Особенности экспрессии целевого гена в составе вектора на основе бактериофага лямбда и изучение путей ее оптимизации
Рекомбинантные молекулы на основе бактериофага лямбда отличаются высокой сегрегационной стабильностью в лизогенном состоянии и высоким уровнем амплификации фаговой ДНК и соответственно встроенного в нее целевого гена при литическом развитии фага, которое заканчивается лизисом бактериальной клетки и...
Saved in:
| Published in: | Біополімери і клітина |
|---|---|
| Date: | 2003 |
| Main Authors: | , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
2003
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156371 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Особенности экспрессии целевого гена 
 в составе вектора на основе бактериофага лямбда 
 и изучение путей ее оптимизации / И.Ю. Славченко, В.А. Шмидт, С.И. Черных, В.А. Кордюм // Вiopolymers and Cell. — 2003. — Т. 19, № 1. — С. 
 81-88. — Бібліогр.: 19 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1862556009558441984 |
|---|---|
| author | Славченко, И.Ю. Шмидт, В.А. Черных, С.И. Кордюм, В.А. |
| author_facet | Славченко, И.Ю. Шмидт, В.А. Черных, С.И. Кордюм, В.А. |
| citation_txt | Особенности экспрессии целевого гена 
 в составе вектора на основе бактериофага лямбда 
 и изучение путей ее оптимизации / И.Ю. Славченко, В.А. Шмидт, С.И. Черных, В.А. Кордюм // Вiopolymers and Cell. — 2003. — Т. 19, № 1. — С. 
 81-88. — Бібліогр.: 19 назв. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Біополімери і клітина |
| description | Рекомбинантные молекулы на основе бактериофага лямбда отличаются высокой сегрегационной стабильностью в лизогенном состоянии и высоким уровнем амплификации фаговой ДНК и соответственно встроенного в нее целевого гена при литическом развитии фага, которое заканчивается лизисом бактериальной клетки и высвобождением целевого продукта в культуральную среду. Это делает перспективным использование фага лямбда для получения рекомбинантных белков. В данном сообщении описано конструирование фага λpIF, несущего две копии искусственного гена интерферона (ИФН) человека под контролем тандема триптофановых промоторов. Экспрессию чужеродных генов осуществляли термоиндукцией клеток, несущих фаг с генами ИФН, а также инфекцией этим фагом реципиентных клеток. Показано, что выход рекомбинантного белка зависит от оптической плотности клеток при термоиндукции и последующего температурного режима культивирования продуцента Увеличение содержания ИФН в лизатах после индукции также наблюдали при использовании Q–R– амбер-мутантов фага λpIF. Показано, что инфицирование реципиентных клеток фагом λpIF обеспечивало более высокий выход ИФН (около 40 мг/л), чем термоиндукция клеток Escherichia coli, несущих фаг с целевыми генами.
Рекомбінантні молекули на основі бактеріофага лямбда відрізняються високою сегрегаційною стабільністю у лізогенному стані і високим рівнем ампліфікації фагової ДНК та відповідно вбудованого в неї цільового гена за літичного розвитку фага, який закінчується лізисом бактеріальної клітини і вивільненням цільового продукту в культуральне середовище. Це робить перспективним використання фага лямбда для отримання рекомбінантних білків. У даному повідомленні описано конструювання фага λpIF, який несе дві копії штучного гена інтерферону (ІФН) людини під контролем тандему триптофанових промоторів. Експресію чужорідних генів здійснювали термоіндукціею клітин, які несуть фаг з генами ІФН, а також інфекцією цим фагом реципієнтних клітин. Показано, що вихід рекомбінантного білка залежить від оптичної густини клітин при термоіндукції і наступного температурного режиму культивування продуцента. Збільшення вмісту ІФН у лізатах після індукції також спостерігали при використанні Q– R– амбер-мутантів фага λpIF. Показано, що інфікування реципієнтних клітин фагом λpIF забезпечує вищий вихід ІФН (біля 40 мг/л), ніж термоіндукиія клітин Escherichia coli, які несуть фаг з цільовими генами.
