Получение и характеристика поликлональных моноспецифических антител против низкомолекулярного, низкоиммуногенного и высококатионного пептида hBD-2
В роботе продемонстрировано результаты получения специфических поликлональных антител против человеческого β-дефенсина-2. Показано роботу полученных анти-hBD-2 антител в твердофазном иммуноферментном анализе, иммунопреципитации и иммуноблот-анализе....
Збережено в:
| Дата: | 2010 |
|---|---|
| Автори: | , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
2010
|
| Назва видання: | Фактори експериментальної еволюції організмів |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/177996 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Получение и характеристика поликлональных моноспецифических антител против низкомолекулярного, низкоиммуногенного и высококатионного пептида hBD-2 / С.Б. Зеленый, В.И. Бобык, С.Я. Мандрык, Л.Л. Сидорик, П.В. Погребной // Фактори експериментальної еволюції організмів: Зб. наук. пр. — 2010. — Т. 9. — С. 411-416. — Бібліогр.: 6 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-177996 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-1779962025-02-09T14:08:33Z Получение и характеристика поликлональных моноспецифических антител против низкомолекулярного, низкоиммуногенного и высококатионного пептида hBD-2 Зеленый, С.Б. Бобык, В.И. Мандрык, С.Я. Сидорик, Л.Л. Погребной, П.В. Генетика людини та медична генетика В роботе продемонстрировано результаты получения специфических поликлональных антител против человеческого β-дефенсина-2. Показано роботу полученных анти-hBD-2 антител в твердофазном иммуноферментном анализе, иммунопреципитации и иммуноблот-анализе. В роботі продемонстровано результати отримання специфічних поліклональних антитіл проти людського β-дефенсину-2. Показано роботу отриманих антиhBD-2 антитіл в твердофазному імуноферментному аналізі, імунопреципітації та імуноблот-аналізі. The results of the purification of high affinity polyclonal antibodies against human β-defensin-2 are represented in the work. Purified anti-hBD-2 antibodies were examined in ELISA, immunoprecipitation as well as in western blot analisis. 2010 Article Получение и характеристика поликлональных моноспецифических антител против низкомолекулярного, низкоиммуногенного и высококатионного пептида hBD-2 / С.Б. Зеленый, В.И. Бобык, С.Я. Мандрык, Л.Л. Сидорик, П.В. Погребной // Фактори експериментальної еволюції організмів: Зб. наук. пр. — 2010. — Т. 9. — С. 411-416. — Бібліогр.: 6 назв. — рос. 2219-3782 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/177996 ru Фактори експериментальної еволюції організмів application/pdf Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Генетика людини та медична генетика Генетика людини та медична генетика |
| spellingShingle |
Генетика людини та медична генетика Генетика людини та медична генетика Зеленый, С.Б. Бобык, В.И. Мандрык, С.Я. Сидорик, Л.Л. Погребной, П.В. Получение и характеристика поликлональных моноспецифических антител против низкомолекулярного, низкоиммуногенного и высококатионного пептида hBD-2 Фактори експериментальної еволюції організмів |
| description |
В роботе продемонстрировано результаты получения специфических поликлональных антител против человеческого β-дефенсина-2. Показано роботу полученных
анти-hBD-2 антител в твердофазном иммуноферментном анализе, иммунопреципитации и иммуноблот-анализе. |
| format |
Article |
| author |
Зеленый, С.Б. Бобык, В.И. Мандрык, С.Я. Сидорик, Л.Л. Погребной, П.В. |
| author_facet |
Зеленый, С.Б. Бобык, В.И. Мандрык, С.Я. Сидорик, Л.Л. Погребной, П.В. |
| author_sort |
Зеленый, С.Б. |
| title |
Получение и характеристика поликлональных моноспецифических антител против низкомолекулярного, низкоиммуногенного и высококатионного пептида hBD-2 |
| title_short |
