Виділення і очищення ізоакцепторних форм тPHK₁Ser і тPHK₂Ser із Thermus thermophilus - Крикливий, І.А.; Коваленко, О.П.; Гудзера, О.Й.; Яремчук, Г.Д.; Тукало, М.А. (Біополімери і клітина, 2006)
Серинова аміноацилювальна система є унікальною в тому розумінні, що це єдина система, де синтетаза 2-го структурного класу впізнає тРНК з довгою варіабельною гілкою (тРНК 2-го типу), що становить особливий інтерес для вивчення механізмів упізнавання тРНК відповідною аміноацил-тРНК синтетазою. Викладено методичні підходи до отримання високоочищених ізоакцепторних тPHK₁Ser і тPHK₂Ser з екстремального термофіла Т. thermophilus у міліграмових кількостях, необхідних для структурних досліджень. Розроблений метод очищення тPHKSer включає хроматографію на бензоїльованій ДЕАЕ-целюлозі і високоефективну рідинну хроматографію на аніонообмінній колонці Spherogel TSK DEAE 5PW та оберненофазовій колоці Ultrapore С8 з використанням обладнання HPLC. Serine aminoacylation system is unique as it is the only system where synthetase of class II recognizes tRNA with a long variable stem (type II tRNA) which is of great interest to study the mechanisms of tRNA recognition by corresponding aminoacyl-tRNA synthetase. Current paper presents the methodological approaches for obtaining purified isoacceptor тPHK₁Ser and тPHK₂Ser in milligram quantities from extremal thermophil T. thermophilus for crystallography. The developed method of tRNA purification employs the chromatography on benzoylated diethylaminoethylcellulose and high-performance liquid chromatography on anionexchange column Spherogel TSK DEAE 5PW, and reverse phase column Ultrapore C8 using HPLC equipment (Beckman). Сериновая аминоацилирующая система является уникальной в том понимании, что это единственная система, в которой синтетаза 2-го структурного класса узнает тРНК с длинной вариабельной ветвью (тРНК 2-го типа), что вызывает особый интерес при изучении механизмов узнавания тРНК соответствующей аминоацил-тРНК синтетазой. Изложены методические подходы к получению методам хроматографии высокоочищенных изоакцепторных тPHK₁Ser и тPHK₂Ser из экстремального термофила Т. thermophilus в миллиграммовых количествах, необходимых для структурных исследований. Разработанный метод очистки тРНК включает хроматографию на бензоилированной ДЭАЭ - целлюлозе, высокоэффективную жидкостную хроматографию на анионобменной колонке Spherogel TSK DEAE 5PW и обратнофазовой колонке Ultrapore С8 с использованием оборудования HPLC.