High stability of the cloned gene in the lysogenic state and high copy number in the lytic state suggest a potential use of phage λ as an expression vector for overproduction of the extracellular recombinant proteins which release to the growth medium as a result of lysis of E. coli cells by phage. This paper describes the construction and characterization of phage λpIF carrying the two copy of an artificial gene for human α2 interferon (IFN) under control of the Ptrp tandem promoter. The expression of the foreign genes realized by thermal induction cells carrying the phage λpIF as well as by infection of recipient cells with this phage. In this study it was shown that the recombinant protein yield is dependent on a cell density at the time of thermal induction and the following temperature of producer cultivation. The increase of soluble target protein concentration in lysates after induction of recombinant phage was also observed using the phage λpIF contains amber-mutations in genes Q and R. The infection of recipient cells by phage λpIF resulted in higher IFN yield (about 40 mg per l) than thermal induction of the cells carrying the phage λ with target genes.
|
| first_indexed | 2025-11-25T22:29:22Z |
| format | Article |
| fulltext | |
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-156371 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7657 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-11-25T22:29:22Z |
| publishDate | 2003 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Славченко, И.Ю. Шмидт, В.А. Черных, С.И. Кордюм, В.А. 2019-06-18T12:08:45Z 2019-06-18T12:08:45Z 2003 Особенности экспрессии целевого гена 
 в составе вектора на основе бактериофага лямбда 
 и изучение путей ее оптимизации / И.Ю. Славченко, В.А. Шмидт, С.И. Черных, В.А. Кордюм // Вiopolymers and Cell. — 2003. — Т. 19, № 1. — С. 
 81-88. — Бібліогр.: 19 назв. — рос. 0233-7657 DOI:http://dx.doi.org/10.7124/bc.00063F https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156371 579.258+577.124 Рекомбинантные молекулы на основе бактериофага лямбда отличаются высокой сегрегационной стабильностью в лизогенном состоянии и высоким уровнем амплификации фаговой ДНК и соответственно встроенного в нее целевого гена при литическом развитии фага, которое заканчивается лизисом бактериальной клетки и высвобождением целевого продукта в культуральную среду. Это делает перспективным использование фага лямбда для получения рекомбинантных белков. В данном сообщении описано конструирование фага λpIF, несущего две копии искусственного гена интерферона (ИФН) человека под контролем тандема триптофановых промоторов. Экспрессию чужеродных генов осуществляли термоиндукцией клеток, несущих фаг с генами ИФН, а также инфекцией этим фагом реципиентных клеток. Показано, что выход рекомбинантного белка зависит от оптической плотности клеток при термоиндукции и последующего температурного режима культивирования продуцента Увеличение содержания ИФН в лизатах после индукции также наблюдали при использовании Q–R– амбер-мутантов фага λpIF. Показано, что инфицирование реципиентных клеток фагом λpIF обеспечивало более высокий выход ИФН (около 40 мг/л), чем термоиндукция клеток Escherichia coli, несущих фаг с целевыми генами. Рекомбінантні молекули на основі бактеріофага лямбда відрізняються високою сегрегаційною стабільністю у лізогенному стані і високим рівнем ампліфікації фагової ДНК та відповідно вбудованого в неї цільового гена за літичного розвитку фага, який закінчується лізисом бактеріальної клітини і вивільненням цільового продукту в культуральне середовище. Це робить перспективним використання фага лямбда для отримання рекомбінантних білків. У даному повідомленні описано конструювання фага λpIF, який несе дві копії штучного гена інтерферону (ІФН) людини під контролем тандему триптофанових промоторів. Експресію чужорідних генів здійснювали термоіндукціею клітин, які несуть фаг з генами ІФН, а також інфекцією цим фагом реципієнтних клітин. Показано, що вихід рекомбінантного білка залежить від оптичної густини клітин при термоіндукції і наступного температурного режиму культивування продуцента. Збільшення вмісту ІФН у лізатах після індукції також спостерігали при використанні Q– R– амбер-мутантів фага λpIF. Показано, що інфікування реципієнтних клітин фагом λpIF забезпечує вищий вихід ІФН (біля 40 мг/л), ніж термоіндукиія клітин Escherichia coli, які несуть фаг з цільовими генами. High stability of the cloned gene in the lysogenic state and high copy number in the lytic state suggest