Влияние состава питательной среды на лизис и внеклеточную локализацию альфа-интерферона человека в системе суперсинтеза рекомбинантных белков с использованием бактериофага лямбда

Исследовано влияние различных источников углерода на выход внеклеточного интерферона в системе биосинтеза рекомбинантных белков с использованием бактериофага лямбда Установлено, что при содержании в культуральной среде определенных источников углерода увеличивается как уровень синтеза целевого прод...

Full description

Saved in:

Bibliographic Details
Published in:	Біополімери і клітина
Date:	2002
Main Author:	Славченко, И.Ю.
Format:	Article
Language:	Russian
Published:	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 2002
Subjects:	Молекулярна та клітинна біотехнології
Online Access:	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156313
Tags:	Add Tag No Tags, Be the first to tag this record!
Journal Title:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Cite this:	Влияние состава питательной среды на лизис и внеклеточную локализацию альфа-интерферона человека в системе суперсинтеза рекомбинантных белков с использованием бактериофага лямбда / И.Ю. Славченко // Вiopolymers and Cell. — 2002. — Т. 18, № 6. — С. 529-533. — Бібліогр.: 18 назв. — рос.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

_version_	1859604911046524928
author	Славченко, И.Ю.
author_facet	Славченко, И.Ю.
citation_txt	Влияние состава питательной среды на лизис и внеклеточную локализацию альфа-интерферона человека в системе суперсинтеза рекомбинантных белков с использованием бактериофага лямбда / И.Ю. Славченко // Вiopolymers and Cell. — 2002. — Т. 18, № 6. — С. 529-533. — Бібліогр.: 18 назв. — рос.
collection	DSpace DC
container_title	Біополімери і клітина
description	Исследовано влияние различных источников углерода на выход внеклеточного интерферона в системе биосинтеза рекомбинантных белков с использованием бактериофага лямбда Установлено, что при содержании в культуральной среде определенных источников углерода увеличивается как уровень синтеза целевого продукта, так и эффективность лизиса инфицированных фагом клеток штамма-продуцента и, следовательно, конечная концентрация рекомбинантного белка в культуральной среде. Досліджено вплив різних джерел вуглецю на вихід позаклітин ного интерферону в системі біосинтезу рекомбінантних білків з використанням бактеріофага лямбда. За присутності в культуральному середовищі певних джерел вуглецю збільшується як рівень синтезу цільового продукту, так і ефективність лізису інфікованих фагом клітин иітама-продуценту і, як наслідок, кінцева концентрація рекомбінантного білка в культуральному середовищі. The influence of different carbon sources on the yield of extracellular human alpha interferon in the system of recombinant proteins biosynthesis using bacteriophage lambda was investigated. Both the level of target protein synthesis and productivity of infected cells lysis are shown to increase in the presence of certain carbon sources in the growth media. This results in rising the extracellular concentration of recombinant protein.
