Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer
Synthesis of fluorogenic peptide substrate of HIV-I protease Dns-SQNYPIVWL which corresponds to the p17/p24 cleavage site for HIV-l protease have been performed. This fluorogenic substrate was based on the fluorescence resonance energy transfer between donor – Trp residue, and acceptor – dansyl grou...
Gespeichert in:
| Datum: | 1995 |
|---|---|
| Hauptverfasser: | , , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | English |
| Veröffentlicht: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1995
|
| Schriftenreihe: | Биополимеры и клетка |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156188 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer / A.L. Kornelyuk, A.G. Terentiev, S. Fisher, T. Porter // Биополимеры и клетка. — 1995. — Т. 11, № 6. — С. 57-61. — Бібліогр.: 18 назв. — англ. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-156188 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| fulltext |
|
| spelling |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-1561882025-02-09T12:15:10Z Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer Синтез та характеристика флюорогенного пептидного субстрату ВІЛ-1 протеази на основі флюоресцентного резонансного переносу енергії Синтез и характеристика флюорогенного пептидной субстрата ВИЧ-1 протеазы на основе флюоресцентного резонансного переноса энергии Kornelyuk, A.I. Terentiev, A.G. Fisher, S. Porter, T. Synthesis of fluorogenic peptide substrate of HIV-I protease Dns-SQNYPIVWL which corresponds to the p17/p24 cleavage site for HIV-l protease have been performed. This fluorogenic substrate was based on the fluorescence resonance energy transfer between donor – Trp residue, and acceptor – dansyl group in the intact peptide. Hydrolysis of substrate by recombinant HIV-I protease resulted in the time-dependent increase of Trp fluorescence and decrease of dansyl fluorescence measured at 350 and 500 nm, respectively, due to the break of resonance energy transfer between donor and acceptor fluorophors. Hydrolysis of fluorogenic peptide substrate was studied also by reversed phase HPLC and two peptide fragments after cleavage of substrate have been detected. Kinetic constants of hydrolysis for this fluorogenic peptide substrate by HIV-I protease were calculated from Lineweaver – Burk plots: KM - 29mkM, kcat =5.4 s⁻¹ and kcat / KM -180000 M⁻¹s⁻¹. Проведено хімічний синтез флюорогенного пептидного субстрату ВІЛ-1 протеази, що має структуру Dns-SQNYPIVWL і відповідає сайту розщеплення р17/р24 у gag-поліпротеіні вірусу імунодефіциту людини.Принцип використання даного субстрату базується на резонансному переносі енергії збудження між донором – залишком Trp і акцептором – дансильною групою. Встановлено, що гідроліз флюорогенного пептидного субстрату рекомбінантною ВІЛ-1 протеазою призводить до падіння інтенсивності флюоресценції дансильної групи і одночасного зростання триптофанової флюоресценції внаслідок порушення резонансного переносу енергії між донором і акцептором. За допомогою високоефективної рідинної хроматографії в оберненій фазі зафіксовано появу пептидів, які є продуктами гідролізу субстрату. Визначено кінетичні параметри гідролізу флюорогенного пептидного субстрату ВІЛ-1 протеазою: КМ – 29 мкМ, kcat– 5,4 с⁻¹ та kcat/KM – 180 000 M⁻¹c⁻¹. Проведен химический синтез флюорогенного пептидной субстрата ВИЧ -1 протеазы , имеющей структуру Dns – SQNYPIVWL и соответсвует сайтурасщепления р17/р24 в gag – полипротеини вируса иммунодефицита людини. Принцип использования данного субстрата базируется на резонансном переносе энергии возбуждения между донором - остатком Trp и акцептором – дансильною группой. Установлено, что гидролиз флюорогенного пептидной субстрата рекомбинантной ВИЧ -1 протеазой приводит к падению интенсивности флюоресценции дансильнои группы и одновременного роста триптофановой флюоресценции вследствие нарушения резонансного переноса энергии между донором и акцептором. С помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии в обратной фазе зафиксировано появление пептидов, которые являются продуктами гидролиза субстрата. Определены кинетические параметры гидролиза флюорогенного пептидной субстрата ВИЧ -1 протеазой : КМ – 29 мкм , kcat - 5,4 с ⁻¹ и kcat / KM – 180 000 M⁻¹c ⁻¹. 1995 Article Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer / A.L. Kornelyuk, A.G. Terentiev, S. Fisher, T. Porter // Биополимеры и клетка. — 1995. — Т. 11, № 6. — С. 57-61. — Бібліогр.: 18 назв. — англ. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000404 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156188 577.325 en Биополимеры и клетка application/pdf Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
