Исследование репродукции вируса ожога гречихи в трансгенных растениях табака, экспрессирующих ген интерферона альфа 2b человека
Было проведено исследование динамики репродукции минус РНК-геномного фиторабдовируса — вируса ожога гречихи в растениях табака, экспрессирующих ген интерферона альфа 2b человека. Показано, что по сравнению с нетрансгенным контролем трансгенные растения табака не проявляют устойчивости к ВОГ....
Збережено в:
| Дата: | 2010 |
|---|---|
| Автори: | , , , , , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
2010
|
| Назва видання: | Фактори експериментальної еволюції організмів |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/177847 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Исследование репродукции вируса ожога гречихи в трансгенных растениях табака, экспрессирующих ген интерферона альфа 2b человека / Н.Я. Спивак, Я.Р. Синдаровская, О.И. Лозовая, Л.А. Сахно, И.М. Герасименко, З.М. Олевинская, Л.Ф. Диденко, Ю.В. Шелудько, Н.В. Кучук // Фактори експериментальної еволюції організмів: Зб. наук. пр. — 2010. — Т. 9. — С. 335-340. — Бібліогр.: 14 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-177847 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-1778472025-02-09T20:37:31Z Исследование репродукции вируса ожога гречихи в трансгенных растениях табака, экспрессирующих ген интерферона альфа 2b человека Спивак, Н.Я. Синдаровская, Я.Р. Лозовая, О.И. Сахно, Л.А. Герасименко, И.М. Олевинская, З.М. Диденко, Л.Ф. Шелудько, Ю.В. Кучук, Н.В. Біотехнології у медицині та сільському господарстві Было проведено исследование динамики репродукции минус РНК-геномного фиторабдовируса — вируса ожога гречихи в растениях табака, экспрессирующих ген интерферона альфа 2b человека. Показано, что по сравнению с нетрансгенным контролем трансгенные растения табака не проявляют устойчивости к ВОГ. Було проведено дослідження динаміки репродукції мінус РНК-геномного фіторабдовірусу — вірусу опіку гречки (ВОГ) у рослинах тютюну, які експресують ген інтерферону альфа 2b людини. Показано, що в порівнянні із нетрансгенним контролем, трансгенні рослини тютюну не проявляють стійкості до ВОГ. Dynamics of RNA-minus genome phytorhabdovirus (burn of buckwheat virus (BBV) reproduction in tobacco plants expressing human alpha 2b interferon was studied. It was shown that transgenic as well as non-transgenic plants do not demonstrate BBV resistance. 2010 Article Исследование репродукции вируса ожога гречихи в трансгенных растениях табака, экспрессирующих ген интерферона альфа 2b человека / Н.Я. Спивак, Я.Р. Синдаровская, О.И. Лозовая, Л.А. Сахно, И.М. Герасименко, З.М. Олевинская, Л.Ф. Диденко, Ю.В. Шелудько, Н.В. Кучук // Фактори експериментальної еволюції організмів: Зб. наук. пр. — 2010. — Т. 9. — С. 335-340. — Бібліогр.: 14 назв. — рос. 2219-3782 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/177847 ru Фактори експериментальної еволюції організмів application/pdf Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Біотехнології у медицині та сільському господарстві Біотехнології у медицині та сільському господарстві |
| spellingShingle |
Біотехнології у медицині та сільському господарстві Біотехнології у медицині та сільському господарстві Спивак, Н.Я. Синдаровская, Я.Р. Лозовая, О.И. Сахно, Л.А. Герасименко, И.М. Олевинская, З.М. Диденко, Л.Ф. Шелудько, Ю.В. Кучук, Н.В. Исследование репродукции вируса ожога гречихи в трансгенных растениях табака, экспрессирующих ген интерферона альфа 2b человека Фактори експериментальної еволюції організмів |
| description |
Было проведено исследование динамики репродукции минус РНК-геномного
фиторабдовируса — вируса ожога гречихи в растениях табака, экспрессирующих
ген интерферона альфа 2b человека. Показано, что по сравнению с нетрансгенным
