Отримання трансгенних рослин картоплі стійких до гербіциду баста, що містять ген cyp11A1 цитохрому P450scc
Отримано 8 трансгенних ліній картоплі сорту Луговська після Agrobacterium tumefaciens-опосередкованої трансформації штамом, що несе ген bar та ген cyp11A1 цитохрому P450scc кори надниркових залоз бика. 4 із 8 рослин мали аномальну морфологію. Проведений ПЛР-аналіз на гени bar і cyp11A1 підтвердив...
Saved in:
| Published in: | Фактори експериментальної еволюції організмів |
|---|---|
| Date: | 2009 |
| Main Authors: | , , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Ukrainian |
| Published: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
2009
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/176851 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Отримання трансгенних рослин картоплі стійких до гербіциду баста, що містять ген cyp11A1 цитохрому P450scc / В.А. Рудас, А.М. Шаховський, Б.В. Моргун, Н.А. Матвєєва, М.В. Кучук // Фактори експериментальної еволюції організмів: Зб. наук. пр. — 2009. — Т. 7. — С. 192-196. — Бібліогр.: 10 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-176851 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Рудас, В.А. Шаховський, А.М. Моргун, Б.В. Матвєєва, Н.А. Кучук, М.В. 2021-02-08T17:39:43Z 2021-02-08T17:39:43Z 2009 Отримання трансгенних рослин картоплі стійких до гербіциду баста, що містять ген cyp11A1 цитохрому P450scc / В.А. Рудас, А.М. Шаховський, Б.В. Моргун, Н.А. Матвєєва, М.В. Кучук // Фактори експериментальної еволюції організмів: Зб. наук. пр. — 2009. — Т. 7. — С. 192-196. — Бібліогр.: 10 назв. — укр. 2219-3782 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/176851 Отримано 8 трансгенних ліній картоплі сорту Луговська після Agrobacterium tumefaciens-опосередкованої трансформації штамом, що несе ген bar та ген cyp11A1 цитохрому P450scc кори надниркових залоз бика. 4 із 8 рослин мали аномальну морфологію. Проведений ПЛР-аналіз на гени bar і cyp11A1 підтвердив інтеграцію цих генів в геном всіх отриманих трансформованих ліній. Транскрипція гена cyp11A1 підтверджена ПЛР аналізом зворотних транскриптів. Получено 8 трансгенных линий картофеля сорта Луговськая после Agrobacterium tumefaciens-опосредованной трансформации штаммом, несущим ген bar и ген cyp11A1 цитохрома P450scc из коры надпочечников быка. 4 из 8 растений имели аномальную морфологию. Проведенный ПЦР-анализ на гены bar и cyp11A1 подтвердил интеграцию этих генов в геном всех полученных трансформованных линий. Транскрипция гена cyp11A1 подтверждена ПЦР-анализом обратных транскриптов. Eight PPT-resistant potato lines were obtained after Agrobacterium tumefaciensmediated transformation with a gene construct carrying bar gene and cyp11A1 gene of cytochrome P450scc from bovine adrenal cortex. Four out of eight plants had abnormal morphology. Integration of foreign genes in genome for all plants was confirmed by PCR analysis. Transcription of cyp11A1 gene was confirmed by RT-PCR analysis. uk Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Фактори експериментальної еволюції організмів Біотехнології у медицині та сільському господарстві Отримання трансгенних рослин картоплі стійких до гербіциду баста, що містять ген cyp11A1 цитохрому P450scc Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Отримання трансгенних рослин картоплі стійких до гербіциду баста, що містять ген cyp11A1 цитохрому P450scc |
| spellingShingle |
Отримання трансгенних рослин картоплі стійких до гербіциду баста, що містять ген cyp11A1 цитохрому P450scc Рудас, В.А. Шаховський, А.М. Моргун, Б.В. Матвєєва, Н.А. Кучук, М.В. Біотехнології у медицині та сільському господарстві |
| title_short |
Отримання трансгенних рослин картоплі стійких до гербіциду баста, що містять ген cyp11A1 цитохрому P450scc |
| title_full |
Отримання трансгенних рослин картоплі стійких до гербіциду баста, що містять ген cyp11A1 цитохрому P450scc |
| title_fullStr |
Отримання трансгенних рослин картоплі стійких до гербіциду баста, що містять ген cyp11A1 цитохрому P450scc |
| title_full_unstemmed |
Отримання трансгенних рослин картоплі стійких до гербіциду баста, що містять ген cyp11A1 цитохрому P450scc |
| title_sort |
отримання трансгенних рослин картоплі стійких до гербіциду баста, що містять ген cyp11a1 цитохрому p450scc |
| author |
Рудас, В.А. Шаховський, А.М. Моргун, Б.В. Матвєєва, Н.А. Кучук, М.В. |
| author_facet |
Рудас, В.А. Шаховський, А.М. Моргун, Б.В. Матвєєва, Н.А. Кучук, М.В. |
| topic |
Біотехнології у медицині та сільському господарстві |
| topic_facet |
Біотехнології у медицині та сільському господарстві |
| publishDate |
2009 |
| language |
Ukrainian |
| container_title |
Фактори експериментальної еволюції організмів |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| format |
Article |
| description |
Отримано 8 трансгенних ліній картоплі сорту Луговська після
Agrobacterium tumefaciens-опосередкованої трансформації штамом, що несе ген bar та
ген cyp11A1 цитохрому P450scc кори надниркових залоз бика. 4 із 8 рослин мали
аномальну морфологію. Проведений ПЛР-аналіз на гени bar і cyp11A1 підтвердив
інтеграцію цих генів в геном всіх отриманих трансформованих ліній. Транскрипція
гена cyp11A1 підтверджена ПЛР аналізом зворотних транскриптів.
