Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application
Цель. Создание биоаффинного сорбента на основе ориентированно иммобилизованного белка А Staphylococcus aureus (SPA) через два целлюлозосвязывающих домена (СBD) Clostridium thermocellum и его применение для очистки антител. Методы. С использованием последовательностей ДНК, кодирующих SPA и два СBD, с...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Вiopolymers and Cell |
|---|---|
| Дата: | 2012 |
| Автори: | , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Англійська |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
2012
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156828 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application / O.B. Gorbatiuk, M.V. Tsapenko, M.V. Pavlova, O.V. Okunev, V.A. Kordium // Вiopolymers and Cell. — 2012. — Т. 28, № 2. — С. 141–148. — Бібліогр.: 21 назв. — англ., рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1862634437120884736 |
|---|---|
| author | Gorbatiuk, O.B. Tsapenko, M.V. Pavlova, M.V. Okunev, O.V. Kordium, V.A. |
| author_facet | Gorbatiuk, O.B. Tsapenko, M.V. Pavlova, M.V. Okunev, O.V. Kordium, V.A. |
| citation_txt | Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application / O.B. Gorbatiuk, M.V. Tsapenko, M.V. Pavlova, O.V. Okunev, V.A. Kordium // Вiopolymers and Cell. — 2012. — Т. 28, № 2. — С. 141–148. — Бібліогр.: 21 назв. — англ., рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Вiopolymers and Cell |
| description | Цель. Создание биоаффинного сорбента на основе ориентированно иммобилизованного белка А Staphylococcus aureus (SPA) через два целлюлозосвязывающих домена (СBD) Clostridium thermocellum и его применение для очистки антител. Методы. С использованием последовательностей ДНК, кодирующих SPA и два СBD, сконструирован ген слитного белка SPA-CBD2 и обеспечено его получение в растворимой форме экспрессией в клетках Escherichia coli. Целевой белок иммобилизовали методом биоаффинного связывния на микрокристаллической целлюлозе. Результаты. Установлены такие характеристики биоаффинного сорбента, как емкость (1 мг SPA-CBD2 /1 мл целлюлози), динамическая емкость (3 мг иммуноглобулинов мыши/1 мл сорбента) и продуктивность, а также показана его стабильность при долгосрочном хранении. С помощью биоаффинного сорбента выделены фракции иммуноглобулинов с чистотой более 95 %. Определено, что очищенные таким способом антитела с высокой чувствительностью выявляют соответствующие антигены. Выводы. Предложенный биоаффинный сорбент позволяет получать очищенные функционально активные полии моноклональные антитела, а также проводить фракционирование на подклассы иммуноглобулинов G мыши.
Ключевые слова: антитела, белок А, целлюлозосвязывающий домен, иммобилизация белка, аффинная хроматография.
Мета. Створення біоафінного сорбента на основі орієнтовано іммобілізованого білка А Staphylococcus aureus (SPA) через два целюлозозв’язувальних домени (СBD) Clostridium thermocellum та його застосування для очищення антитіл. Методи. З використанням послідовностей ДНК, кодуючих SPA і два СBD, сконструйовано ген злитого білка SPA-CBD2 та забезпечено його отримання в розчинній формі експресією у клітинах Escherichia coli. Цільовий білок іммобілізовано методом біоафінного зв’язування на мікрокристалічній целюлозі. Результати. Встановлено такі характеристики біоафінного сорбента, як ємність (1 мг SPACBD2/1 мл целюлози), динамічна ємність (3 мг імуноглобулінів миші/1 мл сорбента) і продуктивність, а також показано його стабільність при тривалому зберіганні. За допомогою біоафінного сорбента виділено фракції імуноглобулінів з чистотою понад 95 %. Визначено, що очищені у такий спосіб антитіла з високою чутливістю виявляють відповідні антигени. Висновки. Запропонований біоафінний сорбент дозволяє отримувати очищені функціонально активні поліі моноклональні анттіла, а також проводити фракціонування на підкласи імуноглобулінів G миші.
Ключові слова: антитіла, білок А, целюлозозв’язувальний домен, іммобілізація білка, афінна хроматографія.
