Генетический анализ энтомофага вида Trichogramma pintoi Voeg.
Investigations of the genetic structure of internal noncoding transcribed spacer 2 (ITS2) of ribosomal DNA of Trichogramma pintoi Voeg. are done. The performed PCR-analysis with the following nucleotide sequence determination of ITS2 region allowed us to reveal essential inter-specific distinctions....
Gespeichert in:
| Datum: | 2007 |
|---|---|
| Hauptverfasser: | , , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Russian |
| Veröffentlicht: |
Видавничий дім "Академперіодика" НАН України
2007
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/1688 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Генетический анализ энтомофага вида Trichogramma pintoi Voeg. / М.Д. Мельничук, В.Г. Спиридонов, Н.П. Ясинская, Р.В. Облап // Доп. НАН України. — 2007. — N 6. — С. 159–162. — Бібліогр.: 10 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-1688 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-16882025-02-23T20:10:05Z Генетический анализ энтомофага вида Trichogramma pintoi Voeg. Мельничук, М.Д. Спиридонов, В.Г. Ясинская, Н.П. Облап, Р.В. Біологія Investigations of the genetic structure of internal noncoding transcribed spacer 2 (ITS2) of ribosomal DNA of Trichogramma pintoi Voeg. are done. The performed PCR-analysis with the following nucleotide sequence determination of ITS2 region allowed us to reveal essential inter-specific distinctions. The obtained data can be used for the T. pіntoі species identification. 2007 Article Генетический анализ энтомофага вида Trichogramma pintoi Voeg. / М.Д. Мельничук, В.Г. Спиридонов, Н.П. Ясинская, Р.В. Облап // Доп. НАН України. — 2007. — N 6. — С. 159–162. — Бібліогр.: 10 назв. — рос. 1025-6415 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/1688 632.937.1 ru application/pdf Видавничий дім "Академперіодика" НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Біологія Біологія |
| spellingShingle |
Біологія Біологія Мельничук, М.Д. Спиридонов, В.Г. Ясинская, Н.П. Облап, Р.В. Генетический анализ энтомофага вида Trichogramma pintoi Voeg. |
| description |
Investigations of the genetic structure of internal noncoding transcribed spacer 2 (ITS2) of ribosomal DNA of Trichogramma pintoi Voeg. are done. The performed PCR-analysis with the following nucleotide sequence determination of ITS2 region allowed us to reveal essential inter-specific distinctions. The obtained data can be used for the T. pіntoі species identification. |
| format |
Article |
| author |
Мельничук, М.Д. Спиридонов, В.Г. Ясинская, Н.П. Облап, Р.В. |
| author_facet |
Мельничук, М.Д. Спиридонов, В.Г. Ясинская, Н.П. Облап, Р.В. |
| author_sort |
Мельничук, М.Д. |
| title |
Генетический анализ энтомофага вида Trichogramma pintoi Voeg. |
| title_short |
Генетический анализ энтомофага вида Trichogramma pintoi Voeg. |
| title_full |
Генетический анализ энтомофага вида Trichogramma pintoi Voeg. |
| title_fullStr |
Генетический анализ энтомофага вида Trichogramma pintoi Voeg. |
| title_full_unstemmed |
Генетический анализ энтомофага вида Trichogramma pintoi Voeg. |
| title_sort |
генетический анализ энтомофага вида trichogramma pintoi voeg. |
| publisher |
Видавничий дім "Академперіодика" НАН України |
| publishDate |
2007 |
| topic_facet |
Біологія |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/1688 |
| citation_txt |
Генетический анализ энтомофага вида Trichogramma pintoi Voeg. / М.Д. Мельничук, В.Г. Спиридонов, Н.П. Ясинская, Р.В. Облап // Доп. НАН України. — 2007. — N 6. — С. 159–162. — Бібліогр.: 10 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT melʹničukmd genetičeskijanalizéntomofagavidatrichogrammapintoivoeg AT spiridonovvg genetičeskijanalizéntomofagavidatrichogrammapintoivoeg AT âsinskaânp genetičeskijanalizéntomofagavidatrichogrammapintoivoeg AT oblaprv genetičeskijanalizéntomofagavidatrichogrammapintoivoeg |
| first_indexed |
2025-11-25T00:04:36Z |
| last_indexed |
2025-11-25T00:04:36Z |
| _version_ |
1849718553159139328 |
| fulltext |
УДК 632.937.1
© 2007
М. Д. Мельничук, В. Г. Спиридонов, Н. П. Ясинская, Р.В. Облап
Генетический анализ энтомофага вида Trichogramma
pintoi Voeg.
