Выделение основных тканеспецифических антигенов из миокарда здоровых лиц и больных дилятационной кардиомиопатией

Описаны методы выделения основных ткане специфических антигенов нормального и пораженного дилятационной кардиомиопатией (ДКМП) миокарда (актин, миозин и тропо миозин) и аорты человека, исследованы их физико-химические свойства. Показано существенное снижение содержания данных белков в пораженном ДКМ...

Повний опис

Збережено в:
Бібліографічні деталі
Опубліковано в: :Биополимеры и клетка
Дата:1993
Автори: Бобык, В.И., Веберов, А.В., Рябенко, Д.В., Дубровская, Г.В., Роднин, Н.В., Сидорик, Л.Л.
Формат: Стаття
Мова:Russian
Опубліковано: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 1993
Теми:
Онлайн доступ:https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156286
Теги: Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:Выделение основных тканеспецифических антигенов из миокарда здоровых лиц и больных дилятационной кардиомиопатией / В.И. Бобык, А.В. Веберов, Д.В. Рябенко, Г.В. Дубровская, Н.В. Роднин, Л.Л. Сидорик // Биополимеры и клетка. — 1993. — Т. 9, № 6. — С. 63-66. — Бібліогр.: 11 назв. — рос.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-156286
record_format dspace
spelling Бобык, В.И.
Веберов, А.В.
Рябенко, Д.В.
Дубровская, Г.В.
Роднин, Н.В.
Сидорик, Л.Л.
2019-06-18T10:47:13Z
2019-06-18T10:47:13Z
1993
Выделение основных тканеспецифических антигенов из миокарда здоровых лиц и больных дилятационной кардиомиопатией / В.И. Бобык, А.В. Веберов, Д.В. Рябенко, Г.В. Дубровская, Н.В. Роднин, Л.Л. Сидорик // Биополимеры и клетка. — 1993. — Т. 9, № 6. — С. 63-66. — Бібліогр.: 11 назв. — рос.
0233-7657
DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000383
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156286
577.152
Описаны методы выделения основных ткане специфических антигенов нормального и пораженного дилятационной кардиомиопатией (ДКМП) миокарда (актин, миозин и тропо миозин) и аорты человека, исследованы их физико-химические свойства. Показано существенное снижение содержания данных белков в пораженном ДКМП миокарде по сравнению с нормальным.
Описано методи виділення основних тканиноспецифічних антигенів нормального та ураженого дилятаційною кардіоміопатією (ДКМП) міокарда (актин, міозин, тропоміозин) і аорти людини, досліджено їх фізико-хімічні властивості. Показано суттєве зниження вмісту згаданих білків в ураженому ДКМП міокарді порівняно з нормальним.
The methods for the purification of the main tissue-specific antigens-(actin, myosin and tropomyosin) from the normal and affected by dilatative cardiomyopathia human heart are described. Some their physico-chemical properties were investigated. The dicrease of the contractive proteins content in the DCMP myocard in comparisons with the normal was shown.
ru
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
Биополимеры и клетка
Клеточная биология
Выделение основных тканеспецифических антигенов из миокарда здоровых лиц и больных дилятационной кардиомиопатией
Виділення основних тканоспецифічних антигенів з міокарда здорових осіб і хворих на дилятаціону кардіоміопатію
The purification of the main tissue-specific antigens from the normal and effected by dilatative cardiomyopathia human heart
Article
published earlier
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
title Выделение основных тканеспецифических антигенов из миокарда здоровых лиц и больных дилятационной кардиомиопатией
spellingShingle Выделение основных тканеспецифических антигенов из миокарда здоровых лиц и больных дилятационной кардиомиопатией
Бобык, В.И.
Веберов, А.В.
Рябенко, Д.В.
Дубровская, Г.В.
Роднин, Н.В.
Сидорик, Л.Л.