Aim. The obtaining of bioaffinity sorbent based on the immobilized protein A of S. aureus (SPA) using two cellulose-binding domains (CBD), and its application for purification of antibodies. Methods. The DNA sequences encoding SPA and two CBD were genetically fused, expressed in the high-productive Escherichia coli system and the protein SPA-CBD2 was obtained in a soluble form. The SPA-CBD2 fusion protein was affinity immobilized on the microcrystalline cellulose. Results. Capacity of bioaffinity sorbent (1 mg SPA-CBD2/1 ml CC31-cellulose), dynamic capacity (3 mg mouse IgG/1 ml bioaffinity sorbent), efficiency and stability during prolonged storage were determined. The bioffinity sorbent was used for purification of antibodies. The purity of antibodies in eluted fractions was more than 95 %. The purified antibodies detected target antigens with a high sensitivity. Conclusions. The designed bioaffinity sorbent provides obtaining pure poly- and monoclonal antibodies in functionally active form and can be useful for the fractionation of mouse immunoglobulin G.
Keywords: antibodies, protein A, cellulose-binding domain, protein immobilization, affinity chromatography.
|
| first_indexed | 2025-11-30T16:10:59Z |
| format | Article |
| fulltext | |
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-156828 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7657 |
| language | English |
| last_indexed | 2025-11-30T16:10:59Z |
| publishDate | 2012 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Gorbatiuk, O.B. Tsapenko, M.V. Pavlova, M.V. Okunev, O.V. Kordium, V.A. 2019-06-19T06:35:37Z 2019-06-19T06:35:37Z 2012 Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application / O.B. Gorbatiuk, M.V. Tsapenko, M.V. Pavlova, O.V. Okunev, V.A. Kordium // Вiopolymers and Cell. — 2012. — Т. 28, № 2. — С. 141–148. — Бібліогр.: 21 назв. — англ., рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000041 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156828 579.69 +577.112 Цель. Создание биоаффинного сорбента на основе ориентированно иммобилизованного белка А Staphylococcus aureus (SPA) через два целлюлозосвязывающих домена (СBD) Clostridium thermocellum и его применение для очистки антител. Методы. С использованием последовательностей ДНК, кодирующих SPA и два СBD, сконструирован ген слитного белка SPA-CBD2 и обеспечено его получение в растворимой форме экспрессией в клетках Escherichia coli. Целевой белок иммобилизовали методом биоаффинного связывния на микрокристаллической целлюлозе. Результаты. Установлены такие характеристики биоаффинного сорбента, как емкость (1 мг SPA-CBD2 /1 мл целлюлози), динамическая емкость (3 мг иммуноглобулинов мыши/1 мл сорбента) и продуктивность, а также показана его стабильность при долгосрочном хранении. С помощью биоаффинного сорбента выделены фракции иммуноглобулинов с чистотой более 95 %. Определено, что очищенные таким способом антитела с высокой чувствительностью выявляют соответствующие антигены. Выводы. Предложенный биоаффинный сорбент позволяет получать очищенные функционально активные полии моноклональные антитела, а также проводить фракционирование на подклассы иммуноглобулинов G мыши.
 Ключевые слова: антитела, белок А, целлюлозосвязывающий домен, иммобилизация белка, аффинная хроматография. Мета. Створення біоафінного сорбента на основі орієнтовано іммобілізованого білка А Staphylococcus aureus (SPA) через два целюлозозв’язувальних домени (СBD) Clostridium thermocellum та його застосування для очищення антитіл. Методи. З використанням послідовностей ДНК, кодуючих SPA і два СBD, сконструйовано ген злитого білка SPA-CBD2 та забезпечено його отримання в розчинній формі експресією у клітинах Escherichia coli. Цільовий білок іммобілізовано методом біоафінного зв’язування на мікрокристалічній целюлозі. Результати. Встановлено такі характеристики біоафінного сорбента, як ємність (1 мг SPACBD2/1 мл целюлози), динамічна ємність (3 мг імуноглобулінів миші/1 мл сорбента) і продуктивність, а також показано його стабільність при тривалому зберіганні. За допомогою біоафінного сорбента виділено фракції імуноглобулінів з чистотою понад 95 %. Визначено, що очищені у такий спосіб антитіла з високою чутливістю виявляють відповідні антигени. Висновки. Запропонований біоафінний сорбент дозволяє отримувати очищені функціонально активні поліі моноклональні анттіла, а також проводити фракціонування на підкласи імуноглобулінів G миші.
