Отримання мутантів Propionibacterium shermanii — продуцентів вітаміну B₁₂ і їх характеристика
Вивчали мутагенну дію супермутагена N-метил-N-нітро-N-нітрозогуанідину на культуру Pr. shermanii 128. Визначено час експозиції з мутагеном – 30 і 60 хв. Отримані мутанти були первинно оцінені за їх здатністю накопичувати вітамін В12. Изольовано штам Pr. shermanii 1818, який синтезує до 45 мг/см³ ві...
Saved in:
| Published in: | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Date: | 1995 |
| Main Author: | |
| Format: | Article |
| Language: | Ukrainian |
| Published: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1995
|
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156178 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Отримання мутантів Propionibacterium shermanii — продуцентів вітаміну B₁₂ і їх характеристика / П.Н. Дімїтрова // Биополимеры и клетка. — 1995. — Т. 11, № 5. — С. 79-83. — Бібліогр.: 11 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860247589537972224 |
|---|---|
| author | Дімітрова, П.Н. |
| author_facet | Дімітрова, П.Н. |
| citation_txt | Отримання мутантів Propionibacterium shermanii — продуцентів вітаміну B₁₂ і їх характеристика / П.Н. Дімїтрова // Биополимеры и клетка. — 1995. — Т. 11, № 5. — С. 79-83. — Бібліогр.: 11 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Биополимеры и клетка |
| description | Вивчали мутагенну дію супермутагена N-метил-N-нітро-N-нітрозогуанідину на культуру Pr. shermanii 128. Визначено час експозиції з мутагеном – 30 і 60 хв. Отримані мутанти були первинно оцінені за їх здатністю накопичувати вітамін В12. Изольовано штам Pr. shermanii 1818, який синтезує до 45 мг/см³ вітаміну В12. Десять найпродуктивніших з усіх перевірених мутантів по вітаміноутворенню досліджено на ауксотрофність. Наведено їх біохімічну характеристику.
Изучали мутагенное действие супермутагена N-MeTWi-N-HHTpo-N- нитрозогуанидина на культуру Pr. shermanii 128. Определено время экспозиции с мутагеном – 30 и 60 мин. Полученные мутанты были первично оценены по их возможности накапливать витамин B₁₂- Изолирован штамм Pr. shermanii 1818, который синтезирует до 45 мг/см³ витамина Bi2. Десять самых продуктивных из всех проверенных мутантов по витаминообразованию исследованы на ауксотрофность. Приведена их биохимическая характеристика.
N-inelhyl-N-nitro-N-nitrozoguanin effective on Propionibaclerium shermanii 128. The time define for exposition with mutagenes 30 and 60 min. Propionibacterium shermanii 1818 sinthezies to 45 mg/cm³ vitamin B₁₂. Generation, isolation and characterization of auxotrophic mutants of Propionibacterium.
|
| first_indexed | 2025-12-07T18:39:02Z |
| format | Article |
| fulltext |
УДК 575.1
П. ТІ. Дімїтрова
ОТРИМАННЯ МУТАНТІВ PROPIONIBACTERIUM SHERMANII —
ПРОДУЦЕНТІВ ВІТАМІНУ B i 2 І ЇХ ХАРАКТЕРИСТИКА
Вивчали мутагенну дію супермутагена N-метил-N-нітро-N-нітрозогуанідину на культу
ру Pr. shermanii 128. Визначено час експозиції з мутагеном — ЗО і 60 хв. Отримані
мутанти були первинно оцінені за їх здатністю накопичувати вітамін Вї2. Изольовано
штам Pr. shermanii 1818, який синтезує до 45 мг/см3 вітаміну Вї2.
Десять найпродуктивніших з усіх перевірених мутантів по вітаміно у творенню
досліджено на ауксотрофність. Наведено їх біохімічну характеристику.
Вступ. За допомогою постійного природного пересіву і відбору активних
форм (автоселекцією) можна збільшити продуктивність пропіоновокис-
лих бактерій у відношенні синтезу вітаміну Ві2 [5—7]. Проте індуко
ваний мутагенез і відбір культур зі зміненим генотипом розширює мож
ливості отримання мутантів з підвищеним рівнем біосинтезу цього віта
міну [2—4, 6, 8, 10]. При багаторазовій дії хімічним мутагенним факто
ром і наступному відборі найпродуктивніших видів (клонів) накопичу
ються окремі біохімічні мутації і в результаті виникають форми мікро
організмів, що відрізняються від початкових штамів цілим набором
морфологічних і фізіологічних ознак.
