Дія 2,5-триолігоаденілату та його епоксипохідного на репродукцію вірусу імунодефіциту людини та на активність зворотної транскриптази ретровірусів
Досліджено дію 2',5'-триолігоаденілату (2',5'АрАрА) та його епоксипохідного (2' ,5'-Аг(ккА)) на репродукцію вірусу імунодефіциту людини (ВІЛ-І). Показано, що 2',5'-олігоаденілати пригнічують репродукцію ВІЛ-1 у випадку їхньої попередньої інкубації з клітинами...
Saved in:
| Published in: | Биополимеры и клетка |
|---|---|
| Date: | 1999 |
| Main Authors: | , , , , , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Ukrainian |
| Published: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1999
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156573 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Дія 2,5-триолігоаденілату та його епоксипохідного на репродукцію вірусу імунодефіциту людини та на активність зворотної транскриптази ретровірусів / 3.Ю. Ткачук, С.Л. Рибалко, Л.І. Семерникова, В.В. Ткачук, М.П. Завелевич, Л.В. Ткачук, І.О. Михайлопуло, Г.X. Мацука // Биополимеры и клетка. — 1999. — Т. 15, № 4. — С. 314-318. — Бібліогр.: 12 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-156573 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Ткачук, З.Ю. Рибалко, С.Л. Семерникова, Л.І. Ткачук, В.В. Завелевич, М.П. Ткачук, Л.В. Михайлопуло, І.О. Мацука, Г.Х. 2019-06-18T16:59:53Z 2019-06-18T16:59:53Z 1999 Дія 2,5-триолігоаденілату та його епоксипохідного на репродукцію вірусу імунодефіциту людини та на активність зворотної транскриптази ретровірусів / 3.Ю. Ткачук, С.Л. Рибалко, Л.І. Семерникова, В.В. Ткачук, М.П. Завелевич, Л.В. Ткачук, І.О. Михайлопуло, Г.X. Мацука // Биополимеры и клетка. — 1999. — Т. 15, № 4. — С. 314-318. — Бібліогр.: 12 назв. — укр. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.00052C https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156573 578.828:278.245.2 Досліджено дію 2',5'-триолігоаденілату (2',5'АрАрА) та його епоксипохідного (2' ,5'-Аг(ккА)) на репродукцію вірусу імунодефіциту людини (ВІЛ-І). Показано, що 2',5'-олігоаденілати пригнічують репродукцію ВІЛ-1 у випадку їхньої попередньої інкубації з клітинами лімфобластоїдної лінії МТ-4. Вивчено можливі механізми противірусної дії 2',5'-олігоаденілатів, а саме: проаналізовано інтерфероногенну дію цих препаратів. Показано, що 2',5'АрАрА та 2' ,5'-Аг(ккА) підвищують рівень інтерферону в клітинах у 2 і 4 рази відповідно порівняно з контролем. Виявлено інгібуючу дію 2' ,5' -олігоаденілатів на активність зворотної транскриптази ендо- і екзогенних ретровірусів. Припускається, що 2',5'-триолігоаденілат та його епоксипохідне можуть використовуватися у боротьбі з ВІЛ-інфекцією. Исследовано действие 2' ,5'-триолигоаденилата (2',5'АрАрА) и его эпоксипроизводного (2',5'-А2)(RAА) на репродукцию вируса иммунодефицита человека (ВИЧ-1). Показано, что 2',5'-олигоаденилаты угнетают репродукцию ВИЧ-1 в случае их предварительной инкубации с клетками лимфобластоидной линии МТ-4. Изучали возможные механизмы противовирусного действия 2',5'-олигоаденилатов, а именно: интерфероногенное действие этих препаратов. Показано, что 2 ,5'АрАрА и 2' ,5'-А₂(raА) увеличивают количество интерферона в клетках в 2 и 4 раза соответственно по сравнению с контролем. Показано ингибирующее действие 2',5'-триолигоаденилатов на активность обратной транскриптазы эндо- и экзогенных ретровирусов. Предполагается, что 2',5'-триолигоаденилат и его эпоксипроизводное могут быть использованы в борьбе против ВИЧ-инфекции. The study of the effect of trimeric 2',5'-oligoadenytic acid (2',5'ApApA) and its epoxyderivative (2',5'-A2(RAA)) on both human immunodeficiency virus (HIV-1) reproduction and retro-viruses reverse transcriptase activity was conducted. 2',5'-oligo-adenylates were shown to suppress HIV-1 reproduction in case of their pre-incubation with the lymphoblastoid cells of MT-4 line. The possible mechanisms of antivirial action of 2' ,5'-oligoadenylates were under investigation, in particular, the interferonogenic effect of the substances was examined. 