Клеточная биология
title_short Выделение основных тканеспецифических антигенов из миокарда здоровых лиц и больных дилятационной кардиомиопатией
title_full Выделение основных тканеспецифических антигенов из миокарда здоровых лиц и больных дилятационной кардиомиопатией
title_fullStr Выделение основных тканеспецифических антигенов из миокарда здоровых лиц и больных дилятационной кардиомиопатией
title_full_unstemmed Выделение основных тканеспецифических антигенов из миокарда здоровых лиц и больных дилятационной кардиомиопатией
title_sort выделение основных тканеспецифических антигенов из миокарда здоровых лиц и больных дилятационной кардиомиопатией
author Бобык, В.И.
Веберов, А.В.
Рябенко, Д.В.
Дубровская, Г.В.
Роднин, Н.В.
Сидорик, Л.Л.
author_facet Бобык, В.И.
Веберов, А.В.
Рябенко, Д.В.
Дубровская, Г.В.
Роднин, Н.В.
Сидорик, Л.Л.
topic Клеточная биология
topic_facet Клеточная биология
publishDate 1993
language Russian
container_title Биополимеры и клетка
publisher Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
format Article
title_alt Виділення основних тканоспецифічних антигенів з міокарда здорових осіб і хворих на дилятаціону кардіоміопатію
The purification of the main tissue-specific antigens from the normal and effected by dilatative cardiomyopathia human heart
description Описаны методы выделения основных ткане специфических антигенов нормального и пораженного дилятационной кардиомиопатией (ДКМП) миокарда (актин, миозин и тропо миозин) и аорты человека, исследованы их физико-химические свойства. Показано существенное снижение содержания данных белков в пораженном ДКМП миокарде по сравнению с нормальным. Описано методи виділення основних тканиноспецифічних антигенів нормального та ураженого дилятаційною кардіоміопатією (ДКМП) міокарда (актин, міозин, тропоміозин) і аорти людини, досліджено їх фізико-хімічні властивості. Показано суттєве зниження вмісту згаданих білків в ураженому ДКМП міокарді порівняно з нормальним. The methods for the purification of the main tissue-specific antigens-(actin, myosin and tropomyosin) from the normal and affected by dilatative cardiomyopathia human heart are described. Some their physico-chemical properties were investigated. The dicrease of the contractive proteins content in the DCMP myocard in comparisons with the normal was shown.
issn 0233-7657
url https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156286
citation_txt Выделение основных тканеспецифических антигенов из миокарда здоровых лиц и больных дилятационной кардиомиопатией / В.И. Бобык, А.В. Веберов, Д.В. Рябенко, Г.В. Дубровская, Н.В. Роднин, Л.Л. Сидорик // Биополимеры и клетка. — 1993. — Т. 9, № 6. — С. 63-66. — Бібліогр.: 11 назв. — рос.
work_keys_str_mv AT bobykvi vydelenieosnovnyhtkanespecifičeskihantigenovizmiokardazdorovyhlicibolʹnyhdilâtacionnoikardiomiopatiei
AT veberovav vydelenieosnovnyhtkanespecifičeskihantigenovizmiokardazdorovyhlicibolʹnyhdilâtacionnoikardiomiopatiei
AT râbenkodv vydelenieosnovnyhtkanespecifičeskihantigenovizmiokardazdorovyhlicibolʹnyhdilâtacionnoikardiomiopatiei
AT dubrovskaâgv vydelenieosnovnyhtkanespecifičeskihantigenovizmiokardazdorovyhlicibolʹnyhdilâtacionnoikardiomiopatiei
AT rodninnv vydelenieosnovnyhtkanespecifičeskihantigenovizmiokardazdorovyhlicibolʹnyhdilâtacionnoikardiomiopatiei
AT sidorikll vydelenieosnovnyhtkanespecifičeskihantigenovizmiokardazdorovyhlicibolʹnyhdilâtacionnoikardiomiopatiei
AT bobykvi vidílennâosnovnihtkanospecifíčnihantigenívzmíokardazdorovihosíbíhvorihnadilâtacíonukardíomíopatíû
