Биотехнологии хвойных in vitro: проблемы и перспективы
Инициация соматического эмбриогенеза у хвойных видов – лиственницы сибирской (Larix sibirica Ledeb.) и сосны сибирской (Pinus sibirica Du Tour) проводилась с использованием зиготических зародышей на разных стадиях их развития и сегментов вегетативных побегов, андроклинии из микроспор и недозрелых...
Saved in:
| Published in: | Фактори експериментальної еволюції організмів |
|---|---|
| Date: | 2008 |
| Main Authors: | , , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
2008
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/178263 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Биотехнологии хвойных in vitro: проблемы и перспективы / И.Н. Третьякова, А.С. Иваницкая, А.В. Барсукова, М.В. Ижболдина, Н.Е. Носкова // Фактори експериментальної еволюції організмів: Зб. наук. пр. — 2008. — Т. 5. — С. 267-271. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859757607310327808 |
|---|---|
| author | Третьякова, И.Н. Иваницкая, А.С. Барсукова, А.В. Ижболдина, М.В. Носкова, Н.Е. |
| author_facet | Третьякова, И.Н. Иваницкая, А.С. Барсукова, А.В. Ижболдина, М.В. Носкова, Н.Е. |
| citation_txt | Биотехнологии хвойных in vitro: проблемы и перспективы / И.Н. Третьякова, А.С. Иваницкая, А.В. Барсукова, М.В. Ижболдина, Н.Е. Носкова // Фактори експериментальної еволюції організмів: Зб. наук. пр. — 2008. — Т. 5. — С. 267-271. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Фактори експериментальної еволюції організмів |
| description | Инициация соматического эмбриогенеза у хвойных видов – лиственницы
сибирской (Larix sibirica Ledeb.) и сосны сибирской (Pinus sibirica Du Tour)
проводилась с использованием зиготических зародышей на разных стадиях их развития
и сегментов вегетативных побегов, андроклинии из микроспор и недозрелых мужских
гаметофитов. Культивирование велось на среде MS и ½ MS, ½ LV и MSG, DCR и K99 с
гормонами 2,4-Д, 6-БАП, ИМК и АБК в разных концентрациях. Образование
морфогенного и андрогенного каллусов требует гормональной регуляции. Успешность
соматического эмбриогенеза и андроклинии у хвойных видов связана с генотипом
дерева и зависит от стадии развития эксплантов.
Induction of somatic embryogenesis in Siberian coniferous species - Siberian larch
(Larix sibirica Ledeb.) and Siberian pine (Pinus sibirica Du Tour) has been conducted from
zygotic embryos on different stages and segments of vegetative shoots, androgenesis in vitro
from microspores and immature male gametophytes. Culturing was made on MS, ½ MS, ½
LV, MSG, DCR and K99 nutrition media with hormones 2,4-D, 6-BAP, IBA and ABK in
different concentrations. The formation of morphogenic and androgenic callus depend on
hormonal regulation .Success of somatic embryogenesis procedure of Siberian coniferous
species connected with tree genotype and depends on stage of explants development.
|
| first_indexed | 2025-12-02T01:33:49Z |
| format | Article |
| fulltext |
267
6. Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with
tobacco tissue cultures // Physiol. Plant., 1962. - V.15. - P.473-497.
Резюме
Изучали влияние возраста незрелых зародышей подсолнечника при их
доращивании in vitro на частоту образования и некоторые признаки полученных из
зародышей растений. Установлено, что зародыши всех возрастов формируют в
условиях in vitro растения, однако возраст зародышей влияет на такие признаки как
высота растений и длина вегетационного периода.
Вивчали вплив віку незрілих зародків соняшника при їхньому дорощуванні in
vitro на частоту утворення й деякі ознаки отриманих із зародків рослин. Встановлено,
що зародки кожного віку формують в умовах in vitro рослини, однак вік зародків
впливає на такі ознаки як висота рослин і довжина вегетаційного періоду.
Influence of age of sunflower immature embryos after in vitro germination and growth
on the frequency of adult plant production and some traits of the plants raised from the
embryos was studied. It was found that embryos of any age can produce plants under in vitro
conditions, however, the age of embryos was influencing such traits as plant height and
vegetative period length.