Мета цєї розробки — отримання, ізоляція і біохімічна характерис
тика мутантів Pr. shermanii — продуцентів вітаміну Ві2.
Матеріали і методи. Б а к т е р і а л ь н і к у л ь т у р и , с е р е д о
в и щ а і у м о в и р о с т у . В експериментах використано мутантний
штам Pr. shermanii 128, отриманий за допомогою індукованого мутаге
незу з батьківського штама Pr. shermanii 15 [9].
Склад середовища для ізоляції і росту мутантів, а також посівні і
ферментаційні середовища з метою випробування вітаміноутворюючої
здатності описані в нашій попередній роботі [2]. Так, середовище на
основі молочної сироватки використано для культивування та підтри
мування вихідних штамів.
Мінімальне диференційне середовище включає сім видів неорганіч
них солей і глюкозу як джерело вуглецю. Воно створене на основі вже
відомих середовищ [1, 4, 11]. До його складу входять ( % ) : глюкоза—
1,0; К 2 Н Р 0 4 —0,1740; К Н 2 Р 0 4 — 0,1360; ( N H 4 ) 2 S 0 3 — 1,60; M g S 0 4 X
Х 7 Н 2 0 —0,001; F e S 0 4 - 7 H 2 0 —0,01; M n S 0 4 - 4 H 2 0 —0,003, СоС12 —0,01.
В табл. 1 наведено фактори росту (вітаміни, амінокислоти, пури
нові і піримідинові основи), які додавали до мінімального середовища
в комбінаціях, що створювали 12 диференційних середовищ за схемою
Хол ідея [11]. Останні використовували для визначення передбачених
ауксотрофних мутантів.
Посівний матеріал отримували на синтетичному середовищі, яке
містило (%) : глюкозу—1,0; гідролізат казеїну — 0,1; Bacto-Tripton —
0,15; дріжджовий екстракт—0,5; біотин — 0,00003; пантотенат каль
цію — 0,0004; N a H 2 P 0 4 — 0,16; К з Р 0 4 — 0,16; MgCl 2 -6H 2 0 — 0,04;
F e S 0 4 - 7 H 2 0 —0,001; СоС12 — 0,0012.
Всі використані поживні речовини у середовищах стерилізували
ВОЛОГИМ паром ПІД тиском при 121 °С протягом 15 хв. Завчасно було
скориговано рН від 6,6 до 6,8.
© II. II. ДІМІТРОВЛ, 1995
ISStf 0233-7G57. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1995. Т. 11. № б 79
Для біохімічної характеристики мутантів застосовували поживні
середовища в ампулах, які містили стерильні субстрати в об'ємі 2 см3.
Безперервне підтримування батьківського штама і мутантних культур
здійснювали при температурі 4 °С на синтетичному середовищі в ліофі-
лізованому стані. Мутанти культивували в середовищі на основі молоч
ної сироватки і пересівали щотижня.
Всі штами розвивалися при ЗО °С в анаеробних умовах. Рідкі се
редовища засівали інокулятом в кількості 12,5 % і, як правило, дося
гали стаціонарної фази росту за 40—48 год.
М у т а г е н н а о б р о б к а . Бактерійну культуру Pr. shermanii 128
в логарифмічній фазі росту центрифугували при 4000 об/хв протягом
15 хв. Клітини відмивали фосфатним буфером і ресуспендували в тому
ж буфері до концентрації з оптичною густиною Д=0,9—1,1, яку визна
чали на ФЕК-56 при Я = 570 нм і товщині кювети 10 мм. Розчин супер-
мутагена ^метил-К-нітро-К-нітрозогуанідину (НМНГ) готували в то
му ж буфері і при температурі 0°С додавали до клітинної суспензії,
при цьому час експозиції з мутагеном складав ЗО і 60 хв. Після вида
лення мутагенного фактора (центрифугуванням при 4000 об/хв протя
гом 15 хв) клітини відмивали двократно і ресуспендували у фосфатно
му буфері. Культуру розбавляли фізіологічним розчином і використо
вували для посіву. Чашки Петрі з відповідними розбавленнями термо-
статували при ЗО °С в анаеробних умовах. Видимі колонії з'являлися на
7—10-ту добу від початку інкубації. Після цього вибрані візуально ко
лонії переглядали під мікроскопом і, переконавшись у їх чистоті, пе
ресівали на рідке середовище для наступних досліджень, методики яких
описані в нашій роботі [2].