AT veberovav vidílennâosnovnihtkanospecifíčnihantigenívzmíokardazdorovihosíbíhvorihnadilâtacíonukardíomíopatíû
AT râbenkodv vidílennâosnovnihtkanospecifíčnihantigenívzmíokardazdorovihosíbíhvorihnadilâtacíonukardíomíopatíû
AT dubrovskaâgv vidílennâosnovnihtkanospecifíčnihantigenívzmíokardazdorovihosíbíhvorihnadilâtacíonukardíomíopatíû
AT rodninnv vidílennâosnovnihtkanospecifíčnihantigenívzmíokardazdorovihosíbíhvorihnadilâtacíonukardíomíopatíû
AT sidorikll vidílennâosnovnihtkanospecifíčnihantigenívzmíokardazdorovihosíbíhvorihnadilâtacíonukardíomíopatíû
AT bobykvi thepurificationofthemaintissuespecificantigensfromthenormalandeffectedbydilatativecardiomyopathiahumanheart
AT veberovav thepurificationofthemaintissuespecificantigensfromthenormalandeffectedbydilatativecardiomyopathiahumanheart
AT râbenkodv thepurificationofthemaintissuespecificantigensfromthenormalandeffectedbydilatativecardiomyopathiahumanheart
AT dubrovskaâgv thepurificationofthemaintissuespecificantigensfromthenormalandeffectedbydilatativecardiomyopathiahumanheart
AT rodninnv thepurificationofthemaintissuespecificantigensfromthenormalandeffectedbydilatativecardiomyopathiahumanheart
AT sidorikll thepurificationofthemaintissuespecificantigensfromthenormalandeffectedbydilatativecardiomyopathiahumanheart
first_indexed 2025-11-24T16:09:58Z
last_indexed 2025-11-24T16:09:58Z
_version_ 1850850919669825536
fulltext Клеточная биология УДК 577.152 В. И. Бобык, А. В. Веберов, Д. В. Рябенко, Г. В. Дубровская, Н. В. Роднин, Л. Л. Сидорик ВЫДЕЛЕНИЕ ОСНОВНЫХ ТКАНЕСПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИГЕНОВ ИЗ МИОКАРДА ЗДОРОВЫХ ЛИЦ И БОЛЬНЫХ ДИЛЯТАЦИОННОЙ КАРДИОМИОПАТИЕЙ Описаны методы выделения основных ткане специфических антигенов нормального и по- раженного дилятационной кардиомиопатией (ДКМП) миокарда (актин, миозин и тро- по миозин) и аорты человека, исследованы их физико-химические свойства. Показано существенное снижение содержания данных белков в пораженном ДКМП миокарде по сравнению с нормальным. Введение. При ряде патологий сердечно-сосудистой системы челове- ка обнаружены аутоантитела к различным белкам, а также надмоле- кулярным структурам миокарда [1]. Одним из заболеваний, при ко- торых существенный вклад в развитие патологических процессов вносят аутоиммунные реакции, является дилятационная кардиомиопа- тия (ДКМП). Сократительный аппарат мышечных волокон представляет собой многокомпонентную белковую систему, в состав которой входят около 20 различных протеинов. Среди них миозин, актин, тропомиозин, α-, β-, γ-актинины и др. белки, выделению и изучению которых посвящен ряд исследований [2—5]. В наибольших количествах представлены три первых белка, содержание которых составляет 55, 15 и 3 % соответст- венно. Кроме того, данные белки играют наиболее существенную роль в процессах сокращения миокарда, в связи с чем нарушения в их функ- ционировании могут обусловливать несостоятельность сердечной мыш- цы при ДКМП, приводящей к развитию сердечной недостаточности. С нашей точки зрения, исследование аутоантителогенеза против актина, миозина, тропомиозина миокарда, а также белков аорты (кол- лагены, структурные D-гликопротеиды, эластин) позволит изучить про- цессы возникновения и развития указанного заболевания. Данная работа посвящена выделению и очистке препаратов ткапе- специфических антигенов из миокарда и аорты человека для дальней- ших иммунохимических исследований. Материалы и методы. Ткани нормального миокарда и миокарда больных ДКМП любезно предоставлены сотрудниками УкрНИИ кар- диологии