2',5'ApApA and 2',5'-A₂(raA) were shown to increase amounts of interferon in cells two and four-fold respectively compared to control. The inhibitory effect of 2',5'-oligoadenylates on activity of endogenous and exogenous retroviruses reverse transcriptase was demonstrated. The trimeric 2',5'-oligoadenylic acid and its epoxyderivative may be used against HIV infection. uk Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Биополимеры и клетка Вирусы и клетка Дія 2,5-триолігоаденілату та його епоксипохідного на репродукцію вірусу імунодефіциту людини та на активність зворотної транскриптази ретровірусів Действие 2',5'-триолигоаденилата и его эпоксипроизводного на репродукцию вируса иммунодефицита человека и на активность обратной транскриптазы ретровирусов The effect of trimeric 2',5'-oligoadenylic acid and its epoxyderivative on the human immunodeficiency virus reproduction and retroviruses reverse transcriptase activity Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Дія 2,5-триолігоаденілату та його епоксипохідного на репродукцію вірусу імунодефіциту людини та на активність зворотної транскриптази ретровірусів |
| spellingShingle |
Дія 2,5-триолігоаденілату та його епоксипохідного на репродукцію вірусу імунодефіциту людини та на активність зворотної транскриптази ретровірусів Ткачук, З.Ю. Рибалко, С.Л. Семерникова, Л.І. Ткачук, В.В. Завелевич, М.П. Ткачук, Л.В. Михайлопуло, І.О. Мацука, Г.Х. Вирусы и клетка |
| title_short |
Дія 2,5-триолігоаденілату та його епоксипохідного на репродукцію вірусу імунодефіциту людини та на активність зворотної транскриптази ретровірусів |
| title_full |
Дія 2,5-триолігоаденілату та його епоксипохідного на репродукцію вірусу імунодефіциту людини та на активність зворотної транскриптази ретровірусів |
| title_fullStr |
Дія 2,5-триолігоаденілату та його епоксипохідного на репродукцію вірусу імунодефіциту людини та на активність зворотної транскриптази ретровірусів |
| title_full_unstemmed |
Дія 2,5-триолігоаденілату та його епоксипохідного на репродукцію вірусу імунодефіциту людини та на активність зворотної транскриптази ретровірусів |
| title_sort |
дія 2,5-триолігоаденілату та його епоксипохідного на репродукцію вірусу імунодефіциту людини та на активність зворотної транскриптази ретровірусів |
| author |
Ткачук, З.Ю. Рибалко, С.Л. Семерникова, Л.І. Ткачук, В.В. Завелевич, М.П. Ткачук, Л.В. Михайлопуло, І.О. Мацука, Г.Х. |
| author_facet |
Ткачук, З.Ю. Рибалко, С.Л. Семерникова, Л.І. Ткачук, В.В. Завелевич, М.П. Ткачук, Л.В. Михайлопуло, І.О. Мацука, Г.Х. |
| topic |
Вирусы и клетка |
| topic_facet |
Вирусы и клетка |
| publishDate |
1999 |
| language |
Ukrainian |
| container_title |
Биополимеры и клетка |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Действие 2',5'-триолигоаденилата и его эпоксипроизводного на репродукцию вируса иммунодефицита человека и на активность обратной транскриптазы ретровирусов The effect of trimeric 2',5'-oligoadenylic acid and its epoxyderivative on the human immunodeficiency virus reproduction and retroviruses reverse transcriptase activity |
| description |
Досліджено дію 2',5'-триолігоаденілату (2',5'АрАрА) та його епоксипохідного (2' ,5'-Аг(ккА)) на репродукцію вірусу імунодефіциту людини (ВІЛ-І). Показано, що 2',5'-олігоаденілати пригнічують репродукцію ВІЛ-1 у випадку їхньої попередньої інкубації з клітинами лімфобластоїдної лінії МТ-4. Вивчено можливі механізми противірусної дії 2',5'-олігоаденілатів, а саме: проаналізовано інтерфероногенну дію цих препаратів. Показано, що 2',5'АрАрА та 2' ,5'-Аг(ккА) підвищують рівень інтерферону в клітинах у 2 і 4 рази відповідно порівняно з контролем. Виявлено інгібуючу дію 2' ,5' -олігоаденілатів на активність зворотної транскриптази ендо- і екзогенних ретровірусів. Припускається, що 2',5'-триолігоаденілат та його епоксипохідне можуть використовуватися у боротьбі з ВІЛ-інфекцією.
Исследовано действие 2' ,5'-триолигоаденилата (2',5'АрАрА) и его эпоксипроизводного (2',5'-А2)(RAА) на репродукцию вируса иммунодефицита человека (ВИЧ-1). Показано, что 2',5'-олигоаденилаты угнетают репродукцию ВИЧ-1 в случае их предварительной инкубации с клетками лимфобластоидной линии МТ-4. Изучали возможные механизмы противовирусного действия 2',5'-олигоаденилатов, а именно: интерфероногенное действие этих препаратов. Показано, что 2 ,5'АрАрА и 2' ,5'-А₂(raА) увеличивают количество интерферона в клетках в 2 и 4 раза соответственно по сравнению с контролем. Показано ингибирующее действие 2',5'-триолигоаденилатов на активность обратной транскриптазы эндо- и экзогенных ретровирусов. Предполагается, что 2',5'-триолигоаденилат и его эпоксипроизводное могут быть использованы в борьбе против ВИЧ-инфекции.