контролем трансгенные растения табака не проявляют устойчивости к ВОГ. |
| format |
Article |
| author |
Спивак, Н.Я. Синдаровская, Я.Р. Лозовая, О.И. Сахно, Л.А. Герасименко, И.М. Олевинская, З.М. Диденко, Л.Ф. Шелудько, Ю.В. Кучук, Н.В. |
| author_facet |
Спивак, Н.Я. Синдаровская, Я.Р. Лозовая, О.И. Сахно, Л.А. Герасименко, И.М. Олевинская, З.М. Диденко, Л.Ф. Шелудько, Ю.В. Кучук, Н.В. |
| author_sort |
Спивак, Н.Я. |
| title |
Исследование репродукции вируса ожога гречихи в трансгенных растениях табака, экспрессирующих ген интерферона альфа 2b человека |
| title_short |
Исследование репродукции вируса ожога гречихи в трансгенных растениях табака, экспрессирующих ген интерферона альфа 2b человека |
| title_full |
Исследование репродукции вируса ожога гречихи в трансгенных растениях табака, экспрессирующих ген интерферона альфа 2b человека |
| title_fullStr |
Исследование репродукции вируса ожога гречихи в трансгенных растениях табака, экспрессирующих ген интерферона альфа 2b человека |
| title_full_unstemmed |
Исследование репродукции вируса ожога гречихи в трансгенных растениях табака, экспрессирующих ген интерферона альфа 2b человека |
| title_sort |
исследование репродукции вируса ожога гречихи в трансгенных растениях табака, экспрессирующих ген интерферона альфа 2b человека |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| publishDate |
2010 |
| topic_facet |
Біотехнології у медицині та сільському господарстві |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/177847 |
| citation_txt |
Исследование репродукции вируса ожога гречихи
в трансгенных растениях табака,
экспрессирующих ген интерферона
альфа 2b человека / Н.Я. Спивак, Я.Р. Синдаровская, О.И. Лозовая, Л.А. Сахно, И.М. Герасименко, З.М. Олевинская, Л.Ф. Диденко, Ю.В. Шелудько, Н.В. Кучук // Фактори експериментальної еволюції організмів: Зб. наук. пр. — 2010. — Т. 9. — С. 335-340. — Бібліогр.: 14 назв. — рос. |
| series |
Фактори експериментальної еволюції організмів |
| work_keys_str_mv |
AT spivaknâ issledovaniereprodukciivirusaožogagrečihivtransgennyhrasteniâhtabakaékspressiruûŝihgeninterferonaalʹfa2bčeloveka AT sindarovskaââr issledovaniereprodukciivirusaožogagrečihivtransgennyhrasteniâhtabakaékspressiruûŝihgeninterferonaalʹfa2bčeloveka AT lozovaâoi issledovaniereprodukciivirusaožogagrečihivtransgennyhrasteniâhtabakaékspressiruûŝihgeninterferonaalʹfa2bčeloveka AT sahnola issledovaniereprodukciivirusaožogagrečihivtransgennyhrasteniâhtabakaékspressiruûŝihgeninterferonaalʹfa2bčeloveka AT gerasimenkoim issledovaniereprodukciivirusaožogagrečihivtransgennyhrasteniâhtabakaékspressiruûŝihgeninterferonaalʹfa2bčeloveka AT olevinskaâzm issledovaniereprodukciivirusaožogagrečihivtransgennyhrasteniâhtabakaékspressiruûŝihgeninterferonaalʹfa2bčeloveka AT didenkolf issledovaniereprodukciivirusaožogagrečihivtransgennyhrasteniâhtabakaékspressiruûŝihgeninterferonaalʹfa2bčeloveka AT šeludʹkoûv issledovaniereprodukciivirusaožogagrečihivtransgennyhrasteniâhtabakaékspressiruûŝihgeninterferonaalʹfa2bčeloveka AT kučuknv issledovaniereprodukciivirusaožogagrečihivtransgennyhrasteniâhtabakaékspressiruûŝihgeninterferonaalʹfa2bčeloveka |
| first_indexed |
2025-11-30T13:46:21Z |
| last_indexed |
2025-11-30T13:46:21Z |
| _version_ |
1850223238192300032 |
| fulltext |
336
СПИВАК Н.Я1., СИНДАРОВСКАЯ Я.Р.2, ЛОЗОВАЯ О.И.1, САХНО Л.А.2,
ГЕРАСИМЕНКО И.М. 2, ОЛЕВИНСКАЯ З.М.1, ДИДЕНКО Л.Ф.1,
ШЕЛУДЬКО Ю.В. 2, КУЧУК Н.В.2
1Институт микробиологии и вирусологии им. Д.К. Заболотного НАН Украины,
ул. Заболотного 154, г. Киев, 03680, Украина; e-mail: Spivak@serv.imv.kiev.ua
2Институт клеточной биологии и генетической инженерии НАН Украины,
ул. Заболотного 148, г. Киев, 03680, Украина e-mail: ysheludko@ukr.net
