Action of booster immunization with E2 CSFV on immune response elicited by marker DNA-vaccine against CSF
Цель. Исследовать влияние бустерной иммунизации рекомбинантным фрагментом Е2 ВКЧС на гуморальный иммунный ответ, индуцированный кандидатной маркированной ДНК-вакциной против КЧС. Методы. Наличие фрагмента гена Е2 ВКЧС детектировали методом ПЦР, а экспрессию белка – продукта этого гена – иммуногистох...
Saved in:
| Published in: | Вiopolymers and Cell |
|---|---|
| Date: | 2012 |
| Main Authors: | , , , |
| Format: | Article |
| Language: | English |
| Published: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
2012
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156827 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Action of booster immunization with E2 CSFV on immune response elicited by marker DNA-vaccine against CSF / Ia.O. Pokholenko, T.P. Gulko, O.G. Deryabina, V.A. Kordium // Вiopolymers and Cell. — 2012. — Т. 28, № 2. — С. 134-140. — Бібліогр.: 17 назв. — англ., рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-156827 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Pokholenko, Ia.O. Gulko, T.P. Deryabina, O.G. Kordium, V.A. 2019-06-19T06:35:09Z 2019-06-19T06:35:09Z 2012 Action of booster immunization with E2 CSFV on immune response elicited by marker DNA-vaccine against CSF / Ia.O. Pokholenko, T.P. Gulko, O.G. Deryabina, V.A. Kordium // Вiopolymers and Cell. — 2012. — Т. 28, № 2. — С. 134-140. — Бібліогр.: 17 назв. — англ., рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000040 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156827 577.21 + 577.27:636.4:578.833.3 Цель. Исследовать влияние бустерной иммунизации рекомбинантным фрагментом Е2 ВКЧС на гуморальный иммунный ответ, индуцированный кандидатной маркированной ДНК-вакциной против КЧС. Методы. Наличие фрагмента гена Е2 ВКЧС детектировали методом ПЦР, а экспрессию белка – продукта этого гена – иммуногистохимическим методом. Титр антител, специфичных к целевому антигену, в сыворотке крови после иммунизации определяли с использованием ИФА. Результаты. Продемонстрировано, что кандидатная маркированная ДНК-вакцина трансфецирует in situ миоциты бицепса. На основе данных иммуногистохимического анализа установлено, что с введенной плазмидной конструкции осуществляется экспрессия фрагмента Е2 ВКЧС. Бустерная иммунизация рекомбинантным фрагментом Е2 ВКЧС после двух иммунизаций маркированной ДНК-вакциной приводит к увеличению титра антител к целевому антигену по сравнению с трехкратной иммунизацией ДНК-вакциной. Выводы. Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что использование бустерной иммунизации рекомбинантным фрагментом Е2 способствует усилению гуморального иммунного ответа на кандидатную маркированную ДНК-вакцину против КЧС. Ключевые слова: маркированная ДНК-вакцина, бустерная иммунизация, гуморальный иммунный ответ, вирус классической чумы свиней. Мета. Дослідити вплив бустерної імунізації рекомбінантним фрагметом Е2 ВКЧС на гуморальну імунну відповідь, індуковану кандидатною маркованою ДНК-вакциною проти КЧС. Методи. Наявність фрагмента гена Е2 ВКЧС детектували методом ПЛР, а експресію білка – продукту цього гена – імуногістохімічним методом. Титр антитіл, специфічних до цільового антигену, у сироватці крові після імунізації визначали, використовуючи ІФА. Результати. Продемонстровано, що кандидатна маркована ДНКвакцина in situ трансфікує міоцити біцепса. На основі даних імуногістохімічного аналізу встановлено, що з введеної плазмідної конструкції здійснюється експресія фрагмента Е2 ВКЧС. Бустерна імунізація рекомбінантним Е2 ВКЧС після двох імунізацій маркованою ДНК-вакциною спричиняє зростання титру антитіл до цільового антигену у порівнянні з триразовою імунізацією ДНК-вакциною. Висновки. Результати проведених досліджень свідчать про те, що використання бустерної імунізації рекомбінантним фрагментом Е2 сприяє посиленню гуморальної імунної відповіді на кандидатну марковану ДНК-вакцину проти КЧС. Ключові слова: маркована ДНК-вакцина, бустерна імунізація, гуморальна імунна відповідь, вірус класичної чуми свиней. The aim was to study the influence of booster immunization with recombinant fragment of E2 CSFV on humoral immune response, elicited by candidate marker DNA-vaccine against CSF. Methods. The fragment of E2 CSFV gene has been detected by PCR, and the expression of encoded protein – by immunohistochemical analysis. The anti-E2 antibodies in blood serum after immunization have been detected by ELISA. Results. It has been shown that candidate marker DNA-vaccine transfected myocytes of murine biceps in situ. The data of immuno-histochemical analysis revealed the expression of fragment of glycoprotein E2 CSFV from the plasmid introduced. The booster immunization with recombinant E2 led to the significant increase of the titer of antibodies specific to the antigen studied. Conclusions. The data obtained show that boosting with recombinant E2 enhances humoral immune response elicited by the candidate marker DNA-vaccine against CSF. Keywords: marker DNA-vaccine, booster immunization, humoral immune response, classical swine fever virus. en Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Вiopolymers and Cell Molecular and Cell Biotechnologies Action of booster immunization with E2 CSFV on immune response elicited by marker DNA-vaccine against CSF Вплив бустерної імунізації фрагментом Е2 ВКЧС на імунну відповідь, індуковану маркованою ДНК-вакциною проти КЧС Влияние бустерной иммунизации фрагмента Е2 ВКЧС на иммунный ответ, индуцированный маркированной ДНК-вакциной против КЧС Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Action of booster immunization with E2 CSFV on immune response elicited by marker DNA-vaccine against CSF |
| spellingShingle |
Action of booster immunization with E2 CSFV on immune response elicited by marker DNA-vaccine against CSF Pokholenko, Ia.O. Gulko, T.P. Deryabina, O.G. Kordium, V.A. Molecular and Cell Biotechnologies |
| title_short |
Action of booster immunization with E2 CSFV on immune response elicited by marker DNA-vaccine against CSF |
| title_full |
Action of booster immunization with E2 CSFV on immune response elicited by marker DNA-vaccine against CSF |
| title_fullStr |
Action of booster immunization with E2 CSFV on immune response elicited by marker DNA-vaccine against CSF |
| title_full_unstemmed |
Action of booster immunization with E2 CSFV on immune response elicited by marker DNA-vaccine against CSF |
| title_sort |
action of booster immunization with e2 csfv on immune response elicited by marker dna-vaccine against csf |
| author |
Pokholenko, Ia.O. Gulko, T.P. Deryabina, O.G. Kordium, V.A. |
| author_facet |
Pokholenko, Ia.O. Gulko, T.P. Deryabina, O.G. Kordium, V.A. |
| topic |
Molecular and Cell Biotechnologies |
| topic_facet |
Molecular and Cell Biotechnologies |
| publishDate |
2012 |
| language |
English |
| container_title |
Вiopolymers and Cell |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Вплив бустерної імунізації фрагментом Е2 ВКЧС на імунну відповідь, індуковану маркованою ДНК-вакциною проти КЧС Влияние бустерной иммунизации фрагмента Е2 ВКЧС на иммунный ответ, индуцированный маркированной ДНК-вакциной против КЧС |
| description |
Цель. Исследовать влияние бустерной иммунизации рекомбинантным фрагментом Е2 ВКЧС на гуморальный иммунный ответ, индуцированный кандидатной маркированной ДНК-вакциной против КЧС. Методы. Наличие фрагмента гена Е2 ВКЧС детектировали методом ПЦР, а экспрессию белка – продукта этого гена – иммуногистохимическим методом. Титр антител, специфичных к целевому антигену, в сыворотке крови после иммунизации определяли с использованием ИФА. Результаты. Продемонстрировано, что кандидатная маркированная ДНК-вакцина трансфецирует in situ миоциты бицепса. На основе данных иммуногистохимического анализа установлено, что с введенной плазмидной конструкции осуществляется экспрессия фрагмента Е2 ВКЧС. Бустерная иммунизация рекомбинантным фрагментом Е2 ВКЧС после двух иммунизаций маркированной ДНК-вакциной приводит к увеличению титра антител к целевому антигену по сравнению с трехкратной иммунизацией ДНК-вакциной. Выводы. Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что использование бустерной иммунизации рекомбинантным фрагментом Е2 способствует усилению гуморального иммунного ответа на кандидатную маркированную ДНК-вакцину против КЧС.
Ключевые слова: маркированная ДНК-вакцина, бустерная иммунизация, гуморальный иммунный ответ, вирус классической чумы свиней.
Мета. Дослідити вплив бустерної імунізації рекомбінантним фрагметом Е2 ВКЧС на гуморальну імунну відповідь, індуковану кандидатною маркованою ДНК-вакциною проти КЧС. Методи. Наявність фрагмента гена Е2 ВКЧС детектували методом ПЛР, а експресію білка – продукту цього гена – імуногістохімічним методом. Титр антитіл, специфічних до цільового антигену, у сироватці крові після імунізації визначали, використовуючи ІФА. Результати. Продемонстровано, що кандидатна маркована ДНКвакцина in situ трансфікує міоцити біцепса. На основі даних імуногістохімічного аналізу встановлено, що з введеної плазмідної конструкції здійснюється експресія фрагмента Е2 ВКЧС. Бустерна імунізація рекомбінантним Е2 ВКЧС після двох імунізацій маркованою ДНК-вакциною спричиняє зростання титру антитіл до цільового антигену у порівнянні з триразовою імунізацією ДНК-вакциною. Висновки. Результати проведених досліджень свідчать про те, що використання бустерної імунізації рекомбінантним фрагментом Е2 сприяє посиленню гуморальної імунної відповіді на кандидатну марковану ДНК-вакцину проти КЧС.
Ключові слова: маркована ДНК-вакцина, бустерна імунізація, гуморальна імунна відповідь, вірус класичної чуми свиней.