Получение и характеристика поликлональных моноспецифических антител против низкомолекулярного, низкоиммуногенного и высококатионного пептида hBD-2 |
| title_full |
Получение и характеристика поликлональных моноспецифических антител против низкомолекулярного, низкоиммуногенного и высококатионного пептида hBD-2 |
| title_fullStr |
Получение и характеристика поликлональных моноспецифических антител против низкомолекулярного, низкоиммуногенного и высококатионного пептида hBD-2 |
| title_full_unstemmed |
Получение и характеристика поликлональных моноспецифических антител против низкомолекулярного, низкоиммуногенного и высококатионного пептида hBD-2 |
| title_sort |
получение и характеристика поликлональных моноспецифических антител против низкомолекулярного, низкоиммуногенного и высококатионного пептида hbd-2 |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| publishDate |
2010 |
| topic_facet |
Генетика людини та медична генетика |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/177996 |
| citation_txt |
Получение и характеристика поликлональных
моноспецифических антител против
низкомолекулярного, низкоиммуногенного
и высококатионного пептида hBD-2 / С.Б. Зеленый, В.И. Бобык, С.Я. Мандрык, Л.Л. Сидорик, П.В. Погребной // Фактори експериментальної еволюції організмів: Зб. наук. пр. — 2010. — Т. 9. — С. 411-416. — Бібліогр.: 6 назв. — рос. |
| series |
Фактори експериментальної еволюції організмів |
| work_keys_str_mv |
AT zelenyjsb polučenieiharakteristikapoliklonalʹnyhmonospecifičeskihantitelprotivnizkomolekulârnogonizkoimmunogennogoivysokokationnogopeptidahbd2 AT bobykvi polučenieiharakteristikapoliklonalʹnyhmonospecifičeskihantitelprotivnizkomolekulârnogonizkoimmunogennogoivysokokationnogopeptidahbd2 AT mandryksâ polučenieiharakteristikapoliklonalʹnyhmonospecifičeskihantitelprotivnizkomolekulârnogonizkoimmunogennogoivysokokationnogopeptidahbd2 AT sidorikll polučenieiharakteristikapoliklonalʹnyhmonospecifičeskihantitelprotivnizkomolekulârnogonizkoimmunogennogoivysokokationnogopeptidahbd2 AT pogrebnojpv polučenieiharakteristikapoliklonalʹnyhmonospecifičeskihantitelprotivnizkomolekulârnogonizkoimmunogennogoivysokokationnogopeptidahbd2 |
| first_indexed |
2025-11-26T15:47:20Z |
| last_indexed |
2025-11-26T15:47:20Z |
| _version_ |
1849868464865411072 |
| fulltext |
411
3. Kralovics R., Passamonti F., Buser A.S., et al. A gain-of-function mutation of
JAK2 in myeloproliferative disorders // N. Engl J. Med 2005.— V.352, N17.— P. 1779–
1790.
4. Levine R.L., Wadleigh M., Cools J., et al. Activating mutation in the tyrosine
kinase JAK2 in polycythemia vera, essential thrombocythemia, and myeloid metaplasia
with myelofibrosis // Cancer Cell 2005.— V.7, N4.— P. 387–397.
5. Zhao R., Xing S., Li Z., et al. Identification of an acquired JAK2 mutation in
polycythemia vera // J. Biol Chem. 2005.— V.280, N24.— P. 22788–22792.
6. Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid
guanidinum thiocyanate-phenol-chloroform extraction // Analyt. Biochem.— 1987.—
V.162.— P. 156–159.
7.Дибков М.В., Гартовська І.Р., Телегеєв Г.Д., Малюта С.С. Розробка тест-
системи для виявлення мутації V617F гена jak2 у хворих на хронічні мієлопролі-
феративні захворювання // Наука та інновації.— 2009.— Т.5, №6.— С. 59–63.
8. Телегеєв Г.Д., Дибков М.В., Божко М.В. Демиденко Д.В., Малюта С.С., Тре-
тяк Н.М., Бондар М.В. Моніторинг хронічного мієлолейкозу за допомогою моле-
кулярно-біологічних методів (методичні рекомендації) // Республіканський центр
науково-медичної інформації., Київ, 1997, 20 стор.
Резюме
Мутація V617F гена jak2 є важливим діагностичним критерієм при хронічних
мієлопроліферативних захворюваннях. Запропоновано методику для її виявлення
за допомогою T-ARMS ПЛР.
Мутация V617F гена jak2 является важным диагностическим критерием при
диагностике хронических миелопролиферативных заболеваний. Предложена
методика ее выявления с помощью T-ARMS ПЦР.