The study of the effect of trimeric 2',5'-oligoadenytic acid (2',5'ApApA) and its epoxyderivative (2',5'-A2(RAA)) on both human immunodeficiency virus (HIV-1) reproduction and retro-viruses reverse transcriptase activity was conducted. 2',5'-oligo-adenylates were shown to suppress HIV-1 reproduction in case of their pre-incubation with the lymphoblastoid cells of MT-4 line. The possible mechanisms of antivirial action of 2' ,5'-oligoadenylates were under investigation, in particular, the interferonogenic effect of the substances was examined. 2',5'ApApA and 2',5'-A₂(raA) were shown to increase amounts of interferon in cells two and four-fold respectively compared to control. The inhibitory effect of 2',5'-oligoadenylates on activity of endogenous and exogenous retroviruses reverse transcriptase was demonstrated. The trimeric 2',5'-oligoadenylic acid and its epoxyderivative may be used against HIV infection.
|
| issn |
0233-7657 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156573 |
| citation_txt |
Дія 2,5-триолігоаденілату та його епоксипохідного на репродукцію вірусу імунодефіциту людини та на активність зворотної транскриптази ретровірусів / 3.Ю. Ткачук, С.Л. Рибалко, Л.І. Семерникова, В.В. Ткачук, М.П. Завелевич, Л.В. Ткачук, І.О. Михайлопуло, Г.X. Мацука // Биополимеры и клетка. — 1999. — Т. 15, № 4. — С. 314-318. — Бібліогр.: 12 назв. — укр. |
| work_keys_str_mv |
AT tkačukzû díâ25triolígoadenílatutaiogoepoksipohídnogonareprodukcíûvírusuímunodefícitulûdinitanaaktivnístʹzvorotnoítranskriptaziretrovírusív AT ribalkosl díâ25triolígoadenílatutaiogoepoksipohídnogonareprodukcíûvírusuímunodefícitulûdinitanaaktivnístʹzvorotnoítranskriptaziretrovírusív AT semernikovalí díâ25triolígoadenílatutaiogoepoksipohídnogonareprodukcíûvírusuímunodefícitulûdinitanaaktivnístʹzvorotnoítranskriptaziretrovírusív AT tkačukvv díâ25triolígoadenílatutaiogoepoksipohídnogonareprodukcíûvírusuímunodefícitulûdinitanaaktivnístʹzvorotnoítranskriptaziretrovírusív AT zavelevičmp díâ25triolígoadenílatutaiogoepoksipohídnogonareprodukcíûvírusuímunodefícitulûdinitanaaktivnístʹzvorotnoítranskriptaziretrovírusív AT tkačuklv díâ25triolígoadenílatutaiogoepoksipohídnogonareprodukcíûvírusuímunodefícitulûdinitanaaktivnístʹzvorotnoítranskriptaziretrovírusív AT mihailopuloío díâ25triolígoadenílatutaiogoepoksipohídnogonareprodukcíûvírusuímunodefícitulûdinitanaaktivnístʹzvorotnoítranskriptaziretrovírusív AT macukagh díâ25triolígoadenílatutaiogoepoksipohídnogonareprodukcíûvírusuímunodefícitulûdinitanaaktivnístʹzvorotnoítranskriptaziretrovírusív AT tkačukzû deistvie25trioligoadenilataiegoépoksiproizvodnogonareprodukciûvirusaimmunodeficitačelovekainaaktivnostʹobratnoitranskriptazyretrovirusov AT ribalkosl deistvie25trioligoadenilataiegoépoksiproizvodnogonareprodukciûvirusaimmunodeficitačelovekainaaktivnostʹobratnoitranskriptazyretrovirusov AT semernikovalí deistvie25trioligoadenilataiegoépoksiproizvodnogonareprodukciûvirusaimmunodeficitačelovekainaaktivnostʹobratnoitranskriptazyretrovirusov AT tkačukvv deistvie25trioligoadenilataiegoépoksiproizvodnogonareprodukciûvirusaimmunodeficitačelovekainaaktivnostʹobratnoitranskriptazyretrovirusov AT zavelevičmp deistvie25trioligoadenilataiegoépoksiproizvodnogonareprodukciûvirusaimmunodeficitačelovekainaaktivnostʹobratnoitranskriptazyretrovirusov AT tkačuklv deistvie25trioligoadenilataiegoépoksiproizvodnogonareprodukciûvirusaimmunodeficitačelovekainaaktivnostʹobratnoitranskriptazyretrovirusov AT mihailopuloío deistvie25trioligoadenilataiegoépoksiproizvodnogonareprodukciûvirusaimmunodeficitačelovekainaaktivnostʹobratnoitranskriptazyretrovirusov AT macukagh deistvie25trioligoadenilataiegoépoksiproizvodnogonareprodukciûvirusaimmunodeficitačelovekainaaktivnostʹobratnoitranskriptazyretrovirusov AT tkačukzû theeffectoftrimeric25oligoadenylicacidanditsepoxyderivativeonthehumanimmunodeficiencyvirusreproductionandretrovirusesreversetranscriptaseactivity AT ribalkosl theeffectoftrimeric25oligoadenylicacidanditsepoxyderivativeonthehumanimmunodeficiencyvirusreproductionandretrovirusesreversetranscriptaseactivity