(Представлено членом-корреспондентом НАН Украины И. А. Григорюком)
Investigations of the genetic structure of internal noncoding transcribed spacer 2 (ITS2) of
ribosomal DNA of Trichogramma pintoi Voeg. are done. The performed PCR-analysis with the
following nucleotide sequence determination of ITS2 region allowed us to reveal essential inter-
specific distinctions. The obtained data can be used for the T. pintoi species identification.
В последние годы все большее внимание уделяется биотехнологиям и экологическим ас-
пектам агропромышленного комплекса. Развитие биологических методов защиты растений
является как логическим дополнением, так и альтернативой химизации. Правильное и сво-
евременное применение биологических методов защиты, таких как насекомые-энтомофаги,
бактериальные, вирусные и грибковые препараты, позволяет значительно сократить, а ино-
гда и полностью отказаться от использования химических средств защиты растений. Одним
из основных средств биологической борьбы с вредителями сельскохозяйственных культур
в экологически ориентированных технологиях является использование трихограммы [1].
Представители рода трихограмма (Trichogramma) — эффективные паразиты яиц мно-
гих опасных вредителей сельскохозяйственных культур и лесных насаждений [2]. Род Tri-
chogramma относится к семейству трихограмматид (Trichogrammatidae), отряда перепон-
чатокрылых (Hymenoptera). На сегодняшний день в мире идентифицировано около 150
видов этого энтомофага [3], 26 из которых встречаются в Украине. Практическое приме-
нение нашли 5 видов (T. pintoi Voeg., T. dendrolimi Mats., T. cacoeciae Meyer., T. semblidis
Auriv. и T. evanescens Westw.), однако наибольшее распространение получила T. pintoi
Voeg., которую успешно разводят лишь в немногочисленных биолабораториях и биофабри-
ках Украины.
Основой эффективного применения трихограммы в биологической защите растений яв-
ляется правильный подбор видов и внутривидовых форм. Поэтому определение видового
состава энтомофага в полевых и садовых агробиоценозах является основной задачей иссле-
дований биотехнологов [4]. Небольшой размер и незначительные морфологические разли-
чия между этими насекомыми затрудняют их идентификацию, что, в свою очередь, снижает
эффективность проведения мероприятий по биологической защите растений. Определение
видовой принадлежности трихограммы в большинстве случаев основано исключительно
на морфологии гениталий мужских особей [5]. Когда самцы полностью отсутствуют или
их присутствие ограничено, идентификация становится еще более трудной и отчасти не-
возможной. В последние годы все большее распространение получают методы оценки ге-
нетического разнообразия, основанные на полиморфизме ДНК. Молекулярно-генетические
маркеры характеризуются высокой степенью полиморфизма и поэтому используются для
решения многих популяционно-генетических задач, в частности характеристики близкород-
ственных видов или идентификации неизвестных [6, 7].