У м о в и к у л ь т и в у в а н н я і х а р а к т е р и с т и к а м у т а н
т ів . Отримані мутанти підлягали первинній оцінці за їх здатністю ут
ворювати вітамін Ві2. Ферментацію здійснювали в колбах об'ємом
500 см3 у середовищі, створеному на основі молочної сироватки. Куль
тивування проводили періодичним способом при ЗО °С протягом 84—
108 год; на 40-й год від його початку додавали 5,6-диметилбензімідазол.
Кількість синтезованого вітаміну BJ2 визначали мікробіологічним ме
тодом [6].
Десять найпродуктивніших з усіх перевірених на вітаміноутворення
мутантів досліджували на ауксотрофність. Клітини кожного штама, що
росли на синтетичному середовищі до середини експоненційної фази,
відділяли, ресуспендували у фосфатному буфері і пересівали на 12 діаг
ностичних середовищ за схемою Холідея [11]. Ці середовища готували
Таблиця 1
Фактори росту в діагностичних середовищах
Фактор росту
Аланін
Аргінін
Аспарагінова кислота
Аденін
Біотин
Валін
Глутамінова кислота
Гуанін
Гліцин
Ізолейцин
Інозит
Лейцин
Лізин
Метионін
Нікотинова кислота
Тіосульфат натрію
Орнітин
Пантотенова кислота
Концен
трация,
мг/см8
5
5
500
5 j
1
50
Фактор росту
Піридоксин
Пролін
р-Амінобензойна кислота
Рибофлавін
Серин
Тимін
Тирозин
Тіамін
Треонін
Триптофан
Урацил
Фенілаланін
Гістидин
Гіпоксантин
Фолієва кислота
Холін
Цитозин
Цистин
Концен
трація,
мг/см3
50
1
1
250
1
5
1
1
1
1
1
1
1
1
50
1
5
1
80 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1995. Т. 11. №5
завчасно у вигляді розчинів з відповідною концентрацією і кожний роз
чин добавляли до середовищ в кількості 1 %. Кожне із 12 тест-середо-
вищ визначали як підтримуюче ріст окремих штамів, якщо вони про
довжували рости після трьох пасажів у тому ж середовищі.
Десятьом мутантам надано також біохімічну характеристику.
Для визначення здатності бактерій розкладати вуглеводи і багато
атомні спирти використовували рідкі поживні середовища, які вклю
чали відповідний вуглевод та індикатор (так званий «строкатий» ряд).
Розподіл за продуктивністю вітаміну Ві2 мутантів (% відносно батьківського штама),
отриманих при експозиції з мутагеном протягом 30 (а) і 60 (б) хв
Після пересіву кожного штама і його інкубації при температурі ЗО °С
зміни в субстраті за відповідний строк (24—36 год) враховували візу
ально за кольором індикаторів.
Результати і обговорення. Отримання продуктивних штамів пропіо-
новокислих бактерій залежить не тільки від вибору оптимальної дози
мутагена, але і від терміну експозиції. Нашими попередніми досліджен
нями [2] встановлено, що застосування високих концентрацій НМНГ
(до 1000 мг/см3), призводить до утворення продуктивніших і стабіль-
ніших'мутантів в порівнянні з обробкою меншими дозами.
В результаті впливу НМНГ на культуру Pr. shermanii 128 ізольо
вано 70 клонів, із них 40 —при експозиції з мутагеном протягом ЗО хв
і ЗО — протягом 60 хв. При відборі високоактивних штамів всі культури
в процесі культивування індивідуально оцінювали за кількістю синте
зованого вітаміну Ві2. Контролем служив батьківський штам, що на
копичував до 25 мг/см3 вітаміну Ві2.
Розподіл отриманих мутантів за продукуванням вітаміну виража
ли у відсотках відносно батьківського штама. Дані представлені на
рисунку.