AT semernikovalí theeffectoftrimeric25oligoadenylicacidanditsepoxyderivativeonthehumanimmunodeficiencyvirusreproductionandretrovirusesreversetranscriptaseactivity AT tkačukvv theeffectoftrimeric25oligoadenylicacidanditsepoxyderivativeonthehumanimmunodeficiencyvirusreproductionandretrovirusesreversetranscriptaseactivity AT zavelevičmp theeffectoftrimeric25oligoadenylicacidanditsepoxyderivativeonthehumanimmunodeficiencyvirusreproductionandretrovirusesreversetranscriptaseactivity AT tkačuklv theeffectoftrimeric25oligoadenylicacidanditsepoxyderivativeonthehumanimmunodeficiencyvirusreproductionandretrovirusesreversetranscriptaseactivity AT mihailopuloío theeffectoftrimeric25oligoadenylicacidanditsepoxyderivativeonthehumanimmunodeficiencyvirusreproductionandretrovirusesreversetranscriptaseactivity AT macukagh theeffectoftrimeric25oligoadenylicacidanditsepoxyderivativeonthehumanimmunodeficiencyvirusreproductionandretrovirusesreversetranscriptaseactivity |
| first_indexed |
2025-11-25T20:44:33Z |
| last_indexed |
2025-11-25T20:44:33Z |
| _version_ |
1850531154411651072 |
| fulltext |
I S S N 0233-7657 . Биополимеры и клетка. 1999. Т. 15. № 4
Дія 2,5-триолігоаденілату та його
епоксипохідного на репродукцію вірусу
імунодефіциту людини та на активність
зворотної транскриптази ретровірусів
3 . Ю . Ткачук, С. Л. Р и б а л к о 1 , Л . І . Семерникова, В. В. Ткачук, М. П. З а в е л е в и ч 2 ,
Л. В. Ткачук, І . О. М и х а й л о п у л о 3 , Г. X. Мацука
Інститут молекулярної біології та генетики НАН України
Вул. Академіка Заболотного, 150, Київ, 03143 , Україна
Інститут епідеміології та інфекційних хвороб МОЗ України
Узвіз Протасів яр, 4, Київ, 03038 , Україна
2
Інститут експериментальної патології, онкології та радіології ім. Р. Є. Кавецького НАН України
Вул. Васильківська, 45 , Київ, 03022 , Україна
З
Інститут біоорганічної хімії АН Бєларусі
Вул. Жодінська, 5 / 2 , Мінськ, 220067, Беларусь
Досліджено дію 2',5'-триолігоаденілату (2',5'АрАрА) та його епоксипохідного (2' ,5'-Аг(ккА)) на
репродукцію вірусу імунодефіциту людини (ВІЛ-І). Показано, що 2',5'-олігоаденілати пригнічують
репродукцію ВІЛ-1 у випадку їхньої попередньої інкубації з клітинами лімфобластоїдної лінії МТ-4.
Вивчено можливі механізми противірусної дії 2',5'-олігоаденілатів, а саме: проаналізовано інтер-
фероногенну дію цих препаратів. Показано, що 2',5'АрАрА та 2' ,5'-Аг(ккА) підвищують рівень
інтерферону в клітинах у 2 і 4 рази відповідно порівняно з контролем. Виявлено інгібуючу дію
2' ,5' -олігоаденілатів на активність зворотної транскриптази ендо- і екзогенних ретровірусів.
Припускається, що 2',5'-триолігоаденілат та його епоксипохідне можуть використовуватися у
боротьбі з ВІЛ-інфекцією.
Вступ. Відомо, що 2 ' ,5 ' -олігоаденілати (2-5А) віді
грають основну роль у набутті клітиною стійкості
до вірусів. Ключовими ферментами системи 2-5А є
2-5А-синтетаза, активність якої залежить від наяв
ності вірусної або клітинної дволанцюгової Р Н К
(dsPHK) , і рибонуклеаза L, активована 2-5А. До
слідження останніх років показали, що система
2-5А є перспективною в боротьбі проти ВІЛ-ін-
фекції [1—4] . До останнього часу застосування
2-5А похідних для підсилення цієї системи здавало
ся обмеженим, головним чином, через низьку спе-
© 3. Ю. ТКАЧУК, С. Л. РИБАЛКО, Л. І. СЕМЕРНИКОВА,
В В. ТКАЧУК, М. П. ЗАВЕЛЕВИЧ, Л. В. ТКАЧУК,
І. О. МИХАЙЛОПУЛО, Г. X. МАЦУКА, 1999
цифічність Р Н К а з и L до вірусної Р Н К [5] . У
зв 'язку з цим розроблено два нових підходи, які
забезпечують вибірковий антивірусний ефект 2-5А
системи, принаймні, проти ВІЛ-1 інфекції. Перший
підхід полягає у внутрішньоклітинній імунізації з
використанням к Д Н К 2-5А-синтетази, зв 'язаної з
елементом трансактивної реакції (відповіді) (TAR)
ВІЛ, другий — пов 'язаний з пригніченням ретро-
вірусної активності зворотної транскриптази за до
помогою аналогів 2-5А.
Метою даної роботи було вивчення дії 2 ' , 5 ' -
олігоаденілату та його похідного на репродукцію
ВІЛ-1 , їхню інтерфероногенну дію, а також впливу
2' ,5 '-олігоаденілатів на активність зворотної транс
криптази екзо- та ендогенних ретровірусів.
