Антиапоптотична дія нейропептиду лей-енкефаліну щодо лейкоцитів донорської крові, підданих холодовому стресу
У дослідженнях із застосуванням різних режимів холодового стресу визначено ступінь прояву апоптозу залежно від тривалості холодового впливу і температури. Вивчено вплив регуляторного нейропептиду лейенкефаліну на розвиток апоптозу лейкоцитів донорської крові людини після холодового стресу за морфоло...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Доповіді НАН України |
|---|---|
| Дата: | 2019 |
| Автори: | , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Ukrainian |
| Опубліковано: |
Видавничий дім "Академперіодика" НАН України
2019
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/158099 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Антиапоптотична дія нейропептиду лей-енке фаліну щодо лейкоцитів донорської крові, підданих холодовому стресу / О.К. Гулевський, Н.М. Моісєєва, О.Л. Горіна // Доповіді Національної академії наук України. — 2019. — № 4. — С. 94-100. — Бібліогр.: 11 назв. — укр. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-158099 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Гулевський, О.К. Моісєєва, Н.М. Горіна, О.Л. 2019-07-12T19:35:17Z 2019-07-12T19:35:17Z 2019 Антиапоптотична дія нейропептиду лей-енке фаліну щодо лейкоцитів донорської крові, підданих холодовому стресу / О.К. Гулевський, Н.М. Моісєєва, О.Л. Горіна // Доповіді Національної академії наук України. — 2019. — № 4. — С. 94-100. — Бібліогр.: 11 назв. — укр. 1025-6415 DOI: doi.org/10.15407/dopovidi2019.04.094 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/158099 577.112.5:576.367:611-018.53:57.086.13 У дослідженнях із застосуванням різних режимів холодового стресу визначено ступінь прояву апоптозу залежно від тривалості холодового впливу і температури. Вивчено вплив регуляторного нейропептиду лейенкефаліну на розвиток апоптозу лейкоцитів донорської крові людини після холодового стресу за морфологічними показниками і за допомогою флуоресцентної мікроскопії з використанням фарбників Hoechst 33342 і PI. Доведено, що додавання нейропептиду в концентрації 10⁻⁹ моль до лейкоцитів, які були піддані холодовому стресу, вірогідно зменшує кількість апоптотичних клітин. В исследованиях с использованием различных режимов холодового стресса определена степень проявления апоптоза в зависимости от продолжительности холодового воздействия и температуры. Изучено влияние регуляторного нейропептида лей-энкефалина на развитие апоптоза лейкоцитов донорской крови человека после холодового стресса по морфологическим показателям и с помощью флуоресцентной микроскопии с использованием красителей Hoechst 33342 и PI. Доказано, что добавление нейропептида в концентрации 10⁻⁹ моль к лейкоцитам, которые были подвергнуты холодовому стрессу, достоверно уменьшает количество апоптотических клеток. Using various modes of cold stress, the degree of apoptosis depending on the duration of cold exposure and the temperature is determined. The influence of leu-enkephalin regulatory neuropeptide on the development of leukocyte apoptosis of human donor blood after cold stress by morphological indices is studied. The fluorescence microscopy and Hoechst 33342 and PI dyes were used. It has been proved that the addition of the neuropeptide in a concentration of 10⁻⁹ Mol to leukocytes, which were subjected to cold stress, significantly reduces the number of apoptotic cells. uk Видавничий дім "Академперіодика" НАН України Доповіді НАН України Біохімія Антиапоптотична дія нейропептиду лей-енкефаліну щодо лейкоцитів донорської крові, підданих холодовому стресу Антиапоптотическое действие нейропептида лей-энкефалина в отношении лейкоцитов донорской крови, подвергнутых холодовому стрессу Antiapoptotic effect of leu-enkephalin neuropeptide on donor blood leukocytes under cold stress Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Антиапоптотична дія нейропептиду лей-енкефаліну щодо лейкоцитів донорської крові, підданих холодовому стресу |