first_indexed	2025-11-28T02:28:18Z
format	Article
fulltext	ISSN 0233-7657. Біополімери і клітина. 2002. Т. 18. № 6 МОЛЕКУЛЯРНА І КЛІТИННА БІОТЕХНОЛОГІЇ Влияние состава питательной среды на лизис и внеклеточную локализацию альфа-интерферона человека в системе суперсинтеза рекомбинантных белков с использованием бактериофага лямбда И. Ю. Славченко ПНИК «Биотехнолог» Ул. Академика Заболотного, 150, Киев, 03143, Украина Исследовано влияние различных источников углерода на выход внеклеточного интерферона в системе биосинтеза рекомбинантных белков с использованием бактериофага лямбда Установле но, что при содержании в культуральной среде определенных источников углерода увеличивается как уровень синтеза целевого продукта, так и эффективность лизиса инфицированных фагом клеток штамма-продуцента и, следовательно, конечная концентрация рекомбинантного белка в культуральной среде. Введение. Бактериофаг лямбда является умерен ным фагом и при инфицировании бактериальной клетки может развиваться по одному из двух альтернативных путей — лизогенному или литиче- скому (см., например, обзор [1]). При лизогенном пути развития фаговая ДНК интегрирует в бакте риальную хромосому, в ее составе реплицируется и передается дочерним клеткам как часть родитель ского генома. В случае литического развития фага синтезируются фаговые белки, обеспечивающие ав тономную репликацию фаговой ДНК, ее упаковку в фаговые частицы и последующий лизис клетки. Поэтому при разработке систем суперсинтеза ре комбинантных белков клетками Escherichia coli с использованием бактериофага лямбда можно до биться внеклеточной локализации целевого про дукта, т. е. непосредственно в культуральной сре де, куда он попадает в результате лизиса инфици рованных клеток штамма-продуцента. Это позво ляет избежать рада технологических сложностей, связанных с извлечением рекомбинантного белка из бактериальных клеток. В таких системах био синтеза ген, кодирующий целевой продукт, может быть локализован в составе плазмиды, содержа щейся в клетках штамма-продуцента [2 ], в составе фаговой ДНК [3—5 ] либо и в составе плазмиды, и © И. Ю. СЛАВЧЕНКО, 2002 в составе фага [6, 7 ]. Сложность разработки техно логий с использованием бактериофага Я, прежде всего, связана с тем, что высокая концентрация целевого продукта в культуральной среде зависит как от эффективности синтеза целевого белка, так и от продуктивности литического развития фага. Однако рекомбинантный продукт, как правило, оказывает токсическое воздействие не только на рост клеток штамма-продуцента, но и на развитие фага [6]. И если в первом случае решить эту проблему можно за счет использования регулируе мых промоторов для транскрипции целевого гена, то разделить во времени литическое развитие фага и процесс синтеза целевого продукта пока не пред ставляется возможным. Поэтому эффективность систем биосинтеза рекомбинантных белков с ис пользованием бактериофага лямбда определяется тем, насколько удачно будут найдены оптимальные условия ведения процесса биосинтеза. Несмотря на то, что бактериофаг Я является хорошо изученным объектом молекулярной биоло гии и генетики, не так много известно о влиянии на развитие фага условий выращивания клеток хозяина, в частности, состава питательной среды. В литературе имеются данные, демонстрирующие, что концентрация молекул рецептора фага Я (про дукт гена ІатВ) на поверхности бактериальной 529 ВЛИЯНИЕ СОСТАВА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ НА ЛИЗИС ИНТЕРФЕРОНА клетки может определяться используемым ИСТОЧ НИКОМ углерода в составе питательной среды. Так же показано влияние концентрации катионов Mg 2 + в питательной среде на эффективность процесса адсорбции фага [8]. Кроме того, присутствие в определенных концентрациях данных катионов по зволяет сохранить фагу Я, несущему мутацию в одном из генов, ответственных за лизис, — Rzy способность лизировать клетку [9 ]. Установлено, что концентрация NaCl в среде играет важную роль в формировании открытого комплекса между РНК-полимеразой и pR промото