Применение фуксина основного дляопределения бромид-ионов в водах методом отражательной цветометрии

Разработана фотометрическая методика определения бромид-ионов в водах, которая основана на окислении в водном растворе бромида до брома хлорамином Т, концентрировании бромпроизводного фуксина основного на мембранных фильтрах и измерении светлоты полученных окрашенных концентратов в тонком слое с пом...

Full description

Saved in:
Bibliographic Details
Published in:Химия и технология воды
Date:2016
Main Authors: Мазная, Ю.И., Зуй, О.В.
Format: Article
Language:Russian
Published: Інститут колоїдної хімії та хімії води ім. А.В. Думанського НАН України 2016
Subjects:
Online Access:https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/160774
Tags: Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
Journal Title:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Cite this:Применение фуксина основного дляопределения бромид-ионов в водах методом отражательной цветометрии / Ю.И. Мазная, О.В. Зуй // Химия и технология воды. — 2016. — Т. 38, № 2. — С. 183-190. — Бібліогр.: 9 назв. — рос.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
_version_ 1860219293709369344
author Мазная, Ю.И.
Зуй, О.В.
author_facet Мазная, Ю.И.
Зуй, О.В.
citation_txt Применение фуксина основного дляопределения бромид-ионов в водах методом отражательной цветометрии / Ю.И. Мазная, О.В. Зуй // Химия и технология воды. — 2016. — Т. 38, № 2. — С. 183-190. — Бібліогр.: 9 назв. — рос.
collection DSpace DC
container_title Химия и технология воды
description Разработана фотометрическая методика определения бромид-ионов в водах, которая основана на окислении в водном растворе бромида до брома хлорамином Т, концентрировании бромпроизводного фуксина основного на мембранных фильтрах и измерении светлоты полученных окрашенных концентратов в тонком слое с помощью отражательной цветометрии. Предел обнаружения бромид-ионов составляет 10 мкг/дм³, интервал линейности градуировочного графика – от 10 до 1000 мкг/дм³. Избыток хлорамина Т не мешает определению, что упрощает и сокращает анализ. Предложенная методика является более чувствительной, экспрессной и простой в выполнении, чем существующие стандартные методики. Она позволяет контролировать содержание бромид-ионов в водах как на уровне, так и ниже ПДК, и может применяться в полевых условиях на месте отбора проб. Розроблено фотометричну методику визначення бромід-іонів у водах, яка базується на окисленні у водному розчині броміду до брому хлораміном Т, концентруванні бромпохідного фуксину основного на мембранних фільтрах і вимірюванні світлоти отриманих забарвлених концентратів в тонкому шарі за допомогою відбивної кольорометрії. Межа виявлення бромід-іонів становить 10 мкг/дм³, інтервал лінійності градуювального графіка – від 10 до 1000 мкг/дм³. Надлишок хлораміну Т не заважає визначенню, що спрощує і скорочує аналіз. Запропонована методика є більш чутливою, експресною і простою у виконанні, ніж існуючі стандартні методики. Вона дозволяє контролювати вміст бромід-іонів у водах як на рівні, так і нижче гранично допустимої концентрації і може застосовуватися в польових умовах на місці відбору проб. Photometric procedure has been developed for determining bromide ions in waters which is based on the oxidation of bromide in an aqueous solution to bromine by Chloramine T, preconcentration of fuchsin basic bromo derivative on membrane filters and measurement of lightness of colored concentrates obtained in a thin layer using reflectance colorimetry. The detection limit for bromide ions is 10 μg/dm³, the linearity of the calibration curve ranges from 10 to 1000 μg/dm³. Excess of Chloramine T does not interfere with the determination which simplifies the analysis and reduces its duration. The proposed procedure is more sensitive, rapid and simple in execution, than the existing standard procedures. It allows to control the content of bromide ions in waters at the level or below the maximum permissible concentration and can be used under field conditions at the sampling site.