| spellingShingle |
Антиапоптотична дія нейропептиду лей-енкефаліну щодо лейкоцитів донорської крові, підданих холодовому стресу Гулевський, О.К. Моісєєва, Н.М. Горіна, О.Л. Біохімія |
| title_short |
Антиапоптотична дія нейропептиду лей-енкефаліну щодо лейкоцитів донорської крові, підданих холодовому стресу |
| title_full |
Антиапоптотична дія нейропептиду лей-енкефаліну щодо лейкоцитів донорської крові, підданих холодовому стресу |
| title_fullStr |
Антиапоптотична дія нейропептиду лей-енкефаліну щодо лейкоцитів донорської крові, підданих холодовому стресу |
| title_full_unstemmed |
Антиапоптотична дія нейропептиду лей-енкефаліну щодо лейкоцитів донорської крові, підданих холодовому стресу |
| title_sort |
антиапоптотична дія нейропептиду лей-енкефаліну щодо лейкоцитів донорської крові, підданих холодовому стресу |
| author |
Гулевський, О.К. Моісєєва, Н.М. Горіна, О.Л. |
| author_facet |
Гулевський, О.К. Моісєєва, Н.М. Горіна, О.Л. |
| topic |
Біохімія |
| topic_facet |
Біохімія |
| publishDate |
2019 |
| language |
Ukrainian |
| container_title |
Доповіді НАН України |
| publisher |
Видавничий дім "Академперіодика" НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Антиапоптотическое действие нейропептида лей-энкефалина в отношении лейкоцитов донорской крови, подвергнутых холодовому стрессу Antiapoptotic effect of leu-enkephalin neuropeptide on donor blood leukocytes under cold stress |
| description |
У дослідженнях із застосуванням різних режимів холодового стресу визначено ступінь прояву апоптозу залежно від тривалості холодового впливу і температури. Вивчено вплив регуляторного нейропептиду лейенкефаліну на розвиток апоптозу лейкоцитів донорської крові людини після холодового стресу за морфологічними показниками і за допомогою флуоресцентної мікроскопії з використанням фарбників Hoechst 33342
і PI. Доведено, що додавання нейропептиду в концентрації 10⁻⁹ моль до лейкоцитів, які були піддані холодовому стресу, вірогідно зменшує кількість апоптотичних клітин.
В исследованиях с использованием различных режимов холодового стресса определена степень проявления апоптоза в зависимости от продолжительности холодового воздействия и температуры. Изучено влияние регуляторного нейропептида лей-энкефалина на развитие апоптоза лейкоцитов донорской крови
человека после холодового стресса по морфологическим показателям и с помощью флуоресцентной микроскопии с использованием красителей Hoechst 33342 и PI. Доказано, что добавление нейропептида в
концентрации 10⁻⁹ моль к лейкоцитам, которые были подвергнуты холодовому стрессу, достоверно уменьшает количество апоптотических клеток.
Using various modes of cold stress, the degree of apoptosis depending on the duration of cold exposure and the
temperature is determined. The influence of leu-enkephalin regulatory neuropeptide on the development of leukocyte
apoptosis of human donor blood after cold stress by morphological indices is studied. The fluorescence
microscopy and Hoechst 33342 and PI dyes were used. It has been proved that the addition of the neuropeptide
in a concentration of 10⁻⁹ Mol to leukocytes, which were subjected to cold stress, significantly reduces the number
of apoptotic cells.
|
| issn |
1025-6415 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/158099 |
| citation_txt |
Антиапоптотична дія нейропептиду лей-енке фаліну щодо лейкоцитів донорської крові, підданих холодовому стресу / О.К. Гулевський, Н.М. Моісєєва, О.Л. Горіна // Доповіді Національної академії наук України. — 2019. — № 4. — С. 94-100. — Бібліогр.: 11 назв. — укр. |
| work_keys_str_mv |