Получено 8 трансгенных линий картофеля сорта Луговськая после
Agrobacterium tumefaciens-опосредованной трансформации штаммом, несущим ген bar
и ген cyp11A1 цитохрома P450scc из коры надпочечников быка. 4 из 8 растений имели
аномальную морфологию. Проведенный ПЦР-анализ на гены bar и cyp11A1 подтвердил
интеграцию этих генов в геном всех полученных трансформованных линий.
Транскрипция гена cyp11A1 подтверждена ПЦР-анализом обратных транскриптов.
Eight PPT-resistant potato lines were obtained after Agrobacterium tumefaciensmediated
transformation with a gene construct carrying bar gene and cyp11A1 gene of
cytochrome P450scc from bovine adrenal cortex. Four out of eight plants had abnormal
morphology. Integration of foreign genes in genome for all plants was confirmed by PCR
analysis. Transcription of cyp11A1 gene was confirmed by RT-PCR analysis.
|
| issn |
2219-3782 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/176851 |
| citation_txt |
Отримання трансгенних рослин картоплі стійких до гербіциду баста, що містять ген cyp11A1 цитохрому P450scc / В.А. Рудас, А.М. Шаховський, Б.В. Моргун, Н.А. Матвєєва, М.В. Кучук // Фактори експериментальної еволюції організмів: Зб. наук. пр. — 2009. — Т. 7. — С. 192-196. — Бібліогр.: 10 назв. — укр. |
| work_keys_str_mv |
AT rudasva otrimannâtransgennihroslinkartoplístíikihdogerbícidubastaŝomístâtʹgencyp11a1citohromup450scc AT šahovsʹkiiam otrimannâtransgennihroslinkartoplístíikihdogerbícidubastaŝomístâtʹgencyp11a1citohromup450scc AT morgunbv otrimannâtransgennihroslinkartoplístíikihdogerbícidubastaŝomístâtʹgencyp11a1citohromup450scc AT matvêêvana otrimannâtransgennihroslinkartoplístíikihdogerbícidubastaŝomístâtʹgencyp11a1citohromup450scc AT kučukmv otrimannâtransgennihroslinkartoplístíikihdogerbícidubastaŝomístâtʹgencyp11a1citohromup450scc |
| first_indexed |
2025-11-25T21:29:34Z |
| last_indexed |
2025-11-25T21:29:34Z |
| _version_ |
1850551603770163200 |
| fulltext |
192
1990. – 280с.;
5. Maliga P. Isolation and characterization of mutants in plant cell cultures // Ann.Rev.Plant
Physiol. – 1984. – 35. – P. 519-542
6. Сергеева Л.Е. Изменения культуры клеток под действием стресса. – К.: Логос, 2001.
– 100 С.
7. Сергеева Л.Е. Новая среда с ионами бария – альтернативная система для отбора
солеустойчивых клеточных линий // Біотехнологія. – 2002. - 2. – С.47-52.
8. Тищенко Е.Н., Сергеева Л.Е., Михальская С.И., Данильченко О.А. RAPD- анализ
вольфрамустойчивой клеточной линии сои с комплексной толерантностью к
осмотикам // Физиология и биохимия культ. растений. - 2008. – Т.40. - №4. – С.329-
337.