314
ДІЯ 2',5'-ТРИОЛІГОАДБНІЛАТУ НА РЕПРОДУКЦІЮ ВІЛ-1
Матеріали і методи. В роботі використано
«корові» 2 ' ,5 ' -олігоаденілати: 2 \5 ' -АрАрА (2 ' ,5 ' -А 3 )
і 2 ' , 5 ' -A 2 ( R A A) (2 ' ,5 ' -епоксиА 3 ) , синтезовані в Ін
ституті біоорганічної хімії АН Бєларусі [6 ].
Визначення анти-ВІЛ-активности Для тесту
вання анти-ВІЛ-активності 2 ' , 5 ' -А 3 та 2 \ 5 ' - е п о к -
сиА 3 використовували лімфобластоїдну лінію клі
тин МТ-4. ВІЛ-1 , штам В III, продукували в
суспензійній культурі лімфоцитів, яку було отри
мано в Інституті ім. Івановського РАН (Москва).
Клітини МТ-4 вирощували на середовищі R P M I -
1640 з 10 % ембріональної сироватки і гента-
міцином у дозі 100 о д / м л . Клітини інфікували
вірусом імунодефіциту людини в дозі 2 Ig I D 5 0 .
Здійснено дві серії дослідів. У першій — препарати
в нетоксичній концентрації (10~4 М) вносили в
клітини одночасно з вірусом та інкубували протя
гом 6 діб (37 °С, в атмосфері 5 % С 0 2 ) . У
культуральному середовищі визначали концент
рацію експресивного антигена р24 ВІЛ та його
інфекційний титр [7 ]. Як контроль використовува
ли азидотимідин, який широко застосовується в
практиці при лікуванні людей, уражених ВІЛ.
Друга серія дослідів передбачала попередню інку
бацію клітин з препаратами. Препарати 2 ' ,5 ' -А 3 та
2 ' ,5 ' -епоксиА 3 вносили в концентрації 10~4 М у
суспензію клітин МТ-4 та інкубували їх протягом
24 год. Далі клітини інфікували ВІЛ-1 та інку
бували протягом 6 діб при температурі 37 °С в
атмосфері 5 % С 0 2 . Потім у культуральному
середовищі визначали концентрацію антигена р24
ВІЛ та його інфекційний титр [7 ].
Активність інтерферону визначали в культу
ральному середовищі методом пригнічення цитопа-
тичної дії вірусу везикулярного стоматиту [8 ].
Визначення активності зворотної транскри
птази ретровірусів. Об 'єктом дослідження були
ендогенний ретровірус типу С, що продукується
перевивними клітинами мишачої лімфоми О Н - 1 , та
екзогенний ретровірус Молоні лейкозу мишей. Клі
тини ОН-1 вирощували на середовищі Ігла з глю
таміном, 10 % - м вмістом телячої ембріональної
сироватки та гентаміцину з розрахунку 100 о д / м л
середовища. Клітини вирощували протягом п 'яти
діб при температурі 37 °С. Вірус, продукований
цими клітинами, є типовим ретровірусом типу С із
щільністю віріона 1,16 г / см у градієнті щільності
цукрози. Вірус містить високомолекулярну Р Н К та
зворотну транскриптазу. Джерелом вірусу було
культуральне середовище, яке звільняли центри
фугуванням при 6000 g (15 хв) від уламків клітин.
Далі вірус осаджували протягом 1 год при 100000 g
крізь подушку 20 %- ї цукрози. Осад суспендували
в буфері (1 /100 відносно об 'єму культурального
середовища): 50 мМ трис-НСІ, рН 7,8, 60 мМ КС1
і 2 мМ дитіотреїтол.
Для репродукції вірусу Молоні використовува
ли культуру нормальних фібробластів мишей NIH
ЗТЗ. ї ї вирощували на середовищі RPMI з 10 % - м
вмістом ембріональної телячої сироватки та ген
таміцину із розрахунку 100 о д / м л середовища.
Клітини пересівали через три доби (1:10) після
обробки версеном з трипсином. Вірус лейкозу ми
шей Молоні одержували у вигляді 10 %-го філь
трату з гомогенату пухлин селезінки мишей лінії
BALB/c, заражених вірусом Молоні. Фільтрат одер
жували з Інституту експериментальної онкології
ім. Р . Є. Кавецького НАН України. Перед заражен
ням вірусом клітини NIH 3N3 обробляли ДЕАЕ-де-
кстраном (50 м к г / м л ) в ростовому середовищі без
сироватки протягом 4 год. Клітини промивали рос
товим середовищем без сироватки та покривали
моношар клітин фільтратом гомогенату пухлин в
об'ємі 0,5 мл протягом 1 год. Фільтрат одержували
центрифугуванням гомогенату при 6000 g. Надоса-
дову рідину фільтрували через міліпоровий фільтр
( J = 0,22 мкм) . Клітини після інкубації з філь
тратом промивали середовищем без сироватки, за
ливали підтримуючим середовищем та інкубували
до появи вірусу. Наявність вірусу визначали по
активності зворотної транскриптази. Потім клітини
пересівали, як звичайно, декілька разів, культу-
ральні середовища збирали для одержання очище
ного вірусу. Останні освітлювали центрифугуван
ням (6000 g, 30 хв) , далі ультрацентрифугували
при 100000 g (1 год). На дно центрифужної про
бірки наносили 2 мл 20 %-го розчину цукрози.