AT gulevsʹkiiok antiapoptotičnadíâneiropeptiduleienkefalínuŝodoleikocitívdonorsʹkoíkrovípíddanihholodovomustresu AT moísêêvanm antiapoptotičnadíâneiropeptiduleienkefalínuŝodoleikocitívdonorsʹkoíkrovípíddanihholodovomustresu AT gorínaol antiapoptotičnadíâneiropeptiduleienkefalínuŝodoleikocitívdonorsʹkoíkrovípíddanihholodovomustresu AT gulevsʹkiiok antiapoptotičeskoedeistvieneiropeptidaleiénkefalinavotnošeniileikocitovdonorskoikrovipodvergnutyhholodovomustressu AT moísêêvanm antiapoptotičeskoedeistvieneiropeptidaleiénkefalinavotnošeniileikocitovdonorskoikrovipodvergnutyhholodovomustressu AT gorínaol antiapoptotičeskoedeistvieneiropeptidaleiénkefalinavotnošeniileikocitovdonorskoikrovipodvergnutyhholodovomustressu AT gulevsʹkiiok antiapoptoticeffectofleuenkephalinneuropeptideondonorbloodleukocytesundercoldstress AT moísêêvanm antiapoptoticeffectofleuenkephalinneuropeptideondonorbloodleukocytesundercoldstress AT gorínaol antiapoptoticeffectofleuenkephalinneuropeptideondonorbloodleukocytesundercoldstress |
| first_indexed |
2025-11-25T20:56:22Z |
| last_indexed |
2025-11-25T20:56:22Z |
| _version_ |
1850543624452833280 |
| fulltext |
94 ISSN 1025-6415. Dopov. Nac. akad. nauk Ukr. 2019. № 4
ОПОВІДІ
НАЦІОНАЛЬНОЇ
АКАДЕМІЇ НАУК
УКРАЇНИ
БІОХІМІЯ
doi: https://doi.org/10.15407/dopovidi2019.04.094
УДК 577.112.5:576.367:611-018.53:57.086.13
О.К. Гулевський, Н.М. Моісєєва, О.Л. Горіна
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України, Харків
E-mail: ukrainanataliy@gmail.com
Антиапоптотична дія нейропептиду лей-енкефаліну щодо
лейкоцитів донорської крові, підданих холодовому стресу
Представлено академіком НАН України А.М. Гольцевим
У дослідженнях із застосуванням різних режимів холодового стресу визначено ступінь прояву апоптозу за-
лежно від тривалості холодового впливу і температури. Вивчено вплив регуляторного нейропептиду лей-
енкефаліну на розвиток апоптозу лейкоцитів донорської крові людини після холодового стресу за морфоло-
гічними показниками і за допомогою флуоресцентної мікроскопії з використанням фарбників Hoechst 33342
і PI. Доведено, що додавання нейропептиду в концентрації 10–9 моль до лейкоцитів, які були піддані холодо-
вому стресу, вірогідно зменшує кількість апоптотичних клітин.
Ключові слова: холодовий стрес, апоптоз, лейкоцити, лей-енкефалін.
Актуальним завданням сьогодення є пошук антиапоптотичних агентів, дія яких спрямо-
вана на блокування апоптозу в лейкоцитах після холодового стресу. Як відомо, однією з
причин пошкодження клітин за умов зниження температури є гіпоксія, що призводить до
збільшення кількості гідроксильних радикалів та інших активних форм кисню внаслідок
порушень процесів окисного фосфорилювання і розвитку окиснювального стресу, що
спричиняє ушкодження ДНК та ініціації апоптозу [1]. У зв’язку з цим ведеться пошук
агентів, які при охолодженні і поверненні в умови нормотермії впливають на окиснювально-
відновні процеси в клітинах і запобігають апоптотичним процесам. Згідно з даними аналізу
літератури і досліджень у цьому напрямку, як антиапоптотичні речовини особливої ува-
ги заслуговують нейропептиди, отримані з головного мозку гібернуючих тварин, або їх
синтетичні аналоги, зокрема лей-енкефалін, відомий як препарат Даларгін [2, 3]. Показа-
но, що лей-енкефалін містить ключову послідовність амінокислот усіх опіоїдів і йому при-
таманний широкий спектр біологічної активності: антигіпоксична та імуномоделювальна
дія, інгібування пероксидного окиснення ліпідів, обмеження гормонально-метаболічних
та енергетичних порушень, покращення мікроциркуляції, прискорення фізіологічної та
репаративної регенерації [2, 4]. Механізм антиапоптотичної дії цієї сполуки пов’язаний з
регуляцією опіоїдних рецепторів і зв’язаних з ними K+-Na+ каналів мітохондрій.
© О.К. Гулевський, Н.М. Моісєєва, О.Л. Горіна, 2019
95ISSN 1025-6415. Допов. Нац. акад. наук Укр. 2019. № 4
Антиапоптотична дія нейропептиду лей-енкефаліну щодо лейкоцитів донорської крові...
Зважаючи на вищесказане, ми ставили за мету дослідити вплив регуляторного нейро-
пептиду лей-енкефаліну на апоптоз лейкоцитів донорської крові людини після холодово-
го стресу за морфологічними показниками з використанням світлової та флуоресцентної
мікроскопії.