9. Паушева З. П. Практикум по цитологии растений. М.1988. – 280 с.
10. Roth E. J, Frazier B L., Apuya N. R. Lark K G. Genetic variation in an inbred
plant:Variation in tissue cultures of soybean [Glycine max (L.) Merrill] // Genetic - 121 –
1989 - P.359-368.
11. Бублик Е.Н., Адонин В.И., Кунах В.А. Цитогенетическая изменчивость клеточных линий
Ungernia victoris при выращивании на питательных средах различного состава //
Цитология и генетика. – 2008. - №1. С.29 -36.
12. Чугункова Т.В., Дубровная О.В. Цитогенетический анализ каллусных культур и
растений – регенерантов, полученных из эксплантов сахарной свеклы различной
плоидности // Цитология и генетика. – 1998. – Т.32, №4. – С.9-15.
Резюме
Показано, що на відміну від вихідного калюсу, в якому виявлено два модальних
класи числа хромосом (біля 2х та 4х), у вольфрам-стійкої клітинної лінії
спостерігається один модальний клас (біля 4х). Крім того, відмічається тенденція до
підвищення рівня плоїдності вольфрамстійкої лінії із збільшенням терміну
культивування в умовах in vitro.
Показано, что в отличии от исходного каллуса, у которого определено два
модальных класса числа хромосом (около 2х и 4х), у вольфрамустойчивой клеточной
линии наблюдается один модальный класс числа хромосом (около 4х). Кроме того,
отмечается тенденция к увеличению уровня плоидности у вольфрамустойчивой
клеточной линии с повышением срока культивирования в условиях in vitro.
There were shown that unlike the initial callus with two modal chromosome classes
(near 2x and 4x) the tungsten resistant cell line is characterized by singe modal chromosome
class (near 4x). Besides that tendency towards polyploidy in tungsten resistant cell line with
the increasing of cultivation tern in vivo is exhibited.
РУДАС В. А., ШАХОВСЬКИЙ А. М., МОРГУН Б. В., МАТВЄЄВА Н. А.,
КУЧУК М. В.
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
Україна, 03680, Київ, вул. Академіка Заболотного, 148, e-mail: rudasv@gmail.com
ОТРИМАННЯ ТРАНСГЕННИХ РОСЛИН КАРТОПЛІ СТІЙКИХ ДО
ГЕРБІЦИДУ БАСТА, ЩО МІСТЯТЬ ГЕН cyp11A1 ЦИТОХРОМУ P450scc
Створення сортів культурних рослин з підвищеною продуктивністю та стійкістю
до гербіцидів є нагальною вимогою нашого часу. Використання сучасних
біотехнологічних методів і, зокрема, генетичної трансформації рослин дозволяє значно
скоротити час отримання рослин з бажаними характеристиками.
Метою нашого дослідження було отримання методами генної інженерії рослин
картоплі з підвищеною біологічною продуктивністю та стійкістю до гербіцидів. Вибір
193
гена bar для генетичної трансформації зумовлений його високою ефективністю [1],
широким застосуванням та наявністю комерційних контактних гербіцидів суцільної дії
(Basta, Bialaphos, Glufosinate, Phosphinothricin) до яких він надає стійкість. В свою чергу
ген cyp11A1 кодує мітохондріальний цитохром P450scc, який в стероідогенних
тканинах тварин каталізує перетворення холестерину в прегненолон, спільний
метаболічний попередник усіх стероїдних гормонів. Стимулюючий вплив ендогенного
застосування стероїдних гормонів на проростання пилку тютюну був
продемонстрований в 1995 році [2]. Декілька років тому було показано, що трансгенні
рослини Nicotiana tabacum, які несли ген cyp11A1, що кодує цитохром P450scc з
мітохондрій кори надниркових залоз бика, випереджали рослини дикого типу за
швидкістю росту і розвитку надземної і підземної частин, вмістом водорозчинного
білку, вуглеводів і крохмалю [3,4,5]. Ці позитивні перетворення відбувалися внаслідок
зміни гормонального статусу трансгенних рослин і свідчили про функціональну
активність P450scc тваринного походження в рослинах. Іншим можливим позитивним
явищем при трансформації рослин геном cyp11A1 може бути поява у трансгенних
рослин стійкості до деяких гербіцидів. Було продемонстровано що трансгенні рослини
картоплі, які несуть ген cyp1A1 пацюка відрізнялися підвищеною стійкістю до
гербіцидів хлортолурону і метабензтіазурону [6].