им. акад. Н. Д. Стражеско. До выделения. антигенов ткань освобождали от жира и тщательно отмывали от остатков крови холод- ной дистиллированной водой. Гомогенат ткани миокарда экстрагировали раствором Бейли (0,5 M KCl, 0,03 M NaHCO3), после чего разводили в 20 раз холодной би- дистиллированной водой. В результате актомиозиновый комплекс вы- падал в осадок. Осадок собирали центрифугированием и использовали для выделения актина и миозина. <ё) В. И. Бобык, А. В. Веберов, Д. В. Рябенко, Г. В. Дубровская, Н. В. Роднин, Л. Л. Сидорик, 1993 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1993. Т. 9. № 6 5-3-757 6 3 Полученный актомиозиновый комплекс растворяли в 0,5 M KCl, после чего добавляли 1,5 объема воды и оставляли до выпадения осадка. Для оценки нативности выделенного препарата миозина опре- деляли его АТФазную активность [6]. А б о н и р о в а н н ы й осадок актомиозинового комплекса после удале- ния ацетона растворяли в воде. Далее высаливали при 25 % насыще- ния сульфата аммония. После диализа препарат актина растворяли в буфере, содержащем АТФ и ионы Ca2+, а затем доочищали на колонке DEAE-Toyopearl 650М (рис. 1) [7]. Гомогенат ткани миокарда экстрагировали водой, затем центри- фугировали и удаляли примеси липидов обработкой этанолом и эфи- Рис. 1. Хроматография препарата актина на DEAE-Toyopear l 650М. Колонка 1 , 5 Х X 20 см. Элюция линейным градиентом 0—1 M NaCl в буфере: 5 0 мМ трис-HCI, р Н 8 , 0 , 0,5 мМ АТФ, 0,2 мМ CaCl 2 Рис. 2. Хроматография препарата тропомиозина на DEAE-Toyopear l 650М. Колонка 1 , 5 X 2 0 см. Элюция линейным градиентом 0—1 M NaCl в 50 мМ Na-фосфатном буфере, рН 8,0 ром. Осадок экстрагировали 1 M KCl, после чего рН раствора дово- дили соляной кислотой до 4,3. Полученный осадок собирали центрифу- гированием, разводили водой в 5 раз и доводили рН раствора до 7,0 с помощью ЫаНСОз. Из полученного раствора тропомиозин высаливали при насыщении сульфата аммония 41—70%. После диализа препарат тропомиозина дополнительно очищали на колонке с DEAE-Toyopearl 650М (рис. 2). Для выделения антигенов из аорты человека использовали после- довательную экстракцию гомогената ткани 1 M CaCl2 (коллаген I); 2,5 %-м NaCl (коллаген II) , 2 % - й трихлоруксусной кислотой (колла- ген III), 5 %-й ТХУ при 40 °С (структурные D-гликопротеиды) и 0,5 M KOH (эластин). Полученные препараты белков концентрировали диа- лизом против воды, в результате чего структурные белки аорты выпа- дали в осадок [8]. Чистоту препаратов антигенов контролировали с помощью элект- рофореза в полиакриламидном геле (ПААГ) с DS-Na по методу Лэммли [9] в градиенте концентрации акриламида 7—22%. Молеку- лярную массу полученных антигенов определяли с помощью калибро- вочной кривой для смеси стандартных белков. Концентрацию белка находили по методу Брэдфорда [10], а так- же спектрофотометрически, используя определенные нами коэффициен- ты молярной экстинкции Л 2 8 0 1 с м 1,2; 1,24; 1,4 для миозина, актина и тропомиозина соответственно. Результаты и обсуждение. В таблице приведены сравнительные выходы основных белков из нормального и пораженного ДКМП мио- карда человека. Видно, что выход белков из нормального миокарда существенно выше. Очевидно, это объясняется разрушением части кар- диомиоцитов при ДКМП и заменой соединительнотканными компонен- тами значительной части мышечной ткани. 