Матеріали і методи. Лейкоконцентрат отримували з донорської крові людини методом
диференціального центрифугування [5]. Для моделювання холодового стресу та ініціації
апоптозу лейкоцитів використовували такі температурні режими і час експозиції клітин:
1 — 15 хв у льодовій бані та 15 хв при 37 °С;
2 — 15 хв у льодовій бані та 30 хв при 37 °С;
3 — 15 хв у льодовій бані та 60 хв при 37 °С;
4 — 30 хв у льодовій бані та 30 хв при 37 °С;
5 — 30 хв у льодовій бані та 60 хв при 37 °С;
6 — 30 хв у льодовій бані та 120 хв при 37 °С;
7 — 60 хв у льодовій бані та 30 хв при 37 °С;
8 — 60 хв у льодовій бані та 60 хв при 37 °С;
9 — 60 хв у льодовій бані та 120 хв при 37 °С.
Нейропептид вносили в суспензію клітин у передінкубаційний період у концентраціях:
10−6 моль−10−7 моль−10−8 мол−10−9 моль. Аналіз наявності апоптотичних змін у клітинах
проводили за морфологічними ознаками клітин (пікноз клітин, фрагментація ядра та
блебінг) за допомогою світлової мікроскопії (PZO-Warszava, Польща; імерсія; ок. 8, об. 100)
після фарбування мазків лейкоконцентрату за Романовським—Гімзе.
Дослідження морфологічних особливостей клітинних ядер та кількості некротичних
клітин у лейкоконцентраті проводили з використанням флуоресцентних барвників Hoechst
33342 (“Sigmа”) та пропідію йодиду (PI, “Sigmа”). Аліквоти PI (7,5 мкМ) та Hoechst 33342
(9 мкМ), розведені фосфатно-сольовим буферним розчином (PBS; рН 7,4), додавали до
1 мл PBS та змішували у співвідношенні 1 : 1 з лейкоконцентратом, в якому знаходилися.
Витримували 30 хв у темряві при кімнатній температурі та видаляли барвники шляхом роз-
ведення до 5 мл PBS та центрифугування.
Інтенсивність флуоресценції барвників реєстрували при збудженні 490 нм і випроміню-
ванні 636 нм для PI та при збудженні 350 нм і випромінюванні 461 нм для Hoechst 33342 за
допомогою конфокального лазерного сканувального мікроскопа LSM 510 META Carl Zeiss
(“Carl Zeiss”, Німеччина). Підраховували кількість лейкоцитів з ядрами, позитивно забарв-
леними PI, та виражали їх у відсотках до загальної кількості клітин у лейкоконцентраті.
Всього підраховували 200 клітин у зразку. Кількість клітин з патологічними ознаками ядер
виражали у відсотках до загальної кількості підрахованих клітин.
Статистичний аналіз експериментальних даних проводили за допомогою комп’ютерної
обробки з використанням програмного пакета “STATGRAPHIC plus for Windows” версії 2.1
за непараметричним критерієм Манна—Уітні. Кількість повторів у кожній серії експери-
ментів була не менше 5—6. Експериментальні дані наведені як середнє арифметичне ± се-
реднє квадратичне відхилення. Ступінь вірогідності становив 0,05.
Результати та їх обговорення. Відомо, що ініціація апоптотичних процесів починаєть-
ся в умовах температури нижче фізіологічної. Зокрема в роботах [6, 7] показано, що після
інкубації лімфоцитів при 16—21 °C відбувається індукція апоптозу. Зниження температури
96 ISSN 1025-6415. Dopov. Nac. akad. nauk Ukr. 2019. № 4
О.К. Гулевський, Н.М. Моісєєва, О.Л. Горіна
на градус призводить до збільшення кількості клітин з ознаками апоптозу. Численні дані
вказують на те, що для більшості клітин апоптоз є типовою реакцією на гіпотермію і подаль-
ше відігрівання [6, 8, 9]. Однак ступінь прояву апоптозу залежить від тривалості холодового
впливу, температури, а також інших факторів.
Отже, в першій серії експериментів за мету ставилося визначення оптимальної темпе-
ратури і часу експозиції лейкоцитів, які призводять до індукції апоптозу цих клітин. Аналіз
наявності апоптотичних змін у лейкоцитах проводили за такими морфологічними озна-
ками: пікноз клітин, фрагментація ядра та блебінг мембран [10]. Встановлено (рис. 1), що
лейкоцити з ознаками апоптозу виявлялися вже після інкубації протягом 15 хв на льоду з
подальшим різким підвищенням температури до 37 ˚С.
