Отримання трансгенних рослин арахісу (Arachis hypogaea L.) з генами білків-стимуляторів імунної відповіді проти туберкульозу AG85, ESAT6
Aims. The production of peanut cultivars with new properties is necessary.The purpose of this work was to develop a method of transgenesis Ag85, ESAT6 genes in peanut genome by Agrobacterium-mediated transformation. Methods. Transformation of peanut lines was carried out using cocultivation of pea...
Saved in:
| Published in: | Фактори експериментальної еволюції організмів |
|---|---|
| Date: | 2015 |
| Main Authors: | , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Ukrainian |
| Published: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
2015
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/177510 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Отримання трансгенних рослин арахісу (Arachis hypogaea L.) з генами білків-стимуляторів імунної відповіді проти туберкульозу AG85, ESAT6 / С.М. Ніфантова, І.К. Комарницький, Ю.В. Симоненко, М.В. Кучук // Фактори експериментальної еволюції організмів: Зб. наук. пр. — 2015. — Т. 17. — С. 217-220. — Бібліогр.: 19 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-177510 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Ніфантова, С.М. Комарницький, І.К. Симоненко, Ю.В. Кучук, М.В. 2021-02-16T12:10:35Z 2021-02-16T12:10:35Z 2015 Отримання трансгенних рослин арахісу (Arachis hypogaea L.) з генами білків-стимуляторів імунної відповіді проти туберкульозу AG85, ESAT6 / С.М. Ніфантова, І.К. Комарницький, Ю.В. Симоненко, М.В. Кучук // Фактори експериментальної еволюції організмів: Зб. наук. пр. — 2015. — Т. 17. — С. 217-220. — Бібліогр.: 19 назв. — укр. 2219-3782 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/177510 577.21:582.739:581.143 Aims. The production of peanut cultivars with new properties is necessary.The purpose of this work was to develop a method of transgenesis Ag85, ESAT6 genes in peanut genome by Agrobacterium-mediated transformation. Methods. Transformation of peanut lines was carried out using cocultivation of peanut explants with Agrobacterium tumefaciens strain GV3101 carrying genetic construct pCB064 containing Ag85, ESAT6 genes and nptII gene. Selection was held on the solidified callus inducing medium with 100 mg/l kanamicyne. The selected callus clones were put on the regeneration medium. Obtained regeneration lines were analysed using PCR-analysis and Western-blot analysis. Results. 8 peanut regeneration lines had positive signals after PCR analysis with DNA fragments of required molecular size for nptII gene, Ag85 and ESAT6 genes. 1 regeneration line of peanut had positive signals after Western-blot analysis. Conclusions. Transgenic peanut plants containing Ag85, ESAT6 genes were obtained. We have developed transgenic peanut plants expressing the Ag85, ESAT6 proteine. Keywords: peanut, Ag85, ESAT6 genes, transformation. uk Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Фактори експериментальної еволюції організмів Молекулярні та клітинні біотехнології Отримання трансгенних рослин арахісу (Arachis hypogaea L.) з генами білків-стимуляторів імунної відповіді проти туберкульозу AG85, ESAT6 Obtaining of transgenic peanut (Arachis hypogaea L.) plants AG85, ESAT6 genes by Agrobacterium-mediated transformation Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Отримання трансгенних рослин арахісу (Arachis hypogaea L.) з генами білків-стимуляторів імунної відповіді проти туберкульозу AG85, ESAT6 |
| spellingShingle |
Отримання трансгенних рослин арахісу (Arachis hypogaea L.) з генами білків-стимуляторів імунної відповіді проти туберкульозу AG85, ESAT6 Ніфантова, С.М. Комарницький, І.К. Симоненко, Ю.В. Кучук, М.В. Молекулярні та клітинні біотехнології |
| title_short |
Отримання трансгенних рослин арахісу (Arachis hypogaea L.) з генами білків-стимуляторів імунної відповіді проти туберкульозу AG85, ESAT6 |
| title_full |
Отримання трансгенних рослин арахісу (Arachis hypogaea L.) з генами білків-стимуляторів імунної відповіді проти туберкульозу AG85, ESAT6 |
| title_fullStr |
Отримання трансгенних рослин арахісу (Arachis hypogaea L.) з генами білків-стимуляторів імунної відповіді проти туберкульозу AG85, ESAT6 |
| title_full_unstemmed |
Отримання трансгенних рослин арахісу (Arachis hypogaea L.) з генами білків-стимуляторів імунної відповіді проти туберкульозу AG85, ESAT6 |
| title_sort |
отримання трансгенних рослин арахісу (arachis hypogaea l.) з генами білків-стимуляторів імунної відповіді проти туберкульозу ag85, esat6 |
| author |
Ніфантова, С.М. Комарницький, І.К. Симоненко, Ю.В. Кучук, М.В. |
| author_facet |
Ніфантова, С.М. Комарницький, І.К. Симоненко, Ю.В. Кучук, М.В. |
| topic |
Молекулярні та клітинні біотехнології |
| topic_facet |
Молекулярні та клітинні біотехнології |
| publishDate |
2015 |
| language |
Ukrainian |
| container_title |
Фактори експериментальної еволюції організмів |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Obtaining of transgenic peanut (Arachis hypogaea L.) plants AG85, ESAT6 genes by Agrobacterium-mediated transformation |
| description |
Aims. The production of peanut cultivars with new properties is necessary.The purpose of this work was to develop a
method of transgenesis Ag85, ESAT6 genes in peanut genome by Agrobacterium-mediated transformation. Methods.