first_indexed 2025-12-07T18:17:51Z
format Article
fulltext ISSN 0204–3556. Химия и технология воды, 2016, т.38, №2 183 ©, Ю.И. Мазная, О.В. Зуй, 2016 Аналитическая химия воды УДК 543.3:546.141 Ю.И. Мазная, О.В. Зуй ПРИМЕНЕНИЕ ФУКСИНА ОСНОВНОГО ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БРОМИД-ИОНОВ В ВОДАХ МЕТОДОМ ОТРАЖАТЕЛЬНОЙ ЦВЕТОМЕТРИИ Институт коллоидной химии и химии воды им. А.В. Думанского НАН Украины, г. Киев olegzuy@gmail.com Разработана фотометрическая методика определения бромид-ионов в водах, которая основана на окислении в водном растворе бромида до брома хлорами- ном Т, концентрировании бромпроизводного фуксина основного на мембранных фильтрах и измерении светлоты полученных окрашенных концентратов в тонком слое с помощью отражательной цветометрии. Предел обнаружения бромид-ионов составляет 10 мкг/дм3, интервал линейности градуировочного графика – от 10 до 1000 мкг/дм3. Избыток хлорамина Т не мешает определе- нию, что упрощает и сокращает анализ. Предложенная методика является более чувствительной, экспрессной и простой в выполнении, чем существу- ющие стандартные методики. Она позволяет контролировать содержание бромид-ионов в водах как на уровне, так и ниже ПДК, и может применяться в полевых условиях на месте отбора проб. Ключевые слова: анализ вод, бромид-ионы, отражательная цветометрия, фуксин основной. Введение. Бром в природных водах содержится исключительно в виде бромидов. При этом существует корреляция между содержанием соединений хлора, брома и йода: общего хлора обычно в ∼100 раз больше, чем общего брома, а общего йода в ∼100 раз меньше, чем брома. При дезинфекции вод, содержащих повышенные количества бромид-ионов, окислителями, в частности озоном, возможно образование токсических бромат-ионов в количествах, превышающих ПДК. Следует отметить, что ПДК бромат-ионов в питьевых водах составляет 10 мкг/дм3 [1]. Сле- ISSN 0204–3556. Химия и технология воды, 2016, т.38, №2184 довательно, бромат-ион является возникающим токсикантом в обрабо- танных дезинфектантами питьевых водах, представляющим опасность для здоровья и жизнедеятельности человека. Бромат-ионы образуются в водах из бромид-ионов. Поэтому артезианская вода с повышенным содержанием бромид-ионов не должна использоваться при обеззара- живании озоном. При обработке вод озоном пороговая концентрация бромида, при которой бромат еще не образуется в количествах, превы- шающих его ПДК, составляет 40 мкг/дм3 [2]. Поэтому актуальной явля- ется разработка методов определения микроколичеств ионов бромида в воде. При определении бромид-ионов в водах наиболее часто исполь- зуют фотометрические, электрохимические, кинетические, ионо- хроматографические методы. Электрохимические и кинетические методы недостаточно селективны. Избирательный метод ионной хроматографии, обладающий пределом обнаружения бромид-ионов на уровне 50 – 100 мкг/дм3, является длительным и трудоемким [3]. Значительная часть спектрофотометрических методов определения бромид-ионов основана на их предварительном окислении до брома [4] и бромировании органических реагентов. Наиболее избирательной из фотометрических методик является экстракционно-фотометрическая с применением фуксина основного [5], при которой к водному рас- твору добавляют органический растворитель – трет-бутанол или хло- роформ. Позже с целью повышения экобезопасности анализа (устра- нения необходимости использования органических растворителей) методика была усовершенствована применением вместо самого кра- сителя сильнокислотного катионита КРС-8П, модифицированного фуксином основным, что позволило предложить безэкстракционный вариант анализа путем измерения светопоглощения твердой фазы в кювете толщиной 1 мм [6]. Методика в указанном варианте позволяет определять 0,8 – 6,4 мг/дм3 бромид-ионов. Цель данной работы – разработка простой и экспрессной методики определения микроколичеств бромид-ионов методом отражательной цветометрии. Методика эксперимента. При приготовлении растворов реагентов использовали дистиллированную воду. Исходный раствор бромид- ионов (1 г/дм3) готовили растворением соответствующей навески КBr "х.