V617F mutation jak2 gene is an important diagnostic criterion for the diagnostics
of chronic myeloproliferative disorders. The method of detection using T-ARMS PCR
was proposed.
ЗЕЛЕНЫЙ С.Б.1, БОБЫК В.И., МАНДРЫК С.Я., СИДОРИК Л.Л.,
ПОГРЕБНОЙ П.В.
1 ИЕПОР им. Р.Е. Кавецкого НАН Украины,
Украина, 03022, Киев, ул. Васильковская, 45, e-mail: now15green@yahoo.com
ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ПОЛИКЛОНАЛЬНЫХ
МОНОСПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ ПРОТИВ
НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНОГО, НИЗКОИММУНОГЕННОГО
И ВЫСОКОКАТИОННОГО ПЕПТИДА HBD-2
Антимикробные пептиды (дефенсины) являются неотъемлемой частью
так называемого неадаптивного, врождённого иммунитета. Все они дейст-
вуют на широкий спектр микроорганизмов, грибков и вирусов, имеющих
оболочку. Кроме того, исследования последних лет, показали, что что опухолям
412
эпителия ротовой полости, вульвы и шейки матки, толстой кишки человека
свойственна повышенная экспрессия дефенсинов [1]. Также продемонстри-
ровано наличие дефенсинов в сыворотке крови онкологических больных.
Было установлено, что уровень hBD-1 в сыворотке крови больных раком
легких можно рассматривать как вспомогательный маркер для диагности-
рования этого заболевания [1]. Все эти данные требуют более тщательного
изучения, и в связи с этим актуальной становится задача детектирования
дефенсинов как на уровне экспрессии генов, так и их количественного
определения в биологическом материале. Так, для изучения возможной роли
дефенсинов в регуляции врожденного и приобретенного иммунитета, их
участия в механизмах карцерогенеза перспективными и высокоинформа-
тивными является иммунобиологические подходы. Важным инструментом
для изучения экспрессии, клеточной локализации поиска белков-партнеров
и клеточных мишеней при онкопатологиях являются высокоафинные, спе-
цифические антитела доступ к которым ограничен.
Одной из проблем при получении антител к малым гидрофобным пеп-
тидам, с которой сталкиваются исследователи, есть их низкая иммуно-
генность, которая обуславливается как трехмерной структурой молекулы,
так и свойствами самих пептидов. К таким низкомолекулярным пептидам
относятся, в частности, дефенсины млекопитающих.
В данной работе рассматривается возможность получения высоко-
афинных поликлональных моноспецифических антител, используя метод
аутоконьюгации дефенсина hBD-2 с целью увеличения иммуногенности
данного пептида, а также адаптация методов очистки антител.
Материалы и методы
Рекомбинантный hBD-2 получали путем наращивания и индукции
бактериальной культуры E.coli (штамм XL-Gold), трансформированной
плазмидной ДНК (pGEX-2T) с клонированным кДНК геном hBD-2. Выде-
ление и очистку hBD-2 проводили как описано в [2], за исключением стадии
очистки с использованием ионообменной хроматографии с Mono-SP column.
Эта стадия была заменена очисткой с использованием Sep-Pak C18 cartridge
с носителем сефадекс (Waters, USA), водными растворами ацетонитрила
(10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 80%, 100%) с pH, который не превышает 4, а так-
же бидистилированной водой с pH 3. Подкисление растворов проводили,
используя трифторуксусную кислоту (ТФУ). Белковые фракции после про-
теолиза тромбином подкисляли TФУ до pH 3 и наносили на Sep-Pak C18.
Используя растворы ацетонитрила снимали с носителя фракции содержащие
hBD-2 (40% раствор), GST+hBD-2 (50%, 60% растворы), GST (80% раствор).
Качество очистки hBD-2 контролировали с помощью SDS-электрофореза в
градиенте ПААГ (7–22%) по методу Леммли [5]. Концентрацию белка опре-
диляли по методу Бредфорд [3].
Аутоконьюгирование hBD-2 проходило в две стадии (с применением
диметилацетамида и малиемидного эфира), которые состояли из активации
пептидов и непосредственно аутоконьюгирования.