Так, після режиму 1 і 2 реєстрували 59,2 ± 3,1 і 60,7 ± 2,3 % відповідно клітин з озна-
ками апоптозу і 7,2 ± 1,2 та 10,2 ± 1,9 % відповідно некротичних лейкоцитів. Збільшення
часових інтервалів обох режимів інкубації сприяло не стільки підвищенню показника від-
соткового вмісту апоптичних лейкоцитів, скільки кількості клітин з ознаками некрозу. Зо-
крема, після режиму 3 кількість клітин з морфологічними ознаками апоптозу не переви-
щувала 59,5 ± 1,8 %, при цьому вміст некротичних клітин вірогідно (р 0,05) збільшувався
до 17,3 ± 2,2 % порівняно з режимами 1 і 2. Таким чином, на підставі одержаних результатів
нами встановлено, що подовження часу інкубації саме при 37 ˚С призводить до найбільш
руйнівних наслідків, а саме збільшення кількості клітин з ознаками некрозу.
На наступному етапі ми оцінювали антиапоптотичний ефект нейропептиду лей-
енкефаліну, дія якого безпосередньо спрямована на інгібування пероксидного окиснення
Рис. 1. Відсотковий вміст апоптичних лейкоцитів у суспензії після різних режимів температурного впли-
ву: 1 — 15 хв у льодовій бані та 15 хв при 37 оС; 2 — 15 хв у льодовій бані та 30 хв при 37 оС; 3 — 15 хв у
льодовій бані та 60 хв при 37 оС; 4 — 30 хв у льодовій бані та 30 хв при 37 оС; 5 — 30 хв у льодовій бані та
60 хв при 37 оС; 6 — 30 хв у льодовій бані та 120 хв при 37 оС; 7 — 60 хв у льодовій бані та 30 хв при 37 оС;
8 — 60 хв у льодовій бані та 60 хв при 37 оС; 9 — 60 хв у льодовій бані та 120 хв при 37 оС
97ISSN 1025-6415. Допов. Нац. акад. наук Укр. 2019. № 4
Антиапоптотична дія нейропептиду лей-енкефаліну щодо лейкоцитів донорської крові...
ліпідів [2, 11], що, як наслідок, може мати вплив на ступінь прояву апоптозу лейкоцитів
після холодового стресу. У роботі [2] припускалося, що реалізація захисних властивостей
пептиду відбувається через активацію δ-опіоїдного рецептора та ініціацію каскаду реакцій,
що сприяють стабілізації неспецифічної мітохондріальної пори.
З урахуванням вищесказаного на наступному етапі ми вивчали антиапоптотичну дію
лей-енкефаліну в концентрації 10−9 моль/л за таким режимом 1 : 15 хв передінкубації з
лейкоцитами до холодового впливу, 15 хв у льодовій бані та 15 хв при 37 °С. Апоптотичні
зміни лейкоцитів оцінювали за морфологічними показниками методом Романовського—
Гімзе (рис. 2, а) і за допомогою флуоресцентних барвників, зокрема Hoechst 33342 і PI
(рис. 2, б, в).
Встановлено, що додавання нейропептиду до лейкоцитів після холодового стресу в кон-
центрації 10−9 моль/л сприяло вірогідному зменшенню відсотка клітин з морфологічними
ознаками апоптозу, які оцінювали за методом Романовського—Гімзе. Зокрема, кількість
апоптотичних клітин після додавання нейропептиду вірогідно (р < 0,05) зменшувалася до
48,2 ± 3,2 % порівняно з контролем (65,3 ± 2,5 %). Необхідно відзначити, що кількість некро-
тичних клітин також вірогідно (р < 0,05) зменшувалася до 5,2 ± 0,8 % порівняно з контролем
(14,9 ± 1,8 %) (рис. 3, а).
У разі використання флуоресцентного ДНК-барвника Hoechst 33342, який вільно про-
никає в усі клітини, незалежно від ступеня пошкодження їх мембрани, спостерігалася іден-
тична тенденція. Так, у контролі кількість клітин з фрагментацією ядра, що є наслідком
апоптотичних процесів у лейкоцитах після холодового стресу [1], становила 51,4 ± 1,7 %.
Після додавання в інкубаційне середовище нейропептиду кількість клітин з фрагментацією
ядра вірогідно зменшувалася до 32,7 ± 2,7 % (див. рис. 3, б).