Осад суспендували в буфері в співвідношенні 1/100
до вихідного об 'єму культурального середовища.
Буфер містив трис-НСІ — 50 мМ, рН 8 ,1 , NaCl —
40 мМ, дитіотреїтол — 2 мМ. Отриману суспензію
використовували як вірусовмісний матеріал.
Активність зворотної транскриптази визна
чали [9] на матриці poly(rA) d ( p T ) , 0 (полірибо-
аденілова кислота — дезокситимідинова кислота)
(«СаІЬіоспет», С Ш А ) . Інкубаційна суміш в об'ємі
100 мкл містила 50 мМ трис-НСІ, рН 7,8, 60 мМ
КС1, 2 мМ дитіотреїтол, 0,2 мМ МпС1 2 , 0,1 %
об'єму тритону Х-100, 0,02 опт. од. поглинання
при 260 нм на пробу матриці , 1 мКі Н 3 Т Т Р
(метил-Н 3 ) (тимідин 5 ' -трифосфатамонієва сіль)
(«Amersham», Велика Британія) , питома активність
64 К і / м м о л ь та нем ічений тимідинтрифосфат
(«СаІЬіоспет») в концентрації 10~5 М, а також
50 мкл 100-кратного концентрату вірусної суспен
зії. До контрольної проби матрицю не вносили.
Досліджувані препарати 2 ' ,5 ' -олігоаденілатів: 2 , 5 -
А 3 та 2 ' ,5 ' -епоксиА 3 вносили в реакційну суміш у
315
ТКАЧУК 3. Ю. ТА ІН.
концентраціях 10~4 та 10~5 відповідно. Проби ін-
кубували протягом 1 год при 37 °С. По закінченні
реакції до проби додавали 1 мл водного розчину
БСА в концентрації 100 м к г / м л та ТХО кислоту до
кінцевої концентрації 10 % . Пробу наносили під
вакуумом на мембранні фільтри Синпор з діа
метром пор 0,4 мкм, промивали 5 % - ю ТХО та
фіксували 96 % - м спиртом, фільтри висушували
та вміщували в сцинтиляційні флакони з сцинти
лятором Ж С - 1 0 7 . Радіоактивність ТХО-нерозчин-
ної фракції визначали на рідинному лічильнику
«Intertechnique» (Франція) .
Результати т а обговорення. Результати до
слідів із впливу 2' ,5 '-олігоаденілатів на репро
дукцію (ВІЛ-1) показали, що при одночасному
введенні препаратів у концентрації 10~4 М та вірусу
в культуру клітин суттєвого впливу на репро
дукцію вірусу не відбувається.
Результати дослідів з попереднім введенням
2' ,5 '-олігоаденілатів (за 24 год до внесення вірусу)
показали, що препарати 2 ' , 5 ' -А 3 і 2 ' ,5 ' -епоксиА 3
пригнічують інфекційність ВІЛ. Як видно з таб
лиці , інфекційний титр ВІЛ при попередній ін
кубації клітин з 2 ' , 5 ' -А 3 свідчить про пригнічення
репродукції вірусу на 2 lg I D 5 0 , а при інкубації з
2 ' ,5 ' -епокси А 3 — на 1 lg I D 5 0 . Відомо, що препарат
2 ' ,5 ' -епоксиА 3 є стійким до дії клітинних фос-
фодіестераз, у той час як 2',5'-А 3 менш стійкий до
дії ферменту [10] . Для вияснення механізму дії
препаратів було проведено досліди на їхню інтер-
фероногенну активність, яку вивчали в експери
ментах на клітинах МТ-4 з попереднім введенням
(за 24 год) препаратів 2 ' ,5 ' -АЗ та 2 , 5 ' - е п о к с и А 3 в
концентрації 10~4 М перед інфікуванням ВІЛ.
Вплив 2\5'-Аъ та 2' ,5'-Аг(ккА) на рівень інтерферону та
репродукцію ВІЛ-J у культурі лімфобластоїдної лінії клітин
МТ-4
316
Було показано, що в зразках, оброблених пре
паратом, значно збільшується синтез інтерферону
порівняно з контролем. Із даних таблиці випливає,
що при обробці клітин препаратом 2 ' , 5 ' -А 3 кіль
кість інтерферону вища в 2 рази порівняно з
контролем. Препарат 2 ' ,5 ' -епоксиА 3 підвищує рі
вень інтерферону в 4 рази. Щ е одним із можливих
пояснень противірусної дії цих речовин відносно
ВІЛ-1 може бути вплив 2' ,5 '-олігоаденілатів на
активність зворотної транскриптази ретровірусів.
Для цього вивчали дію 2 ' ,5 ' -олігоА 3 на активність
зворотної транскриптази ендо- та екзогенних ре
тровірусів.