ТРЕТЬЯКОВА И.Н., ИВАНИЦКАЯ А.С., БАРСУКОВА А.В., ИЖБОЛДИНА М.В.,
НОСКОВА Н.Е.
Институт леса им. В.Н. Сукачева СО РАН
Россия,660036, Красноярск, Академгородок, e-mail: culture@ksc.krasn//ru
БИОТЕХНОЛОГИИ ХВОЙНЫХ IN VITRO: ПРОБЛЕМЫ И ПЕРСПЕКТИВЫ
На основании свойства тотипотентности клеток в биотехнологии
микроклонального размножения хвойных появились два новых направления –
соматический и микроспориальный эмбриогенез. Андроклиния in vitro – феномен
перехода спорогенных клеток с гаметофитного пути развития, на спорофитный путь в
культуре in vitro, представляет собой одно из перспективных направлений для
получения гаплоидных и дигаплоидных растений-регенерантов в современных
биотехнологических исследованиях. Это явление активно изучается у различных
представителей покрытосеменных растении [Круглова,Горбунова,1997,2001; Круглова,
Куксо,2006] то время как у голосеменных растений подобные исследования редки и
только начинаются [Иванова и др.2006]. Соматический эмбриогенез - это асексуальный
способ размножения, был открыт 20 лет назад у Picea abies [Hagman et al]. Полученные
эмбриогенные клеточные линии сохраняют компетентность длительный период
времени и позволяют получить генетически однородный селекционный материал
улучшенных форм. Несмотря на активные исследования в области соматического
эмбриогенеза у хвойных, регенерация растений данным способом все еще остается
проблематичной для большинства видов. Критическим моментом является процесс
созревания соматических зародышей, поскольку он влияет на жизнеспособность
полученных de novo зародышей, и особенно на их способность прорастать и
продуцировать нормальные растения-регенеранты.
Изучение соматического и микроспориального эмбриогенеза открывает большие
перспективы в познании процесса клеточной дифференцировки и реализации
морфогенетических программ в эмбриогенезе и раннем онтогенезе растительного
268
организма, а так же получении высокопродуктивных генетически однородных чистых
линий. Применение эффективных инновационных технологий, таких как соматический
эмбриогенез и андроклиния в сочетании с криоконсервацией и различными
селекционными программами даст возможность для получения, раннего отбора и
испытания ценных генотипов, их быстрого распространения.
Цель настоящих исследований заключалась в разработке биотехнологии
получения соматических зародышей и андроклинных эмбриоидов у хвойных видов
Сибири, проведении цитоэмбриологического анализа полученных структур и
определении гормонального контроля морфогенных и андроклинных каллусов.
Материалы и методы
Объектом настоящих исследований являлись деревья лиственницы сибирской
(Larix sibirica Ledeb.), произрастающие в естественных насаждениях на территории
Республики Хакасия и Тыва, в искусственных насаждениях г. Красноярска. В работе
использовали 32 генотипа лиственницы сибирской устойчивых и неустойчивых к
поражению лиственничной почковой галлицей. Деревья сосны сибирской (кедра
сибирского – Pinus sibirica Du Tour), произрастали в естественном древостое Западного
Саяна (Ермаковский и Шушенский районы Красноярского края) и на клоновых
прививочных плантациях Западно-Саянского Опытного лесного хозяйства. Для взятия
образцов использовалось 13 деревьев-доноров из естественного древостоя и 20 клонов,
опыленных пыльцой материнских деревьев из естественного древостоя и гетерозисного
дерева с однолетним развитием женских шишек..