Матеріали і методи
Бактеріальний штам. Для генетичної трансформації картоплі використовували
Agrobacterium tumefaciens штам GV3101, що несе генетичну конструкцію pCB093
розміром 10960 п.н. На Т-ДНК розміщувалися експресивні касети Pnos-bar-Tocs, P35S-
cyp11A1-T35S та P35S-sgfp-Tnos.
Рослинний матеріал. В роботі були використані асептично вирощені in vitro
рослини 6 сортів картоплі (Solanum tuberosum L.), а саме: Луговська, Дезіре,
Білоруський 12, Ласунак, Слов’янка, Незабудка. Рослини вирощували в пробірках на
середовищі МС [7] при температурі 23-25 0С, 16-годинному світловому фотоперіоді та
розмножували живцюванням.
Генетична трансформація картоплі. В експериментах використовували по 100
міжвузлів кожного сорту картоплі. Трансформацію і регенерацію рослин здійснювали
згідно [8] з деякими модифікаціями. Для селекції трансгенних ліній в середовище
додавали 1-4 мг/л фосфінотрицину.
ПЛР аналіз. Для перевірки відсутності агробактеріальної ДНК в отриманих
рослинних лініях проводили ПЛР з праймерами на virD1. Бактеріальний ген virD1
розміщений поза Т-ДНК і не переноситься в рослинний геном при трансформації. Для
ампліфікації фрагменту цього гена довжиною 432 п.н. використовувалися праймери
virD1-1, 5'-ATG TCG CAA GGC AGT AAG CCC A-3' та virD1-2, 5'-GGA GTC TTT CAG
CAT GGA GCA A-3' [9]. Для аналізу bar гена використали 2 пари праймерів: 1 пара —
5'-GGA ATT CAT GAG CGG AGA ATT AAG GGA GT-3' та 5'-CAG ATC TCG GTG
ACG GGC AGG AC-3', які утворювали фрагмент розміром 911 пн, 2 пара — 5'-GCG
GTC TGC ACC ATC GTC AAC-3' і 5'-CAG ATC TCG GTG ACG GGC AGG AC-3', які
утворювали фрагмент розміром 494 п.н. Для аналізу гена cyp11А1 використовували
пару праймерів 5'-GCC ACA TCG AGA ACT TCC AGA AG-3' та 5'-CTG GTG TGG
AAC ATC TTG TAG ACG-3', які утворювали фрагмент розміром 502 п.н. [4].
Виділення сумарної РНК та синтез першого ланцюга кДНК. Сумарну РНК
виділяли згідно методики [10]. Матеріалом були листки асептичних рослин вагою біля
200 мг. Концентрацію та чистоту препаратів РНК вимірювали на спектрофотометрі
BioPhotometer (Eppendorf) v.1.35.
Проведення зворотньої транскрипції. 1 мкг сумарної РНК попередньо
обробленої ДНКазою I, вільною від РНКази (Fermentas), використовувався як матриця
для синтезу першого ланцюга кДНК (зворотнього транскрипту). Синтез проводили за
допомогою спеціалізованого набору реактивів компанії Fermentas (#K1612) за
194
інструкцією фірми-виробника. Для кожної проби РНК проводили дві паралельні реакції
— у присутності і у відсутності (негативний контроль) зворотної транскриптази M-
MuLV. Для наступної ампліфікації застосовували ті ж самі специфічні до кодуючої
частини гена cyp11A1 цитохрому P450scc праймери, які давали фрагмент розміром 502
п.н.
Результати та обговорення
В результаті експериментів згідно методики [8] трангенні рослини отримані не
були. Спостерігали швидке почорніння експлантів і їх загибель, а також
неконтрольований ріст агробактерій. В подальших експериментах використали по 100
експлантів картоплі сортів Луговська і Слов’янка. Обробка експлантів агробактерією
здійснювалася так, як і в попередніх експериментах, але була докорінно змінена
система селекції трансгенних клітин. Була використана багатоступінчаста система
селекції трансгенних клітин, яку здійснювали шляхом поступового підвищення
концентрації фосфінотрицину (перші 2 місяці культивування — 1 мг/л , III-IV місяці —
2 мг/л, і надалі — 4 мг/л), нітрату амонію (від 0 до 1,65 г/л) в живильному середовищі
(в перший місяць — повна відсутність нітрату амонію в середовищі, II місяць — 1-10 %
від концентрації в середовищі МС, III місяць — 50 % від концентрації в середовищі
МС, надалі вирощування на середовищі МС (100 %) та збільшенням освітленості
експлантів від темряви по повноцінного освітлення (I місяць — темрява, II місяць —
розсіяне світло, надалі повне освітлення). Через 5-6 місяців селекції було регенеровано
8 трансгенних рослин картоплі сорту Луговська. 4 із 8 рослин мали аномальну
морфологію: утворювали багато пагонів і погано вкорінювалося. Це було добре
помітно навіть в умовах in vitro. Можливо ці аномалії зв'язані зі зміною гормонального
статусу рослин. Остаточні висновки можна буде зробити після вирощування всіх
рослин в ґрунті, хромосомного аналізу і більш детального молекулярно-біологічного
аналізу всіх рослин.