Transformation of peanut lines was carried out using cocultivation of peanut explants with Agrobacterium tumefaciens
strain GV3101 carrying genetic construct pCB064 containing Ag85, ESAT6 genes and nptII gene. Selection was held on
the solidified callus inducing medium with 100 mg/l kanamicyne. The selected callus clones were put on the regeneration
medium. Obtained regeneration lines were analysed using PCR-analysis and Western-blot analysis. Results. 8 peanut
regeneration lines had positive signals after PCR analysis with DNA fragments of required molecular size for nptII gene,
Ag85 and ESAT6 genes. 1 regeneration line of peanut had positive signals after Western-blot analysis. Conclusions.
Transgenic peanut plants containing Ag85, ESAT6 genes were obtained. We have developed transgenic peanut plants
expressing the Ag85, ESAT6 proteine.
Keywords: peanut, Ag85, ESAT6 genes, transformation.
|
| issn |
2219-3782 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/177510 |
| citation_txt |
Отримання трансгенних рослин арахісу (Arachis hypogaea L.) з генами білків-стимуляторів імунної відповіді проти туберкульозу AG85, ESAT6 / С.М. Ніфантова, І.К. Комарницький, Ю.В. Симоненко, М.В. Кучук // Фактори експериментальної еволюції організмів: Зб. наук. пр. — 2015. — Т. 17. — С. 217-220. — Бібліогр.: 19 назв. — укр. |
| work_keys_str_mv |
AT nífantovasm otrimannâtransgennihroslinarahísuarachishypogaealzgenamibílkívstimulâtorívímunnoívídpovídíprotituberkulʹozuag85esat6 AT komarnicʹkiiík otrimannâtransgennihroslinarahísuarachishypogaealzgenamibílkívstimulâtorívímunnoívídpovídíprotituberkulʹozuag85esat6 AT simonenkoûv otrimannâtransgennihroslinarahísuarachishypogaealzgenamibílkívstimulâtorívímunnoívídpovídíprotituberkulʹozuag85esat6 AT kučukmv otrimannâtransgennihroslinarahísuarachishypogaealzgenamibílkívstimulâtorívímunnoívídpovídíprotituberkulʹozuag85esat6 AT nífantovasm obtainingoftransgenicpeanutarachishypogaealplantsag85esat6genesbyagrobacteriummediatedtransformation AT komarnicʹkiiík obtainingoftransgenicpeanutarachishypogaealplantsag85esat6genesbyagrobacteriummediatedtransformation AT simonenkoûv obtainingoftransgenicpeanutarachishypogaealplantsag85esat6genesbyagrobacteriummediatedtransformation AT kučukmv obtainingoftransgenicpeanutarachishypogaealplantsag85esat6genesbyagrobacteriummediatedtransformation |
| first_indexed |
2025-11-25T23:10:35Z |
| last_indexed |
2025-11-25T23:10:35Z |
| _version_ |
1850579168045039616 |
| fulltext |
ISSN 2219-3782. Фактори експериментальної еволюції організмів. 2015. Том 17 217
Отримання трансгенних рослин арахісу (Arachis Hypogaea l.) З генами білків-стимуляторів імунної відповіді проти ...
Н
іф
ан
то
ва
С
.М
.,
К
ом
ар
ни
ць
ки
й
І.К
.,
С
им
он
ен
ко
Ю
.В
.,
К
уч
ук
М
.В
.
Були отримані трансгенні рослини арахі-
су (Arachis hypogaea L.), які містять гени ag85,
ESaT6, що кодують білки-стимулятори імун-
ної відповіді проти туберкульозу та маркерний
ген nptII. Генетичну трансформацію проводи-
ли за допомогою штаму GV3101 Agrobacterium
tumefaciens, з використанням плазміди pCB064.
Інтеграція перенесених генів у рослинний ге-
ном доведена за допомогою полімеразної ланцю-
гової реакції (ПЛР-аналізу). Продукування білка
з протитуберкульозною активністю виявили вес-
терн-блот гібридизацією.
Важливість представників родини бобових
полягає в тому, що вони є надійним джерелом по-
рівняно недорогого рослинного харчового білка.
Арахіс (Arachis hypogaea L.) відноситься до зер-
нобобових представників цієї родини, плоди яко-
го можуть вживатися у їжу в необробленому ви-
гляді. Рослини, що вживаються в їжу без терміч-
ної обробки, можуть використовуватись в якості
так званих їстівних вакцин [1–3]. Наприклад, бі-
лок LTB- ESaT6 синтезований в рослинах викли-
кав антиген-специфічний ефект [4]. Вже існують
повідомлення про успішний синтез туберкульоз-
них антигенів в рослинах тютюну [5, 6] та ара-
бідопсису [7]. Туберкульоз – небезпечна інфек-
ційна хвороба, яка становить загрозу життю на-
селення та спричиняє господарські втрати у тва-
ринництві. Вакцина БЦЖ не дає повноцінного
захисту для дорослих від туберкульозу легенів.
Альтернативою може бути створення нових вак-
цин на основі генів ag85, ESaT6 [6, 8–11]. У лі-
тературі висвітлені роботи по трансформації ара-
хісу генами хітинази рису, який підвищує стій-
© НІФАНТОВА С.М., КОМАРНИЦьКИЙ І.К., СИМОНЕНКО Ю.В., КУЧУК М.В.
кість рослин до Cercospora arachidicola та мар-
керного гена hpt стійкості до гігроміцину [12]; ге-
ном atNHX, надекспрессія якого поліпшує соле-
стійкість і підвищує посухостійкість в трансген-
них рослинах арахісу [13]; генами фітосинтази з
кукурудзи (Zmpsy1) та хітинази рису (rchit) [14];
cry1EC геном, що надає стійкості до Spodoptera
litura [15]; cpo-p геном, що інгібує продукцію
мікотоксину грибів у трансгенного арахісу [16].
У роботі [17] арахіс трасформували геном білка
вірусу чуми великої рогатої худоби гемаглюти-
ніну (H), з можливістю використання трансген-
них рослин у якості їстівних вакцин. Метою на-
шої роботи було отримання трансгенних рослин
арахісу з генами ag85, ESaT6, що кодують біл-
ки-стимулятори імунної відповіді проти туберку-
льозу.
Матеріали і методи
Рослинний матеріал. У роботі використо-
вувались асептично вирощені в культурі in vitro
рослини арахісу (Arachis hypogaea L.) – бактері-
альні штами. Генетичну трансформацію прово-
дили за допомогою штаму GV3101 Agrobacterium
tumefaciens, з використанням плазміди pCB064
(рис. 1), яка містить гени ag85, ESaT6, що коду-
ють білки-стимулятори імунної відповіді проти
туберкульозу та маркерний ген nptII.
Генетична трансформація та селекція.
В даній роботі використовувався метод непрямої
трансформації рослин арахісу з використанням
agrobacterium tumefaciens в якості переносника
генів. В асептичних умовах гіпокотилі та стебла
рослин нарізались на експланти і переносились
УДК 577.21:582.739:581.143
НІФАНТОВА С.М., КОМАРНИЦьКИй І.К., СИМОНЕНКО Ю.В., КУЧУК М.В.
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України,
Україна,03143, м. Київ, вул. Академіка Заболотного, 148, е-mail: sveta@iicb.kiev.ua
ОТРИМАННЯ ТРАНСГЕННИХ РОСЛИН АРАХІСУ (ARAcHis HyPoGAEA L.)