The aim was to study the influence of booster immunization with recombinant fragment of E2 CSFV on humoral immune response, elicited by candidate marker DNA-vaccine against CSF. Methods. The fragment of E2 CSFV gene has been detected by PCR, and the expression of encoded protein – by immunohistochemical analysis. The anti-E2 antibodies in blood serum after immunization have been detected by ELISA. Results. It has been shown that candidate marker DNA-vaccine transfected myocytes of murine biceps in situ. The data of immuno-histochemical analysis revealed the expression of fragment of glycoprotein E2 CSFV from the plasmid introduced. The booster immunization with recombinant E2 led to the significant increase of the titer of antibodies specific to the antigen studied. Conclusions. The data obtained show that boosting with recombinant E2 enhances humoral immune response elicited by the candidate marker DNA-vaccine against CSF.
Keywords: marker DNA-vaccine, booster immunization, humoral immune response, classical swine fever virus.
|
| issn |
0233-7657 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156827 |
| citation_txt |
Action of booster immunization with E2 CSFV on immune response elicited by marker DNA-vaccine against CSF / Ia.O. Pokholenko, T.P. Gulko, O.G. Deryabina, V.A. Kordium // Вiopolymers and Cell. — 2012. — Т. 28, № 2. — С. 134-140. — Бібліогр.: 17 назв. — англ., рос. |
| work_keys_str_mv |
AT pokholenkoiao actionofboosterimmunizationwithe2csfvonimmuneresponseelicitedbymarkerdnavaccineagainstcsf AT gulkotp actionofboosterimmunizationwithe2csfvonimmuneresponseelicitedbymarkerdnavaccineagainstcsf AT deryabinaog actionofboosterimmunizationwithe2csfvonimmuneresponseelicitedbymarkerdnavaccineagainstcsf AT kordiumva actionofboosterimmunizationwithe2csfvonimmuneresponseelicitedbymarkerdnavaccineagainstcsf AT pokholenkoiao vplivbusternoíímunízacíífragmentome2vkčsnaímunnuvídpovídʹíndukovanumarkovanoûdnkvakcinoûprotikčs AT gulkotp vplivbusternoíímunízacíífragmentome2vkčsnaímunnuvídpovídʹíndukovanumarkovanoûdnkvakcinoûprotikčs AT deryabinaog vplivbusternoíímunízacíífragmentome2vkčsnaímunnuvídpovídʹíndukovanumarkovanoûdnkvakcinoûprotikčs AT kordiumva vplivbusternoíímunízacíífragmentome2vkčsnaímunnuvídpovídʹíndukovanumarkovanoûdnkvakcinoûprotikčs AT pokholenkoiao vliâniebusternoiimmunizaciifragmentae2vkčsnaimmunnyiotvetinducirovannyimarkirovannoidnkvakcinoiprotivkčs AT gulkotp vliâniebusternoiimmunizaciifragmentae2vkčsnaimmunnyiotvetinducirovannyimarkirovannoidnkvakcinoiprotivkčs AT deryabinaog vliâniebusternoiimmunizaciifragmentae2vkčsnaimmunnyiotvetinducirovannyimarkirovannoidnkvakcinoiprotivkčs AT kordiumva vliâniebusternoiimmunizaciifragmentae2vkčsnaimmunnyiotvetinducirovannyimarkirovannoidnkvakcinoiprotivkčs |
| first_indexed |
2025-11-27T09:35:31Z |
| last_indexed |
2025-11-27T09:35:31Z |
| _version_ |
1850809821556637696 |
| fulltext |
134
MOLECULAR AND CELL BIOTECHNOLOGIES
UDC 577.21 + 577.27:636.4:578.833.3
Âëèÿíèå áóñòåðíîé èììóíèçàöèè ôðàãìåíòîì
Å2 ÂÊ×Ñ íà èììóííûé îòâåò, èíäóöèðîâàííûé
ìàðêèðîâàííîé ÄÍÊ-âàêöèíîé ïðîòèâ Ê×Ñ
ß. À. Ïî õî ëåí êî, Ò. Ï. Ãóëü êî, Å. Ã. Äå ðÿ áè íà1, Â. À. Êîð äþì
Èíñòè òóò ìî ëå êó ëÿð íîé áè î ëî ãèè è ãå íå òè êè ÍÀÍ Óêðà è íû
Óë. Àêàäåìèêà Çà áî ëîò íî ãî, 150, Êèåâ, Óêðà è íà, 03680
1Èíñòè òóò âå òå ðè íàð íîé ìå äè öè íû ÍÀÀÍ Óêðà è íû
Óë. Äî íåö êàÿ, 30, Êèåâ, Óêðà è íà, 03151
yasnenka@gmail.com
Öåëü. Èññëå äî âàòü âëè ÿ íèå áóñ òåð íîé èì ìó íè çà öèè ðå êîì áè íàí òíûì ôðàã ìåí òîì Å2 ÂÊ×Ñ íà ãó ìî -
ðàëü íûé èì ìóí íûé îò âåò, èí äó öè ðî âàí íûé êàí äè äàò íîé ìàð êè ðî âàí íîé ÄÍÊ-âàê öè íîé ïðî òèâ Ê×Ñ.
Ìå òî äû. Íà ëè ÷èå ôðàã ìåí òà ãåíà Å2 ÂÊ×Ñ äå òåê òè ðî âà ëè ìå òî äîì ÏÖÐ, à ýêñ ïðåñ ñèþ áåë êà – ïðî -
äóê òà ýòî ãî ãåíà – èì ìó íî ãèñ òî õè ìè ÷åñ êèì ìå òî äîì. Òèòð àí òè òåë, ñïå öè ôè÷ íûõ ê öå ëå âî ìó àí òè -
ãå íó, â ñû âî ðîò êå êðî âè ïî ñëå èì ìó íè çà öèè îïðå äå ëÿ ëè ñ èñ ïîëü çî âà íè åì ÈÔÀ. Ðå çóëü òà òû. Ïðî äå ìîí-
ñòðè ðî âà íî, ÷òî êàí äè äàò íàÿ ìàð êè ðî âàí íàÿ ÄÍÊ-âàê öè íà òðàíñ ôå öè ðó åò in situ ìè î öè òû áè öåï ñà.
Íà îñíî âå äàí íûõ èì ìó íî ãèñ òî õè ìè ÷åñ êî ãî àíà ëè çà óñòà íîâ ëå íî, ÷òî ñ ââå äåí íîé ïëàç ìèä íîé êîíñò-
ðóê öèè îñó ùå ñòâëÿ åò ñÿ ýêñ ïðåñ ñèÿ ôðàã ìåí òà Å2 ÂÊ×Ñ. Áóñ òåð íàÿ èì ìó íè çà öèÿ ðå êîì áè íàí òíûì
ôðàã ìåí òîì Å2 ÂÊ×Ñ ïî ñëå äâóõ èì ìó íè çà öèé ìàð êè ðî âàí íîé ÄÍÊ-âàê öè íîé ïðè âî äèò ê óâå ëè ÷å íèþ
òèò ðà àí òè òåë ê öå ëå âî ìó àí òè ãå íó ïî ñðàâ íå íèþ ñ òðåõ êðàò íîé èì ìó íè çà öè åé ÄÍÊ-âàê öè íîé. Âû âî -
äû. Ðå çóëü òà òû ïðî âå äåí íûõ èñ ñëå äî âà íèé ñâè äå ò åëüñòâó þò î òîì, ÷òî èñ ïîëü çî âà íèå áóñ òåð íîé èì -
ìó íè çà öèè ðå êîì áè íàí òíûì ôðàã ìåí òîì Å2 ñïî ñî áñòâó åò óñè ëå íèþ ãó ìî ðàëü íî ãî èì ìóí íî ãî îò âå òà
íà êàí äè äàò íóþ ìàð êè ðî âàí íóþ ÄÍÊ-âàê öè íó ïðî òèâ Ê×Ñ.
Êëþ ÷å âûå ñëî âà: ìàð êè ðî âàí íàÿ ÄÍÊ-âàê öè íà, áóñ òåð íàÿ èì ìó íè çà öèÿ, ãó ìî ðàëü íûé èì ìóí íûé îò âåò,
âè ðóñ êëàñ ñè ÷åñ êîé ÷óìû ñâè íåé.
Ââå äå íèå. Êëàñ ñè ÷åñ êàÿ ÷óìà ñâè íåé (Ê×Ñ) ÿâ ëÿ -
åò ñÿ îïàñ íûì âû ñî êî êîí òà ãè îç íûì èí ôåê öè îí -
íûì çà áî ëå âà íè åì. Îíà âõî äèò â ñïè ñîê À Ìåæ äó -
íà ðîä íî ãî ýïè çî î òè ÷åñ êî ãî áþðî. Ïå ðè î äè ÷åñ êèå
âñïûø êè ýòîé áî ëåç íè, íà áëþ äà å ìûå ïî âñå ìåñ òíî,
çà èñ êëþ ÷å íè åì ÑØÀ, Êà íà äû, Àâñòðàëèè, Íî âîé
Çå ëàí äèè, Èñëàí äèè, Èðëàí äèè, Íîð âå ãèè è Øâå -
öèè, íà íî ñÿò çíà ÷è òåëü íûé óùåðá æè âîò íî âîäñò-
âó. Âîç áó äè òå ëåì ýòî ãî çà áî ëå âà íèÿ ÿâ ëÿ åò ñÿ ïðåä-
ñòà âè òåëü ñå ìå éñòâà Flaviviridae – âè ðóñ êëàñ ñè -
÷åñ êîé ÷óìû ñâè íåé (ÂÊ×Ñ). Èìå þ ùè å ñÿ íà ðûí -
êå àò òå íó è ðî âàí íûå âàê öè íû ïðî òèâ Ê×Ñ íå ïî -
çâî ëÿ þò ñå ðî ëî ãè ÷åñ êè îò ëè ÷èòü ïî ñòèí ôåê öè îí-
íûé è ïî ñòâàê öè íàëü íûé èì ìó íè òå òû. Ýòîò àñ ïåêò
îñî áåí íî àê òó à ëåí ïðè âû ÿâ ëå íèè õðî íè ÷åñ êè èí-
ôè öè ðî âàí íûõ æè âîò íûõ, ó êî òî ðûõ â òå ÷åíèå äëè-
òåëü íî ãî âðå ìå íè íåò êëè íè ÷åñ êèõ ïðî ÿâ ëåíèé çàáî-
ëå âà íèÿ, âñëå äñòâèå ÷åãî îíè ìî ãóò ÿâ ëÿòü ñÿ èñ òî÷-
íèêîì ðàñ ïðîñ òðà íå íèÿ âè ðó ëåí òíî ãî ÂÊ×Ñ â ïîïó-
ëÿ öèè. Èñõî äÿ èç ýòî ãî âî ìíî ãèõ ñòðà íàõ, âêëþ ÷àÿ
ñòðà íû Åâðî ïåé ñêî ãî ñî äðó æåñ òâà, ïðàê òè êó åò ñÿ ïîë-
íàÿ ýëè ìè íà öèÿ èí ôè öè ðî âàí íî ãî è ïî òåí öè àëü íî
èíôè öè ðî âàí íî ãî ïî ãî ëîâüÿ è çà ïðåò íà âàê öè íà öèþ
ïðî òèâ Ê×Ñ.