ИССЛЕДОВАНИЕ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСА ОЖОГА ГРЕЧИХИ
В ТРАНСГЕННЫХ РАСТЕНИЯХ ТАБАКА,
ЭКСПРЕССИРУЮЩИХ ГЕН ИНТЕРФЕРОНА
АЛЬФА 2b ЧЕЛОВЕКА
Вирусные болезни растений являются важной проблемой сельского
хозяйства. Вирусы способны резко снижать урожайность и ухудшать ка-
чество продукции ценных сельскохозяйственных культур. К настоящему
времени разработаны новые подходы к стратегии защиты растений от
вирусной инфекции, одним из которых является изучение развития вирусной
инфекции в растительном организме, экспрессирующем ген интерферона
человека. Интерфероны являются неспецифическими факторами защиты
клеток от широкого спектра ДНК- и РНК-содержащих вирусов животных
[1]. Существуют также данные, что интерферон после экзогенной обработки
может повышать устойчивость растительных клеток к вирусным заболева-
ниям [2-4]. Антивирусный эффект был продемонстрирован и в результате
экспрессии генов α- и β-интерферона в трансгенных растениях [5, 6]. С дру-
гой стороны, в ряде работ отмечено отсутствие достоверного защитного
эффекта интерферона в растительных клетках [7, 8].
Целью настоящей работы являлось изучение восприимчивости расте-
ний табака, экспрессирующих ген интерферона человека, к фиторабдови-
русу — вирусу ожога гречихи (ВОГ). Интерес использования минус-ге-
номного ВОГ мотивирован тем, что механизм его репродукции отличается
от ранее изученных плюс-геномных фитовирусов. Кроме того, ВОГ поражает
ценные сельскохозяйственные культуры, в том числе гречиху, картофель,
томаты, табак [9]. Полученные данные могут указать возможный механизм
приобретения вирусоустойчивости растений к фиторабдовирусам. В работе
также было исследовано влияние вирусной инфекции на продукцию реком-
бинантного интерферона в трансгенных растениях табака. Исследование
накопления целевого белка при развитии вирусной инфекции в трансгенных
растениях имеет значение для промышленной биотехнологии.
Материалы и методы
В работе использованы растения табака Nicotiana tabacum сорта
Wisconsin, несущие рекомбинантный (с растительным сигналом выведения
белка в апопласт) или нативный ген интерферона альфа 2b человека (inf
б2b) [10] и растения табака, несущие, помимо гена inf б2b (с растительным
транспортным сигналом), ген cry3A (устойчивость к насекомым). Исполь-
337
зовали две линии табаков, несущих нативный ген inf б2b (073/3, 073/9); три
линии табаков, несущих ген inf б2b с растительным транспортным сигналом
(125/1, 125/2, 125/4), и три линии двойных трансформантов (125/150/1, 125/
150/3, 125/150/9). Наличие трансгенов подтверждали ПЦР анализом. В ка-
честве контроля использовали нетрансгенный табак сорта Wisconsin.
Трансгенные и контрольные растения табака инокулировали очищен-
ным вирусным препаратом в концентрации 100 мкг/мл. В качестве контроля
использовали растения табака, инокулированные буфером. Все растения,
вне зависимости от визуальной оценки проявившейся на них вирусной пато-
логии, были использованы для выделения ВОГ [11].
Сбор растительного материала и экстракцию белков проводили каждую
неделю в течение месяца как описано в [10]. Для титрования интерферона
была использована методика [12].
Результаты и обсуждение
В результате агробактериальной трансформации были получены
трансгенные растения табака, несущие ген интерферона человека inf б2b с
разными транспортными сигналами [10], а также растения табака, несущие
ген inf б2b и ген cry3A устойчивости к насекомым. Наличие трансгенов в
растениях было подтверждено ПЦР анализом, а активность интерферона
в растительных экстрактах была подтверждена методом титрования интер-
ферона. Для эксперимента были отобраны линии растений с высокой актив-
ностью интерферона. Экспрессия гена inf б2b не сопровождалась видимыми
изменениями фенотипа растений или задержкой их развития.