Отримані результати свідчать, що препарат
2 ' ,5 ' -А 3 в концентрації 10~5 М пригнічує активність
зворотної транскриптази ендогенного ретровірусу
типу С на 20 % , а препарат 2 ' ,5 ' -епоксиА 3 у тій же
концентрації — на 41 % (рис. 1, а). Збільшення
концентрації препаратів до 10~4 М знижує ак
тивність ферменту, у випадку 2 ' , 5 ' -А 3 на 42 %,
2 ' ,5 ' -епоксиА 3 — на 68 % ( рис 1, б).
Експерименти, проведені із зворотною транс-
криптазою екзогенного вірусу Молоні лейкозу ми
шей, також показали інгібуючу дію досліджуваних
препаратів. Препарат 2 ' , 5 ' -А 3 в концентрації 10~5 М
пригнічує активність ферменту на 25 %, а препа-
ДІЯ 2\5'-ТРИОЛІГОАДЕНІЛАТУ НА РЕПРОДУКЦІЮ ВІЛ-1
рат 2 ' , 5 ' - е п о к с и А 3 — на 57 % ( р и с 2, я ) . Збіль
шення концентрації препаратів до 10~4 М посилило
дію 2 ' , 5 ' -А 3 до 41 % , а 2 ' ,5 ' -епоксиА 3 — до 71 %
(рис. 2, б). Таким чином, з 'ясовано, що дефосфо-
рильований «кор» 2 ,5 ' -ол і гоА 3 , а також його епок-
сипохідне пригнічують активність зворотної транс
криптази обох вірусів, але епоксипохідне має знач
но більшу інгібуючу дію. Виявлено концентраційну
залежність даного ефекту.
Слід відмітити, що дія досліджуваних препа
ратів на зворотну транскриптазу ендо- та екзоген
ного ретровірусів майже однакова. З літератури
відомо, що кордиципінові аналоги 2 ' ,5 ' -олігоаде-
нілатів також пригнічують активність зворотної
транскриптази різною мірою — залежно від кон
центрації та хімічної будови препаратів [11] .
Вивчено кінетику інгібування зворотної транс
криптази 2-5А [8 ]. Кінетичне пригнічення було
змішаного типу, де 2-5А не жорстко конкурентне з
d T T P . Іншими авторами було показано, що 2-5А та
їхні похідні є неконкурентними інгібіторами утво
р е н н я к о м п л е к с у : п р а й м е р (HIV) — зворотна
транскриптаза [12] . Механізм та специфічність
пригнічуючої дії 2-5А та його похідних залежали
від модифікацій в рибозильній частині молекули,
довжини ланцюжка , ступеню 5 ' -фосфорилювання.
Рис. 2. Дія 2',5'-олігоаденілатів на активність зворотної транскриптази ендогенного ретровірусу Молоні (а, б): J — контроль; 2 —
концентрація 2 ' ,5 ' -А 3 1 • 10" 5 M (а) і 1 • 10" 4 М (б); 3 — 2' ,5 ' -епоксиА 3 — 1 • 10~ 5 M (а) і 1 • 10" 4 M (б)
317
ТКАЧУК 3. Ю. ТА ІН
Це пригнічення є специфічним для 2 ' ,5 ' -міжнук-
леотидного зв ' я зку , і 2 ' ,5 ' -похідні не мали інгібу
ючої активності.
В усіх випадках пригнічення праймер ВІЛ-1
транскриптазного комплексу показало перевагу 5 ' -
трифосфатної частини. Нефосфорильовані похідні
не були інгібіторами зворотної транскриптази. Ці
результати не узгоджуються з нашими даними, які
показали, що дефосфорильований «кор» 2 ' ,5 ' -оліго-
аденілат та його епоксипохідне є інгібіторами зво
ротної транскриптази ретровірусів. Таким чином,
противірусна дія досліджуваних препаратів від
носно ВІЛ-1 може пояснюватися також пригні
ченням активності зворотної транскриптази.
Оцінюючи отримані результати, можна зроби
ти припущення стосовно того, що 2' ,5 '-оліго-А
можуть бути перспективними у боротьбі зі СНІ Дом
та супутніми вірусними інфекціями.
3. Ю. Ткачук, С. Л. Рыбалко, Л. И. Семерникова, В. В, Ткачук,
М. П. Завелевич, Л. В. Ткачук, И. А. Михайлопуло,
Г. X. Мацука
Действие 2',5'-триолигоаденилата и его эпоксипроизводного на
репродукцию вируса иммунодефицита человека и на активность
обратной транскриптазы ретровирусов
Резюме
Исследовано действие 2' ,5'-триолигоаденилата (2',5'АрАрА) и
его эпоксипроизводного (2',5'-А2)(ЇІЛА) на репродукцию вируса
иммунодефицита человека (ВИЧ-1). Показано, что 2',5'-оли-
гоаденилаты угнетают репродукцию ВИЧ-J в случае их пред
варительной инкубации с клетками лимфобластоидной линии
МТ-4. Изучали возможные механизмы противовирусного дей
ствия 2',5'-олигоаденилатов, а именно: интерфероногенное
действие этих препаратов. Показано, что 2 ,5'АрАрА и 2' ,5'-
А2(цдА) увеличивают количество интерферона в клетках в 2
и 4 раза соответственно по сравнению с контролем. Показано
ингибирующее действие 2',5'-триолигоаденилатов на актив
ность обратной транскриптазы эндо- и экзогенных ретрови
русов. Предполагается, что 2',5'-триолигоаденилат и его
эпоксипроизводное могут быть использованы в борьбе против
ВИЧ-инфекции.