Íà ñå ãî äíÿø íèé äåíü íà ðûí êå ïî ÿ âè ëàñü ïåð âàÿ
ìàð êè ðî âàí íàÿ ñóá ú å äè íè÷ íàÿ âàê öè íà ïðî òèâ Ê×Ñ,
áà çè ðó þ ùà ÿ ñÿ íà èñ ïîëü çî âà íèè îñíîâ íî ãî ïðî òåê -
òèâ íî ãî àí òè ãå íà Å2 ãëè êîï ðî òå è íà ÂÊ×Ñ [1]. Îä-
ISSN 0233–7657. Biopolymers and Cell. 2012. Vol. 28. N 2. P. 134–140
Ó Institute of Molecular Biology and Genetics, NAS of Ukraine, 2012
135
ÂËÈßÍÈÅ ÁÓÑÒÅÐÍÎÉ ÈÌÌÓÍÈÇÀÖÈÈ Å2 ÂÊ×Ñ ÍÀ ÈÌÌÓÍÍÛÉ ÎÒÂÅÒ ÏÐÎÒÈ Ê×Ñ
íà êî, ñî ãëàñ íî ëè òå ðà òóð íûì äàí íûì, îíà ìå íåå ýô -
ôåê òèâ íà, ÷åì, íà ïðè ìåð, àò òå íó è ðî âàí íàÿ âàê öè íà èç
øòàì ìà «Ñ». À ïî ñêîëü êó èìåí íî íà ïðÿ æåííîñòü ãó -
ìî ðàëü íî ãî èì ìóí íî ãî îò âå òà ÿâ ëÿ åò ñÿ êëþ ÷å âûì ôàê -
òî ðîì, îïðå äå ëÿ þ ùèì âîç ìîæ íîñòü èí ôèöè ðî âà íèÿ
æè âîò íî ãî ÂÊ×Ñ è ðàç âè òèå äëè òåëüíî ãî áåñ ñèìï-
òîì íî ãî âè ðó ñî íî ñè ò åëüñòâà [2], ïî èñ êè ýô ôåê òèâ íîé
ìàð êè ðî âàí íîé âàê öè íû ïðî òèâ ýòî ãî çà áî ëå âà íèÿ îñ-
òà þò ñÿ àê òó àëü íûì íà ïðàâ ëå íè åì â âå òå ðè íàð íîé âè -
ðó ñî ëî ãèè.
 ïðå âà ëè ðó þ ùåì êî ëè ÷åñ òâå ðà áîò, ïî ñâÿ ùåí íûõ
ñî çäà íèþ ìàð êè ðî âàí íîé ÄÍÊ-âàê öè íû ïðî òèâ Ê×Ñ,
èñ ïîëü çó åò ñÿ ïî ëíàÿ ïî ñëå äî âà òåëü íîñòü ãå íà ãëè -
êîï ðî òå è íà Å2 ÂÊ×Ñ [3–5].  òî æå âðå ìÿ äèô ôå ðåí-
öèðî âàòü ïî ñòâàê öè íàëü íûé è ïî ñòèí ôåê öè îí íûé èì-
ìó íè òå òû ó æè âîò íûõ ïðåä ïî ëà ãà åò ñÿ çà ñ÷åò ïðè ìå -
íå íèÿ òåñò-ñèñ òåì äëÿ âû ÿâ ëå íèÿ àí òè òåë ê Årns. Ñëå -
äó åò îò ìå òèòü, ÷òî äëÿ ñî çäà íèÿ ÄÍÊ-âàê öè íû â ðà áî -
òàõ [6, 7] èñ ïîëü çî âà íû ôðàã ìåí òû ãå íà Å2, íå ñî äåð -
æà ùèå ïî ñëå äî âà òåëü íîñ òè, êî äè ðó þ ùèå ñèã íàëü íûé
ïåï òèä è òðàíñ ìåì áðàí íûé äî ìåí, òîã äà êàê âñå àí òè -
ãåí íûå ñóá äîìå íû ñî õðà íå íû, êàê ó áåë êà äè êî ãî òè ïà.
 ñâî åé ïðåäû äó ùåé ðà áî òå ìû ñî îá ùè ëè î ñî çäà -
íèè êàí äè äàò íîé ìàð êè ðî âàí íîé ÄÍÊ-âàê öè íû ïðî -
òèâ Ê×Ñ íà îñíî âå ôðàã ìåí òà ãåíà, êî äè ðó þ ùå ãî àí -
òè ãåí íûå ñóá äî ìå íû À è D ãëè êîï ðî òå è íà Å2 ÂÊ×Ñ
[8].
Ïðå è ìó ùåñ òâîì ïðåä ëà ãà å ìî ãî íà ìè ïîä õî äà ÿâ -
ëÿ åò ñÿ èñ ïîëü çî âà íèå ðàç íûõ àí òè ãåí íûõ ñóá äî ìå íîâ
Å2 äëÿ ðàç ðà áîò êè êàê ìàð êè ðî âàí íîé ÄÍÊ-âàê öè íû,
òàê è äè àã íîñ òè êóìà íà áà çå ðå êîì áè íàí òíî ãî áåë êà,
÷òî ïî çâî ëèò ïî âû ñèòü òî÷ íîñòü äèô ôå ðåí öè à öèè ïî -
ñòâàê öè íàëü íî ãî è ïî ñòèí ôåê öè îí íî ãî èì ìó íè òå òîâ ó
æè âîò íûõ çà ñ÷åò äå òåê öèè àí òè òåë ñðà çó ê äâóì
ïðîòåê òèâ íûì àí òè ãå íàì Å2 (ñóá äî ìå íàì Â è Ñ) è Årns.
 ïî ñëåä íåå âðå ìÿ â ëè òå ðà òó ðå ïî ÿ âè ëèñü äàí íûå
î òîì, ÷òî áóñ òåð íàÿ èì ìó íè çà öèÿ ðå êîì áèíàí òíûì
áåë êîì [9] èëè ðå êîì áè íàí òíûì âè ðó ñîì, íà ïðè ìåð
àäå íî âè ðó ñîì [10, 11], ïî ñëå ïðè ìè ðî âà íèÿ ÄÍÊ-âàê-
öè íîé ìî æåò çíà ÷è òåëü íî óñè ëèòü èì ìóí íûé îò âåò íà
ÄÍÊ-âàê öè íà öèþ.
Òà êèì îá ðà çîì, öåëüþ äàí íîé ðà áî òû áû ëî èñ ñëå -
äî âà íèå âëè ÿ íèÿ áóñ òåð íîé èì ìó íè çà öèè ðå êîì áè -
íàí òíûì ôðàã ìåí òîì Å2 ÂÊ×Ñ íà ãó ìî ðàëü íûé èì -
ìóí íûé îò âåò, èí äó öè ðî âàí íûé êàí äè äàò íîé ìàð êè -
ðî âàí íîé ÄÍÊ-âàê öè íîé ïðî òèâ Ê×Ñ.
Ìà òå ðè à ëû è ìå òî äû. Èñïîëü çî âà íû øòàì -
ìû Escherichia coli Sure®2 («Stratagene», ÑØÀ)
è BL 21 (DE3) («Novagen», Ãåð ìà íèÿ). Ïðå ïà ðà -
òû ïëàç ìèä íîé ÄÍÊ âû äå ëÿ ëè è î÷è ùà ëè ùå -
ëî÷ íûì ëè çè ñîì ñ ïî ñëå äó þ ùåé äåï ðî òå è íè çà -
öè åé ñìåñüþ ôå íîë–õëî ðî ôîðì â ñî îò âå òñòâèè ñ
ìå òî äà ìè, îïè ñàí íû ìè â [12–14 ].