413
Иммунизацию лабораторных животных (кролики) проводили ауто-
коньюгированным hBD-2, используя разработанную ранее нами схему [2].
Антисыворотку получали через 7 дней после последней иммунизации. Выса-
ливание иммуноглобулинов из сыворотки проводили насыщенным раство-
ром сульфата аммония до 50% (v/v).
Хроматографическая очистка иммуноглобулинов на колонке с DEAE-
Tyopearl. В работе исползовали носитель DEAE-Tyopearl-650M фирмы
ToyoSoda (Япония). Носитель уравновешивали Na-фосфатным буфером,
pH 7,2. После высаливания сульфатом аммония осадок иммуноглобулинов
собирали центрифугированием (10 000 об/мин, 10–15 минут при +4 °C)
и растворяли в минимальном объеме охлажденного раствора PBS pH 7,3.
Диализ проводили против бидистилированной воды в течении 20 минут, потом
против охлажденного раствора PBS pH 7,3 в течении 18 часов при +4 °C.
После диализа иммуноглобулины наносили на колонку с DEAE-Tyopearl. Ко-
лонку 3 промывали объемами раствора PBS буфера, pH 7,3. Белковые фракции,
которые не связались с носителем, собирали отдельно для дальнейшей очистки.
Очистка IgG на ProteinG-sepharose. В работе использовали носитель
Protein G-Sepharose фирмы Pharmacia (Швеция). Колонку уравновешивали
буфером PBS, pH 7,3. После нанесения предварительно очищенных на
DEAE-Tyopearl иммуноглобулинов на колонку с ProteinG-sepharose, антитела
инкубировали с носителем 2–3 часа при комнатной температуре, промывали
колонку 10 объемами буфером PBS pH 7,3 для удаления не связавшегося
белка и проводили элюцию 0,2 М глицином pH 2,5 с последующей нейтра-
лизацией элюата 1 М раствором Tris-HCl, pH 11,0. Чистоту полученных IgG
проверяли методом SDS-электрофореза в 15% ПААГ. Фракции, содержащие
максимальное количество белка объединяли и диализовали против буфера
PBS, pH 7,3, при +4 °С на протяжении 18 часов. Конечная концентрация IgG
составляла в среднем 1,5–1,6 мг/мл.
Твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA).Титр антител
против белка hBD-2 в сыворотке на всех этапах очистки определяли с по-
мощью метода твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) с модифи-
кациями. Учитывая высокую гидрофобность антигенов, в работе использо-
вали микропланшеты фирмы Nunc (Дания) с маркировкой Maxisorb. Им-
мобилизацию дефенсина проводили на протяжении 18 часов при +4 °C в PBS
буфере, pH 7,3. Конечная концентрация антигенов вносимых в каждую лунку
составляла 1 мкг/мл. Все последующие операции проводили с использова-
нием буфера PBS pH 7,3 с 0,1% Tween-20 (PBS-T). Антисыворотку инкуби-
ровали при комнатной температуре на протяжении двух часов, а полученные
антитела в течении часа в тех же условиях.
Иммуноблот-анализ (Western blot analisis). Определение специфично-
сти полученных антител к hBD-2 клеточных лизатах проводили с помощью
иммуноблотинга по известной методике [4] с модификациями. В иммунобло-
тинге для контроля специфичности антител против очищеного hBD-2 ис-
пользовали лизат клеток млекопитающих Tirex c добавлением глютатион-
6-трансферазы (GST), химерного белка GST-hBD-2 и hBD-2.
414
Иммунопреципитация. Для проведения иммунопреципитации исполь-
зовали Protein A Sepharose фирмы Pharmacia (Швеция). Все процедуры
проводили по стандартной методике с небольшими модификациями.
Продукты иммунопреципитации после проведения градиентного SDS-
электрофореза в ПААГ, визуализировали прокраской геля серебром и пара-
лельно постановкой иммуноблотинга.
