ГТФазо-активуючий білок олігофренін 1 – новий партнер багатофункціонального адапторного білка інтерсектину 1 - Губар, О.С.; Уї, С.; Білюарт, П.; Кропивко, С.В.; Циба, Л.О.; Гасман, С.; Риндич, А.В. (Вiopolymers and Cell, 2012)
Інтерсектин 1 (ITSN1) – багатофункціональний адапторний білок, що бере участь в ендоцитозі, екзоцитозі та передачі клітинних сигналів, а також асоційований з такими патологіями, як синдром Дауна і хвороба Альцгеймера. Мета. Виявлення нових білкових партнерів ITSN1, залучених до процесів мембранного транспорту. Методи. Аналізом in silico за допомогою програми Scansite виявлено ГТФазо-активуючий білок олігофренін 1 (OPHN1) як потенційний партнер SH3A-домену ITSN1. Для підтвердження формування комплексу між ITSN1 і OPHN1 застосовано тест на взаємодію in vitro з використанням GST-злитих білків та імунопреципітацію. Локалізацію білків у клітині визначали методами імунофлуоресценції та конфокальної мікроскопії. Результати. Показано, що мозкоспецифічна ізоформа SH3A-домену ITSN1 і SH3A-домен, який експресується в усіх тканинах, взаємодіють з OPHN1. ITSN1 і OPHN1 формують комплекси у клітинах лінії PC12 як у стані спокою, так і при стимулюванні екзоцитозу. Висновки. ГТФазо-активуючий білок OPHN1 та адапторний білок ITSN1 взаємодіють у клітинах лінії PC12 незалежно від стимулювання екзоцитозу.
Ключові слова: інтерсектин 1, олігофренін 1, PC12, екзоцитоз. Intersectin 1 (ITSN1) is a multifunctional adaptor protein which is involved in endocytosis, exocytosis and cellular signaling and it is also associated with such pathologies as Down syndrome and Alzheimer’s disease. The aim of this study was to identify new ITSN1 protein partners which are implicated in membrane trafficking. Methods. In silico analysis by Scansite online resource had identified a GTPase activating protein oligophrenin 1 (OPHN1) as a potential partner of ITSN1 SH3A domain. GST pull-down and immunoprecipitation were used to prove complex formation between ITSN1 and OPHN1. Subcellular protein localization was determined by immunofluorescence and confocal microscopy. Results. We have shown that brain-specific and ubiquitously expressed SH3A domain isoforms of ITSN1 interact with OPHN1. ITSN1 and OPHN1 form complexes in both resting and stimulated to exocytosis PC12 cell line. Conclusions. GTPase activating protein OPHN1 and adaptor protein ITSN1 interact in PC12 cell line independently of exocytosis stimulation.
Keywords: intersectin 1, oligophrenin 1, PC12, exocytosis. Интерсектин 1 (ITSN1) – многофункциональный адапторный белок, участвующий в эндоцитозе, экзоцитозе и передаче клеточных сигналов, а также ассоциированный с такими патологиями, как синдром Дауна и болезнь Альцгеймера. Цель. Выявление новых белковых партнеров ITSN1, вовлеченных в процессы мембранного транспорта. Методы. Анализом in silico с помощью программы Scansite выявлен ГТФазо-активирующий белок олигофренин 1 (OPHN1) как потенциальный партнер SH3A-домена ITSN1. Для подтверждения формирования комплекса между ITSN1 и OPHN1 применен тест на взаимодействие in vitro с использованием GST-слитых белков и иммунопреципитация. Локализацию белков в клетке определяли методами иммунофлуоресценции и конфокальной микроскопии. Результаты. Показано, что мозгоспецифическая изоформа SH3A-домена ITSN1 и SH3A-домен, экспрессирующийся во всех тканях, взаимодействуют с OPHN1. ITSN1 и OPHN1 формируют комплексы в клетках линии PC12 как в состоянии покоя, так и при стимулировании экзоцитоза. Выводы. ГТФазо-активирующий белок OPHN1 и адапторный белок ITSN1 взаимодействуют в клетках линии PC12 независимо от стимулирования экзоцитоза.
Ключевые слова: интерсектин 1, олигофренин 1, PC12, экзоцитоз.