Èììó íè çà öèÿ. Ýêñïå ðè ìåí òû ïðî âî äè ëè íà
ñàì êàõ ìû øåé ëè íèè BALB/c (ðàç âå äå íèå ÈÌÁèÃ
ÍÀÍ Óêðà è íû) â âîç ðàñ òå 2–2,5 ìåñ. Âñå ìà íè-
ïóëÿ öèè ñ æè âîò íû ìè ïðî âî äè ëè ñ èñ ïîëü çî âà -
íèåì ñå äà òèâ íûõ è àíåñ òå çè ðó þ ùèõ ïðå ïà ðà òîâ
â ñî îò âå òñòâèè ñ òðå áî âà íè ÿ ìè âå òå ðè íàð íî ãî çà -
êî íî äà ò åëüñòâà. Äëÿ èñ ñëå äî âà íèÿ ýêñ ïðåñ ñèè
ôðàã ìåí òà Å2 ÂÊ×Ñ in situ æè âîò íûì (n = 6) îä -
íî êðàò íî ââî äè ëè âíóò ðè ìû øå÷ íî â áè öåïñ ïî
100 ìêã pTR-BKneo–, ðàñ òâî ðåí íîé â 100 ìêë ôè -
çè î ëî ãè ÷åñ êî ãî ðàñ òâî ðà. Êîí òðîëü íûì æè âîò -
íûì èíú å öè ðî âàëè ïî 100 ìêã èñ õîä íî ãî âåê òî ðà
pTR-UFneo–. Ìî íè òî ðèíã ýêñ ïðå ñèè èñ ñëå äó å ìî -
ãî ôðàã ìåí òà ïðî âî äè ëè íà 3-è ñóò ïî ñëå ââå äå -
íèÿ ïðå ïà ðà òà. Êîì áè íè ðî âàí íóþ èì ìó íè çà öèþ
æèâîò íûõ îñó ùå ñòâëÿ ëè ïî ñõå ìå, îïè ñàí íîé â
«Ðå çóëü òà òàõ è îá ñóæ äå íèè». Êî ëè ÷åñ òâî æè âîò -
íûõ â êàæ äîé ãðóï ïå ñî ñòàâ ëÿ ëî ñåìü. Êðîâü äëÿ
âû äå ëå íèÿ ñû âî ðîò êè ïî ëó ÷à ëè ðåò ðî îð áè òàëü -
íîé ïóí êöè åé íà 21-, 42- è 65-å ñóò ïî ñëå íà ÷à ëà
èì ìó íè çà öèè; ñû âî ðîò êó êðî âè – êàê îïè ñà íî â
[8].
Èììó íî ãèñ òî õè ìè ÷åñ êîå îïðå äå ëå íèå ýêñ-
ïðå ññèè ôðàã ìåí òà Å2 ÂÊ×Ñ in situ. Íà 3-è ñóò
ïî ñëå ââå äå íèÿ ïðå ïà ðà òà ïëàç ìèä íîé ÄÍÊ ìû -
øåé âû âî äè ëè èç ýêñ ïå ðè ìåí òà. Áè öåïñ âû äå ëÿ -
ëè, ïî ìå ùà ëè íà ïðåä ìåò íûé ñòî ëèê êðè îñ òàò -
íîé óñòà íîâ êè ïðè òåì ïå ðà òó ðå –25 îÑ è ãî òî âè -
ëè ñå ðèé íûå ñðå çû òîë ùè íîé 20 ìêì, êî òî ðûå
ôèê ñè ðî âà ëè 0,25 %-ì âîä íûì ðàñ òâî ðîì ãëó òà -
ðî âî ãî àëü äå ãè äà íà ïðî òÿ æå íèè 5 ìèí. Èììóíî-
ãèñ òî õè ìè ÷åñ êîå îïðå äå ëå íèå ýêñ ïðåñ ñèè ôðàã-
ìåí òà Å2 îñó ùå ñòâëÿ ëè ïî ñëå äó þ ùåé ìå òî äè êå:
íà ñðå çû íà íî ñè ëè ïåð âè÷ íûå àí òèòå ëà (ãè ïåð-
èì ìóí íàÿ ñû âî ðîò êà ñâèíüè, ïî ëó ÷åí íàÿ, êàê îïè-
ñà íî â [8]) â ðà áî ÷åì ðàç âå äå íèè 1:1000 â ôîñ-
ôàò íî-ñî ëå âîì áó ôå ðå, ðÍ 7,4, ñî äåð æà ùåì 0,05 %
òâèí-20 (ÔÑÁÒ) è 1 % îá åç æè ðåí íî ãî ìî ëî êà.
Èíêó áè ðî âà ëè ïðè òåì ïå ðà òó ðå 37 îÑ â òå ÷å íèå
136
ÏÎ ÕÎ ËÅÍ ÊÎ ß. À., ÃÓËÜÊÎ Ò. Ï., ÄÅÐßÁÈÍÀ Î. Ã., ÊÎÐÄÞÌ Â. À.
2 ÷. Ñðå çû ïðî ìû âà ëè òðè ðàçà ÔÑÁÒ è íà íî ñè ëè àí-
òè òå ëà ê èì ìó íîã ëî áó ëè íàì ñâèíüè («Sigma»,
ÑØÀ), êîíú þ ãè ðî âàí íûå ñ ïå ðîê ñè äà çîé õðå íà, â
ðà áî ÷åì ðàç âå äå íèè 1:500. Èíêó áè ðî âà ëè â òå ÷å -
íèå 2 ÷. Ñðå çû ïðî ìû âà ëè ïÿòü ðàç ÔÑÁÒ.  êà ÷åñ -
òâå õðî ìî ãå íà èñ ïîëü çî âàí 3-àìè íî ý òèë êàð áà çîëü
(«Sigma»). Ñðå çû äî ïîë íè òåëü íî îêðà øè âà ëè 1
%-ì âîä íûì ðàñ òâî ðîì àçó ðà-²².
Ñóì ìàð íóþ ÄÍÊ èç òêà íè áè öåï ñà âû äå ëÿ ëè
ýêñ òðàê öè åé ñìåñüþ ôå íîë–õëî ðî ôîðì ñî ãëàñ íî
ìå òî äè êå [15].
Äå òåê öèÿ ôðàã ìåí òà ãå íà Å2 ÂÊ×Ñ ñ ïî ìîùüþ
ÏÖÐ. Äëÿ òåñ òè ðî âà íèÿ òðàíñ ãå íà ìå òî äîì ÏÖÐ ïî-
äîá ðà íà ïà ðà ïðàé ìå ðîâ: Å2asn – 5'-GGCACCAAA
ATCAACGGGAC-3' è E2sn – 5'-GGGAGTCCGTC
AGCCTCAT-3'. Ðå àê öè îí íàÿ ñìåñü ñî äåð æà ëà 100 íã
ñóì ìàð íîé ÄÍÊ. Àìïëèôèêàöèþ ôðàã ìåí òà ãå íà
ãëè êîï ðî òå è íà Å2 ÂÊ×Ñ ïðî âî äè ëè íà ÄÍÊ-àìï-
ëè ôè êà òî ðå «Òåð öèê» («ÄÍÊ-òåõ íî ëî ãèè», ÐÔ) ïî
ñëå äó þ ùåé ñõå ìå: äå íà òó ðà öèÿ ÄÍÊ – 95 îÑ, 30 ñ;
îò æèã ïðàé ìå ðîâ – 60 îÑ, 30 ñ; ýëîí ãà öèÿ – 72 îÑ,
1 ìèí. Ïîñ ëå çà âåð øå íèÿ ïðî öåñ ñà ïðî äóê òû àì -
ïëè ôè êà öèè ðàç äå ëÿ ëè ìå òî äîì ãåëü-ýëåê òðî ôî ðå -
çà â 0,8 %-ì àãà ðîç íîì ãå ëå.
Ýêñïðåñ ñèÿ â êëåò êàõ E. coli øòàì ìà BL (DE3)
ôðàã ìåí òà Å2 ÂÊ×Ñ è åãî î÷èñ òêà. Áàê òå ðè àëü íóþ
êóëü òó ðó âû ðà ùè âà ëè íà ïè òà òåëü íûõ ñå ðå äàõ LB
[12], BactoTMBrain heart infusion Porcine («BD Bio-
sciences», ÑØÀ) (äà ëåå ñðå äà II) è Bacto NZCYM
Broth («Difco», ÑØÀ) (äà ëåå ñðå äà NZCYM), ñî -
äåð æà ùèõ êà íà ìè öèí è ãëþ êî çó â êî íå÷ íîé êîí -
öåí òðà öèè 50 ìêã/ìë è 0,5 % ñî îò âå òñòâåí íî. Â ïè -
òà òåëü íóþ ñðå äó âíî ñè ëè èíî êó ëÿò êëå òîê E. coli
BL(DE3)/pET24ap-csfc@rev, ïðåä âà ðè òåëü íî âû ðà -
ùåí íûé ïðè òåì ïå ðà òó ðå 37 îÑ íà ïðî òÿ æå íèè 16–
18 ÷. Ñî îò íî øå íèå îá ú å ìîâ èíî êó ëÿ òà è ïè òà òåëü -
íîé ñðå äû ñî ñòàâ ëÿ ëî 1:100. Êóëü òó ðó âû ðà ùè âà ëè
â óñëî âè ÿõ èí òåí ñèâ íîé àý ðà öèè (160 îá/ìèí) ïðè
òåì ïå ðà òó ðå 37 îÑ äî äîñ òè æå íèÿ îïòè ÷åñ êîé ïëîò -
íîñ òè À600 = 2, ïî ñëå ÷å ãî äëÿ èí äóê öèè ñèí òå çà öå -
ëå âî ãî ïðî äóê òà âíî ñè ëè ðàñ òâîð èçî ïðî ïèë-b-D-
òè î ãà ëàê òî çè äà (ÈÏÒÃ, «MBI Fermentas», Ëèò âà) äî
êî íå÷ íîé êîí öåí òðà öèè 1 ìÌ è ïðî äîë æà ëè êóëü -
òè âè ðî âà íèå øòàì ìà-ïðî äó öåí òà â ýòèõ æå óñëî âè -
ÿõ â òå ÷å íèå 4–16 ÷. Âû äå ëå íèå òå ëåö âêëþ ÷å íèÿ,
ñî äåð æà ùèõ ôðàã ìåíò Å2, ïðî âî äè ëè, êàê îïè ñà íî
â [16]. Èçî ëè ðî âàí íûå òåëü öà âêëþ ÷å íèÿ ñî ëþ áè -
ëè çè ðî âà ëè â áó ôåð íîì ðàñ òâî ðå, ñî äåð æà ùåì 8 Ì
ìî ÷å âè íó è 0,1 Ì ÄÒÒ). Ñî ëþ áè ëè çè ðî âàí íûé áå -
ëîê ïå ðå âîäè ëè â áó ôåð íûé ðàñ òâîð, íå ñî äåð æà -
ùèé ìî ÷å âè íû è ÄÒÒ, ñ ïî ìîùüþ ãåëü-ôè ëüòðà öèè
íà ñå ôà äåê ñå G-25 («GE Healthcare», ÑØÀ). Õðî ìà -
òîã ðà ôè ÷åñ êóþ î÷èñ òêó ïðå ïà ðà òîâ îñó ùå ñòâëÿ ëè
íà Q Sepharose XL («GE Healthcare»). Ïî ëó ÷åí íûå
ôðàê öèè àíà ëè çèðîâà ëè ãåëü-ýëåê òðî ôî ðå çîì ïî ìå -
òî äó Ëýììëè â 13 %-ì ÑÄÑ-ÏÀÀÃ [12]. Ñî äåð æà -
íèå öå ëå âî ãî áåë êà â ëè çà òå êëå òîê E. coli îöå íè âà -
ëè ìå òî äîì äåí ñè òî ìåò ðèè ýëåê òðî ôî ðåã ðàìì ñ
ïî ñëå äó þ ùèì àíà ëè çîì â ïðî ãðàì ìå «Total Lab»
(ÑØÀ).