 Ключові слова: антитіла, білок А, целюлозозв’язувальний домен, іммобілізація білка, афінна хроматографія. Aim. The obtaining of bioaffinity sorbent based on the immobilized protein A of S. aureus (SPA) using two cellulose-binding domains (CBD), and its application for purification of antibodies. Methods. The DNA sequences encoding SPA and two CBD were genetically fused, expressed in the high-productive Escherichia coli system and the protein SPA-CBD2 was obtained in a soluble form. The SPA-CBD2 fusion protein was affinity immobilized on the microcrystalline cellulose. Results. Capacity of bioaffinity sorbent (1 mg SPA-CBD2/1 ml CC31-cellulose), dynamic capacity (3 mg mouse IgG/1 ml bioaffinity sorbent), efficiency and stability during prolonged storage were determined. The bioffinity sorbent was used for purification of antibodies. The purity of antibodies in eluted fractions was more than 95 %. The purified antibodies detected target antigens with a high sensitivity. Conclusions. The designed bioaffinity sorbent provides obtaining pure poly- and monoclonal antibodies in functionally active form and can be useful for the fractionation of mouse immunoglobulin G.
 Keywords: antibodies, protein A, cellulose-binding domain, protein immobilization, affinity chromatography. en Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Вiopolymers and Cell Molecular and Cell Biotechnologies Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application Біоаффінний сорбент на основі іммобілізованого білка А Staphylococcus aureus: створення і використання Биоаффинный сорбент на основе иммобилизованного белка А Staphylococcus aureus: создание и использование Article published earlier |
| spellingShingle | Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application Gorbatiuk, O.B. Tsapenko, M.V. Pavlova, M.V. Okunev, O.V. Kordium, V.A. Molecular and Cell Biotechnologies |
| title | Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application |
| title_alt | Біоаффінний сорбент на основі іммобілізованого білка А Staphylococcus aureus: створення і використання Биоаффинный сорбент на основе иммобилизованного белка А Staphylococcus aureus: создание и использование |
| title_full | Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application |
| title_fullStr | Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application |
| title_full_unstemmed | Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application |
| title_short | Bioaffinity sorbent based on immobilized protein A Staphylococcus aureus: development and application |
| title_sort | bioaffinity sorbent based on immobilized protein a staphylococcus aureus: development and application |
| topic | Molecular and Cell Biotechnologies |
| topic_facet | Molecular and Cell Biotechnologies |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/156828 |
| work_keys_str_mv | AT gorbatiukob bioaffinitysorbentbasedonimmobilizedproteinastaphylococcusaureusdevelopmentandapplication AT tsapenkomv bioaffinitysorbentbasedonimmobilizedproteinastaphylococcusaureusdevelopmentandapplication AT pavlovamv bioaffinitysorbentbasedonimmobilizedproteinastaphylococcusaureusdevelopmentandapplication AT okunevov bioaffinitysorbentbasedonimmobilizedproteinastaphylococcusaureusdevelopmentandapplication AT kordiumva bioaffinitysorbentbasedonimmobilizedproteinastaphylococcusaureusdevelopmentandapplication AT gorbatiukob bíoaffínniisorbentnaosnovíímmobílízovanogobílkaastaphylococcusaureusstvorennâívikoristannâ AT tsapenkomv bíoaffínniisorbentnaosnovíímmobílízovanogobílkaastaphylococcusaureusstvorennâívikoristannâ AT pavlovamv bíoaffínniisorbentnaosnovíímmobílízovanogobílkaastaphylococcusaureusstvorennâívikoristannâ AT okunevov bíoaffínniisorbentnaosnovíímmobílízovanogobílkaastaphylococcusaureusstvorennâívikoristannâ AT kordiumva bíoaffínniisorbentnaosnovíímmobílízovanogobílkaastaphylococcusaureusstvorennâívikoristannâ AT gorbatiukob bioaffinnyisorbentnaosnoveimmobilizovannogobelkaastaphylococcusaureussozdanieiispolʹzovanie AT tsapenkomv bioaffinnyisorbentnaosnoveimmobilizovannogobelkaastaphylococcusaureussozdanieiispolʹzovanie AT pavlovamv bioaffinnyisorbentnaosnoveimmobilizovannogobelkaastaphylococcusaureussozdanieiispolʹzovanie AT okunevov bioaffinnyisorbentnaosnoveimmobilizovannogobelkaastaphylococcusaureussozdanieiispolʹzovanie AT kordiumva bioaffinnyisorbentnaosnoveimmobilizovannogobelkaastaphylococcusaureussozdanieiispolʹzovanie |