ПЛР-аналіз на vir-район A. tumefaciens був негативним для всіх 8 трансгенних
рослин, що свідчить про відсутність у них агробактеріального забруднення.
Проведений ПЛР-аналіз на ген bar з використанням 2 пар праймерів та на ген cyp11A1
цитохрому P450scc з використанням 1 пари праймерів підтвердив інтеграцію цих генів
в геном всіх 8 отриманих трансформованих рослин (Рис. 1). Для аналізу експресії
cyp11A1 гена на рівні РНК були взяті 2 трансгенні рослини з нормальною морфологією.
Аналіз показав наявність мРНК гена cyp11A1 в обох рослинах (Рис. 2), що свідчить про
активну транскрипцію. В подальшому планується провести дослідження на виявлення
білкового продукту гена.
195
Рис. 1. Результати ПЛР-аналізу на гени bar та cyp11AI рослин картоплі сорту
Луговська, трансформованих штамом pCB093: М — ДНК маркер, 1, 5 — плазмідна
ДНК в якості позитивного контролю, 3-4, 7-8 — загальна ДНК трансформованих
рослин картоплі клонів 1 і 2
Рис 2. Аналіз зворотних транскриптів (ЗТ) і геномної ДНК (ДНК) рослин
картоплі на ген cyp11A1: 1, 3 — РНК трансгенних рослин № 5 і 8 без додання зворотної
транскриптази в якості негативного контролю; 2, 4 — ЗТ з РНК трансгенних рослин №
5 і 8 відповідно; 5 — геномна ДНК трансформованої рослини
Висновки
Проведено генетичну трансформацію конструкцією з генами bar і cyp11A1.
Регенеровано 8 рослин картоплі вдосконаленим методом поступового підвищення
концентрації фосфінотрицину і нітрату амонію в живильному середовищі. Хоча
фенотипічно рослини різняться, проте було показано, що усі вони інтегрували ген bar
(стійкість до фосфінотрицину) та ген cyp11A1 цитохрому P450scc. Молекулярний
аналіз 2 рослин підтвердив транскрипцію гена цитохрому P450scc.
Література
1. De Block M., Botterman J., Vandewiele, M., Dockx J., Thoen, C., Gosselé, V.,
Movva N., Thompson C., Van Montagu M., Leemans J. Engineering herbicide resistance in
plants by expression of a detoxifying enzyme // EMBO J. — 1987. — vol. 6. № 9.— P.2513-
2518.
2. Ylstra B., Touraev A., Brinkmann A. O., Heberle-Bors E., Tunen AJV. Steroid
hormones stimulate germination and tube growth of in vitro matured tobacco pollen // Plant
Physiology. — 1995.— vol. 107, № 2. — P.639-643.
3. Бердичевец И.Н., Манешина Т.В., Ярмолинский Д.Г., Спивак С.Г., Шпаковский
Г.В., Картель Н.А. Трансформация растений табака рекомбинантной плазмидой
pGBP450f экспрессирующей кДНК cyp11A1 цитохрома P450scc из коры надпочечников
быка // Международная конференция «Молекулярная генетика, геномика и
биотехнология». — Минск. — 2004.
4. Спивак С.Г. Бердичевец И.Н., Картель Н.А. Трансгенные растения табака,
экспрессирующие ген cyp11A1 цитохрома P450scc животного происхождения //
Фактори експериментальної еволюції організмів. — Київ. — 2006. — С.639-644.
5. Спивак C.Г., Морозова Е.В., Бердичевец И.Н., Картель Н.А. Влияние
экспрессии гена cyp11A1 цитохрома P450scc животного происхождения на
гормональный статус и фенотип растений табака Nicotiana tabacum L. // Гуминовые
кислоты и фитогормоны в растениеводстве. — Київ. — 2007.— С.72.