Мы показали существование фоновой интерфероноподобной актив-
ности в экстрактах нетрансгенных растений, которая, по всей вероятности,
имеет фазовый характер (чередование уменьшения и увеличения актив-
ности). Такие же фазовые изменения обнаружены и в интерфероноподобной
активности экстрактов трансгенных растений табака. В последнем случае
антивирусная активность экстракта состоит из фоновой интерфероноподоб-
ной активности самого растения и активности, полученной вследствие экс-
прессии гена интерферона.
В первую неделю эксперимента наблюдали резкое изменение уровней
интерфероноподобной активности как в опытных (исключение — линии
073/9 и 125/2), так и в контрольных (инокулированных буфером) экстрактах
растений. Во всех экстрактах контрольных растений уровень активности
снижался, что особенно заметно для линий 073/9, 125/1 и 125/2, у которых
активность снизилась с 800 МЕ/мл до 13, 50 и 25 МЕ/мл, соответственно.
Данные результаты могли быть следствием включения защитных систем
растения в ответ на ранение (втирание буфера в листья). Одним из механиз-
мов защиты от стрессовых факторов является временное изменение белково-
го профиля растения. В этом случае происходит ограничение синтеза типич-
ных растительных белков и накопление стрессовых белков [13].
Изменение интерфероноподобной активности в экстрактах эксперимен-
тальных (зараженных вирусом) растений через неделю после инфициро-
338
вания имело другой характер. В растительных экстрактах, имеющих изна-
чально высокий уровень активности (≥400 МЕ/мл), снижалась интерфероно-
подобная активность в два и более раза (исключение — линии 073/9 и 125/2).
Наоборот, в растительных экстрактах с изначально невысоким уровнем
активности ≤200 МЕ/мл (на уровне неспецифической активности контроля),
происходило увеличение интерфероноподобной активности, в том числе и
в экстракте нетрансгенного растения, до ≥400 МЕ/мл. Это особенно заметно
для линии 125/150/1, интерфероноподобная активность которой возросла
до 800 МЕ/мл (рис. 1). Следует отметить, что через неделю после инокуля-
ции интерфероноподобная активность экстрактов опытных растений (в лю-
бом из вариантов) была выше, чем контрольных (исключение — линия 073/3).
Ко второй неделе после инфицирования интерфероноподобная актив-
ность в экстрактах трансгенных растений начинает снижаться (кроме линии
125/150/9). Уровень интерфероноподобной активности контроля в это время
не изменяется и остается на уровне 400 МЕ/мл. Накопление вируса в это
Рис. 1. Интерфероноподобная активность у экстрактов растений
0
100
200
300
400
500
600
700
800
900
0
73
/3 1 2 3 4
07
3/
9 1 2 3 4
12
5/
1 1 2 3 4
12
5/
2 1 2 3 4
12
5/
4 1 2 3 4
12
5/
15
0/
1 1 2 3 4
12
5/
15
0/
3 1 2 3 4
12
5/
15
0/
9 1 2 3 4
w
t 1 2 3 4
линии табаков,
недели после заражения
МЕ/мл
зараженные
растения
незараженные
растения
Рис. 2. Накопление вируса ожога гречихи
0
0,5
1
1,5
2
2,5
0
73
/3 1 2 3 4
07
3/
9 1 2 3 4
12
5/
1 1 2 3 4
12
5/
2 1 2 3 4
12
5/
4 1 2 3 4
12
5/
15
0/
1 1 2 3 4
12
5/
15
0/
3 1 2 3 4
12
5/
15
0/
9 1 2 3 4
w
t 1 2 3 4
линии табаков,
недели после заражения
Концентрация вируса,
мг/мл
339
время достигает максимальных значений для большинства трансгенных
линий (исключение — 073/3 и 125/1) и нетрансгенного контроля (рис. 2).
В это время появляются симптомы вирусной инфекции на верхних листьях
табаков.
В дальнейшем, вплоть до конца эксперимента (4-я неделя после зара-
жения), интерфероноподобная активность экстрактов всех опытных расте-
ний оставалась низкой. При этом в экстракты двух линий контрольных
растений (125/4 и 125/150/3) к третьей неделе демонстрируют увеличение
интерфероноподобной активности, незначительный всплеск активности
показан также для линии 125/150/1. Подобные данные свидетельствуют в
пользу предположения, что ВОГ ингибирует накопление рекомбинантного
интерферона, что и сказывается на интерфероноподобной активности экс-
трактов. К третьей неделе происходит развитие симптомов вирусного забо-
левания по всему растению, а нижние зараженные листья отмирают.