Результаты и обсуждение
Исходя из того, что данный малый гидрофобный пептид обладает сла-
быми иммуногенными свойствами, было решено повысить иммуногенность
hBD-2, используя метод аутоконьюгации с применением диметилацетамида
и малиемидного эфира. В результате аутоконьюгирования были получены
молекулы пептидов, состоящие из ди-, тетра- и мономеров. Качество конью-
гирования hBD-2 и mBD-2 проверяли с помощью градиентного SDS-электро-
фореза в ПААГ, а для hBD-2 Western blot анализом с использование получен-
ных ранее моноклональных антител против hBD-2 [6]. Результаты проверки
аутоконьюгирования в иммуноблот-анализе с использованием полученных
ранее моноклональных антител против hBD-2 представлены на рис. 1, А.
При анализе рис. 1, А можна зделать вывод, что в результате аутоконьюгирова-
ния образуются тетрамеры дефенсина с молекулярной массой около 16 кДа.
В ходе получения поликлональных антител было выяснено, что данные
антитела имели слабую афинность к человеческому сывороточному альбуми-
ну. Для определения возможности возникновения данного “феномена” был
проведен компьютерный анализ аминокислотных последовательностей
человеческого альбумина и hBD-2, используя программу определения
гомологии, предоставленную на веб-сервере LALIGN (http:// www.ch.embnet.
org/software/LALING_form.html). Было найдено три сходные последователь-
1 2 1 2 3 4 1 2 3 4
А Б В
16 кДа
4 кДа
29 кДа
4 кДа
4 кДа
Рис. 1. А. Иммуноблотинг с использованием полученых поликлональних анти-hBD-2
антител. Дорожки: 1 — очищенный белок hBD-2; 2 — аутоконьюгированный белок
hBD-2. Б. Иммуноблотинг с использованием полученых поликлональних анти-hBD-2
антител. Блокирование сайтов неспецифической сорбции в растворе сухого молока.
Дорожки: 1 — лизат клеток Tirex; 2 — лизат клеток Tirex+GST+HSA (человеческий
сывороточный альбумин); 3 — лизат клеток Tirex+GST-hBD-2; 4 — лизат клеток
Tirex+hBD-2. В. Иммуноблотинг с использованием полученых поликлональних
анти-hBD-2 антител. Блокирование сайтов неспецифической сорбции сывороткой
крупного рогатого скота. Дорожки: 1 — лизат клеток Tirex+очищенный белок hBD-2;
2 — лизат клеток Tirex+GST-hBD-2; 3 — лизат клеток Tirex+GST+HSA; 4 — лизат
клеток Tirex
415
ности длинной 11, 6 и 4 аминокислотных остатка с соответствующими
совпадениями 63,6%, 66,7% и 100%. Общая последовательность размером
11 аминокислотных остатков вполне может являться антигенной детерми-
нантой, причем эта последовательность находится на С-конце hBD-2.
И, возможно, что она в первую очередь подвергается воздействию протеаз
при иммунизации лабораторных животных.
Для увеличения афинности антител против hBD-2 и mBD-2 было необ-
ходимо очистить антитела от фракции, распознающей и человеческий сыво-
роточный альбумин и hBD-2 из общего пула поликлональных антител. Для
этого синтезировали афинную колонку Br-CN sepharose 4B с пришитым на
нее в качестве лиганда альбумином человека (ICN). Пул антител пропускался
через колонку трижды, с промежуточной инкубацией 30 минут. Не связав-
шаяся с альбумином фракция антител была собрана и проверена на афинность
к hBD-2 и альбумину человека. Полученные антитела не выявили альбумин
человека ни в ELISA, ни в Western blot анализе. При проверке в методе ELISA
минимальная рабочая концентрация очищенных поликлональных анти-hBD-2
антител была 0,35 мкг/мл (результаты не представлены).
Для выяснения возможности определения нативного hBD-2 в биологи-
ческих жидкостях с использованием полученных поликлональных антител
необходимо было проверить их работу в методе иммунопреципитации. В экс-
перименте использовались клеточные лизаты, как бактериальных культур,
продуцирующих рекомбинантный hBD-2, так и лизаты линии клеток A431,
индуцированные EGF, продуцирующие нативный hBD-2. Было продемонстри-
ровано, что очищенные поликлональные анти-hBD-2 антитела специфически
узнавали белок hBD-2 в лизатах клеток бактериальных культур, трансформи-
рованных вектором с кДНК геном hBD-2, так и лизатах линии клеток A431
(результаты не представлены).