Результати дослідження життєздатності лейкоцитів за флуоресцентним ДНК-барв-
ни ком PI також узгоджуються з попередніми даними щодо морфологічних ознак некрозу.
Зокрема, з рис. 4 видно, що в контрольній групі кількість некротичних клітин становила
Рис. 2. Лейкоцити з морфологічними ознаками апоптозу після холодового стресу: а — мікрофотографія
суспензії лейкоцитів, забарвлення еозин-метиленовим синім та азур-еозином, зб.: ок. 10, об. 100; імерсія;
б — мікрофотографія суспензії лейкоцитів, забарвлення Hoechst 33342 та PI, зб. ок. 10, об. 63, імерсія; в —
мікрофотографія нативних лейкоцитів, забарвлення Hoechst 33342 та PI, зб. ок. 10, об. 63, імерсія. 1 —
блебінг; 2 — фрагментація ядра; 3 — пікноз; 4 — некроз
98 ISSN 1025-6415. Dopov. Nac. akad. nauk Ukr. 2019. № 4
О.К. Гулевський, Н.М. Моісєєва, О.Л. Горіна
20,6 ± 2,1 %, однак після додавання нейропептиду кількість позитивних за РІ клітин не пе-
ревищувала 7,8 ± 1,3 %.
Таким чином, у дослідженнях із застосуванням різних режимів холодового стресу з’я-
со вано ступінь прояву апоптозу залежно від тривалості холодового впливу і температури.
Встановлено, що найбільш сприятливим для вивчення явищ апоптозу є такий режим: 15 хв
передінкубації лейкоцитів при 37 ˚С, 15 хв експозиції клітин при 0 ˚С і 15 хв подальшої
інкубації при 37 ˚С, оскільки саме за таких умов відношення апоптотичних клітин до не-
кротичних було максимальним. Антиапоптотичну дію на лейкоцити після холодового стре-
су, яку оцінювали за морфологічними ознаками і за допомогою флуоресцентної мікроско-
пії з використанням барвників Hoechst 33342 і PI, нейропептид лей-енкефалін виявляє в
концентрації 10−9 моль. З огляду на той факт, що для більшості клітин апоптоз є типовою
реакцією на охолодження і подальше відігрівання, одержані дані актуальні і необхідні для
вдосконалення протоколів низькотемпературного зберігання лейкоцитів або для створення
реабілітуючих середовищ з метою пригнічення апоптотичних реакцій і підвищення функці-
ональної активності клітин після холодового стресу.
ЦИТОВАНА ЛІТЕРАТУРА
1. Гулевский А.К., Ахатова Ю.С., Щенявский И.И. Особенности апоптоза, индуцированного снижением
температуры. Пробл. криобиологии и криомедицины. 2017. 27, № 2. С. 97—109. doi: https://doi.org/
10.15407/cryo27.02.097
2. Лихванцев В.В., Гребенников О.А., Шапошников А.А., Борисов К.Ю., Черпаков Р.А., Шульгина Н.М.
Фармакологическое прекондиционирование: роль опиоидных пептидов. Общая реаниматология. 2012.
8, № 3. С. 51—55.
3. Маслов Л.Н., Лишманов Ю.Б., Барзах Е.И., Максимов И.В., Ворожцова И.Н., Буховец И.Л., Ми-
нин С.М., Орлова Е.Б., Лавров А.Г., Овчинников М.В. Кардиоваскулярные эффекты D-Ala2, Leu5, Arg6-
Рис. 3. Кількість апоптотичних і некротичних лейкоцитів після холодового стресу та інкубації з лей-
енкефаліном у концентрації 10−9 моль/л: а — за даними світлової мікроскопії (забарвлення за Ро ма нов-
ським—Гімзе); б — за даними флуоресцентної мікроскопії (забарвлення Hoechst 33342 і РІ). * — відміннос-
ті вірогідні порівняно з контролем, р 0,05; # — відмінності вірогідні порівняно з нормою, р 0,05
99ISSN 1025-6415. Допов. Нац. акад. наук Укр. 2019. № 4
Антиапоптотична дія нейропептиду лей-енкефаліну щодо лейкоцитів донорської крові...
эн кефалина (Даларгин) связаны с активацией периферических опиоидных μ-рецепторов. Эксперим. и
клинич. фармакология. 2008. 71, № 2. С. 21—28.