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2007, №6 159
Рис. 1. Упрощенная схема строения гена рибосомальной РНК эукариот. ITS1, ITS2 — внутренние некоди-
рующие спейсерные регионы; 28S, 18S — большая и малая субъединица рибосомальной РНК. Стрелками
отмечено местонахождение праймеров
У эукариот гены, кодирующие 18S и 28S рибосомальную РНК, кластеризованы в тандем-
ные повторы в ядерном геноме [8]. ITS регион, расположенный между 18S и 28S кодирую-
щими областями, обычно имеет высокую степень полиморфизма, в отличие от кодирующих
областей (рис. 1). Полиморфизм ITS регионов довольно широко используется для изучения
таксономического статуса видов и диагностических целей. Так, R. Stouthamer с соавт. [9]
использовали ITS2 регион для идентификации родственных видов трихограммы методом
полимеразной цепной реакции с последующим анализом длин рестрикционных фрагмен-
тов (ПЦР-ПДРФ).
Исходя из вышесказанного, целью нашего исследования было изучение полиморфизма
ITS2 региона рибосомальной ДНК вида T. рintoi Voeg., который разводят в лабораторных
условиях для выявления видоспецифических характеристик.
Материалом для выделения ДНК служило имаго одного энтомофага. Геномную ДНК
выделяли по методу [10] с предварительной обработкой протеиназой К. Концентрацию
и чистоту нуклеиновой кислоты определяли на спектрофотометре “BioPhotometer” (“Ep-
pendorf”, Германия) при длине волны λ = 260 нм.
Для амплификации ITS2 участка рибосомальной ДНК трихограммы использовали прай-
меры 5′-TGTGAACTGCAGGACACATG-3′; 5′-GTCTTGCCTGCTCTGCTCTGAG-3′ . ПЦР
проводили на приборе 2700 (“Applied Biosystems”, США). Продукты амплификации иден-
тифицировали методом электрофореза в 2%-м агарозном геле.
Определение нуклеотидной последовательности ПЦР фрагментов ITS2 региона осу-
ществляли на генетическом анализаторе ABI PRISM 3130 (“Applied Biosystems”, США)
с использованием набора BigDye®terminator, v.3,1, согласно инструкции производителя.
Каждый образец анализировали в двух повторах, с правым и левым праймером. По-
лученные последовательности ДНК с обоих праймеров сводили в консенсусную последова-
тельность. Результат считали достоверным, если при сопоставлении ДНК последователь-
ностей, полученных с правого и левого праймера, не было выявлено отличий хотя бы в один
нуклеотид.
ПЦР-амплификация ITS2 региона рибосомальной ДНК позволила нам получить фраг-
мент размером 698 п. н. Суммарно проанализировали 50 особей, из них 25 самцов и 25 самок.
Следует отметить, что внутривидовых отличий по длине ПЦР-продукта не выявлено.
Для получения более детальной характеристики вида T. рintoi Voeg. определяли ну-
клеотидную последовательность ITS2 региона. Полученные характеристики обрабатывали
с использованием компьютерной программы SeqAnalyses5.2 (“Applied Biosystems”) и анали-
зировали в международной базе данных (www. ncbi. nlm. nih. gov/BLAST/). Результаты
расшифровки нуклеотидной последовательности исследуемого вида (рис. 2) сопоставляли
с нуклеотидной последовательностью, взятой из GenBank (Accession No. AY182 757). Ана-
лизируемые нуклеотидные последовательности ITS2 региона T. pintoi имеют 98% сходства,
15 различий в 10 участках. Проведенный BLAST-aнализ свидетельствует о том, что поли-
160 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2007, №6
Рис. 2. Нуклеотидная последовательность ITS2 региона вида T. pintoi Voeg. Показано сравнение с после-
довательностью, помещенной в GenBank (Accession No. AY182 757)
морфизм данного региона может быть использован в качестве маркера видовой принад-
лежности, позволяющего дифференцировать данный вид от других представителей рода
Trichogramma Westw. Метод секвенирования ITS2 региона рДНК рекомендовано использо-
вать для генетической паспортизации вида T. pintoi Voeg.
1. Ткачов В.М., Онищенко Л. Г. Бiологiчний захист саду вiд шкiдникiв i хвороб. – Київ: Урожай, 1992. –
240 с.