ч." в воде. Рабочие растворы готовили соответственно разбавлением исходного раствора водой и использовали в день приготовления. При- ISSN 0204–3556. Химия и технология воды, 2016, т.38, №2 185 меняли фуксин основной "ч.д.а.", растворяя его навеску в воде при нагревании на водяной бане до 80°С. Применяли также серную кис- лоту "х.ч.", хлорамин Т фирмы "Aldrich". Для получения окрашенных концентратов использовали фильтры мембранные нитроцеллюлоз- ные (Украина), для фильтрования – разборную тефлоновую воронку Бюхнера с эффективной площадью фильтрования 1,25 см2. Цветовые координаты RGB окрашенных пятен измеряли прибором PocketSpec (г. Денвер, США), оценивая светлоту (R) окрашенных пятен по яркости оттенков красного цвета (канал G). Методика определения бромид-ионов с применением фуксина основного. К 100 см3 пробы, помещенной в коническую колбу на 500 см3, содер- жащей бромид-ионы, прибавляют раствор фуксина основного до кон- центрации 1⋅10-5 М, 5 см3 концентрированной серной кислоты, переме- шивают, затем прибавляют 1,0 см3 0,4%-ного раствора хлорамина Т и оставляют на 40 мин. После этого раствор фильтруют через нитроцел- люлозный мембранный фильтр с размером пор 0,3 – 0,5 мкм и изме- ряют светлоту полученных окрашенных концентратов. Результаты и их обсуждение. При введении раствора фуксина основ- ного в подкисленную пробу краситель переходит в почти бесцветную, желтоватого оттенка лейко-форму, которая при появлении следов брома в растворе превращается в труднорастворимый тетрабромфук- син красного цвета [5, 6]. Это соединение можно сконцентрировать в виде тонкого слоя на нитроцеллюлозных мембранных фильтрах при фильтровании через них исследуемых проб. Ацетилцеллюлозные фильтры для концентрирования аналитической формы непригодны. Установлено, что для концентрирования тетрабромфуксина на мем- бранных фильтрах оптимальный размер пор составляет 0,3 – 0,5 мкм. На рис. 1 показано влияние продолжительности отстаивания проб с реагентами на светлоту мембранных фильтров, из которого видно, что устойчивая окраска достигается в течение 40 мин. Из данных [6] следует, что оптимальный интервал кислотности для образования окрашенной формы – от рН 2 до 3 М Н 2 SO 4 . Нами были установлены оптимальные условия проведения реакции: кислотность – 1 М Н 2 SO 4 , концентрация фуксина основного – 1⋅10-5 М. В этих условиях проис- ходит разложение хлорамина Т с выделением хлора, и бромид-ионы количественно окисляются до брома, который далее взаимодействует с бесцветной лейко-формой красителя в растворе. ISSN 0204–3556. Химия и технология воды, 2016, т.38, №2186 52 56 60 64 68 0 20 40 60 80 С те п ен ь п от ем н ен и я, % мин Рис. 1. Зависимость степени потемнения мембранных фильтров от продол- жительности отстаивания проб. Для окисления бромид-ионов необходим не менее чем двукрат- ный и не более чем 20-кратный по сравнению со стехиометрическим избыток хлорамина Т, так как при недостаточной концентрации хло- рамина окисление бромидов может быть неполным, а при избыточном содержании протекают побочные редокс-реакции. Реагент и его бром- производное проявляют устойчивость к действию свободного хлора. Образующееся соединение устойчиво в растворе и на поверхности фильтров не менее одних суток. Уравнения имеющих место реакций можно представить следующим образом: H2N C NH2 + NH2 + 4Br- + 2Cl2 H2N C NH2 + NH2 Br Br BrBr + 4 Cl- 2 CH3C6H4SO2NClNa H2SO4 2 CH3C6H4SO2NH2 + Cl2 + Na2SO4 (1) (2) ; . Уравнение (1) представляет собой реакцию гидролиза хлорамина Т в сернокислой среде, (2) – реакцию