4. Shenoy S.S., Lui F. Biochemistry, Endogenous Opioids. StatPerls. URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/
books/NBK532899/. (Дата звернення: 15.01.2019).
5. Аграненко В.А., Сукясян Г.В., Воробьева Г.С., Абезгауз Н.Н., Трошина В.М., Копыл В.И., Шитикова
М.Г., Мартынова В.А., Ермакова Г.А. Методы выделения концентратов тромбо- и лейкоцитов из лейко-
тромбоцитарного слоя консервированной крови в пластикатных мешках. Гематология и трансфузио-
логия. 1985. 30, № 11. С. 54—59.
6. Neutelings T., Lambert C.A., Nusgens B.V., Colige A.C. Effects of mild cold shock (25 °C) followed by warm-
ing up at 37 °C on the cellular stress response. Plos One. 2013. 8. е69687. doi: https://doi.org/10.1371/jour-
nal.pone.0069687
7. Fransen J.H., Dieker J.W., Hilbrands L.B., Berden J.H., van der Vlag J. Synchronized turbo apoptosis induced
by cold-shock. Apoptosis. 2011. 16. P. 86-93. doi: https://doi.org/10.1007/s10495-010-0546-0
8. Rauen U., Polzar B., Stephan H., Mannherz H.G., de Groot H. Cold-induced apoptosis in cultured hepato-
cytes and liver endothelial cells: mediation by reactive oxygen species. FASEB J. 1999. 13, № 1. P. 155—
168.
9. Rauen U., Petrat F., Li T., De Groot H. Hypothermia injury/cold induced apoptosis – evidence of an increase
in chelatable iron causing oxidative injury in spite of low O2-/H2O2 formation. FASEB J. 2000. 14, № 13.
Р. 1953—1964. doi: https://doi.org/10.1096/fj.00-0071com
10. Zhang Y., Chen X., Gueydan C., Han J. Plasma membrane changes during programmed cell deaths. Cell Res.
2018. 28. P. 9—21. doi: https://doi.org/10.1038/cz.2017.133
11. Plotnikov E.Y., Chupyrkina A.A., Jankauskas S.S., Pevzner I.B., Silachev D.N., Skulachev V.P., Zorov D.B.
Mechanisms of nephroprotective effect of mitochondria-targeted antioxidants under rhabdomyolysis and
ischemia/reperfusion. Biochim. Biophys. Acta. 2011. 1812, Iss. 1. P. 77—86. doi: https://doi.org/10.1016/j.
bbadis.2010.09.008
Надійшло до редакції 12.02.2019
REFERENCES
1. Gulevsky, A. K., Akhatova, Yu. S. & Shchenyavsky, I. I. (2017). Features of apoptosis, induced by temperature
reduction. Probl. Cryobiol. Cryomed., 27, No. 2, pp. 97-109 (in Russian). doi: https://doi.org/10.15407/
cryo27.02.097
2. Likhvantsev, V. V., Grebenchikov, O. A., Shaposhnikov, A. A., Borisov, K. Yu., Cherpakov, R. A. & Shulgi-
na, N. V. (2012). Pharmacological preconditioning: role of opioid peptides. Obshchaya Reanimatologiya, 8,
No. 3, pp. 51-55 (in Russian).
3. Maslov, L. N., Lishmanov, Yu. B., Barzakh, E. I., Maksimov, I. V., Vorozhtsova, I. N., Bukhovets, I. L., Mi-
nin, S. M., Orlova, E. B., Lavrov, A. G. & Ovchinnikov, M. V. (2008). Cardiovascular effects of D-Ala2, Leu5,
Arg6-enkephalin (Dalargin) are mediated by peripheral μ-opioid receptor activation. Éksperimentalnaya i
Klini cheskaya Farmakologiya, 71, No. 2, pp. 21-28 (in Russian).
4. Shenoy, S. S. & Lui, F. (2018). Biochemistry, Endogenous Opioids. StatPearls. Retrieved from https://www.
ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK532899/
5. Agranenko, V. A., Sukisyan, G. V., Vorobyeva, G. S., Abezgauz, N. N., Troshina, V. M., Kopyl, V. I., Shitiko-
va, M. G., Martynova, V. A. & Ermakova, G. A. (1985). Methods for isolation of thrombo- and leucocyte con-
centrates from the thrombocytic layer of the blood preserved in plastic bags. Hematology and Transfusiology,
30, No. 11, pp. 54-59 (in Russian).