ром фага Я [10] и тем самым оказывает влияние на инициацию транскрипции правого оперона фага, в котором находятся гены, кодирующие существен ные для литического развития фага Я белки [1 ]. Обнаружено ингибирование различными вещества ми формирования бляшек бактериофагом Я на га зоне Е. coli, выращенной в присутствии или в отсутствие лактозы [11 ]. Состав питательной среды также может влиять на выбор пути развития фага в инфицированной клетке [12, 13]. Например, показано, что замена глюкозы на глицерин в бед ной питательной среде стимулирует лизогенное развитие фага [13]. Целью данной работы было исследование вли яния различных дополнительных источников угле рода в составе богатой питательной среды для культивирования инфицированных фагом лямбда клеток штамма-продуцента Е. coli на литическое развитие фага и выход растворимого альфа-2Ь интерферона человека (ИФН). Материалы и методы. В работе использовали ранее полученный нами чувствительный к фагу лямбда продуцент ИФН — SG30 (pIF-Іб) гесЛ (F, araDJ39y MargF-lac)U169, flbB5301, deoCl, rpsLlSO, relAl, Ыоп-100, cps-50::MudJ) [14, 15]. Рекомбинантная плазмида pIF-16 несет тандем ис кусственных генов ИНФ под контролем тандема триптофановых промоторов. В качестве генетиче ского маркера она содержит ген Ыа </?-лактамазы), обеспечивающий устойчивость несущих ее клеток к ампициллину. Для инфицирования продуцента ис пользовали фаг Яс1857(?ТГ, источником которого служил лизогенный штамм Е. coli К802 (hsdFt> hsdht, goC, met, SupE) (Я cI857Qamll7Ram54). В качестве индикаторной культуры при титровании фага использовали штамм Е. coli RLM1 (thf> leti> lac, tonA, SupE). Среды. Продуцент культивировали в питатель ной среде следующего состава: вода — 1 л, NaCl — 10 г, дрожжевой экстракт (USB) — 5 г, пептон (Винницкий мясокомбинат) — 10 г. В среду добав ляли ампициллин до конечной концентрации 20 мкг/мл и MgS0 4-7 Н 2 0 из расчета 1 мл 1 М раствора на 1 литр среды. В зависимости от усло вий эксперимента в нее также вносили 10 %-й раствор одного из следующих веществ — глюкозы, ксилозы, рамнозы, мальтозы, фруктозы, глицери на, маннита, сорбита до конечной концентрации 0,5 г/л. Для получения фаголизата Яс1857(2~йГ исполь зовали аналогичную среду, но содержащую 40 г/л пептона без каких-либо добавок. Получение фаголизата. Фаголизат Яс1857(2~К~ получали термоиндукцией лизогенной культуры К802 acI857QTT) по [14]. Титр определяли обще принятым двухслойным методом и, как правило, он составлял (1,5—3,0)-Ю 1 0 БОЕ/мл лизата. Культивирование продуцента. Питательную среду засевали инокулятом Е. coli SG30 (pIF-W, предварительно выращенным в термостате при температуре 37 °С в течение ночи. Соотношение объема инокулята к объему среды составляло 1:10. Культуру выращивали на качалке в условиях ин тенсивной (160 об/мин) аэрации при температуре 37 °С до оптической плотности 3,0. После этого инфицировали фагом Яс1857<2~1Г, добавляя заранее полученный фаголизат в количестве 1/5 объема культуральной среды, и продолжали культивирова ние в течение 18 ч при температуре 21 °С Оптическую плотность (ОП) измеряли на фо токолориметре КФК-3 (Россия) при Я - 5 4 0 нм в кювете с длиной оптического пути 1 см. Электрофоретическому анализу подвергали су- пернатант лизата, полученный центрифугировани ем при 14000 об/мин в течение 5 мин. Для этого к 40 мкл супернатанта добавляли 15 мкл буфера для нанесения (5 %-й глицерин, 3 %-й SDS, 2 %-й /3-меркаптоэтанол, 0,02 %-й бромфеноловый си ний) и перемешивали. Пробы выдерживали 5 мин при 100 °С и весь образец наносили на полиакри- ламидном геле (ПААГ). Электрофорез белков осуществляли по методу Лэммли [16] в 12,5 %-м ПААГ в присутствии 1 %-го SDS с последующим прокрашиванием в растворе кумасси R-250. Процентное содержание ИФН в образцах опре деляли денситометрированием соответствующих дорожек геля с помощью прибора Image Master (^Pharmacia Biotech*, Швеция). Результаты и обсуждение. Ранее нами показа но, что экспрессия генов альфа-2 ИФН человека в составе плазмиды pIF-16 обеспечивает