З ГЕНАМИ БІЛКІВ-СТИМУЛЯТОРІВ ІМУННОЇ ВІДПОВІДІ
ПРОТИ ТУБЕРКУЛьОЗУ AG85, EsAT6
Рис. 1. Схематичне зображення плазміди pCB064
218 ISSN 2219-3782. Фактори експериментальної еволюції організмів. 2015. Том 17
Ніфантова С.М., Комарницький І.К., Симоненко Ю.В., Кучук М.В.
Генетичну трансформацію арахісу проводи-
ли за вищеописаною методикою, з використан-
ням агробактерії, що містила плазміду pCB164 як
переносника генів ag85, ESaT6. Селекцію про-
водили на агаризованому середовищі для калю-
соутворення з канаміцином у концентрації 100
мг/л. Після селекції всі відібрані калюсні кло-
ни переносили на регенераційне середовище з
тими ж селективними агентами. Через 2–3 місяці
на частині відібраних калюсів утворювались ін-
тенсивно-зелені осередки регенерації, з яких при
подальшому культивуванні утворювались пагони
(рис. 2).
на агаризоване середовище Гамборга В5, що мі-
стило регулятор росту dicamba у концентрації
1мкг/л для ініціації калюсогенезу. Через 1–2 тиж-
ні всі калюси переносили у рідке поживне сере-
довище того ж складу для кокультивації з нічною
культурою Agrobacterium tumefaciens. Кокульти-
вацію проводили у темряві при температурі 22 °С
протягом 24 годин. Проводили інфільтрацію, ка-
люс відмивали стерильною водою та переноси-
ли на агаризоване поживне середовище, що мі-
стило 750 мг/л цефатоксиму, для елімінації агро-
бактерії та селективний агент 100 мг/л канаміци-
ну. Через 4 тижні після селекції всі відібрані ка-
люсні клони переносили на регенераційне сере-
довище, яке містило ВАР у концентрації 1 мкг/л,
ag2S2O3, гідролізат казеїну у концентрації 300
мг/л, цефатоксим та канаміцин. Тіосульфат срі-
бла чинить антиетиленову дію і таким чином під-
вищує регенераційну здатність калюсів [18]. Мо
лекулярно-біологічний аналіз. Для підтверджен-
ня трансгенної природи отриманих регенеран-
тів, аналізували сумарну рослинну ДНК, екстра-
говану ЦТАБ-методом [19] за допомогою ПЛР
із використанням відповідних праймерів : nptII
5’CCTGaaTGaaCTCCaGGaCGaGGCa3’,
5’GCTCTaGaTCCaGaGTCCCGCTCaGaaG3’
ag85 5’-aGCaGTCCCTGaCCaaGCTC-3’,
5’-TCaGGTTGCTGCTaCGaaCG-3’ ESaT6
5 ’ - aT T T C G C G G G TaT C G a G G C C G - 3 ’ ,
5’-GGTCGaaGCCaTTGCCTGaCC-3’.
В реакції використовували 10 нг тоталь-
ної рослинної ДНК. Реакійна суміш загальним
об’ємом 20 мкл містила 1 мкг рослинної ДНК,
праймери в концентрації 0,25 мкМ, нуклеозид-
трифосфати в конц. 0,5 мкМ, 0,1 од. ДНК поліме-
рази Tag та буферний розчин. Ампліфікацію про-
водили при таких умовах: 94 °С 5 хв → (94 °С
30 с, 60 °С 30 с, 72 °С 30 с)Ч30→72 °С 5 хв. Піс-
ля ампліфікації зразки фракціонували в 1 % ага-
розному гелі при напрузі електричного поля 100
В/см протягом 1 години у ТВЕ-буфері. Гелі за-
барвлювали бромістим етидієм і фотографували,
використовуючи червоний фільтр.
Для виявлення продукування білка з про-
титуберкульозною активністю проводили Вес-
терн-блот гібридизацію.
Результати та обговорення
У ході проведеної роботи була визначена се-
лективна концентрація канаміцину для калюсних
тканин введених у культуру in vitro рослин арахі-
су, яка склала 100 мг/л.
Рис. 2. Селекція та регенерація арахісу на селектив-
ному середовищі з канаміцином концентрації 100 мг/л
Рис. 3. ПЛР-аналіз на наявність гена ag85 в рос-
линній ДНК трансгенних ліній арахісу: 1 – ДНК
молекулярного маркера, 2 – ДНК плазміди pCB064
(розмір ампліфікованого фрагмента 484 пн), 3–10 –
ДНК трансгенних ліній, 11 – ДНК контрольної не-
трансформованої лінії арахісу
ISSN 2219-3782. Фактори експериментальної еволюції організмів. 2015. Том 17 219
Отримання трансгенних рослин арахісу (Arachis Hypogaea L.) З генами білків-стимуляторів імунної відповіді проти ...