Последним этапом проверки работы полученных поликлональных
антител был подбор условий и проведение иммуноблот-анализа. Результаты
иммуноблот-анализа представленны на рис. 1, Б и В. При использовании в
качестве агента для блокирования неспецифической сорбции раствора
сухого молока, очищенные анти-hBD-2 неспецифически узнавали не только
белок hBD-2, а также, химерный белок GST-hBD-2 и GST (рис. 1, Б). При
использовании в качестве агента для блокирования неспецифической сорб-
ции бычьей сыворотки, очищенные анти-hBD-2 специфически узнавали
только белок hBD-2 (рис. 1, В). При проверке в методе иммуноблот-анализа
минимальная рабочая концентрация очищенных поликлональных анти-hBD-2
антител была 1,75 мкг/мл. Таким образом, было оптимизировано условия
роботы очищенных антител в иммуноблот-анализе с использованием в ка-
честве блокирюющего агента сыворотку БРС.
Выводы
В роботе представлены результаты получения и характеристики поли-
клональных кроличьих антител против низкомолекулярного, низкоиммуно-
генного и высококатионного человеческого пептида hBD-2. Разработано метод
повышения иммуногенных свойств белка hBD-2 путем аутоконьюгирования.
416
Продемонстрировано роботу полученных специфических поликлональных
антител в твердофазном иммуноферментном анализе, иммунопреципитации
и иммуноблот-анализе.
Литература
1. Dynamic alteration of human b-defensin 2 localization from cytoplasm to
intercellular space in psoriatic skin / Wook-Kang Huh, Takashi Oono, Yoshinori Shirafuji
[et al.] // J. Mol Med.— 2002.— Vol.80.— P. 678–684.
2. Получение рекомбинантного шаперона GroEL и его иммунологическая
кросс-реактивность с Hsp60 / Л.Н. Кaпустян, Р.Г. Киямова, В.С. Гришкова [и др.] /
/ Биополимеры и клетка.— 2006.— Т.2, №22.— С. 117–120.
3. Bradford M. M. A rаpid and sensitive method for quantitation of microgram
quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding / Marian M. Bradford
// Analytical Biochemistry.— 1976.— Vol.86.— P. 193–200.
4. Idiopathic dilated cardyomyopathy in the young: Clinical profile and natural
history / Taliercio C.P., Seward J.B., Driscoll D.J. [et al.] // JACC.— 1985.— Vol.6.—
P. 1120–1126.
5. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the
bacteriophage T4 / Ulrich K. Laemmli // Nature.— 1970.— 227, №52.— P. 680–685.
6. P.V. Pogrebnoy et al. Experemental Onkology, March 2003, 25, p. 36–39.
Резюме
В роботе продемонстрировано результаты получения специфических поликло-
нальных антител против человеческого β-дефенсина-2. Показано роботу полученных
анти-hBD-2 антител в твердофазном иммуноферментном анализе, иммунопреци-
питации и иммуноблот-анализе.
В роботі продемонстровано результати отримання специфічних поліклональ-
них антитіл проти людського β-дефенсину-2. Показано роботу отриманих анти-
hBD-2 антитіл в твердофазному імуноферментному аналізі, імунопреципітації та
імуноблот-аналізі.
The results of the purification of high affinity polyclonal antibodies against human
β-defensin-2 are represented in the work. Purified anti-hBD-2 antibodies were examined
in ELISA, immunoprecipitation as well as in western blot analisis.
1ЗУЕВА М.И., 2АТРАМЕНТОВА Л.А.
1ГУ “Институт дерматологии и венерологии АМН Украины” Украина, 61057,
Харьков, ул. Чернышевская, 7/9, e-mail: mahaqq@yandex.ru
2Харьковский национальный университет имени В.Н. Каразина,
Украина, 61077, Харьков, пл. Свободы, 4, e-mail: wshkoda23@rambler.ru
ПОЛИМОРФИЗМ 1258G/A ГЕНА SPІNK-5 ПРИ ХРОНИЧЕСКОЙ
КРАСНОЙ ВОЛЧАНКЕ
Хроническая красная волчанка — заболевание, связанное с аутоимун-
ными патологиями. Для него характерно поражение кожи и соединительной
ткани. О роли генетических факторов в развитии этого заболевания свиде-
|