При дії НМНГ у концентрації 1000 мг/см3 і експозиції про
тягом ЗО хв отримано 8 клонів з біосинтетичною активністю, вищою за
40 мг/см3. При експозиції з мутагеном протягом 60 хв число їх змен
шилося до трьох. Штам Pr. shermanii 1818 накопичував у клітинах до
45 мг/см3 вітаміну Ві2 і надалі його було використано як вихідну куль
туру для подальшого мутагенного впливу і поетапного відбору високо
активних продуцентів.
Результати первинної оцінки обгрунтовані методом математичної
статистики. Було виділено штами, яким притаманна більш висока_ві-
таміноутворююча активність, що характеризується як Х±Ъ<У1Х (де х —
середня арифметична активність; о —середнє квадратичне відхилення).
У цих же мутантів було простежено біосинтетичну стабільність протя
гом чотирьох послідовних генерацій (табл. 2).
Експерименти показують, що у п'яти послідовних мутантів біосин-
тетична активність під час досліджуваного періоду зменшується. Оди
надцять клонів зберігали високу вітаміноутворюючу здатність і були
віднесені до плюсових варіантів. Негативні по біосинтезу коріноїдів ва
ріанти клонів зберігають низьку активнсть в результаті повторних
пересівів,
ISSR 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1995. Т. 11. №5 6—5-857 81
Аналіз морфологічних Ознак клітин, а також культуральних влас
тивостей колоній, що виросли із раніше оброблених мутагеном клітин
Pr. shermanii 128, свідчить про те, що вони не відрізняються у пози
тивних варіантів клонів від їх початкового батьківського штаму. Не
гативні варіанти мутантів утворюють порівняно менші колонії жовтого
або сірого кольору. їх форма кругла, поверхня гладка з рівними руб
цями. Вони характеризуються слабшим біосинтезом вітаміну В]2.
Вивчено також вплив терміну дії мутагена НМНГ на клітини про-
піоновокислих бактерій для перевірки їх виживання. Показано, що воно
зменшується із зростанням часу обробки. Ці результати збігаються з
даними Воробйової та ін. [4]. Питома частина клітин, що вижили, при
впливові НМНГ в концентрації 1000 мг/см3 протягом ЗО хв складала
1,3 %, в той час як при експозиції 60 хв — тільки 0,5 %.
Аналіз 10 мутантних культур пропіоновокислих бактерій для визна
чення потреби у ростових факторах виявив їх ауксотрофну специфіч
ність серед таких, які проявили високу вітаміноутворюючу активність.
Штами, що несуть подібні маркери, можна легко ідентифікувати і се-
лекціювати у майбутніх генетичних експериментах. Посіяні на 12 діаг
ностичних середовищах штами містили різні концентрації і комбінації
Т а б л и ц я 2
Біохімічна активність мутантів, отриманих при дії на Pr. shermanii 128
супермутагена НМНГ
Штам
Активність вітаміну Ві2, мг/см3
Номер досліду
Штам
Активність вітаміну В12, мг/см3
Номер досліду
1802
1803
1804
1805
1806
1811
1818
1819
41,3
44,9
33,6
41,7
41,4
33,2
45,5
43,3
37,4
45,2
29,9
42,6
39,8
32,9
43,9
43,1
32,3
44,8
27,7
42,0
38,6
34,5
44,1
42,6
32,8
45,1
28,3
41,8
39,3
33,7
44,3
43,0
1821
1822
1511
1510
1520
1514
1519
1525
32,2
42,8
35,0
31,4
44,5
41,1
35,0
43,9
31,9
40,4
32,3
32,1
42,0
41,6
36,5
39,0
32,8
42,9
34,6
30,3
39,9
42,8
34,9
35,0
31,5
41,3
36,0
31,0
40,4
42,4
35,7
35,7
ISSR 0233-7057. БИОПОЛИМЕРЫ II КЛПТКЛ. HW,. Т. 11. № п
вітамінів, амінокислот, пуринових і піримідинових основ. Незважаючи
на мутагенну дію НМНГ, культури зберегли здатність синтезувати зга
дані речовини. Вони добре росли на всіх діагностичних середовищах
при кількох пересівах. Всі мутанти виявилися прототрофами, що можуть
рости на мінімальному середовищі без додавання ростових факторів.