English |
| description |
Synthesis of fluorogenic peptide substrate of HIV-I protease Dns-SQNYPIVWL which corresponds to the p17/p24 cleavage site for HIV-l protease have been performed. This fluorogenic substrate was based on the fluorescence resonance energy transfer between donor – Trp residue, and acceptor – dansyl group in the intact peptide. Hydrolysis of substrate by recombinant HIV-I protease resulted in the time-dependent increase of Trp fluorescence and decrease of dansyl fluorescence measured at 350 and 500 nm, respectively, due to the break of resonance energy transfer between donor and acceptor fluorophors. Hydrolysis of fluorogenic peptide substrate was studied also by reversed phase HPLC and two peptide fragments after cleavage of substrate have been detected. Kinetic constants of hydrolysis for this fluorogenic peptide substrate by HIV-I protease were calculated from Lineweaver – Burk plots: KM - 29mkM, kcat =5.4 s⁻¹ and kcat / KM -180000 M⁻¹s⁻¹. |
| format |
Article |
| author |
Kornelyuk, A.I. Terentiev, A.G. Fisher, S. Porter, T. |
| spellingShingle |
Kornelyuk, A.I. Terentiev, A.G. Fisher, S. Porter, T. Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer Биополимеры и клетка |
| author_facet |
Kornelyuk, A.I. Terentiev, A.G. Fisher, S. Porter, T. |
| author_sort |
Kornelyuk, A.I. |
| title |
Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer |
| title_short |
Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer |
| title_full |
Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer |
| title_fullStr |
Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer |
| title_full_unstemmed |
Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer |
| title_sort |
synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of hiv-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| publishDate |
1995 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156188 |
| citation_txt |
Synthesis and characterization of fluorogenic peptide substrate of HIV-1 protease based on fluorescence resonance energy transfer / A.L. Kornelyuk, A.G. Terentiev, S. Fisher, T. Porter // Биополимеры и клетка. — 1995. — Т. 11, № 6. — С. 57-61. — Бібліогр.: 18 назв. — англ. |
| series |
Биополимеры и клетка |
| work_keys_str_mv |
AT kornelyukai synthesisandcharacterizationoffluorogenicpeptidesubstrateofhiv1proteasebasedonfluorescenceresonanceenergytransfer AT terentievag synthesisandcharacterizationoffluorogenicpeptidesubstrateofhiv1proteasebasedonfluorescenceresonanceenergytransfer AT fishers synthesisandcharacterizationoffluorogenicpeptidesubstrateofhiv1proteasebasedonfluorescenceresonanceenergytransfer AT portert synthesisandcharacterizationoffluorogenicpeptidesubstrateofhiv1proteasebasedonfluorescenceresonanceenergytransfer AT kornelyukai sinteztaharakteristikaflûorogennogopeptidnogosubstratuvíl1proteazinaosnovíflûorescentnogorezonansnogoperenosuenergíí AT terentievag sinteztaharakteristikaflûorogennogopeptidnogosubstratuvíl1proteazinaosnovíflûorescentnogorezonansnogoperenosuenergíí AT fishers sinteztaharakteristikaflûorogennogopeptidnogosubstratuvíl1proteazinaosnovíflûorescentnogorezonansnogoperenosuenergíí AT portert sinteztaharakteristikaflûorogennogopeptidnogosubstratuvíl1proteazinaosnovíflûorescentnogorezonansnogoperenosuenergíí AT kornelyukai sinteziharakteristikaflûorogennogopeptidnojsubstratavič1proteazynaosnoveflûorescentnogorezonansnogoperenosaénergii AT terentievag sinteziharakteristikaflûorogennogopeptidnojsubstratavič1proteazynaosnoveflûorescentnogorezonansnogoperenosaénergii AT fishers sinteziharakteristikaflûorogennogopeptidnojsubstratavič1proteazynaosnoveflûorescentnogorezonansnogoperenosaénergii AT portert sinteziharakteristikaflûorogennogopeptidnojsubstratavič1proteazynaosnoveflûorescentnogorezonansnogoperenosaénergii |
| first_indexed |
2025-11-25T23:08:45Z |
| last_indexed |
2025-11-25T23:08:45Z |
| _version_ |
1849805635669983232 |