативный препарат
наносили на колонку с сефадексом G-200 (0,9X100 см), предваритель-
но уравновешенную буфером А (0,15 M фосфатный буфер, рН 7,1, 1 мМ
2-меркаптоэтанол, 0,1 мМ M g C l 2 ) . Элюцию вели со скоростью 20 мл/ч.
Полученные после гель-фильтрации активные фракции объединяли и
подвергали дальнейшей очистке на колонке MonoQ («Pharmacia» , Шве-
ция) , т акже уравновешенной буфером А. Адсорбированный материал
элюировали возрастающим градиентом концентрации KCl (0—1 М) со
скоростью 60 мл /ч в течение 30 мин.
92 ~ ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1991. Т. 7. № 6
М е т о д ы а н а л и з а . Активность ДАП-декарбоксилазы определя-
ли по методу Work [8], активность Д А П - л и г а з ы — по скорости обра-
зования мезо-ДАП в реакционной среде (конечный объем 0,5 мл) , со-
держащей 0,3 M фосфатный буфер, рН 8,5, 4 мМ АДФ и бесклеточный
экстракт, полученный центрифугированием при 15 000 g в течение
20 мин. После инкубации при 37 °С в течение 30 мин реакцию останав-
ливали добавлением 0,12 мл ледяной уксусной кислоты. Удельную фер-
ментативную активность измеряли по количеству микромолей мезо-
Рис. 3. Разделение ДАП-лигазы (2) и
ДАП-декар бокси лазы (1) на колонке
MonoQ
Рис. 2. Электрофорез на бумаге реакцион-
ной смеси с бесклеточным экстрактом
В. subtilis. После инкубации в течение
О (1) и 30 мин (2) 20 мкл реакционной
пробы анализировали электрофорети-
чески
Д А П , образовавшейся за 1 мин в присутствии 1 мг белка бесклеточно-
го экстракта.
Концентрацию белка определяли методом Bredford [9].
Высоковольтный электрофорез на бумаге проводили в растворе ук-
сусная кислота : муравьиная кислота : вода (10 : 41,2 : 948, V/V), рН 1,9,
45 мин, 4000 В. Электрофореграммы проявляли 1 %-ным раствором
нингидрина в ацетоне.
Молекулярную массу ферментов определяли гель-фильтрацией
[10]. В качестве белков-маркеров использовали набор LW Kit
(«Pharmac ia») .
Результаты и обсуждение. Фермент ДАП-декарбоксилаза преобра-
зует мезо-ДАП в лизин. Его активность измеряют по скорости перера-
ботки мезо-ДАП [8].
При определении ДАП-декарбоксилазной активности в экстрактах
клеток В. subtilis, S. bovis и Е. faecium, достигших конца экспоненци-
альной фазы роста, мы часто тестировали не уменьшение, а увеличение
,содержания ДАП. Известно, что у бацилл максимальная ДАП-декар-
боксилазная активность приходится на конец ростового цикла [ И ] .
Тем не менее в ходе ферментативной реакции мы отмечали именно воз-
растание концентрации мезо-ДАП (рис. 2).
Наблюдаемое повышение содержания этой аминокислоты могло
быть обусловлено наличием другого энзима, катализирующего накоп-
ление мезо-ДАП и способного эффективно функционировать в услови-
ях, оптимальных для проявления ДАП-декарбоксилазной активности.
Фермент ДАП-лигаза , ускоряя реакцию в обратном направлении,
92 ~ ISSN 0233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1991. Т. 7. № 6
отщепляет от предшественника пептидогликана клеточной стенки УДФ-
N-ацетилмурамил-трипептида мезо-ДАП и увеличивает тем самым со-
держание диаминопимелиновой кислоты в свободном состоянии. Д а н -
ный уридиновый трипептид накапливается в бактериальных экстрактах,
получаемых в результате разрушения оболочек клеток ультразвуком и
последующего центрифугирования при 15 000 g в течение 20 мин [12].
Использование другого режима центрифугирования (100 000 gy 60 мин)
позволяет отделить ферментативные образцы от пептидогликана [12].
Действительно, в бесклеточных экстрактах В. subtilis, S. bovis, E. fae-
Ciumy отобранных после осаждения при 100 000 g, не отмечалось уве-
личения содержания Д А П в случае их использования для определения
ДАП-декарбоксилазной активности. Добавление же к таким экстрак-
там полученного при центрифугировании осадка приводило к заметно-
му повышению концентрации этой аминокислоты в реакционной пробе.
Уровень содержания Д А П становился еще выше при смещении рН ре-
акции в щелочную сторону (рН 9) и при увеличении молярности
0,15 M фосфатного буфера до значения 0,3 M (таблица) . Перечислен-
ные условия (слабощелочное значение рН, наличие неорганического
фосфора, а т а к ж е А Д Ф ) являются оптимальными для функционирова-
ния ДАП-лигазы в обратном направлении [4, 5] . Внесение нами в ре-
акционную среду, содержащую 0,3 M фосфатный буфер (рН 8,5) и
бесклеточный экстракт любого из исследуемых микроорганизмов, полу-
ченный центрифугированием при 15 000 g (что определяет наличие в
нем как ферментативного препарата, так и УДФ-Ы-ацетилмурамил-три-
пептида), 4 мМ А Д Ф способствовало трехкратному увеличению содер-
жания Д А П (см. таблицу) . Таким образом, чем ближе становились ус-
ловия реакции к специфически подобранным для проявления ДАП-ли-
газной активности, тем значительнее возрастал уровень содержания
Д А П .