накопление целевого продукта внутри клетки-продуцента в нерастворимом виде [15]. Установлено, что содер жание в культуральной среде того или иного источ ника углерода может приводить как к увеличению, 530 В Л И Я Н И Е СОСТАВА П И Т А Т Е Л Ь Н О Й С Р Е Д Ы НА Л И З И С И Н Т Е Р Ф Е Р О Н А так и уменьшению выхода рекомбинантного белка. Например, при культивировании клеток Е. coli SG30 (pIF-16) при температуре 37 °С в среде, содержащей глюкозу, ксилозу, мальтозу или ман- нит, выход целевого продукта значительно ниже по сравнению с контролем (среда без внесения допол нительного источника углерода) [17]. Нами также показано, что использование в биотехнологическом процессе бактериофага лямбда позволяет получать альфа-2Ь ИФН в высокой концентрации непосред ственно в культуральной среде, куда он попадает в результате лизиса инфицированных фагом А кле ток Е. coli SG30 (pIF-16). При этом эффективность данного процесса существенно зависит от темпера турного режима культивирования продуцента [2 ]. Поскольку состав питательной среды может влиять не только на уровень синтеза целевого продукта, но и на эффективность лизиса инфици рованных фагом клеток штамма-продуцента и, сле довательно, на конечную концентрацию рекомби нантного белка в культуральной среде, исследова ние действия на этот процесс источника углерода является одним из важных элементов оптимизации биотехнологического процесса. Первым этапом инфекционного процесса явля ется адсорбция фага на бактериальной клетке. Рецептор фага лямбда кодируется геном ІатВ, входящим в состав мальтозного оперона. Добавле ние мальтозы в питательную среду индуцирует мальтозный оперон и на поверхности клетки резко возрастает количество рецепторов фага А [8 ]. При использовании фага для получения рекомбинант- ных белков с внеклеточной локализацией очень важно, чтобы как можно большая часть клеток штамма-продуцента была заражена фагом. Обще принято считать, что этому способствует индукция синтеза молекул рецептора фага А. Поэтому во многих руководствах рекомендуют для этих целей использовать среды, содержащие мальтозу (напри мер, [18]). Однако мальтоза оказалась в числе четырех углеводов, добавление которых в пита тельную среду приводило к угнетению синтеза рекомбинантного интерферона в клетках Е. coli SG30 (pIF-16) [17]. Но в этой же работе нами установлено, что негативное влияние мальтозы, глюкозы, ксилозы или маннита на синтез ИФН носит температурозависимый характер, и имеет место при 37 °С А поскольку при использовании фага в процессе биосинтеза ИФН, как показано нами ранее [2 ], предпочтительна пониженная тем пература для культивирования инфицированных клеток штамма-продуцента, то целесообразно ис следовать влияние и этих углеводов на эффектив ность процесса получения целевого продукта в 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Рис 1. Электрофореграмма супернатантов фаголизатов клеток Е. coli SG30 (piF-16), полученных при культивировании на среде с: 2 — глюкозой; 3 — ксилозой; 4 — рамнозой; 5 — маль тозой; 6 — фруктозой; 7 — глицерином; 8 — маннитом; 9 — сорбитом; 10 — контроль; / — маркер ИФН разрабатываемой системе биосинтеза с использова нием бактериофага лямбда. В представленной работе изучали влияние на литическое развитие фага и выход растворимого альфа-2Ь интерферона человека наличия в составе богатой питательной среды для культивирования инфицированных фагом лямбда клеток штамма- продуцента Е. coli одного из следующих источни ков углерода — глюкозы, ксилозы, рамнозы, маль тозы, фруктозы, глицерина, маннита, сорбита. Для этого культуру Е. coli SG30 (pIF-16) выращивали при 37 °С до оптической плотности 3,0 на среде, содержащей тот или иной источник угле рода. В контрольный вариант дополнительного ис точника углерода не вносили. Затем культуру ин фицировали фагом AcI857Q~R~, как описано в раз деле «Материалы и методы», и дальнейшее культивирование продолжали при температуре 21 °С Через 18 ч фаголизаты центрифугировали и супернатант анализировали электрофоретически. Анализ полученных данных показал (рис. 1), что наиболее высокое внеклеточное содержание ИФН наблюдается на среде с мальтозой (дорожка 5), глицерином (дорожка 7) и глюкозой (дорожка 2). Интересным является то, что аналогичная зави симость установлена для обоих исследуемых в ра боте [8] штаммов Е. coli Hfr G6 и 3000 при определении количества рецепторов на поверхно сти клеток, выращенных на среде М63 с мальтозой, глицерином и глюкозой. Так, для штамма Е. coli Hfr G6 этот показатель на среде с мальтозой 531 СЛАВЧЕНКО И. Ю. Рис 2. Влияние различиях источников углерода в составе питательной среды на выход ИФН в плазмидосодержащих клетках (У) и при его получении в системе биосинтеза с использованием фага Я (2). Выход, имеющий место в контроле, (без добавления углевода), принят за і. В первом случае ИФН имеет внутриклеточную локализацию и выход определяли как процент от суммарных белков клетки, температура культивиро вания продуцента 28 °С, данные взяты из работы [16]. Во втором случае ИФН имеет внеклеточную локализацию и выход определяли как процент от растворимых белков клетки составил 6300, глицерином — 2700, глюкозой — 35. Для штамма Е. coli 3000 — соответственно 9500, 360 и 30. Тем не менее, несмотря на то, что при биосинтезе ИФН в системе с использованием фага А уровень выхода целевого белка с внеклеточ ной локализацией носит подобную зависимость, нет весомых оснований считать, что это связано с количеством молекул рецептора бактериофага А на поверхности клетки. В данном исследовании клетки штамма-проду цента, выращенные на среде с добавлением различ ных источников углерода, инфицировали с одина ковой множественностью, которая в несколько раз меньше, чем количество образующихся рецепторов в условиях катаболитной репрессии их синтеза (как известно, мальтозный оперон, содержащий кодирующий рецептор фага лямбда ген ІатВ, чув ствителен к катаболитной репрессии). Кроме того, выход ИФН на среде с глюкозой, репрессирующей синтез рецептора, выше, чем в ее отсутствие (конт роль). Это свидетельствует о том, что при данных условиях ведения процесса тот или иной дополни тельный источник углерода, прежде всего, влияет на уровень синтеза целевого продукта и эффектив ность лизиса клеток бактериофагом. Полученные результаты являются также инте ресными с точки зрения анализа положительного влияния на эффективность процесса используемых углеводов по их принадлежности к одной из двух групп, сформированных в работе [17]. Первую группу составляют углеводы, добавление которых в среду для культивирования продуцента ИФН SG30 (pIF-J6) при температуре 37 °С приводит к увели чению выхода целевого продукта (глицерин, рам ноза, фруктоза, сорбит), а вторую — к уменьше нию (глюкоза, мальтоза, маннит, ксилоза). При инфицировании этого же продуцента фагом лямбда и его последующем культивировании при темпера туре 21 °С эффективный лизис и соответственно высокая концентрация ИФН и других растворимых белков клетки обеспечиваются только одним источ ником углерода, относящимся к первой группе (глицерин), и всеми четырьмя углеводами (в боль шей или меньшей степени), составляющими вто рую группу. На рис. 2 представлены сравнительные данные по влиянию различных источников углерода в со ставе питательной среды на выход ИФН в плазми досодержащих клетках и при его получении в системе биосинтеза с использованием фага А. Вы ход, имеющий место в контролях, принят за 1. Так, согласно полученным данным, самый вы сокий выход растворимого ИФН с внеклеточной локализацией достигнут на среде с мальтозой (в 3,7 раза выше, чем в контроле). Более чем в три раза он выше на среде с глицерином, глюкозой, ксилозой и маннитом. При этом строгой корреля ции положительного влияния используемых источ ников углерода на выход ИФН при его получении плазмидным способом и с использования фага А не выявлено. Так, при плазмидном способе получения ИФН наиболее оптимальными оказались среды с добавлением мальтозы, сорбита и фруктозы (рис. 2). В то же время среды с сорбитом и фруктозой не являются оптимальными