Àíòèòåëà, ñïå öè ôè÷ íûå ê ôðàã ìåí òó Å2 ÂÊ×Ñ,
â ñû âî ðîò êå êðî âè ìû øåé îïðåäå ëÿ ëè ìå òî äîì òâåð-
äî ôàç íî ãî èì ìó íî ôåð ìåí òíî ãî àíà ëè çà ñî ãëàñ íî
ìåòî äè êå [8]. Ðå çóëü òà òû ïðåä ñòàâ ëå íû â âè äå ñðåä-
íå ãî çíà ÷å íèÿ ïî êà çà òå ëÿ îïòè ÷åñ êîé ïëîò íîñ òè â
èñ ïîëü çó å ìîì ðàç âå äå íèè ± ñðåä íåñ òà òèñ òè ÷åñ êîå
îò êëî íå íèå (n = 7). Äëÿ îöåí êè çíà ÷è ìîñ òè ðàç ëè-
÷èé èñ ïîëü çî âàí íå ïà ðà ìåò ðè ÷åñ êèé êðè òå ðèé Ìàí-
íà-Óèò íè (U). Ïî êà çà òåëü ñå ðî êîí âåð ñèè âû ÷èñ ëÿ -
ëè â ïðî öåí òàõ ïî ñî îò íî øå íèþ ÷èñ ëà ñû âî ðî òîê
æè âîò íûõ ñ òèò ðà ìè àí òè-Å2 àí òè òåë > 1/50, ïî ëó-
÷åí íû ìè ïî ñëå âàê öè íà öèè, ê îá ùå ìó ÷èñ ëó èñ ñëå-
äî âàí íûõ ñû âî ðî òîê. Ðå çóëü òà òû ïðåä ñòàâ ëå íû â
âè äå ñðåä íå ãî çíà ÷å íèÿ ïî êà çà òå ëÿ (ïî ëó ÷åí íî ãî ó
òðåõ ãðóïï ïî ñåìü æè âîò íûõ â êàæ äîé ãðóï ïå).
Ðå çóëü òà òû è îá ñóæ äå íèå. Â íà øåé ïðåä û äó -
ùåé ðà áî òå in vitro ïî êà çà íî, ÷òî ñ ñî çäàí íîé ðå -
êîì áè íàí òíîé ïëàç ìè äû pTR-BKneo– ïî ñëå ââå -
äåíèÿ åå â êëåò êè ëè íèè ÑÍÎ-Ê1 ýêñ ïðåñ ñè ðó åòñÿ
ôðàã ìåíò Å2 ÂÊ×Ñ [8]. Îäíèì èç êëþ ÷å âûõ ýòà ïîâ
ïðè ðàç ðà áîò êå ÄÍÊ-âàê öèí, êàê è äðó ãèõ ãå íî òå -
ðà ïåâ òè ÷åñ êèõ ïðå ïà ðà òîâ, ÿâ ëÿ åò ñÿ ïîä òâåð æäå -
íèå ïå ðåíå ñå íèÿ ãå íå òè ÷åñ êî ãî ìà òå ðè à ëà, à èìåí -
íî – öå ëå âî ãî ãå íà èëè ãå íîâ â êëåò êè-ìè øå íè îð-
ãà íèç ìà-ðå öè ïè åí òà, à òàê æå ïîä òâåð æäå íèå ôóíê -
öè î íàëü íîé àê òèâ íîñ òè ñî çäàí íûõ ðå êîì áè íàíò-
íûõ ìî ëå êóë in situ. Íà ëè ÷èå òðàíñ ãå íà â êëåò êàõ â
çî íå ââå äå íèÿ è ýêñ ïðåñ ñèè öå ëå âî ãî áåë êà èñ ñëå -
äî âà ëè íà 3-è ñóò ïî ñëå âíóò ðè ìû øå÷ íîé èíú åê -
öèè pTR-BKneo–. Äëÿ òåñ òè ðî âà íèÿ òðàíñ ãå íà ìå òî -
äîì ÏÖÐ ðàñ ñ÷è òû âà ëè ïà ðó ïðàé ìå ðîâ: Å2asn – 5'-
GGCACCAAAATCAACGGGAC-3' è E2sn – 5'-GG
GAGTCCGTCAGCCTCAT-3' (ðèñ. 1). Äëè íà îæè -
äà å ìî ãî ÏÖÐ-ôðàã ìåí òà ñî ñòàâ ëÿ åò 701 ï. í. ÏÖÐ-
àíàëè çîì îá ðàç öîâ ñóì ìàð íîé ÄÍÊ, âû äå ëåííîé èç
òêà íè áè öåï ñà, ïî êà çà íî ïðè ñó òñòâèå òðàíñãå íà
ôðàã ìåí òà ãëè êîï ðî òå è íà Å2 ÂÊ×Ñ â êëåò êàõ áè -
öåï ñà ýêñ ïå ðè ìåí òàëü íûõ æè âîò íûõ, î ÷åì ñâè äå-
òåëüñòâó åò ïî ëî ñà îæè äà å ìî ãî ðàç ìå ðà íà ýëåê òðî -
ôî ðåã ðàì ìå ïðî äóê òîâ ÏÖÐ-ðå àê öèè (ðèñ. 2). Â òî
æå âðå ìÿ â êîí òðîëü íûõ îá ðàç öàõ ýòîò ôðàã ìåíò
îò ñó òñòâó åò. Òà êèì îá ðà çîì, ìîæ íî çà êëþ ÷èòü, ÷òî
ïðè âû áðàí íîì ñïî ñî áå ââå äå íèÿ ïëàç ìèä íîé ÄÍÊ
ñî çäàí íàÿ êî íñòðóê öèÿ pTR-BKneo– in situ òðàíñ -
ôîð ìè ðó åò êëåò êè áè öåï ñà.
Ýêñïðåñ ñèþ öå ëå âî ãî àí òè ãå íà èç ó÷à ëè èì ìó -
íî ãèñ òî õè ìè ÷åñ êèì ìå òî äîì íà 3-è ñóò ïî ñëå ââå -
137
ÂËÈßÍÈÅ ÁÓÑÒÅÐÍÎÉ ÈÌÌÓÍÈÇÀÖÈÈ Å2 ÂÊ×Ñ ÍÀ ÈÌÌÓÍÍÛÉ ÎÒÂÅÒ ÏÐÎÒÈ Ê×Ñ
PcmvTR
TRE2 pA2
701 ï. í.
E2asn E2sn Ðèñ. 1. Ñõå ìà ðàñ ïî ëî æå íèÿ ïðàé ìå ðîâ
íà ôðàã ìåí òå ãåíà ãëè êîï ðî òå è íà Å2
ÂÊ×Ñ îò íî ñè òåëü íî åãî ñòðóê òóð íîé êàð -
òû â ñî ñòà âå ïëàç ìè äû pTR-BKneo–; TR –
èí âåð òè ðî âàí íûå òåð ìè íàëü íûå ïî âòî ðû
ÀÀV- 2; Ðcmv – ýí õàí ñåð/ïðî ìî òîð ðàí -
íèõ ãå íîâ öè òî ìå ãà ëî âè ðó ñà ÷å ëî âå êà;
E2 – SacI-EcoRI-ôðàã ìåíò ãåíà Å2 ÂÊ×Ñ;
ðÀ2 – ñèã íàë ïî ëè à äå íè ëè ðî âà íèÿ)
1 2 3 4 5 6 7 8
¬701 ï. í.
Ðèñ. 2. Ýëåê òðî ôî ðåã ðàì ìà ïðî äóê òîâ ÏÖÐ, ïî ëó ÷åí íûõ ñ èñïîëü-
çî âà íè åì ïðàé ìå ðîâ E2-sn/E2-asn: 1 – ïðî áà áåç ÄÍÊ (êîíòðîëü);
2 – òî òàëü íàÿ ÄÍÊ êëå òîê áè öåï ñà íà 3-è ñóò ïî ñëå ââå äå íèÿ êîíò-
ðîëüíîé ïëàç ìèä íîé ÄÍÊ; 3 – pTR-BKneo–; 4–6, 8 – òî òàëü íàÿ ÄÍÊ
êëå òîê áè öåï ñà íà 3-è ñóò ïîñëå ââå äå íèÿ pTR-BKneo–; 7 – ìàð êåð
(FastRulerTM DNA Ladder, Low Range, «Fermentas»). Ñòðåë êîé óêà -
çàí ðàç ìåð ïðî äóê òîâ ÏÖÐ
à á
Ðèñ. 3. Èììó íî ãèñ òî õè ìè ÷åñ êîå
îïðå äå ëå íèå ýêñ ïðåñ ñèè ôðàã -
ìåí òà ãëè êîï ðî òå è íà Å2 ÂÊ×Ñ â
êëåò êàõ áè öåï ñà ìûøè íà 3-è ñóò
ïî ñëå ââå äå íèÿ: à – êîí òðîëü íàÿ
ãðóï ïà; á – ýêñïå ðè ìåí òàëü íàÿ
ãðóï ïà, êîòî ðîé ââî äè ëè
pTR-BKneo–. ́400
äå íèÿ êàí äè äàò íîé ìàð êè ðî âàí íîé ÄÍÊ-âàê öè íû.