64 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1993. Т. 9. № 6 5-3-757 64 По данным электрофореза в ПААГ, миозин из сердца человека представлен двумя субъединицами (рис. 3), которые соответствуют лег- кой (около 30 000) и тяжелой (около 200 000) цепям миозина. В от- личие от миозина из сердечной мышцы быка, в котором легкая цепь представлена двумя молекулярными формами с M r 27 000 и 19 000, в миокарде человека легкая цепь либо не образует двух молекулярных форм, либо они имеют одинаковую молекулярную массу. Полученный нами препарат актина представлял собой при элект- рофорезе в ПААГ одну полосу с M r около 40000, что соответствует литературным данным о молекуляр- ной массе актинов из других источни- / 2 S M : ков. Определенная нами изоэлектриче- *** екая точка для данного белка (около 5,5) дает возможность отнести его к α-форме актина. Следует отметить, ^ * — что изоэлектрические точки не отли- чались для актина из нормального и пораженного ДКМП миокарда. Из литературных данных [7] из- вестно, что молекула тропомиозина т представляет собой димер, состоящий из двух субъединиц с M r около 33 000, при этом каждая из них содержит по Сравнительное содержание основных сократительных белков миокарда здоровых лиц и пораокенного ДКМП Белок Нормальный миокард, % Пораженный ДКМП миокард, % Актин IOO 50 Мио.-іип 100 54 Т р о п о м п о ш н 100 61 Рис. 3. Электрофорез в денатурирую- щих условиях тканеспецифических антигенов из миокарда человека: 1— миозин, 2 — тропомиозин, 3 — актин, M — смесь стандартных белков (тяже- лая цепь миозина, 200 000; фосфори- лаза В-97,4000; бычий сывороточный альбумин, 68 000; овальбумип 43 000; карбоангидраза, 29 000; β-лактогло- булин, 18 000; лизоцим, 14 300) 284 остатка аминокислот. При исследовании полученного нами препара- та обнаружена одна основная полоса с M r около 32 000. Во всех пре- паратах присутствовала также минорная полоса с Mr около 30 000. Ве- роятно, она представляет собой примесь тропонина, который весьма прочно ассоциирован с тропомиозином, и разделение их без существен- ной денатурации препарата белка затруднительно. В работе [11] пока- зано, что субъединицы тропомиозина из скелетных мышц кур идентичны по молекулярной массе, но различаются по изоэлектрическоп точке. В то же время нами при изоэлектрофокусировании обнаружена лишь одна полоса с изоэлектрической точкой около 5,8. Различия в изоэлект- рических точках субъединиц тропомиозина связывают с их различным фосфорилированием. Очевидно, в случае тропомиозина, полученного из миокарда человека, субъединицы данного белка фосфорилированы одинаково. Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о том, что препараты тканеспецифических белков из миокарда человека до- статочно гомогенны, по своим физико-химическим свойствам схожи с аналогичными белками из других источников и могут быть использо- ваны в качестве аутоантигенов для дальнейших иммунохимических исследований. Р е з ю м е . Описано методи виділення основних тканиноспецифічних антигенів нормального та ураженого дилятаційною кардіоміопатією (ДКМП) міокарда (актин, міозин, тропоміозин) і аорти людини, досліджено їх фізико-хімічні властивості. Показа- но суттєве зниження вмісту згаданих білків в ураженому Д К М П міокарді порівняно з нормальним. ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1993. Т. 9. № 6 5 - 3 - 7 5 7 65 S u m m a r y . The methods for the purification of the main t issue-specif ic ant igens (actin, myos in and tropomyos in) from the normal and affected by di latative cardiomyo- pathia human heart are described. S o m e their physico-chemical properties were inves t iga - ted. The dicrease of the contractive proteins content in the DCMP myocard in compar i son with the normal w a s shown. С П И С О К Л И Т Е Р А Т У Р Ы 1. Клиническая иммунология и аллергология / П о д ред. JI. Иегера.