для культивирования ин фицированных фагом А клеток штамма-продуцента ИФН Е. coli SG30 {pIF-16) (рис. 2). Сравнительный анализ показал, что при поло жительной динамике воздействия дополнительных источников углерода на выход ИФН при его полу чении в системах биосинтеза как с использованием фага А, так и без него выбор того или иного источника углерода имеет более существенное вли яние на выход рекомбинантного белка в системе с использованием фага лямбда. При этом следует учитывать тот факт, что выход ИФН в контроль ном варианте с внеклеточной локализацией (про дуцент инфицировали фагом) значительно ниже, чем в контрольном варианте с внутриклеточной локализации продукта (продуцент не инфицирова ли фагом). Однако использование дополнительного источника углерода в составе питательной среды позволяет оптимизировать технологический про цесс и добиться в конечном счете сравнимого уров- 532 В Л И Я Н И Е СОСТАВА П И Т А Т Е Л Ь Н О Й С Р Е Д Ы НА Л И З И С И Н Т Е Р Ф Е Р О Н А ня выхода целевого белка. А поскольку технология с использованием фага Я позволяет получать ре- комбинантный продукт в растворимом виде, она имеет большое преимущество по сравнению с тех нологией, обеспечивающей накопление целевого белка внутри клеток в виде нерастворимых телец включений. Таким образом, в результате исследований ус тановлено, что введение того или иного дополни тельного источника углерода в состав богатой пита тельной среды может существенно повысить выход рекомбинантного белка в системе биосинтеза ИФН с использованием штамма-продуцента Е. coli SG30 (pIF-16) и бактериофага Я. При этом внеклеточное содержание ИФН определяется как уровнем синте за ИФН в инфицированной клетке, так и эффек тивностью лизиса клеток штамма-продуцента бак териофагом лямбда. Негативного влияния какого- либо из используемых источников углерода в данных условиях ведения процесса не зарегистри ровано. Для дальнейшей оптимизации биотехноло гического процесса целесообразно использовать среды, содержащие мальтозу, глицерин, глюкозу, маннит, ксилозу. Автор выражает признательность И. П. Костю- ченко и Е. В. Борейко за постановку отдельных экспериментов, Е. Н. Пехоте — за денситометриро- вание гелей. /. Yu. Slavchenko The influence of nutrients in growth media on the lysis and extracellular localization of human alpha interferon in the system of recombinant proteins overproduction using bacteriophage lambda Summary The influence of different carbon sources on the yield of extra cellular human alpha interferon in the system of recombinant proteins biosynthesis using bacteriophage lambda was investigated. Both the level of target protein synthesis and productivity of infected cells lysis are shown to increase in the presence of certain carbon sources in the growth media. This results in rising the extracellular concentration of recombinant protein. І. Ю. Славченко Вплив складу поживного середовища на лізис і позаклітинну локалізацію альфа-интерферону людини в системі суперсинтезу рекомбінантних білків з використанням бактеріофага лямбда Резюме Досліджено вплив різних джерел вуглецю на вихід позаклітин ного интерферону в системі біосинтезу рекомбінантних білків з використанням бактеріофага лямбда. За присутності в культуральному середовищі певних джерел вуглецю збільшу ється як рівень синтезу цільового продукту, так і ефек тивність лізису інфікованих фагом клітин иітама-продуценту і, як наслідок, кінцева концентрація рекомбінантного білка в культуральному середовищі. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Лтаиіне М. Переключение генов. Регуляция генной актив ности и фаг Я.—М.: Мир, 1989.—160 с. 2. Славченко И. Ю. Влияние температуры на выход раст воримого альфа интерферона человека в системе супер синтеза рекомбинантных белков с использованием бакте риофага лямбда / / Біополімери и клітина.—2002.—18, № 5.—С. 436—441. 3. Moir A., Brammar W. J. The use of specialised transducing phages in the amplification of enzyme production / / Мої. and Gen. Genet.—1976.—149.—P. 87—99. 