бромирования фуксина основ- ного. На рис. 2 показаны спектры диффузного отражения тетрабром- фуксина и тетрайодфуксина на спектрофотометре Shimadzu 2450. Во избежание наложения спектров концентрация йодид-ионов была в 10 раз выше по сравнению с концентрацией бромид-ионов. Минимум в ISSN 0204–3556. Химия и технология воды, 2016, т.38, №2 187 спектре отражения бромпроизводного фуксина основного находится при 560 нм. Минимум в спектре отражения света йодпроизводного этого же красителя находится при 500 нм. Сопоставление данных спектров показывает, что, несмотря на некоторое различие миниму- мов отражения, определение бромидов в присутствии преобладающих количеств йодидов затруднено. 44 64 84 104 124 400 500 600 700 1 2 3 4 R, % λ, нм Рис. 2. Спектры отражения тетрабром- и тетрайодфуксина: 1 – ну- левая линия, 2 – спектр отражения бумажного фильтра, 3 – спектр отражения тетрабромфуксина на бумажном фильтре (при концен- трации Br – в пробе 1 мг/дм3), 4 – спектр отражения тетрайодфук- сина на бумажном фильтре (при концентрации I – в пробе 10 мг/дм3). Градуировочный график для определения бромид-ионов представ- лен на рис. 3. Предел обнаружения, рассчитанный по 3σ-критерию, составляет 10 мкг/дм3. 30 50 70 90 0 400 800 а 34 38 42 0 40 80 120 б С те п ен ь п о те м н ен и я, % С те п ен ь п о те м н ен и я, % C(Br�), мкг/дм3 C(Br�), мкг/дм3 Рис. 3. Градуировочные графики для определения бромид-ионов в широком интервале концентраций (а) и микроконцентраций бромид-ионов (б). ISSN 0204–3556. Химия и технология воды, 2016, т.38, №2188 Предел определения, рассчитанный по 6σ-критерию, составляет 20 мкг/дм3. Интервал линейности градуировочного графика – 10 – 1000 мкг/дм3. Продолжительность определения бромид-ионов в еди- ничной пробе воды составляет 45 мин. При анализе серии из шести проб воды продолжительность одного определения сокращается до 7 мин. Изучено влияние мешающих компонентов на определение 40 мкг/дм3 бромид-ионов. Найдено, что хлорид-ион не мешает при 120- кратных избытках по отношению к бромид-ионам, а йодид-ион – при равных с бромидом количествах. Учитывая, что в природных водах бромидов на ∼ 2 порядка больше, чем йодидов, эту методику можно использовать для анализа таких вод. Ионы йодата и хлората не мешают анализу. Не мешают определению катионы серебра (І), ртути (ІІ) при концентрациях ≤ 50, железа (ІІ) < 1000 и марганца (ІІ) < 2 мг/дм3, кото- рые удаляют пропусканием раствора через колонку с катионитом. Проанализированы питьевые артезианские воды на содержание бромид-ионов разработанной методикой и для сравнения – стан- дартным методом [7] с использованием реагента фенолового красного (таблица). Видно, что результаты хорошо коррелируют между собой в пределах погрешности опыта. Результаты анализа вод на содержание бромид-ионов (n = 3; P = 0,95) Вода* Найдено Br-, мг/дм3 разработанной методикой стандартной методикой [7] Артезианская 1 0,50 ± 0,05 0,48 ± 0,04 Артезианская 2 0,86 ± 0,08 0,89 ± 0,07 Артезианская 3 0,66 ± 0,07 0,65 ± 0,07 Артезианская 4 0,21 ± 0,03 0,19 ± 0,03 * Содержание хлорид-ионов в водах находилось в пределах 50 – 80 мг/дм3, марганца (II) – 0,3 – 4,0 и йодид-ионов – 2 – 5 мкг/дм3. Выводы. Предложенная методика является более точной и воспро- изводимой, чем разработанная ранее с применением флуоресцеина [8]. Кроме того, она охватывает более широкий интервал определяемых кон- центраций. Преимуществами этой методики по сравнению с общепри- нятыми стандартными [7, 9] являются экспрессность, высокая чувстви- ISSN 0204–3556. Химия и технология воды, 2016, т.38, №2 189 тельность, простота выполнения, отсутствие необходимости в дорого- стоящей аппаратуре. Она может применяться в полевых условиях при использовании шприцев с насадками для фильтрования окрашенных проб и стандартной цветовой шкалы сравнения. Такая шкала