Z. Yu. Tkachuk, S. L. Rybalko, L. I. Semernikova, V. V. Tkachuk,
M. P. Zavelevich, L. V. Tkachuk, I. O. Mikhailopulo,
G. Kh. Matsuka
The effect of trimeric 2',5'-oligoadenylic acid and its epoxyderivative
on the human immunodeficiency virus reproduction and retroviruses
reverse transcriptase activity
Summary
The study of the effect of trimeric 2',5'-oligoadenylic acid
(2',5'ApApA) and its epoxyderivative (2',5'-А2(ъАА)) on both
human immunodeficiency virus (HIV-J) reproduction and retro
viruses reverse transcriptase activity was conducted. 2',5'-oligo-
adenylates were shown to suppress HIV-J reproduction in case of
their pre-incubation with the lymphoblastoid cells of MT-4 line. The
possible mechanisms of antivirial action of 2',5'-oligoadenylates
were under investigation, in particular, the interferonogenic effect of
the substances was examined. 2',5'ApApA and 2',5'-A2(RAA) were
shown to increase amounts of interferon in cells two and four-fold
respectively compared to control. The inhibitory effect of 2',5'-
oligoadenylates on activity of endogenous and exogenous
retroviruses reverse transcriptase was demonstrated. The trimeric
2',5' -oligoadenylic acid and its epoxyderivative may be used against
HIV infection.
СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ
\. Muller W. E., Schrodeer H. C. Alteration of (2'-5')oligo-
adenylatee metabolism and ribonuclease L activity in H-9 cells
by HIV / / Int. Conf. AIDS.—1989 .—P. 667.
2. Schrodeer H. C, Wender R., Kuchino Y., Muller W. E.
Modulation of nuclear matrix-associated 2',5'-oligoadenylate
metabolism and ribonuclease L activity in H9-cells by human
immunodeficiency virus / / J. Biol. C h e m . — 1 9 8 9 . — 2 6 4 ,
N 10.—P. 5669—5673 .
3. Veda M., Higasa S., Suehiro A., Kakishita E. Evaluation of
immuno-status in HIV disease using serum 2',5'-oligoadenylate
synthetase activity / / Int. Conf. AIDS.—1994 .—10, N 1.—
P. 158.
4. Schroder H. C , Kelve M., Muller W. E. The 2-5A system and
HIV infection / / Progr. Мої. and Subcell. Bio l .—1994.—14.—
P. 176—197.
5. Schroder H. C, Suhadolnik R. J., Pfleider W., Cliarubala R.,
Muller W. E. (2',5')-oligoadenylate and intracellular immunity
against retrovirus infection / / Int. J. Biochem.—1992.—24,
N 1.—P. 5 6 — 6 3 .
6. Mikhailopulo I. A., Baran E. A., Tkachuk L. V. Synthesis and
use in kidney transplantations in rabbits and monkeys of
(2\5')ol igoadenylate trimers modified at the 2'-terminus / /
4th Int. symp. on Molecular aspects of chemotherapy (23—25
June, 1993, Gdansk).—Gdansk, 1993.—P. 61.
7. Viscidy R., Farthadegun H., Laiyster F. et al. Enzyme
immunoassay for detection of human immunodeficiency virus
antigen in cell cultures / / J. Clin. Micro. — 1 9 8 8 . — 2 6 . —
P. 453—458.
8. Соловьев В. Д., Пектемиров Т. А. Интерфероны в теории
и практике медицины.—M.: Медицина, 1981.—С. 85—90.
9. Liu D. К, Owens G. F. Inhibition of viral reverse transcriptase
by 2',5'-oligoadenylates / / Biochem. and Biophys. Res. Com-
muns.—1987.—145, N 1.—P. 219—297 .
10. Козлов А. В., Ткачук 3. Ю. Изучение устойчивости различ
ных аналогов 2\5'-олигоаденилатов к действию фосфо-
диэстераз / / Биополимеры и клетка. —1994 . — 1 0 , № 1.—
С. 47—52 .
11. Montefiori D. С, Sobol R. W., Li Shi Wu, Reichenbach N. L
Phosphorothioate and cordycepin analogues of 2 \5 ' -o l igo-
adenylate: Inhibition of human immunodeficiency virus type 1
reverse transcriptase and infection in vitro II Proc. Nat. Acad.
Sci. USA.—1989 .—86 .—P. 7191—7194 .
12. Sobol R. W., Fisheer M I., Reichenbach N. L., Kumar A.,
Beard W. A., Wilson S. H., Charubala R., Pfleiderer W.,
Suhadolnik R. J. HIV-reverse transcriptase: inhibition by
2',5'-oligoadenylates / / Biochemistry.—1993.—32, N 45 .—
P. 12112—12118.
УДК 578.828:278.245.2
Надійшла до редакції 22.04.98
318
|