Для доказу ідентичності 10 мутантних штамів було визначено їх
аміло- і протеолітичні властивості (табл. 3).
В анаеробних умовах всі мутанти інтенсивно зброджують глюкозу
з утворенням кислоти і газу. Засвоюють адоніт, інозит. Деякі з них
слабо використовують рамнозу (Рг. shermanU П-10), інулін (Рг. sher
manU П-4, П-8, П-9, П-10), декстрин, глікоген (Рг. shermanU П-8, П-10),
маніт (Рг. shermanU П-3, П-9, П-10), сорбіт (Рг. shermanU П-5, П-10),
саліцин (Рг. shermanU П-3, П-4, П-7). Штами Рг. shermanU П-5, П-6,
П-10 не використовують саліцин. Штам Рг. shermanU П-10 не викорис
товує дульцит і трегалозу. Всі досліджені штами розжижують желатин
і пептонізують молоко.
Результати проведених експериментів показали, що внаслідок
впливу НМНГ на клітини Рг. shermanU 128 за умови різного терміну
експозиції індукуються мутації і утворюються клони, здатні накопичу
вати вітамін Віг у значно більшій кількості, ніж батьківський штам.
При дії НМНГ у концентрації 1000 мг/см3 і експозиції протягом ЗО хв
ізольований і виділений штам Рг. shermanU 1818 синтезує до 45 мг/см3
вітаміну Віг, що перевищує по продуктивності батьківський штам
па 83 %•
Десять тестованих бактерійних мутантів, що належать до плюс-
варіаитів з високою вітаміноутворюючою здатністю, зберегли батьків
ський генотип і щодо потреби у ростових факторах.
Р. N. Dimitrova
ISOLATION AND CHARACTERIZATION OF MUTANTS
OF PROPIONIBACTERIUM SHERMANU OF PRODUCER OF VITAMIN B1 2
S и in m a r у
N-nielhyl-N-nilro-N-nitrozoguanin effective on Proplonibaclerium shermanU 128. The
time define for exposition with mutagenes 30 and 60 min. Proplonibacterium shermanU
1818 sinthezics to 45 ing/cm3 vitamin B12. Generation, isolation and characterization of
auxotrophic mutants of Proplonibacterium.
СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ
1. Воробьева Л. И. Пропионовокислые бактерии и образование витамина Ві2 — М •
Изд-во МГУ, 1976.— 264 с.
2. Димитрова П. И., Мургов И. Д. Получаване на мутанти на Proplonibacterium she-
rmanii с повишен синтез на витамин Bi2 // Науч. труды ВИХВП.— Пловдив,
1990.—Т. 37.—С. 205.
3. О лине ка я Н. Л. Хранение пропионовокислых бактерий // Прикл. биохимия "и
микробиология.— 1988.— 24, № 8.—С. 38.
4. Попова Я. Химия и технология на внтамините.---Пловдив : Изд-во ВИХВП,
1972.--Зої с.
5. Пушкин А. В., Елисеев А. А., Быховский В. Я. Взаимосвязь биосинтеза корринои-
дов и глутамина у пропионовокислых бактерий // Прикл. биохимия и микробиоло
гия.-- 1988.- 2 4 . - С. 756.
6. Цанев //., Митов Г. Рьководство за практически упражнения по микробиоло
гия.— София : Медицина и физкультура, 1978.— С. 179.
7. Battcrsbu A. Synthetic and biosynthetic studies on vitamin Bi2 // J. Natur. Pro
ducts.— Ї988.— 51.— P. 629.
8. Gluts B. A., Hofherr L. Mutagenesis of strains of Proplonibacterium to produce
cold-sensitive mutants // J. Dairy Sci.— 1983.— 66.— P. 2482.
9. Gluts B. A., Kathleen F. A. Isolation and characterization of mutants of Proploni
bacterium strains // Ib id .—1988.—71.—P. 1769—1776.
10. Glats B. A. Generation, isolation and characterization of auxotrophic mutants of
Propioniba.cterium // Ib id .—1979.—70.—P. 79.