Образование мезо-ДАП в бесклеточных экстрактах В. subtilis, S. bovis и Е. faecium
Д л я дальнейшей характеристики ферментативного препарата, осу-
ществляющего накопление мезо-ДАП в экстрактах В. subtilis, он был
изолирован согласно рекомендациям Michaud et al. [5] и очищен гель-
фильтрацией на сефадексе G-200. После элюции с колонки 0,15 M фос-
фатным буфером выявлен один активный белковый пик, Mr которого
120 000. Помимо ДАП-лигазной, он содержал и ДАП-декарбоксилаз-
ную активность. Разделение этих ферментативных активностей дости-
галось посредством ионообменной хроматографии. ДАП-лигазная фрак-
ция элюировалась с MonoQ при более высокой концентрации KCl, чем
ДАП-декарбоксилазная (рис. 3) . Установленная гель-фильтрацией в
указанных условиях величина молекулярной массы ДАП-лигазы В. sub-
tilis фактически не отличается от таковой у ДАП-лигазы Е. coli (Mr
106 000+3000) [5] . Такая молекулярная масса характерна для димер-
ных белков. Выяснение предполагаемого субъединичного строения
ДАП-лигазы В. subtilis и ее физико-химических свойств составляют
предмет наших дальнейших исследований.
Р е з ю м е
В екстрактах клітин В. subtilis, S. bovis, Ε. faecium виявлена УДФ^-ацетилмураміл-
L-аланіл-D-глютамат: мезо-2, 6-ДАП-лігазна активність. УДФ-N-ацетилмураміл-L-ала-
92 ~ ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1991. Т. 7. № 6
ніл-D-глютамат: мезо-2, 6-ДАП-лігаза В. subtilis виділена і очищена гель-фільтрацією та
іонообмінною хроматографією. Молекулярна маса ферменту, визначена методом гель-
фільтрації, становить 120 000.
S u m m a r y
Uridine-diphosphate-N-acetylmuramyl-L-aIanyl-£>-glutamate: meso-2, 6-diaminopimelate li-
gase activity was found in extracts of B. subtilis, S. bovis, E. faecium. ί /ΖλΡ-Ν-acetylmura-
myl-L-alanyl-D-glutamate: meso-2, 6-diaminopimelate l igase f rom B. subtilis was purif ied
by gel-f i l t rat ion and ion-exchange chromatography. The molecular weight of enzyme a s
determined by gel-f i l t rat ion is 120 000.
С П И С О К Л И Т Е Р А Т У Р Ы
1. Strominger J. L., Ito E., Thretiti R. Η. Comparat ive biochemistry of cell wal l peptide
synthesis in b a c t e r i a / / F e d . Proc.— 1961 .—20.—P. 228.
2. Formation of yDP-ace ty lmuramyl peptides / Ε. I to, S. G. Nathenson, D. N. Dietzler
et al. / / Meth. E n z y m o l . — N e w York : Acad, press, 1966.—Vol. 8 . — P . 324—328.
3. Preparation and f ract ionat ion of ZMP-add ing enzyme f rom Corynebacterium xerosis/
E. Ito, S. G. Nathenson, D. .N. Dietzler et al. / / Ibid.— P. 329—337.
4. Mizuno Y., Ito E. Purif icat ion and properties of uridine diphosphate N-ace ty lmuramyU
L-alanyl-D-glutamate : meso-2, 6-diaminopimelate ligase / / J . Biol. Chem.— 1968.— 243,
N 10,—P. 2665—2672.
5. Over-production, purif ication and properties of the ur idine-diphosphate-N-acetylmura-
myl-L-alanyl-Z)-glutamate: meso-2, 6-diaminopimelate l igase f rom Escherichia coll [
C. Michaud, D. Mengin-Lecreulx, J. van Heijenoort , D. Blanot / / E u r . J . Biochem.--*
1990.— 194, N 3 . — P . 853—861.
6. Spizizen C., Reilly B. E., Evans A. H. Requirements for t r ans fo rmat ion in Bacillus
subtilis / / Ann. Rev. Microbiol.— 1966.—20, N 1 .—P. 341—400.
7. Henderson L. M., Snell Ε. E. Uni form medium for determinat ion of amino acids with
various m i c r o o r g a n i s m s / / J . Biol. Chem.— 1948 — 172, N 1 ,—P. 15—29.
8. Work E. Reaction of ninhydrin in acid solution with s t ra ight-chain amino acids con-
ta in ing two amino groups and its application to the est imation of αε-diaminopimel ic
acid / / Biochem. J.— 1967.—67, N 3 . — P . 416—423.
9. Bradford Μ. M. A rapid and sensit ive method for the quant i ta t ion of mic rogram quan-
tities of protein ut i l izing the principle of protein-dye b i n d i n g / / J . Anal . Biochem.—
1976,—72, N 2 . — P . 248—254.
10. Andrews P. Es t imat ion of the molecular weight of proteins by sephadex gel-fi l tra*
tion / / J. Biochem.— 1964.—91, N 2 . — P . 222—333.
11. Grandgenett D. P., Stahly D. P. Diaminopimelate decarboxylase of sporu la t ing bacte-
r i a / / J . Bacteriol.— 1968,— 96, N 6 . — P . 2099—2109.
12. Mengin-Lecreulx D., Flouret B., van Heijenoort J. Cytoplasmic steps of pept idoglycan
synthesis in Escherichia co/t / / Ibid.— 1982.— 151, N 3 . — P . 1109—1117.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН УССР, Киев Получено 15.05.91
92 ~ ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1991. Т. 7. № 6
|