Ïî ëó ÷åí íûå ðå çóëü òà òû ñâè äå ò åëüñòâó þò î òîì,
÷òî öå ëå âîé àí òè ãåí ýêñ ïðåñ ñè ðó åò ñÿ ìè î öè òà ìè
áè öåï ñà íà 3-è ñóò ïî ñëå âíóò ðè ìû øå÷ íî ãî ââå äå -
íèÿ èñ ñëå äó å ìîé ÄÍÊ-âàê öè íû (ðèñ. 3, ñì. âêëåé -
êó). Îäíà êî ïðî öåíò òðàíñ ôå öè ðî âàí íûõ êëå òîê
îêà çàë ñÿ íå áîëü øèì – 2,42 ± 0,17 %, ÷òî ñî ãëà ñó åò -
ñÿ ñ ëè òå ðà òóð íûìè äàí íû ìè [17]. Ñëå äó åò òàê æå îò -
ìå òèòü, ÷òî õî òÿ â ïîä àâ ëÿ þ ùåì áîëü øè íñòâå ñëó-
÷à åâ ôðàãìåíò ãëè êîï ðî òå è íà Å2 ýêñ ïðåñ ñè ðî âà ëè
êëåò êè ïî ïå ðå÷ íî ïî ëî ñà òûõ ìûøö, çà ôèê ñè ðî âà íû
åäè íè÷ íûå âà ðè àí òû åãî ýêñ ïðåñ ñèè êëåò êà ìè, âõî -
äÿ ùè ìè â ñî ñòàâ ñî ñó äèñ òîé ñòåí êè âå íó ëû, âå ðî ÿò -
íåå âñå ãî, êëåò êà ìè ãëàä êèõ ìûøö èëè æå ýí äî òå-
ëè î öè òà ìè. Ýêñïðåñ ñèÿ öå ëå âî ãî àí òè ãå íà ýòè ìè
êëåòêàìè ìî æåò îá åñ ïå ÷èòü åãî íå ïîñ ðå äñòâåí íîå
ïî ïàäà íèå â êðî âî òîê è, òà êèì îá ðà çîì, âîç ìîæ íîå
óñè ëå íèå èì ìóí íî ãî îò âå òà áëà ãî äà ðÿ îá åñ ïå ÷å íèþ
êîíòàê òà ñ áîëü øèì êî ëè ÷åñ òâîì àí òè ãåí-ïðåä ñòàâ-
ëÿ þ ùèõ êëå òîê â äðå íè ðó þ ùèõ ëèì ôî óç ëàõ, ñå ëå -
çåí êå è ò. ä.
Âëè ÿ íèå áóñ òåð íîé èì ìó íè çà öèè èñ ñëå äî âà ëè
ñ èñ ïîëü çî âà íè åì ðå êîì áè íàí òíî ãî ôðàã ìåí òà Å2
ÂÊ×Ñ, ïî ëó ÷åí íî ãî â êëåò êàõ E. coli. È õî òÿ â êëåò -
êàõ E. coli ðå êîì áè íàí òíûé áå ëîê íå ãëè êî çè ëè ðó -
åò ñÿ, ðà íåå ïî êà çà íî, ÷òî ïðè èì ìó íè çà öèè ñâè íåé
äàí íûì ôðàã ìåí òîì èí äó öè ðó åò ñÿ ïðî òåê òèâ íûé
èì ìóí íûé îò âåò, äîñ òà òî÷ íûé äëÿ çà ùè òû æè âîò -
íî ãî îò èí ôè öè ðî âà íèÿ ÂÊ×Ñ øòàì ìà «Âà øèíã-
òîí» [16].
Äëÿ ïî âû øå íèÿ âû õî äà öå ëå âî ãî àí òè ãå íà îïòè-
ìè çè ðî âà íû óñëî âèÿ êóëü òè âè ðî âà íèÿ øòàì ìà-
ïðî äó öåí òà BL21 (DE3)/pET24ap-csfc@rev, ñî çäàí -
íî ãî ðà íåå [16]. Ïî êà çà íî, ÷òî êóëü òè âè ðî âà íèå íà
ñëîæ íûõ ïè òà òåëü íûõ ñðå äàõ LB, II è NZCYM ïðè -
âî äèò ê ñèí òå çó öå ëå âî ãî ïðî äóê òà ñ ìî ëå êó ëÿð- íîé
ìàñ ñîé 34 êÄà. Íà êîï ëå íèå öå ëå âî ãî áåë êà ñî ñòàâ -
ëÿ åò 0,152 ã èç 1 ë êóëü òó ðû áàê òå ðè àëü íûõ êëå òîê
ïðè èñ ïîëü çî âà íèè ñðå äû LB è 0,4 ã – ñðå äû II. Íà -
êîï ëå íèå öå ëå âî ãî áåë êà ïðè êóëü òè âè ðî âà íèè íà
ñðå äå NZCYM íå ðå ãèñ òðè ðî âà ëîñü ïðè ïî- ìîùè
ãåëü-ýëåê òðî ôî ðå çà â 13 %-ì ïî ëè àê ðè ëà ìèä- íîì
ãå ëå â äå íà òó ðè ðó þ ùèõ óñëî âè ÿõ ñ îêðàñ êîé ïî Êó -
ìàñ ñè, îäíà êî äå òåê òè ðî âà ëîñü âåñ òåðí-áëîò àíà -
ëè çîì. Óðî âåíü ïðî äóê öèè ôðàã ìåí òà Å2 ÂÊ×Ñ ñî -
ñòàâ ëÿ åò 19,54 è 35,62 % ïðè êóëü òè âè ðî âà íèè â òå -
÷å íèå 12–18 ÷ ïî ñëå äî áàâ ëå íèÿ ÈÏÒà íà ñðå äàõ
LB è II ñî îò âå òñòâåí íî. Èñõî äÿ èç ýòî ãî â äàëü íåé -
øèõ ýêñ ïå ðè ìåí òàõ èñ ïîëü çî âà ëè òîëü êî ñðå äó II.
Ïî êà çà íî, ÷òî óìåíü øå íèå êîí öåí òðà öèè ÈÏÒÃ â
äèà ïà çî íå îò 1 äî 0,1 ìÌ âû çû âà åò ñíè æå íèå âû õî-
äà öå ëå âî ãî ïðî äóê òà ïðè áëè çè òåëü íî â äâà ðàçà.
Ïðî âå äåí íûé àíà ëèç äè íà ìè êè íà êîï ëå íèÿ ïðî äóê-
òà âû ÿ âèë óâå ëè ÷å íèå êî ëè ÷åñ òâà ôðàã ìåí òà Å2 â
138
ÏÎ ÕÎ ËÅÍ ÊÎ ß. À., ÃÓËÜÊÎ Ò. Ï., ÄÅÐßÁÈÍÀ Î. Ã., ÊÎÐÄÞÌ Â. À.
1 2 3
¬ 50
¬ 40
¬ 30
êÄà
34®
à á
- +
1 2
Ðèñ. 4. Ýëåê òðî ôî ðåã ðàì ìà àëèê âîò, ïî ëó ÷åí íûõ ïî ñëå ðå íà òó ðà -
öèè è î÷èñ òêè ôðàã ìåí òà Å2 ÂÊ×Ñ (1, 2 – ôðàê öèè, âû äå ëåí íûå
ïîñëå ïî ñëå äî âà òåëü íûõ õðî ìà òîã ðà ôèé íà ñå ôà äåê ñå G-25 è Q
Sepharose XL; 3 – ìàð êåð ìî ëå êó ëÿð íîé ìàñ ñû áåë êîâ, PageRulerTM
Unstained Protein Ladder, Fermentas) (à) è ðå çóëü òà òû äîò-áëîò àíà -
ëè çà ôðàã ìåí òà Å2 ÂÊ×Ñ (1 – áåë êè ðàñ òâî ðè ìîé ôðàêöèè êëå òî÷ -
íî ãî ëè çà òà BL21 (DE3); 2 – ôðàã ìåíò Å2 ÂÊ×Ñ) (á)
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1, 0
1,2
1,4
OD450
*
*
1 2 3 4 5
Ðèñ. 5. Ðå çóëü òà òû èì ìó íî ôåð ìåí òíî ãî àíà ëè çà ñû âî ðî òîê êðî -
âè ìû øåé ïî ñëå òðåòü åé èì ìó íè çà öèè: 1 – êîí òðîëü íûå æè âîò -
íûå, êî òî ðûì ââî äè ëè pTR-UFneo– ; 2, 3 – æè âîò íûå, òðèæ äû èì -
ìó íè çî âàí íûå êàí äè äàò íîé ìàð êè ðî âàí íîé ÄÍÊ-âàê öè íîé (2 –
÷å ðåç ñåìü äíåé ïî ñëå òðåòü åé èì ìó íè çà öèè; 3 – åùå ÷å ðåç ìå -
ñÿö); 4, 5 – æè âîò íûå, äâàæ äû èì ìó íè çî âàí íûå êàí äè äàò íîé ìàð -
êåð íîé ÄÍÊ-âàê öè íîé, è òðå òèé ðàç – ôðàã ìåí òîì Å2 (4 – ÷å ðåç
ñåìü äíåé ïî ñëå òðåòü åé èì ìó íè çà öèè; 5 – åùå ÷å ðåç ìå ñÿö); Äàí -
íûå ïðè âå äå íû ïðè èñ ïîëü çî âà íèè ñû âî ðî òîê â ðà áî ÷åì ðàç âå äå -
íèè 1:400; ð £ 0,01; *p > 0,05
êëåò êàõ ÷å ðåç 12–18 ÷ êóëü òè âè ðî âà íèÿ ïî ñðàâ íå -
íèþ ñ 4 ÷ ïî ñëå äî áàâ ëå íèÿ èí äóê òî ðà.