6. Yamada T., Ohashi Y., Ohshima M., Inui H., Shiota N., Ohkawa H., Ohkawa Y.
Inducible cross-tolerance to herbicides in transgenic potato plants with the rat cyp1A1 gene
//Theor. Appl. Genet. — 2002. — vol. 104. № 2-3.— P.308-314.
196
7. Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with
tobacco tissue culture // Physiol. Plant. — 1962. — vol. 15, № 3. — P.473-497.
8. Beaujean A., Sangwan R.S., Lecardonnel A., Sangwan-Norreel B.S. Agrobacterium-
mediated transformation of three economically important potato cultivars using sliced
internodal explants: an efficient protocol of transformation // J. Exp. Bot. — 1998. — vol. 49,
№ 326. — P.1589-1595.
9. K.H. Lipp João, Brown T.A. Enhanced transformation of tomato co-cultivated with
Agrobacterium tumefaciens C58C1Rifr::pGSFR1161 in the presence of acetosyringone //
Plant Cell Rep. — 1993. — vol. 12, № 7-8. — P.422-425.
10. Logemann J., Schell J., Willmitzer L. Improved method for the isolation of RNA
from plant tissues // Anal. Biochem. — 1987.— vol. 163, № 1. — P.16-20.
Резюме Отримано 8 трансгенних ліній картоплі сорту Луговська після
Agrobacterium tumefaciens-опосередкованої трансформації штамом, що несе ген bar та
ген cyp11A1 цитохрому P450scc кори надниркових залоз бика. 4 із 8 рослин мали
аномальну морфологію. Проведений ПЛР-аналіз на гени bar і cyp11A1 підтвердив
інтеграцію цих генів в геном всіх отриманих трансформованих ліній. Транскрипція
гена cyp11A1 підтверджена ПЛР аналізом зворотних транскриптів.
Получено 8 трансгенных линий картофеля сорта Луговськая после
Agrobacterium tumefaciens-опосредованной трансформации штаммом, несущим ген bar
и ген cyp11A1 цитохрома P450scc из коры надпочечников быка. 4 из 8 растений имели
аномальную морфологию. Проведенный ПЦР-анализ на гены bar и cyp11A1 подтвердил
интеграцию этих генов в геном всех полученных трансформованных линий.
Транскрипция гена cyp11A1 подтверждена ПЦР-анализом обратных транскриптов.
Eight PPT-resistant potato lines were obtained after Agrobacterium tumefaciens-
mediated transformation with a gene construct carrying bar gene and cyp11A1 gene of
cytochrome P450scc from bovine adrenal cortex. Four out of eight plants had abnormal
morphology. Integration of foreign genes in genome for all plants was confirmed by PCR
analysis. Transcription of cyp11A1 gene was confirmed by RT-PCR analysis.
САХНО Л.А., МОРГУН Б.В., КИЩЕНКО Е.М., КУЧУК Н.В.
Институт клеточной биологии и генетической инженерии НАН Украины
Украина, 03680, Киев, ул. Академика Заболотного, 148, е-mail: sakhno2007@ukr.net
НАСЛЕДОВАНИЕ ВВЕДЕННЫХ ГЕНОВ BAR И CYP11A1
ЦИТОХРОМА Р450SCC ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ
В Т1 ПОКОЛЕНИИ ТРАНСФОРМИРОВАННЫХ ЛИНИЙ ТАБАКА И РАПСА
В последние годы возрастает интерес к введению различных генов цитохрома
Р450 животного происхождения в геном растений. Это связано с возможностью
получения растений с новыми ценными характеристиками: устойчивостью к
гербицидам и способностью к ремидиации почв и воздуха за счёт экспрессии генов,
участвующих у млекопитающих в метаболизме ксенобиотиков (cyp1A1, cyp2В6,
cyp2С19, cyp2Е1) [1,2,3], а также ускорению темпов роста благодаря синтезу не
присущих растительным тканям биологически-активных молекул (cyp11A1) [4].
Растения риса [1] способны расти на почвах, содержащих атразин и метолахлор, и
накапливать их, очищая почву. Картофель с активным геном cyp1A1, полученным из
печени крысы, демонстрирует устойчивость к гербицидам хлортолурону и
метабензтиазурону [2]. Тополя, экспрессирующие ген cyp2Е1 цитохрома Р450 из
печени кролика, способны поглощать такие ядовитые вещества, как трихлорэтилен,
|