позво- ляет визуально сопоставлять окраску полученных концентратов, что упрощает анализ непосредственно на месте отбора проб. Резюме. Розроблено фотометричну методику визначення бромід-іонів у водах, яка базується на окисленні у водному розчині бро- міду до брому хлораміном Т, концентруванні бромпохідного фуксину основного на мембранних фільтрах і вимірюванні світлоти отрима- них забарвлених концентратів в тонкому шарі за допомогою відбивної кольорометрії. Межа виявлення бромід-іонів становить 10 мкг/дм3, інтервал лінійності градуювального графіка – від 10 до 1000 мкг/дм3. Надлишок хлораміну Т не заважає визначенню, що спрощує і скоро- чує аналіз. Запропонована методика є більш чутливою, експресною і простою у виконанні, ніж існуючі стандартні методики. Вона дозво- ляє контролювати вміст бромід-іонів у водах як на рівні, так і нижче гранично допустимої концентрації і може застосовуватися в польових умовах на місці відбору проб. Yu.I. Maznaya, O.V. Zuy APPLICATION OF FUCHSIN BASIC FOR BROMIDE IONS DETERMINATION IN WATERS BY REFLECTION COLORIMETRY Summary Photometric procedure has been developed for determining bromide ions in waters which is based on the oxidation of bromide in an aqueous solution to bromine by Chloramine T, preconcentration of fuchsin basic bromo derivative on membrane filters and measurement of lightness of colored concentrates obtained in a thin layer using reflectance colorimetry. The detection limit for bromide ions is 10 μg/dm3, the linearity of the calibration curve ranges from 10 to 1000 μg/dm3. Excess of Chloramine T does not interfere with the determination which simplifies the analysis and reduces its duration. The proposed procedure is more sensitive, rapid and simple in execution, than the existing standard procedures. It allows to control the content of bromide ions ISSN 0204–3556. Химия и технология воды, 2016, т.38, №2190 in waters at the level or below the maximum permissible concentration and can be used under field conditions at the sampling site. Список использованной литературы [1] ДСТУ 7525:2014. Вода питна. Вимоги та методи контролювання якості. – К.: Мінекономрозвитку України, 2014. – 26 с. [2] Зуй О.В., Гончарук В.В. Гетерогенно-хемилюминесцентный анализ в определении нанограммовых количеств анионов. – К.: Наук. думка, 2013. – 252 с. [3] Pilipenko A.T., Zuy О.V., Terletskaya A.V. //J. Water Chem. and Technol. – 1992. – 14, N11. – P. 16 – 21. [4] Бабко А.К., Пилипенко А.Т. Фотометрический анализ. Методы определе- ния неметаллов. – М.: Химия, 1974. – 360 с. [5] Полянский Н.Г. Аналитическая химия брома. – М.: Наука, 1980. – 248 с. [6] Брыкина Г.Д., Марченко Д.Ю., Шпигун О.А. // Вест. Моск. ун-та, Сер. 2. – 1993. – 34, № 6. – С. 590 – 594. [7] Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater / APHA, AWWA, WPCF. – 1999. – 541 p. [8] Зуй О.В., Мазная Ю.И. // Методы и объекты хим. анализа. – 2014. – 9, №3. – С. 121 – 124. [9] ДСТУ ISO 10304-1:2003. Якість води. Визначання розчинених фторид-, хлорид-, нітрит-, ортофосфат-, бромід-, нітрат- і сульфат-іонів мето- дом рідинної хроматографії. Ч.1. Метод для слабкозабруднених вод. – К.: Держспоживстандарт України, 2004. – 14 с. Поступила в редакцию 30.07.2015 г.
id nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-160774
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
issn 0204-3556
language Russian
last_indexed 2025-12-07T18:17:51Z
publishDate 2016
publisher Інститут колоїдної хімії та хімії води ім. А.В. Думанського НАН України
record_format dspace
spelling Мазная, Ю.И.
Зуй, О.В.
2019-11-19T15:36:14Z
2019-11-19T15:36:14Z
2016
Применение фуксина основного дляопределения бромид-ионов в водах методом отражательной цветометрии / Ю.И. Мазная, О.В. Зуй // Химия и технология воды. — 2016. — Т. 38, № 2. — С. 183-190. — Бібліогр.: 9 назв. — рос.