Òà êèì îá ðà çîì, ìàê ñè ìàëü íûé óðî âåíü ñèí òå çà
ôðàã ìåí òà Å2 ÂÊ×Ñ (äî 0,4 ã/ë êóëü òè âà öè îí íîé
ñðå äû) íà áëþ äà ëè ïðè âû ðà ùè âà íèè êóëü òó ðû â òå-
÷å íèå 12–18 ÷ ïî ñëå äî áàâ ëå íèÿ ÈÏÒà (äî êî íå÷ -
íîé êîí öåí òðà öèè 1 ìÌ) íà ñðå äå II.  ðå çóëü òà òå
èç ó÷å íèÿ ðàñ ïðå äå ëå íèÿ ñèí òå çè ðî âàí íî ãî ôðàã -
ìåí òà Å2 ÂÊ×Ñ â êëåò êàõ E. coli ïðî äå ìî íñòðè ðî -
âà íî, ÷òî îí íà êàï ëè âàë ñÿ â êëåò êàõ èñ êëþ ÷è òåëü -
íî â âè äå òå ëåö âêëþ ÷å íèÿ, êî òî ðûå âïîñ ëå äñòâèè
âû äå ëÿ ëè ïðè ëè çè ñå êëå òîê, ñî ëþ áè ëè çè ðî âà ëè â
áó ôå ðå, ñî äåð æà ùåì õà îò ðîï íûé àãåíò, è ðå íà òó -
ðè ðî âà ëè.  êà ÷åñ òâå òåñ òà, ïî çâî ëÿ þ ùå ãî îöå íèòü
êîð ðåê òíîñòü ôîð ìè ðî âà íèÿ àí òè ãåí íèõ äå òåð ìè-
íà íò ïðè ðå íà òó ðà öèè ôðàã ìåí òà Å2 in vitro, èñ ïîëü-
çî âà íî ñâÿ çû âà íèå ïðå ïà ðà òà ðå êîì áè íàí òíî ãî Å2
ñ àí òè òå ëà ìè ãè ïå ðèì ìóí íîé ñû âî ðîò êè ñâèíüè,
ïî ëó ÷åí íîé, êàê îïè ñà íî ðà íåå [8], êî òî ðîå ïðî âå -
ðÿ ëè ñ ïî ìîùüþ äîò-áëîò òèí ãà (ðèñ. 4).
Ýêñïå ðè ìåí òû ïî èç ó÷å íèþ âëè ÿ íèÿ áóñ òåð íîé
èì ìó íè çà öèè ôðàã ìåí òîì Å2 ÂÊ×Ñ íà èì ìóí íûé
îò âåò, èí äó öè ðî âàí íûé ìàð êè ðî âàí íîé ÄÍÊ-âàê-
öè íîé ïðî òèâ Ê×Ñ, âû ïîë íÿ ëè ïî ñëå äó þ ùåé ñõå-
ìå: æè âîò íûì ââî äè ëè ïî 100 ìêã êàí äè äàò íîé ìàð-
êè ðî âàí íîé ÄÍÊ-âàê öè íû âíóò ðè ìû øå÷ íî ñ èí òåð-
âà ëîì â äâå íå äå ëè. ×å ðåç òðè íå äå ëè ïî ñëå âòî ðîé
èì ìó íè çà öèè ïðî âî äè ëè áóñ òåð íóþ èì ìó íè çà öèþ:
â îä íîé ãðóï ïå – ÄÍÊ-âàê öè íîé â òîé æå äî çå, à âî
âòî ðîé – ââå äå íè åì 30 ìêã ðå êîì áè íàí òíî ãî ôðàã -
ìåí òà Å2 ÂÊ×Ñ. Àíàëèç ïî ëó ÷åí íûõ äàí íûõ âûÿ-
âèë, ÷òî ïî êà çà òåëü ñå ðî êîí âåð ñèè ïî ñëå âòî ðîé èì-
ìó íè çà öèé ñî ñòàâ ëÿ åò » 54 %, â òî âðå ìÿ êàê ïî ñëå
òðåòü åé – 100 %. ×å ðåç ìå ñÿö ïî ñëå òðåòü åé èì ìó -
íè çà öèè ýòîò ïî êà çà òåëü íå èç ìå íÿë ñÿ. Ðå çóëü òà òû
àíà ëè çà ñû âî ðî òîê ñâè äå ò åëüñòâó þò î òîì, ÷òî áóñ -
òåð íàÿ èì ìó íè çà öèÿ ðå êîì áè íàí òíûì Å2 ÂÊ×Ñ
ïî ñëå äâóõ èì ìó íè çà öèé ìàð êè ðî âàí íîé ÄÍÊ-âàê -
öè íîé ïðè âî äèò ê áî ëåå çíà ÷è òåëü íî ìó óâå ëè ÷å -
íèþ òèò ðà àí òè òåë ê öå ëå âî ìó àí òè ãå íó ïî ñðàâ íå -
íèþ ñ òðåõ êðàò íîé èì ìó íè çà öè åé ÄÍÊ-âàê öè íîé
(ðèñ. 5). Òàê æå ñëå äó åò îò ìå òèòü, ÷òî ñïóñ òÿ ìå ñÿö
ïî ñëå áóñ òåð íîé èì ìó íè çà öèè äîñ òî âåð íî ãî ïà äå -
íèÿ òèò ðà àí òè òåë ê Å2 íå íà áëþ äà ëîñü.
Âû âî äû. Ðàñ ñ÷è òà íû ïðàé ìå ðû, ïî çâî ëÿ þ ùèå
òåñ òè ðî âàòü ïðè ñó òñòâèå òðàíñ ãå íà ôðàã ìåí òà ãëè -
êîï ðî òå è íà Å2 ÂÊ×Ñ â êëåò êàõ ñêå ëåò íûõ ìûøö
ìûøè. Ïîä òâåð æäå íî, ÷òî pTR-BKneo– in situ òðàíñ-
ôîð ìè ðó åò êëåò êè áè öåï ñà è ñ ââå äåí íîé ïëàç ìèä -
íîé êî íñòðóê öèè ýêñ ïðåñ ñè ðó åò ñÿ ôðàã ìåíò ãëè -
êîï ðî òå è íà Å2 ÂÊ×Ñ. Ïî êà çà íî, ÷òî íà 3-è ñóò ïî -
ñëå ââå äå íèÿ êàí äè äàò íîé ìàð êè ðî âàí íîé ÄÍÊ-
âàê öè íû ïðî òèâ Ê×Ñ öå ëå âîé àí òè ãåí ýêñ ïðåñ ñè ðó-
åò ñÿ â îñíîâ íîì â êëåò êàõ ìè î öè òîâ ïî ïå ðå÷ íî ïî -
ëî ñà òîé ìû øå÷ íîé òêà íè.
 ðå çóëü òà òå ïðî âå äåí íûõ èñ ñëå äî âà íèé, íà -
ïðàâ ëåí íûõ íà îïòè ìè çà öèþ óñëî âèé ýêñ ïðåñ ñèè
ôðàã ìåí òà Å2 ÂÊ×Ñ â êëåò êàõ E. coli øòàì ìà BL21
(DE3), óñòà íîâ ëå íî, ÷òî íà êîï ëå íèå öå ëå âî ãî áåë -
êà ñî ñòàâ ëÿ åò ìè íè ìóì 0,4 ã èç 1 ë êóëü òó ðû áàê òå -
ðè àëü íûõ êëå òîê ïðè èñ ïîëü çî âà íèè ïî äî áðàí íûõ
óñëî âèé êóëü òè âè ðî âà íèÿ íà ñðå äå BactoTMBrain
heart infusion Porcine.
Âû ÿâ ëå íî, ÷òî ïî êà çà òåëü ñå ðî êîí âåð ñèè ïî ñëå
äâóê ðàò íîé èì ìó íè çà öèè êàí äè äàò íîé ìàð êè ðî-
âàí íîé ÄÍÊ-âàê öè íîé ñî ñòàâ ëÿ åò » 54 %, òîã äà êàê
áóñ òåð íàÿ èì ìó íè çà öèÿ òîé æå ÄÍÊ-âàê öè íîé èëè
ðå êîì áè íàí òíûì ôðàã ìåí òîì Å2 ÂÊ×Ñ óâå ëè ÷è âà -
åò ýòîò ïî êà çà òåëü äî 100 %.
Òà êèì îá ðà çîì, ìîæ íî ñäå ëàòü âû âîä î òîì, ÷òî
èñ ïîëü çî âà íèå áóñ òåð íîé èì ìó íè çà öèè ðå êîì áè -
íàí òíûì Å2 ñïî ñî áñòâó åò óñè ëå íèþ ãó ìî ðàëü íî ãî
èì ìóí íî ãî îò âå òà íà êàí äè äàò íóþ ìàð êè ðî âàí íóþ
ÄÍÊ-âàê öè íó ïðî òèâ Ê×Ñ. Ñëå äó åò îò ìå òèòü òîò
ôàêò, ÷òî áóñ òåð íàÿ èì ìó íè çà öèÿ ðå êîì áè íàíò-
íûì áåë êîì ïðè âî äèò ê áî ëåå çíà ÷è òåëü íî ìó âîç ðà-
ñòà íèþ òèò ðà àí òè òåë ê öå ëå âî ìó àí òè ãå íó â ñðàâ íå-
íèè ñ èñ ñëå äó å ìîé ÄÍÊ-âàê öè íîé.