Рис. 4. ПЛР-аналіз на наявність гена білка ESaT6 в
рослинній ДНК трансформованних ліній арахісу: 1 –
ДНК молекулярного маркера, 2–3 – зразки без ДНК,
4 – ДНК плазміди pCB064 (розмір ампліфікованого
фрагмента 103 пн), 5 – ДНК контрольної нетрансфор-
мованої лінії арахісу, 6–12 – ДНК трансгенних ліній
Було відібрано 23 регенераційні лінії, які в
подальшому аналізували на наявність перене-
сених генів за допомогою ПЛР-аналізу, з яких
8 ліній виявилися трансгенними і містили гени
ag85, ESaT6 та nptII. Результати ампліфікації
фрагментів ДНК потрібного розміру 484 пн для
гена ag85, та 103 пн для ESaT6 представлені на
малюнках (рис. 3, 4) відповідно.
Продукування протеїну ESaT6-ag85
(dTMD)-6His у біомасі трансгенної рослини ара-
хісу лінії r15 виявлене методом Вестерн-блот гі-
бридизації.
Висновок
У результаті проведеної нами роботи впер-
ше були отримані трансгенні рослини арахісу з
генами ag85, ESaT6, що кодують білки-стимуля-
тори імунної відповіді проти туберкульозу, дове-
дена їх трансгенна природа та виявлене продуку-
вання рекомбінантного білка.
ЛІТЕРАТУРА
1. Mason H.S., Warzecha H., Mor T., arntzen C.J. Edible plant vaccines: application for prophylactic and therapentic molecular
medicine // Trend Mol. Med. – 2002. – 8, N 7. – P. 324–329.
2. Walmsley a.M., arntzen C.J. Plant delivery of edible vaccines// Curr. Opin. Biotechnol. – 2000. – 11 – P. 126–129.
3. Tuboly. T, Yu W., Baily a., Erickson L., Nagy E. Development of oral vaccine in plants against transmissible gastroenteritis virus of
swine. – In: Toutant J.P., Balazs E. (eds) Molecular farming. La Grande Motte, Paris, 2000 – P. 239–248.
4. rigano M.M., Dreitz S., Kipnis a.P., Izzob a.a., Walmsley a.M. Oral immunogenicity of a plant-made, subunit, tuberculosis
vaccine // Vaccine. – 2006. – 24, N 5. – P. 691–695.
5. Zelada a., Calamante G., de la Paz Santangelo M., Bigi F., Verna F., Mentaberry a., Cataldi a. Expression of tuberculosis antigen
ESaT-6 in Nicotiana tabacum using a potato virus X-based vector // Tuberculosis. – 2006. – 86, N 3. – P. 263–267.
6. Ilaria Pepponi, Gil r. Diogo, Elena Stylianou, Craig J. van Dolleweerd, Pascal M.W. Drake, Matthew J. Paul, Laura Sibley, Julian K.-
C. Ma and rajko reljic Plant-derived recombinant immune complexes as self- adjuvanting TB immunogens for mucosal boosting of
BCG // Plant Biotechnology Journal. – 2014. – P. 1–11
7. rigano M.M., alvarez M.L., Pinkhasov J., Jin Y., Sala F., arntzen C.J., Walmsley a.M. Production of a fusion protein consisting of
the enterotoxigenic Escherichia coli heat-labile toxin B subunit and a tuberculosis antigen in Arabidopsis thraliana // Plant Cell rep. –
2004. – 22, N 7. – P. 502–508.
8. Brodin P., rosenkrands I., andersen P., Cole S.T., Brosh r. ESaT-6 proteins: protective antigens and virulence factors? // Trend
Microbiol. – 2004. – 12, N 11. – P. 500–508
9. Dietrich J., Weldingh K., andersen P. Prospects for a novel vaccine against tuberculosis // Veterinaty Microbiol. – 2006. – 112, N 2. –
4. – P. 163–169.