0204-3556
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/160774
543.3:546.141
Разработана фотометрическая методика определения бромид-ионов в водах, которая основана на окислении в водном растворе бромида до брома хлорамином Т, концентрировании бромпроизводного фуксина основного на мембранных фильтрах и измерении светлоты полученных окрашенных концентратов в тонком слое с помощью отражательной цветометрии. Предел обнаружения бромид-ионов составляет 10 мкг/дм³, интервал линейности градуировочного графика – от 10 до 1000 мкг/дм³. Избыток хлорамина Т не мешает определению, что упрощает и сокращает анализ. Предложенная методика является более чувствительной, экспрессной и простой в выполнении, чем существующие стандартные методики. Она позволяет контролировать содержание бромид-ионов в водах как на уровне, так и ниже ПДК, и может применяться в полевых условиях на месте отбора проб.
Розроблено фотометричну методику визначення бромід-іонів у водах, яка базується на окисленні у водному розчині броміду до брому хлораміном Т, концентруванні бромпохідного фуксину основного на мембранних фільтрах і вимірюванні світлоти отриманих забарвлених концентратів в тонкому шарі за допомогою відбивної кольорометрії. Межа виявлення бромід-іонів становить 10 мкг/дм³, інтервал лінійності градуювального графіка – від 10 до 1000 мкг/дм³. Надлишок хлораміну Т не заважає визначенню, що спрощує і скорочує аналіз. Запропонована методика є більш чутливою, експресною і простою у виконанні, ніж існуючі стандартні методики. Вона дозволяє контролювати вміст бромід-іонів у водах як на рівні, так і нижче гранично допустимої концентрації і може застосовуватися в польових умовах на місці відбору проб.
Photometric procedure has been developed for determining bromide ions in waters which is based on the oxidation of bromide in an aqueous solution to bromine by Chloramine T, preconcentration of fuchsin basic bromo derivative on membrane filters and measurement of lightness of colored concentrates obtained in a thin layer using reflectance colorimetry. The detection limit for bromide ions is 10 μg/dm³, the linearity of the calibration curve ranges from 10 to 1000 μg/dm³. Excess of Chloramine T does not interfere with the determination which simplifies the analysis and reduces its duration. The proposed procedure is more sensitive, rapid and simple in execution, than the existing standard procedures. It allows to control the content of bromide ions in waters at the level or below the maximum permissible concentration and can be used under field conditions at the sampling site.
ru
Інститут колоїдної хімії та хімії води ім. А.В. Думанського НАН України
Химия и технология воды
Аналитическая химия воды
Применение фуксина основного дляопределения бромид-ионов в водах методом отражательной цветометрии
Application of fuchsin basic for bromide ions determination in waters by reflection colorimetry
Article
published earlier
spellingShingle Применение фуксина основного дляопределения бромид-ионов в водах методом отражательной цветометрии
Мазная, Ю.И.
Зуй, О.В.
Аналитическая химия воды
title Применение фуксина основного дляопределения бромид-ионов в водах методом отражательной цветометрии
title_alt Application of fuchsin basic for bromide ions determination in waters by reflection colorimetry
title_full Применение фуксина основного дляопределения бромид-ионов в водах методом отражательной цветометрии
title_fullStr Применение фуксина основного дляопределения бромид-ионов в водах методом отражательной цветометрии
title_full_unstemmed Применение фуксина основного дляопределения бромид-ионов в водах методом отражательной цветометрии
title_short Применение фуксина основного дляопределения бромид-ионов в водах методом отражательной цветометрии
title_sort применение фуксина основного дляопределения бромид-ионов в водах методом отражательной цветометрии
topic Аналитическая химия воды
topic_facet Аналитическая химия воды
url https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/160774
work_keys_str_mv AT maznaâûi primeneniefuksinaosnovnogodlâopredeleniâbromidionovvvodahmetodomotražatelʹnoicvetometrii
AT zuiov primeneniefuksinaosnovnogodlâopredeleniâbromidionovvvodahmetodomotražatelʹnoicvetometrii
AT maznaâûi applicationoffuchsinbasicforbromideionsdeterminationinwatersbyreflectioncolorimetry
AT zuiov applicationoffuchsinbasicforbromideionsdeterminationinwatersbyreflectioncolorimetry