a potential use of phage λ as an expression vector for overproduction of the extracellular recombinant proteins which release to the growth medium as a result of lysis of E. coli cells by phage. This paper describes the construction and characterization of phage λpIF carrying the two copy of an artificial gene for human α2 interferon (IFN) under control of the Ptrp tandem promoter. The expression of the foreign genes realized by thermal induction cells carrying the phage λpIF as well as by infection of recipient cells with this phage. In this study it was shown that the recombinant protein yield is dependent on a cell density at the time of thermal induction and the following temperature of producer cultivation. The increase of soluble target protein concentration in lysates after induction of recombinant phage was also observed using the phage λpIF contains amber-mutations in genes Q and R. The infection of recipient cells by phage λpIF resulted in higher IFN yield (about 40 mg per l) than thermal induction of the cells carrying the phage λ with target genes. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Біополімери і клітина Молекулярна та клітинна біотехнології Особенности экспрессии целевого гена в составе вектора на основе бактериофага лямбда и изучение путей ее оптимизации Особливості експресії цільового гена у складі вектора на основі бактеріофага лямбда та вивчення шляхів її оптимізації Peculiarities of a target gene expression in the structure of the phage lambda-base vector and investigation of ways of its optimization Article published earlier |
| spellingShingle | Особенности экспрессии целевого гена в составе вектора на основе бактериофага лямбда и изучение путей ее оптимизации Славченко, И.Ю. Шмидт, В.А. Черных, С.И. Кордюм, В.А. Молекулярна та клітинна біотехнології |
| title | Особенности экспрессии целевого гена в составе вектора на основе бактериофага лямбда и изучение путей ее оптимизации |
| title_alt | Особливості експресії цільового гена у складі вектора на основі бактеріофага лямбда та вивчення шляхів її оптимізації Peculiarities of a target gene expression in the structure of the phage lambda-base vector and investigation of ways of its optimization |
| title_full | Особенности экспрессии целевого гена в составе вектора на основе бактериофага лямбда и изучение путей ее оптимизации |
| title_fullStr | Особенности экспрессии целевого гена в составе вектора на основе бактериофага лямбда и изучение путей ее оптимизации |
| title_full_unstemmed | Особенности экспрессии целевого гена в составе вектора на основе бактериофага лямбда и изучение путей ее оптимизации |
| title_short | Особенности экспрессии целевого гена в составе вектора на основе бактериофага лямбда и изучение путей ее оптимизации |
| title_sort | особенности экспрессии целевого гена в составе вектора на основе бактериофага лямбда и изучение путей ее оптимизации |
| topic | Молекулярна та клітинна біотехнології |
| topic_facet | Молекулярна та клітинна біотехнології |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156371 |
| work_keys_str_mv | AT slavčenkoiû osobennostiékspressiicelevogogenavsostavevektoranaosnovebakteriofagalâmbdaiizučenieputeieeoptimizacii AT šmidtva osobennostiékspressiicelevogogenavsostavevektoranaosnovebakteriofagalâmbdaiizučenieputeieeoptimizacii AT černyhsi osobennostiékspressiicelevogogenavsostavevektoranaosnovebakteriofagalâmbdaiizučenieputeieeoptimizacii AT kordûmva osobennostiékspressiicelevogogenavsostavevektoranaosnovebakteriofagalâmbdaiizučenieputeieeoptimizacii AT slavčenkoiû osoblivostíekspresíícílʹovogogenauskladívektoranaosnovíbakteríofagalâmbdatavivčennâšlâhívííoptimízacíí AT šmidtva osoblivostíekspresíícílʹovogogenauskladívektoranaosnovíbakteríofagalâmbdatavivčennâšlâhívííoptimízacíí AT černyhsi osoblivostíekspresíícílʹovogogenauskladívektoranaosnovíbakteríofagalâmbdatavivčennâšlâhívííoptimízacíí AT kordûmva osoblivostíekspresíícílʹovogogenauskladívektoranaosnovíbakteríofagalâmbdatavivčennâšlâhívííoptimízacíí AT slavčenkoiû peculiaritiesofatargetgeneexpressioninthestructureofthephagelambdabasevectorandinvestigationofwaysofitsoptimization AT šmidtva peculiaritiesofatargetgeneexpressioninthestructureofthephagelambdabasevectorandinvestigationofwaysofitsoptimization AT černyhsi peculiaritiesofatargetgeneexpressioninthestructureofthephagelambdabasevectorandinvestigationofwaysofitsoptimization AT kordûmva peculiaritiesofatargetgeneexpressioninthestructureofthephagelambdabasevectorandinvestigationofwaysofitsoptimization |