2. Фурсов В.Н., Сторожева Н.А. Выявление, определение и районирование хозяйственно важных
видов яйцеедов рода Trichogramma Westw. в агробиоценозах Украины. – Киев, 1990. – С. 1–47. –
(Препр. / Ин-т зоологии им. И.И. Шмальгаузена АН УССР; № 26).
3. Фурсов В.Н. Биологический метод защиты растений: междунар. исследования и приоритетное зна-
чение таксономии // Вестн. зоологии. – 2001. – 35, № 3. – С. 97–101.
4. Бойчук Ю.Д., Злотiн О.З., Головко В.О. Бiологiчнi основи добору вихiдного матерiалу для куль-
тивування комах. – Харкiв: РВП “Оригiнал”, 1997. – 104 с.
5. Sorokina A.P. Keys to the Species of Genus Trichogramma Westw. (Hymenoptera, Trichogrammatidae)
of the World Fauna. – Moscow: Kolos, 1993. – 76 p.
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2007, №6 161
6. Américo I. Molecular Key to Seven Brazilian Species of Trichogramma Hymenoptera: Trichogrammatidae)
Using Sequences of the ITS2 Region and Restriction Analysis // Neotropical Entomology. – 2001. – 30,
No 2. – P. 259–262.
7. Susanta K. Behura Molecular marker systems in insects: current trends and future avenues // Mol. Ecol. –
2006. – 15. – P. 3087–3113.
8. Hoy M.A. Insect Molecular Genetics. – San Diego: Academic Press, 1994. – P. 43.
9. Stouthamer R., Hu J., van Kan F. J. P.M., Platner G.R. The utility of internally transcribed spacer 2 DNA
sequences of the nuclear ribosomal gene for distinguishing sibling species of Trichogramma // BioControl. –
1999. – 43. – P. 421–440.
10. Boom R., Sol C. J., Salimans M.M. et al. Rapid and simple method for purification of nucleic acids //
J. Clin. Microb. – 1990. – 28, No 3. – P. 495–503.
Поступило в редакцию 19.02.2007Национальный аграрный университет, Киев
УДК 581.1
© 2007
В.А. Негрецкий, Е.И. Ковзун
Инициация флорального морфогенеза у растений
различной фотопериодической чувствительности
и особенности экспрессии Са2+-зависимой
протеинкиназы С
(Представлено академиком НАН Украины К.М. Сытником)
We study the α-isoform of Ca-dependent protein kinase C (CaPKC) expression during the
induction of flowering in the leaves of different photoperiodic sensitive plants. As a result,
the expression of Са-dependent proteine kinase С in the leaves of 2 biotypes of tobacco and
perilla plants is shown. The 5 long-day induction promoted the CaPKC expression in the leaves
of long-day tobacco Nicotiana silvestris L. plants by 143%. A similar activation of the PKC
expression was observed after 5 short-day (SD) inductions in SD plants of tobacco M. Mamoth
and perilla. This allows us to discuss the Сa-dependent PKC participation in mechanisms of
signal transduction during the photoperiodic induction and its involving in the initial stages of
floral morphogenesis.
Фотопериодическая индукция цветения кардинально изменяет метаболизм растительной
клетки. Протеинкиназы (ПК) играют одну из главных ролей в начальных событиях пе-
редачи сигнала. Роль протеинкиназы С (ПКС) в трансдукции сигнала в клетке активно
исследуется. Существует обширная литература по функционированию ПК в растительной
клетке [1, 2]. Один из путей повышения экспрессии ПКС связан с фосфолипидным ги-
дролизом, повышением концентрации ионов Са2+ в цитозоле, внутриклеточное содержание
которого активирует ПКС для дальнейшего ее участия в процессах фосфорилирования.
Показана важная роль ионов Са2+ в процессе зацветания растений [3, 4].
Механизм рецепции фотопериодического стимула, его передачи в клетке и между ни-
ми, амплификации сигнала у фотопериодически чувствительных растений изучен недоста-
точно. В настоящее время есть несколько сообщений о косвенном участии протеинкиназ
162 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2007, №6
|