4. А. с. СССР № 600175. Способ биосинтеза биологически активного вещества / Кордюм В. А., Черных С. И. / / Опубл. в БИ. № 12, 1978. 5. Славченко И. Ю., Черных С. Кордюм В. А. Иссле дование (Ьагозависимого синтеза /?-лактамазы в изогенных Su + и Su штаммах Е. coli при заражении их фагами ХЫа и XblaQ"R~ II Ферменты микроорганизмов.—М.: ВНИ- ИСЭНТИ, 1989.—С. 31—36. 6. Славченко Я. Ю. Исследование эффективности исполь зования бактериофага А для получения а 2 интерферона человека в клетках Escherichia coli: Автореф. дис. ... канд. биол. наук.—Киев, 1990.—19 с. 7. Лат. Украины № 2463. Способ получения /3-галакто- зидазы / В. А. Кордюм, С. И. Черных, И. Ю. Славченко, В. Г. Коробко / / Опубл. в БИ № 5-І, 1994. 8. Schwartz М. The adsorption of coliphage lambda to its host: effect of variations in the surface density of receptor and in phage-receptor affinity / / J. Мої. Biol.—1976.—103, N 3.— P. 521—536. 9. Garrett J. M.f Young R. Lethal action of bacteriophage lambda S gene / / J. Virol.—1982.—44, N 3.—P. 886—892. 10. Roe J. H., Record M. T. Jr. Regulation of the kinetics of the interaction of Escherichia coli RNA polymerase with the lambda pR promoter by salt concentration / / Biochemistry.— 1985.—24, N 18.—P. 4721—4726. 11. Gabig M., Herman-Antosiewicz A., Kwiatkowska M.t Los M., Thomas M. S.> Wegrzyn G. The cell surface protein Ag43 facilitates phage infection of Escherichia coli in the presence of bile salts and carbohydrates / / Microbiology.—2002.—148.— P. 1533—1542. 12. Gabig M., Obuchowski M.f Wegrzyn A., Szalewska-Palasz A.y Tfwmas M. S.t Wegrzyn G. Excess production of phage lambda delayed early proteins under conditions supporting high Escherichia coli growth rates / / Microbiology.—1998.— 144,—P. 2217—2224. 13. Czyz A., Los M.t Wrobel В., Wegrzyn G. Inhibition of spontaneous induction of lambdoid prophages in Escherichia coli cultures: simple procedures with possible biotechnological application / / BMC Biotechnol.—2001.—1, N 1. 14. Славченко И. Ю. Отбор чувствительных к бактериофагу X клонов из устойчивого к нему штамма Escherichia coli II Біополімери і клітина.—2001.—17, № 2.—С. 160—165. 15. Славченко И. Ю. Экспрессия альфа-2Ь интерферона чело века в различных штаммах Escherichia coli II Біополімери і клітина.—2001.—17, № 6.—С. 546—550. 16. Laemmli V. Cleavage of structural proteins during the assemb ly of the head of bacteriophage T4 / / Nature.—1970.—227.— P. 680 -685 . 17. Славченко И. Ю. Влияние различных источников углерода на синтез рекомбинантного белка в клетках Escherichia coli II Біополімери і клітина.—2002.—18, № 4.—С. 334—339. 18. Гловер Д. Клонирование ДНК. Методы.—М.: Мир, 1988.. УДК 579.258+577.124 Надійшла до редакції 30.01.02 533
id	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-156313
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
issn	0233-7657
language	Russian
last_indexed	2025-11-28T02:28:18Z
publishDate	2002
publisher	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
record_format	dspace
spelling	Славченко, И.Ю. 2019-06-18T11:24:11Z 2019-06-18T11:24:11Z 2002 Влияние состава питательной среды на лизис и внеклеточную локализацию альфа-интерферона человека в системе суперсинтеза рекомбинантных белков с использованием бактериофага лямбда / И.Ю. Славченко // Вiopolymers and Cell. — 2002. — Т. 18, № 6. — С. 529-533. — Бібліогр.: 18 назв. — рос. 0233-7657 DOI:http://dx.doi.org/10.7124/bc.000631 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156313 579.258+577.124 Исследовано влияние различных источников углерода на выход внеклеточного интерферона в системе биосинтеза рекомбинантных белков с использованием бактериофага лямбда Установлено, что при содержании в культуральной среде определенных источников углерода увеличивается как уровень синтеза целевого продукта, так и эффективность лизиса инфицированных фагом клеток штамма-продуцента и, следовательно, конечная концентрация рекомбинантного белка в культуральной среде. Досліджено вплив різних джерел вуглецю на вихід позаклітин ного