К окончанию эксперимента количество вируса в некоторых линиях
(125/2 и 125/150/3) значительно падает. Причиной этого может быть как
приобретение устойчивости к ВОГ, так и гибель инфицированных тканей.
Последний факт, по-видимому, явился причиной некротизации растений
линий 125/4 и 125/150/1.
Интересно наличие интерфероноподобной активности в нетрасгенных
растениях табака. Результаты проведенных исследований показали угнетение
репродукции вируса везикулярного стоматита в культуре перевиваемых
тестикул поросят на уровне 400 МЕ/мл. Эти данные можно объяснить тем,
что в растениях табака присутствует ген, обладающий высокой степенью
гомологии с геном β-интерферона человека. Экспрессия данного гена инду-
цируется в растениях при заражении вирусом табачной мозаики [14]. Возмож-
но, экспрессия такого гена приводит к определению активности интерферона
в системе in vitro. Этот вопрос требует дальнейшего изучения.
Выводы
Исследована динамика репродукции вируса ожога гречихи растениях
табака, экспрессирующих ген интерферона альфа 2b человека. Показано,
что высокий уровень накопления вируса коррелирует с низким уровнем
экспрессии гена интерферона. Устойчивость к ВОГ у трансгенных растений
табака достоверно не отличается от таковой у контрольных растений. Полу-
ченные данные имеют значение для дальнейшего изучения ВОГ, а также
для изучения поведения трансгенов и накопления целевого белка в растении
при развитии вирусной инфекции.
Литература
1. Goodbourn S., Didcock L. Interferons: cell signaling, immune modulation,
antiviral responses and virus countermeasures // J. of General Virol.— 2000.— V.81.—
P. 2341–2364.
2. Orshansky P., Rubinstein M., Sela I. Human interferons protect plants from virus
infection // Proc. Nat. Acad. Sci. USA.— 1982.— V.79.— P. 2278–2280.
340
3. Огарков В.И., Каплан И.Б., Тальянский М.Э., Атабеков И.Г. Подавление
репродукции вирусов картофеля под влиянием интерферона человека // Докл. АН
СССР.— 1984.— Т.276, №3.— С. 743–745.
4. Rosenberg N., Reichman M., Sela I. Antiviral activity of natural and recombinant
human leukocyte interferons in tobacco protoplasts // Virol.— 1985.— V.140.—
P. 173–178.
5. Смирнов С.П., Крашенинникова Л.В., Пухальский В.А. Устойчивость к вирусу
табачной мозаики у трансгенных растений табака, продуцирующих α-интерферон
человека // Докл. АН СССР.— 1991.— Т.317, №3.— С. 732–734.
6. Рывкин М.И., Дейнеко Е.В., Комарова М.Л., Кочетов А.В., Шумный В.К.
Оценка вирусоустойчивости трансгенных растений табака и люцерны, несущих ген
β-интерферона человека // Докл. АН СССР.— 1993.— Т.331, №5.— С. 652–654.
7. Huisman M.J., Broxterman H.J. Human interferon does not protect cell protoplasts
against infection with alfa-alfa mosaic virus // Virol.— 1985.— 143, №4.— P. 622–625.
8. Edelbaum O., Stein D., Holland N. et al. Expression of active human interfe-
ron-β in transgenic plants // J. of Interferon Res.— 1992.— V.12, №4.— P. 449–453.
9. Шевчук В.К, Довгань С.В., Діденко Л.Ф. та ін. Вірусний опік гречки // Каран-
тин і захист рослин.— 2008.— №11.— С. 13–15.
10. Шелудько Ю. В., Герасименко И. М., Щербак и др. (2009) Перспективы
для применения в ветеринарной медицине трансгенных растений, синтезирующих
физиологически активный интерферон a2b человека. Ветеринарна медицина.
Збірник наукових праць / Ред. Стегній Б.Т.: Харків, ТОВ “НТМТ”.— 2009.— Т.92.—
С. 528–531.
11. Мандріка Т.Ю., Серденко О.Б., Діденко Л.Ф., и др. Характеристика
бацилоподібного вірусу плямистості аїру // Мікробіологічний журнал.— 2007.—
Т.69, №5.— С. 49–58.
12. Белоцкий С.М., Спивак Н.Я. Интерфероны: биологические и клинические
эффекты.— К.: Фитосоциоцентр, 2006.— 288 с.