6. Neutelings, T., Lambert, C. A., Nusgens, B. V. & Colige, A.C. (2013). Effects of mild cold shock (25 °C) fol-
lowed by warming up at 37 °C on the cellular stress response. Plos One, 8, е69687. doi: https://doi.org/10.1371/
journal.pone.0069687
7. Fransen, J. H., Dieker, J. W., Hilbrands, L. B., Berden, J. H. & van der Vlag, J. (2011). Synchronized turbo
apoptosis induced by cold-shock. Apoptosis, 16, pp. 86-93. doi: https://doi.org/10.1007/s10495-010-0546-0
8. Rauen, U., Polzar, B., Stephan, H., Mannherz, H. G. & de Groot, H. (1999). Cold-induced apoptosis in cul-
tured hepatocytes and liver endothelial cells: mediation by reactive oxygen species. FASEB J., 13, No. 1,
pp. 155-168.
О.К. Гулевський, Н.М. Моісєєва, О.Л. Горіна
9. Rauen, U., Petrat, F., Li, T. & De Groot, H. (2000). Hypothermia injury/cold induced apoptosis – evidence of
an increase in chelatable iron causing oxidative injury in spite of low O2-/H2O2 formation. FASEB J., 14,
No. 13, pp. 1953-1964. doi: https://doi.org/10.1096/fj.00-0071com
10. Zhang, Y., Chen, X., Gueydan, C. & Han, J. (2018). Plasma membrane changes during programmed cell deaths.
Cell Res., 28, pp. 9-21. doi: https://doi.org/10.1038/cz.2017.133
11. Plotnikov, E. Y., Chupyrkina, A. A., Jankauskas, S. S., Pevzner, I. B., Silachev, D. N., Skulachev, V. P. & Zo-
rov, D. B. (2011). Mechanisms of nephroprotective effect of mitochondria-targeted antioxidants under rhab-
domyolysis and ischemia/reperfusion. Biochim. Biophys. Acta., 1812, Iss. 1, pp. 77-86. doi: https://doi.org/
10.1016/j.bbadis.2010.09.008
Received 12.02.2019
А.К. Гулевский, Н.Н. Моисеева, О.Л. Горина
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, Харьков
E-mail: ukrainanataliy@gmail.com
АНТИАПОПТОТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ НЕЙРОПЕПТИДА ЛЕЙ-ЭНКЕФАЛИНА
В ОТНОШЕНИИ ЛЕЙКОЦИТОВ ДОНОРСКОЙ КРОВИ, ПОДВЕРГНУТЫХ
ХОЛОДОВОМУ СТРЕССУ
В исследованиях с использованием различных режимов холодового стресса определена степень проявле-
ния апоптоза в зависимости от продолжительности холодового воздействия и температуры. Изучено вли-
яние регуляторного нейропептида лей-энкефалина на развитие апоптоза лейкоцитов донорской крови
человека после холодового стресса по морфологическим показателям и с помощью флуоресцентной ми-
кроскопии с использованием красителей Hoechst 33342 и PI. Доказано, что добавление нейропептида в
концентрации 10−9 моль к лейкоцитам, которые были подвергнуты холодовому стрессу, достоверно умень-
шает количество апоптотических клеток.
Ключевые слова: холодовой стресс, апоптоз, лейкоциты, лей-энкефалин.
A.K. Gulevsky N.N. Moiseyevа, O.L. Gorina
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the NAS of Ukraine, Kharkiv
E-mail: ukrainanataliy@gmail.com
ANTIAPOPTOTIC EFFECT OF LEU-ENKEPHALIN NEUROPEPTIDE
ON DONOR BLOOD LEUKOCYTES UNDER COLD STRESS
Using various modes of cold stress, the degree of apoptosis depending on the duration of cold exposure and the
temperature is determined. The influence of leu-enkephalin regulatory neuropeptide on the development of leu-
kocyte apoptosis of human donor blood after cold stress by morphological indices is studied. The fluorescence
microscopy and Hoechst 33342 and PI dyes were used. It has been proved that the addition of the neuropeptide
in a concentration of 10−9 Mol to leukocytes, which were subjected to cold stress, significantly reduces the num-
ber of apoptotic cells.
Keywords: cold stress, apoptosis, leukocytes, leu-enkephalin.
|