— М. : Медицина,. 1990.—Т. 3 .—527 с. 2. Rose N. R., Neumann D. Α., Herskowitz A. Auto immune myocardit is: concepts and quest ions / / Immunol . Today.—1991.—12, N 8.— P. 253—255. 3. Coderholm B., Wieslander J., Bygren P., Neinegard D. Pat ients with IgA nephropathy have circulat ing ant i -basement membrane antibodies react ing with structures common co l lagen I, II and I V / / P r o c . Nat. Acad. Sci. U S A . — 1 9 8 6 . — 8 3 — P. 6151—6155. 4. Michael D., Michael S., Tsoukas W. C., Hoffmann G. W. Distribution of ant ibodies aga ins t co l l agen in A I D S risk groups and homosexual A I D S patients s u g g e s t s a link between autoimmunity and the immunopathogenes i s of A I D S / / J . Immunol .—1990 .— 144, N 4 . — P . 1241 — 1250. 5. Dan-Goor M., Muhland A. Ant ibody directed aga ins t 142-148 sequence of the myosin, heavy chain interferes with myosin-act in interaction / / Biochemistry .—1991.—30, N 2.— P. 400—405. 6. Spudich J. A., Walt S. The regulat ion of rabbit skeletal musc le c o n t r a c t i o n / / J . Biol . C h e m . - 1 9 7 1 . — 2 4 6 , N 1 5 . — P . 4866—4871. 7. Epstein H. FFischman D. A. Molecular analys i s of protein assembly in musc le de- v e l o p m e n t / / Sc ience .—1991.—251.— P. 1039—1044. 8. Ивановский Ю. В., Нагорнев Β. Α., Зубжицкий Ю. Η. Получение иммунных сыворо- ток против антигенов аорты для иммуноморфологического изучения эксперимен- тального а т е р о с к л е р о з а / / Б ю л . эксперим. биологии и медицины.—1975.— № 3,— С. 72—77. 9. Laemmli U. К. C l e a v a g e of structural proteins during the assembly of the bacterio- phage T 4 / / N a t u r e . — 1 9 7 0 . — 2 2 7 , N 5 2 . — P . 680—685. 10. Bradford M. M. A rapid and sensi t ive method for the quantitation of microgram quantit ies of protein ut i l i z ing the principle of protein-dye b i n d i n g / / A n a l . Biochem.— 1976 .—72 .—P. 248—254. 11. Moore L. A., Arrizubieta M. J., Tidyman W. E. et al. Ana lys i s of the chicken fast myo- sin heavy chain f a m i l y / / J . Мої. B i o l . — 1 9 9 2 . — 2 2 5 . — P . 1143—1151. Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН Украины, Киев Получено 28.06.93 УкрНИИ кардиологии им. акад. А. Д . Стражеско М З Украины, Киев УДК 58.04:581.162.41:635.64 Ю. В. Чесноков, О. Б. Шевкун, А. А. Глушакова УСТОЙЧИВОСТЬ К КАНАМИЦИНУ ПРОРАСТАЮЩЕЙ IN VITRO ПЫЛЬЦЫ ТОМАТА В работе исследовано влияние различных концентраций канамицина на общий процент прорастания пыльцевых зерен и длину пыльцевых трубок у пыльцы томата. Установле- на корреляция между спорофитом и гаметофитом растений томата по признаку -ус- тойчивость к канамицину», в том числе выявлены различия между гомо- и гетерози- готным состояниями у устойчивых к канамицину растений с помощью селекции на уров- не гаметофита на стадии зрелой пыльцы. Обсуждаются возможные эффекты воздей- ствия канамицина на физиологическую и генетическую Активность прорастающей пыль- цы различных (устойчивый и неустойчивый к канамицину) генотипов томата. Введение. Мужской гаметофит, обладая сравнительно простой морфо- логией, тем не менее, в процессе своего развития и функционирования проявляет значительную физиологическую и биохимическую активность, транскрибируя и транслируя большое число генов своего гаплоидного генома [1—4]. © Ю. В. Чесноков, О. Б. Шевкун, А. А. Глушакова, 1993 66 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1993. Т. 9. № 6 5-3-757 66