13. Sembdner G. The biochemistry and the physiological and molecular actions
of jasmonates // Ann. Rev. of Plant Physiol. and Plant Mol. Biol.— 1993.— V.44.—
P. 569–589.
14. Sela I., Grafi G., Sher N., Edelbaum O., Yagev H., Gerassi E. Resistance Systems
Related to the N Gene and their Comparison with Interferon. In: Plant Resistance to
Virus. Ciba Foundation Symposium, 1987.— P. 109–112.
Резюме
Было проведено исследование динамики репродукции минус РНК-геномного
фиторабдовируса — вируса ожога гречихи в растениях табака, экспрессирующих
ген интерферона альфа 2b человека. Показано, что по сравнению с нетрансгенным
контролем трансгенные растения табака не проявляют устойчивости к ВОГ.
Було проведено дослідження динаміки репродукції мінус РНК-геномного
фіторабдовірусу — вірусу опіку гречки (ВОГ) у рослинах тютюну, які експресують
ген інтерферону альфа 2b людини. Показано, що в порівнянні із нетрансгенним
контролем, трансгенні рослини тютюну не проявляють стійкості до ВОГ.
Dynamics of RNA-minus genome phytorhabdovirus (burn of buckwheat virus (BBV)
reproduction in tobacco plants expressing human alpha 2b interferon was studied. It was
shown that transgenic as well as non-transgenic plants do not demonstrate BBV resistance.
341
СУПРУН С.М., ДОНЧЕНКО Г.В., ПАРХОМЕНКО Ю.М., *КУРЧЕНКО И.Н.,
*ХАРКЕВИЧ Е.С., *НОГИНА Т.М., КУЧМЕРОВСКАЯ Т.М.
Институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины, Украина, 01601, Киев,
ул. Леонтовича, 9, е-mail:sst @biochem.kiev.ua
*Институт микробиологии и вирусологии им. Д.К. Заболотного НАНУ, Украина,
Киев, ул. Заболотного, 154.
БИОТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ КОФЕРМЕНТА А (COA)
Кофермент А (CoA) является одним из важнейших коферментов осу-
ществляющих перенос ацильных групп чрезвычайно необходимых в процес-
сах клеточного метаболизме, особенно в биосинтезе жирных кислот. Учиты-
вая его важную роль в обмене веществ, внимание исследователей привлекает
CoA, в качестве потенциального препарата, который может обладать корре-
гирующими при нарушениях клеточного метаболизма, вызванных различ-
ными заболеваниями (ишемическая болезнь сердца, острые нарушения
мозгового кровообращения, атеросклероз, сахарный диабет и т.п.). Экс-
периментальными исследованиями было показано, что дисульфид СоА и
его предшественники могут использоваться в лечебных целях [1]. Однако,
получение кофермента А с применением химического синтеза в промыш-
ленном масштабе достаточно сложный и не эффективный процес. Не ис-
ключено, что хорошей альтернативой ему может быть биотехнологический
способ получения препарата, который является более рентабельным и ши-
роко используется у высоко развитых странах. При этом наиболее эффек-
тивными с точки зрения биотехнологии получения CoA оказались штаммы
Brevibacterium обладающие высокой биосинтетической активностью, которые
начали широко использовать [2, 3]. В качестве потенциального источика CoA
в последнии годы большое внимание уделяется грибам, которые багаты на
разнообразные биологически активные вещества, многие из которых нашли
применения для получения лекарственных средств. [4–6]. В связи с эти поиск
новых продуцентов сверхпродуцентов СоА, пантотеновой кислоты (ПАК)
и других биологически-активных соединений остается актуальным. Преиму-
щество грибов состоит в том, что они нетребовательны к субстрату для
культивирования, устойчивы к изменениям природных условий и достаточно
технологичны. Цель данного исследования — разработка биотехнологии
получения CoA на основе селекционированных штаммов-продуцентов.
Материалы и методы
Нами был проведен скрининг штаммов-продуцентов CoA и его пред-
шественников среди различных таксономических групп микромицетов и
бактерий коллекции культур микроорганизмов Института микробиологии
и вирусорлогии. Для определения СоА микромицеты выращивали глубин-
ным способом на синтетической среде Чапека на качалках при 240 об/мин
в течение 3-х суток, в то время как бактерии выращивали в течении двух
суток на среде Хоттингера с 1,5% пептона и 1% дрожжевого экстракта. Се-
лекцию штамма продуцента Corynebacterium ammoniagenes B-6 — прово-
|