интерферону в системі біосинтезу рекомбінантних білків з використанням бактеріофага лямбда. За присутності в культуральному середовищі певних джерел вуглецю збільшується як рівень синтезу цільового продукту, так і ефективність лізису інфікованих фагом клітин иітама-продуценту і, як наслідок, кінцева концентрація рекомбінантного білка в культуральному середовищі. The influence of different carbon sources on the yield of extracellular human alpha interferon in the system of recombinant proteins biosynthesis using bacteriophage lambda was investigated. Both the level of target protein synthesis and productivity of infected cells lysis are shown to increase in the presence of certain carbon sources in the growth media. This results in rising the extracellular concentration of recombinant protein. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Біополімери і клітина Молекулярна та клітинна біотехнології Влияние состава питательной среды на лизис и внеклеточную локализацию альфа-интерферона человека в системе суперсинтеза рекомбинантных белков с использованием бактериофага лямбда Вплив складу поживного середовища на лізис і позаклітинну локалізацію альфа-интерферону людини в системі суперсинтезу рекомбінантних білків з використанням бактеріофага лямбда The influence of nutrients in growth media on the lysis and extracellular localization of human alpha interferon in the system of recombinant proteins overproduction using bacteriophage lambda Article published earlier
spellingShingle	Влияние состава питательной среды на лизис и внеклеточную локализацию альфа-интерферона человека в системе суперсинтеза рекомбинантных белков с использованием бактериофага лямбда Славченко, И.Ю. Молекулярна та клітинна біотехнології
title	Влияние состава питательной среды на лизис и внеклеточную локализацию альфа-интерферона человека в системе суперсинтеза рекомбинантных белков с использованием бактериофага лямбда
title_alt	Вплив складу поживного середовища на лізис і позаклітинну локалізацію альфа-интерферону людини в системі суперсинтезу рекомбінантних білків з використанням бактеріофага лямбда The influence of nutrients in growth media on the lysis and extracellular localization of human alpha interferon in the system of recombinant proteins overproduction using bacteriophage lambda
title_full	Влияние состава питательной среды на лизис и внеклеточную локализацию альфа-интерферона человека в системе суперсинтеза рекомбинантных белков с использованием бактериофага лямбда
title_fullStr	Влияние состава питательной среды на лизис и внеклеточную локализацию альфа-интерферона человека в системе суперсинтеза рекомбинантных белков с использованием бактериофага лямбда
title_full_unstemmed	Влияние состава питательной среды на лизис и внеклеточную локализацию альфа-интерферона человека в системе суперсинтеза рекомбинантных белков с использованием бактериофага лямбда
title_short	Влияние состава питательной среды на лизис и внеклеточную локализацию альфа-интерферона человека в системе суперсинтеза рекомбинантных белков с использованием бактериофага лямбда
title_sort	влияние состава питательной среды на лизис и внеклеточную локализацию альфа-интерферона человека в системе суперсинтеза рекомбинантных белков с использованием бактериофага лямбда
topic	Молекулярна та клітинна біотехнології
topic_facet	Молекулярна та клітинна біотехнології
url	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156313
work_keys_str_mv	AT slavčenkoiû vliâniesostavapitatelʹnoisredynalizisivnekletočnuûlokalizaciûalʹfainterferonačelovekavsistemesupersintezarekombinantnyhbelkovsispolʹzovaniembakteriofagalâmbda AT slavčenkoiû vplivskladupoživnogoseredoviŝanalízisípozaklítinnulokalízacíûalʹfainterferonulûdinivsistemísupersintezurekombínantnihbílkívzvikoristannâmbakteríofagalâmbda AT slavčenkoiû theinfluenceofnutrientsingrowthmediaonthelysisandextracellularlocalizationofhumanalphainterferoninthesystemofrecombinantproteinsoverproductionusingbacteriophagelambda

Institution

Similar Items