Ia. O. Pokholenko, T. P. Gulko, O. G. Deryabina1, V. A. Kordium
Action of booster immunization with E2 CSFV on immune response
elicited by marker DNA-vaccine against CSF
Institute of Molecular Biology and Genetics, NAS of Ukraine
150, Akademika Zabolotnoho Str., Kyiv, Ukraine, 03680
1Institute of Veterinary Medicine, NAAS of Ukraine
30, Donetska Str., Kyiv, Ukraine, 03151
Summary
Aim. The aim was to study the influence of booster immunization with
recombinant fragment of E2 CSFV on humoral immune response, elici-
ted by candidate marker DNA-vaccine against CSF. Methods. The
fragment of E2 CSFV gene has been detected by PCR, and the expres-
sion of encoded protein – by immunohistochemical analysis. The anti-
E2 antibodies in blood serum after immunization have been detected
139
ÂËÈßÍÈÅ ÁÓÑÒÅÐÍÎÉ ÈÌÌÓÍÈÇÀÖÈÈ Å2 ÂÊ×Ñ ÍÀ ÈÌÌÓÍÍÛÉ ÎÒÂÅÒ ÏÐÎÒÈ Ê×Ñ
140
ÏÎ ÕÎ ËÅÍ ÊÎ ß. À., ÃÓËÜÊÎ Ò. Ï., ÄÅÐßÁÈÍÀ Î. Ã., ÊÎÐÄÞÌ Â. À.
by ELISA. Results. It has been shown that candidate marker DNA-vac-
cine transfected myocytes of murine biceps in situ. The data of immuno-
histochemical analysis revealed the expression of fragment of glyco-
protein E2 CSFV from the plasmid introduced. The booster immuniza-
tion with recombinant E2 led to the significant increase of the titer of
antibodies specific to the antigen studied. Conclusions. The data obtai-
ned show that boosting with recombinant E2 enhances humoral immu-
ne response elicited by the candidate marker DNA-vaccine against CSF.
Keywords: marker DNA-vaccine, booster immunization, humoral
immune response, classical swine fever virus.
ß. Î. Ïî õî ëåí êî, Ò. Ï. Ãóëü êî, Î. Ã. Äå ðÿ áè íà, Â. À. Êîð äþì
Âïëèâ áóñ òåð íî¿ ³ìóí³çàö³¿ ôðàã ìåí òîì Å2 ÂÊ×Ñ íà ³ìóí íó
â³äïîâ³äü, ³íäó êî âà íó ìàð êî âà íîþ ÄÍÊ-âàê öè íîþ ïðî òè Ê×Ñ
Ðå çþ ìå
Ìåòà. Äîñë³äèòè âïëèâ áóñ òåð íî¿ ³ìóí³çàö³¿ ðå êîìá³íà íòíèì
ôðàã ìå òîì Å2 ÂÊ×Ñ íà ãó ìî ðàëü íó ³ìóí íó â³äïîâ³äü, ³íäó êî âà íó
êàí äè äàò íîþ ìàð êî âà íîþ ÄÍÊ-âàê öè íîþ ïðî òè Ê×Ñ. Ìå òî äè.
Íà ÿâí³ñòü ôðàã ìåí òà ãåíà Å2 ÂÊ×Ñ äå òåê òó âà ëè ìå òî äîì ÏËÐ,
à åêñïðåñ³þ á³ëêà – ïðî äóê òó öüî ãî ãåíà – ³ìó íîã³ñòîõ³ì³÷íèì ìå -
òî äîì. Òèòð àí òèò³ë, ñïå öèô³÷íèõ äî ö³ëüî âî ãî àí òè ãå íó, ó ñè -
ðî âàòö³ êðîâ³ ï³ñëÿ ³ìóí³çàö³¿ âèç íà ÷à ëè, âè êî ðèñ òî âó þ ÷è ²ÔÀ.
Ðå çóëü òà òè. Ïðî äå ìî íñòðî âà íî, ùî êàí äè äàò íà ìàð êî âà íà ÄÍÊ-
âàê öè íà in situ òðàíñô³êóº ì³îöè òè á³öåï ñà. Íà îñíîâ³ äà íèõ ³ìó -
íîã³ñòîõ³ì³÷íî ãî àíàë³çó âñòà íîâ ëå íî, ùî ç ââå äå íî¿ ïëàçì³äíî¿
êî íñòðóêö³¿ çä³éñíþºòüñÿ åêñïðåñ³ÿ ôðàã ìåí òà Å2 ÂÊ×Ñ. Áóñ -
òåð íà ³ìóí³çàö³ÿ ðå êîìá³íà íòíèì Å2 ÂÊ×Ñ ï³ñëÿ äâîõ ³ìóí³çàö³é
ìàð êî âà íîþ ÄÍÊ-âàê öè íîþ ñïðè ÷è íÿº çðîñ òàí íÿ òèò ðó àíòè-
ò³ë äî ö³ëüî âî ãî àí òè ãå íó ó ïîð³âíÿíí³ ç òðè ðà çî âîþ ³ìóí³çàö³ºþ
ÄÍÊ-âàê öè íîþ. Âèñ íîâ êè. Ðå çóëü òà òè ïðî âå äå íèõ äîñë³äæåíü
ñâ³ä÷àòü ïðî òå, ùî âè êî ðèñ òàí íÿ áóñ òåð íî¿ ³ìóí³çàö³¿ ðå êîìá³-
íà íòíèì ôðàã ìåí òîì Å2 ñïðèÿº ïî ñè ëåí íþ ãó ìî ðàëü íî¿ ³ìóí íî¿
â³äïîâ³ä³ íà êàí äè äàò íó ìàð êî âà íó ÄÍÊ-âàê öè íó ïðî òè Ê×Ñ.
Êëþ ÷îâ³ ñëî âà: ìàð êî âà íà ÄÍÊ-âàê öè íà, áóñ òåð íà ³ìóí³çà-
ö³ÿ, ãó ìî ðàëü íà ³ìóí íà â³äïîâ³äü, â³ðóñ êëà ñè÷ íî¿ ÷óìè ñâè íåé.
REFERENCES
1. Beer M., Reinmann I., Hoffman B., Depner K. Novel marker
vaccines against classical swine fever // Vaccine.–2007.–25,
N 30.–P. 5665–5670.
2. Vasilyev D. À., Lugovtcev V. Iu. The course of lectures in viro-
logy // Viruses causing diseases of swine.–Ulyanovsk: USAA,
2004.–Part 3.–85 p.
3. Tarradas J., Alvarez B., Fraile L., Rosell R., Munoz M., Galin-
do-Cardiel I., Domingo M., Dominguez J., Ezquerra A., Sobrino
F., Ganges L. Immunomodulatory effect of swine CCL20 che-
mokine in DNA vaccination against CSFV // Vet. Immunol. Im-
munopathol.–2011.–142, N 3–4.–P. 243–251.
4. Wienhold D., Armengol E., Maroquardt A., Maroquardt C., Voigt
H., Buttner M., Saalmuller A., Pfaff E. Immunomodulatory ef-
fect of plasmids co-expressing cytokines in classical swine fever
virus subunit gp55/E2-DNA vaccination // Vet. Res.–2005.–36,
N 4.–P. 571–587.
5. Ganges L., Barrera M., Nunez J. I., Blanco I., Frias M. T., Rod-
riges F., Sobrino F. A DNA vaccine expressing the E2 protein of
classical swine fever virus elicits T cell responses that can prime
for rapid antibody production and confer total protection upon
viral challenge // Vaccine.–2005.–23, N 28.–P. 3741–3752.
6. Makowska-Daniel I., Collins R. A., Pejsak Z. Evaluation of gene-
tic vaccine against classical swine fever // Vaccine.–2001.–19,
N 17–19.–P. 2480–2484.
7. Yu X., Tu C., Li H., Hu R., Chen C., Li Z., Zhang M., Yin Z. DNA-
mediated protection against classical swine fever virus // Vacci-
ne.–2001.–19, N 11–12.–P. 1520–1525.
8. Pokholenko I. A., Ruban T. O., Sukhorada O. M., Deriabin O. M.,
Tytok T. G., Kordium V. A. The development of DNA-vaccine
against classical swine fever // Biopolym. Cell.–2007.–23, N 2.–
P. 93–99.
9. Schneeweiss A., Chabiersli S., Salomo M., Delaroque N., Al-Ro-
baiy S., Grunwald T., Burki K., Liebert U. G., Ulbert S. A DNA
vaccine encoding the E protein of West Nile virus is protective
and can be boosted by recombinant domain DIII // Vaccine.–
2011.–29, N 37.–P. 6352–6357.
10. Zhao H. P., Sun J. F., Li N., Sun Y., Wang Y., Qui H. J. Prime-
boost immunization using alphavirus replicon and adenovirus
vectored vaccines induces enhanced immune responses against
classical swine fever virus in mice // Vet. Immunol. Immunopa-
thol.–2009.–131, N 3–4.–P. 158–166.
11. Hammond J. M., Jansen E. S., Morrissy C. J., Goff W. V., Mee-
han G. C., Williamson M. M., Lenghaus C., Sproat K. W., Andrew
M. E., Coupar B. E., Johnson M. A. A prime-boost vaccination
strategy using naked DNA followed by recombinant porcine ade-
novirus protects pigs from classical swine fever // Vet. Micro-
biol.–2001.–80, N 2.–P. 101–119.
12. Sambrook J., Fritsch E. E., Maniatis T. Molecular cloning.–
Cold Spring Harbor Lab. press, 1989.–625 p.
13. Yamamoto T., Horikoshi M. Rapid preparation of plasmid temp-
lates suitable for a DNA sequences without RNAse treatment //
Nucleic Acids Res.–1995.–23, N 16.–P. 3351–3352.
14. Current protocols in molecular biology / Eds F. M. Ausubel et
al.–New York: John Wiley & Sons, Inc., 1997.–Vol. 1.–
P. 1.7.9–1.7.10.
15. DNA vaccines: methods and protocols / Eds D. B. Lawrie, R. G.
Whalen.–New York: Humana press, 2000.–529 p.
16. Deryabin O., Kulinich R., Deryabina O., Reznik V. Protective
properties of the Classical Swine fever virus E2 recombinant
protein expressed in E. coli // Herald of Bila Tserkva National
Agrarian University.–2005.–31.–P. 151–158.
17. Dupuis M., Denis-Mize K., Woo C., Goldbeck C., Selby M. J.,
Chen M., Otten G. R., Ulmer J. B., Donnelly J. J., Ott G., McDo-
nald D. M. Distribution of DNA vaccines determines their im-
munogenicity after intramuscular injection in mice // J. Immu-
nol.–2000.–165, N 5.–P. 2850–2858.
Received 26.07.11
|