10. Orme I.M. Current progress in tuberculosis vaccine development // Vaccine. – 2005. – 23, N 17/18. – P. 2105–2108.
11. Orme I.M. Tuberculosis vaccines: Current progress // Drugs. – 2005. – 65, N 17. – P. 2437–2444.
12. Iqbal M.M., Nazir F., ali S., asif M.a., Zafar Y., Iqbal J., ali G.M. Over expression of rice chitinase gene in transgenic peanut
(Arachis hypogaea L.) improves resistance against leaf spot // Mol Biotechnol. – 2012 – 50, N 2. – P. 129–136.
13. asif M.a., Zafar Y., Iqbal J., Iqbal M.M., rashid U., ali G.M., arif a., Nazir F. Enhanced expression of atNHX1, in transgenic
groundnut (Arachis hypogaea L.) improves salt and drought tolerance // Mol Biotechnol. – 2011. – 49, N 3. – P. 250–256.
14. Bhatnagar M., Prasad K., Bhatnagar-Mathur P., Narasu M.L., Waliyar F., Sharma K.K. an efficient method for the production of
marker-free transgenic plants of peanut (Arachis hypogaea L.) // Plant Cell rep. – 2010. – 29, N 5. – P. 495–502.
15. Tiwari S., Mishra D.K., Singh a., Singh P.K., Tuli R. Expression of a synthetic cry1EC gene for resistance against Spodoptera litura
in transgenic peanut (Arachis hypogaea L.) // Plant Cell rep. – 2008. – 27, N 6. – P. 1017–1025.
16. Niu C., akasaka-Kennedy Y., Faustinelli P., Joshi M., rajasekara K., Yang H., Chu Y., Cary J., Ozias-akins P. antifungal activity
in Transgenic Peanut (Arachis hypogaea L.) Conferred by a Nonheme Chloroperoxidase Gene. Peanut Science. – 2009. – 36, N 2. –
P. 126–132.
17. abha Khandelwal, Vally K.J.M., Geetha N., Venkatachalam P., Shaila M.S., Lakshmi Sita G. Engineering hemagglutinin (H) protein
of rinderpest virus into peanut (Arachis hypogaea L.) as a possible source of vaccine // Plant Science. – 2003. – 165, N 1. – P. 77–84.
18. De Block M., Botterman J., Vandewiele M., Dockx J., Thoen C., Gossele V., Movva N.r., Thompson C., Van Montagu M., Leemans J.
Engineering herbicide resistance in plants by expression of a detoxifying enzyme // EMBO J. – 1987. – 6. – P. 2513–2518.
19. Doyle J.J., Doyle J.L. Isolation of plant DNa from fresh tissue // Focus. – 1990. – 12. – P. 13–15.
220 ISSN 2219-3782. Фактори експериментальної еволюції організмів. 2015. Том 17
Ніфантова С.М., Комарницький І.К., Симоненко Ю.В., Кучук М.В.
NIFANTOVA S.N., KOMARNICKIY I.K., SIMONENKO YU.V., KUCHUK N.V.
Institute of Cell Biology and Genetic Engineering National Academy of Sciences of Ukraine,
Ukraine, 03143, Kyiv-143, Akademika Zabolotnogo str., 148, e-mail: sveta@ iicb.kiev.ua
OBTAINING OF TRANSGENIC PEANUT (ARACHIS HYPOGAEA L.) PLANTS AG85, ESAT6
GENES BY AGROBACTERIUM-MEDIATED TRANSFORMATION
Aims. The production of peanut cultivars with new properties is necessary.The purpose of this work was to develop a
method of transgenesis Ag85, ESAT6 genes in peanut genome by Agrobacterium-mediated transformation. Methods.
Transformation of peanut lines was carried out using cocultivation of peanut explants with Agrobacterium tumefaciens
strain GV3101 carrying genetic construct pCB064 containing Ag85, ESAT6 genes and nptII gene. Selection was held on
the solidified callus inducing medium with 100 mg/l kanamicyne. The selected callus clones were put on the regeneration
medium. Obtained regeneration lines were analysed using PCr-analysis and Western-blot analysis. Results. 8 peanut
regeneration lines had positive signals after PCr analysis with DNa fragments of required molecular size for nptII gene,
Ag85 and ESAT6 genes. 1 regeneration line of peanut had positive signals after Western-blot analysis. Conclusions.
Transgenic peanut plants containing Ag85, ESAT6 genes were obtained. We have developed transgenic peanut plants
expressing the Ag85, ESAT6 proteine.
Keywords: peanut, Ag85, ESAT6 genes, transformation.
|