11. ХолиОей Р. Сочетания аминокислот, витаминов, пуринов и пиримидинов, исполь
зуемые для определения потребностей ауксотрофных штаммов в факторах роста/ /
Сб. методик по генетике микроорганизмов.-•- М. : Медицина, 1970.— 239 с.
Вищий in т харчової і смакової промисловості, Иловдів Одержано 21.03.95
KS.S.N 02o3-7of>7. І.ЗПОПОЛІІМІГРЬГ И КЛЕТКА, 1995. Т. П. № 5 5* 8 3
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-156178 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7657 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-12-07T18:39:02Z |
| publishDate | 1995 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Дімітрова, П.Н. 2019-06-18T09:38:43Z 2019-06-18T09:38:43Z 1995 Отримання мутантів Propionibacterium shermanii — продуцентів вітаміну B₁₂ і їх характеристика / П.Н. Дімїтрова // Биополимеры и клетка. — 1995. — Т. 11, № 5. — С. 79-83. — Бібліогр.: 11 назв. — укр. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0003FF https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156178 575.1 Вивчали мутагенну дію супермутагена N-метил-N-нітро-N-нітрозогуанідину на культуру Pr. shermanii 128. Визначено час експозиції з мутагеном – 30 і 60 хв. Отримані мутанти були первинно оцінені за їх здатністю накопичувати вітамін В12. Изольовано штам Pr. shermanii 1818, який синтезує до 45 мг/см³ вітаміну В12. Десять найпродуктивніших з усіх перевірених мутантів по вітаміноутворенню досліджено на ауксотрофність. Наведено їх біохімічну характеристику. Изучали мутагенное действие супермутагена N-MeTWi-N-HHTpo-N- нитрозогуанидина на культуру Pr. shermanii 128. Определено время экспозиции с мутагеном – 30 и 60 мин. Полученные мутанты были первично оценены по их возможности накапливать витамин B₁₂- Изолирован штамм Pr. shermanii 1818, который синтезирует до 45 мг/см³ витамина Bi2. Десять самых продуктивных из всех проверенных мутантов по витаминообразованию исследованы на ауксотрофность. Приведена их биохимическая характеристика. N-inelhyl-N-nitro-N-nitrozoguanin effective on Propionibaclerium shermanii 128. The time define for exposition with mutagenes 30 and 60 min. Propionibacterium shermanii 1818 sinthezies to 45 mg/cm³ vitamin B₁₂. Generation, isolation and characterization of auxotrophic mutants of Propionibacterium. uk Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Отримання мутантів Propionibacterium shermanii — продуцентів вітаміну B₁₂ і їх характеристика Получение мутантов Propionibacterium shermanii – продуцентов витамина B₁₂ и их характеристика Isolation and characterization of mutants of Propionibacterium shermanii of producer of vitamin B₁₂ Article published earlier |
| spellingShingle | Отримання мутантів Propionibacterium shermanii — продуцентів вітаміну B₁₂ і їх характеристика Дімітрова, П.Н. |
| title | Отримання мутантів Propionibacterium shermanii — продуцентів вітаміну B₁₂ і їх характеристика |
| title_alt | Получение мутантов Propionibacterium shermanii – продуцентов витамина B₁₂ и их характеристика Isolation and characterization of mutants of Propionibacterium shermanii of producer of vitamin B₁₂ |
| title_full | Отримання мутантів Propionibacterium shermanii — продуцентів вітаміну B₁₂ і їх характеристика |
| title_fullStr | Отримання мутантів Propionibacterium shermanii — продуцентів вітаміну B₁₂ і їх характеристика |
| title_full_unstemmed | Отримання мутантів Propionibacterium shermanii — продуцентів вітаміну B₁₂ і їх характеристика |
| title_short | Отримання мутантів Propionibacterium shermanii — продуцентів вітаміну B₁₂ і їх характеристика |
| title_sort | отримання мутантів propionibacterium shermanii — продуцентів вітаміну b₁₂ і їх характеристика |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156178 |
| work_keys_str_mv | AT dímítrovapn otrimannâmutantívpropionibacteriumshermaniiproducentívvítamínub12ííhharakteristika AT dímítrovapn polučeniemutantovpropionibacteriumshermaniiproducentovvitaminab12iihharakteristika AT dímítrovapn isolationandcharacterizationofmutantsofpropionibacteriumshermaniiofproducerofvitaminb12 |