В качестве эксплантов использовались мегагаметофиты, незрелые зиготические
зародыши, а также сегменты однолетних вегетативных побегов, микроспороциты у
лиственницы сибирской и сосны сибирской
Для инициации эмбриональной массы из зиготических зародышей
использовались базовые MS, ½ MS [Murashige ., Skoog 1962], ½ LV, MSG, DCR[Plant
cell….1995] и K99 [Deutch et.al.,2004] с добавлением мезоинозита, L-глютамина,
фитогормонов: 2,4-Д и 6-БАП, сахарозы , а также агара или Gelrite. Для пролиферации
эмбриональной массы концентрация 6-БАП, 2.4-D и сахарозы снижалась в 2-4 раза (у
разных видов по-разному). Эксперименты по индукции и пролиферации эмбриогенного
каллуса проводились в темноте при температуре 24 ± 1оС. Для перехода соматических
зародышей к созреванию экспланты культивировались на безгормональных базовых
средах c активированным углем в течение 1 нед. Для созревания соматических
зародышей в среды добавлялись мезоинозит , L-глютамин, 2,4-Д, АБК, сахароза, а
также агар. Культивирование проводилось на свету, при 16-ти часовом фотопериоде и
температуре 24 ± 1оС.
Для индукции каллуса из сегментов вегетативных побегов проводилась
обработка эксплантов низкой температурой (+2-3°С в течении трех дней) на средах
DCR [Malabadi, Van Staden 2005] и ½ MS, содержащих сахарозу, активированного угля
и Gelrite без гормонов. Для индукции каллусообразования проводился перенос
эксплантов на базовые среды с добавлением L-глютамина, гидролизата казеина,
мезоинозита, сахарозы и Gelrite, а также 2,4-Д, 6-БАП и индолилуксусной кислоты
(ИУК). Пролиферация каллусных культур проводилась на средах DCR и ½ MS,
содержащих сахарозу, 2,4-Д и БАП, а также Gelrite (в темноте, при температуре
24±1оС).
Для индукции андроклинных культур у лиственницы сибирской экспланты
вводились в культуру на протяжении зимы и ранней весны, и не подвергались
дополнительной предобработке, в то время как индукция андроклинии в весенний
период, когда температура воздуха поднималась выше нуля, требовала дополнительной
стрессовой обработки эксплантов низкими положительными температурами (2-3о С) в
течение 1-3 сут. Андроклинные культуры выращивались на твердых и жидких средах
MS, ½ MS, WPM и K99, различающиеся по составу макроэлементов, витаминов и
269
гормонов. В качестве желирующего компонента использовался агар, в концентрации 6
г/л.
Для проведения цитологического анализа использовались давленые препараты.
Окраска эксплантов проводилась сафранином с добавлением капли метиленового
синего. Просмотр микроскопических образцов осуществлялся на микроскопе МБИ-6.
Статистическая обработка данных проводилась по стандартным методикам при
помощи Microsoft Excel. Морфологические изменения фиксировались цифровой
фотокамерой Fudjifilm FinePix S7000 (Япония).
Иммуноферментный анализ растительных образцов проводился в лаборатории
физиологии растений Института биологии УНЦ РАН по методике, разработанной
проф. Г.Р. Кудояровой с соавторами [Кудоярова и др., 1986; Кудоярова,1990;]. Было
определено содержание индолилуксусной кислоты (ИУК), абсцизовой кислоты (АБК) и
цитокининов.
Результаты и обсуждение
Соматический эмбриогенез
Эксперименты по культивированию недоразвитых изолированных зародышей и
вегетативных побегов у лиственницы сибирской и кедра сибирского на
модифицированных средах MS, MSG, LV и DCR с различными концентрациями
гормонов и в разном их соотношении друг с другом позволили манипулировать
процессами морфогенеза клеток, образующими эмбриогенный каллус и соматические
зародыши. Под действием гормонов 6-БАП и 2,4-Д соматические клетки зиготических
зародышей на 5-10 сут. культивирования начинали интенсивно растягиваться (до 200-
300 мкм в длину), и превращаться в эмбриональные трубки. Эмбриональные трубки
подвергались неравному делению, в результате которого на одном из полюсов
формировались эмбриональные клетки диаметром 39-47 мкм. В течение следующих 5-7
сут. клетки инициалей активно делились и образовывали эмбриональные глобулы,
которые окружались эмбриональными трубками. Наблюдалось образование
эмбрионально-суспензорной массы. (ЭСМ). Перенос эксплантов через 1 мес. на среды с
пониженным содержанием цитокининов и сахарозы вызывал интенсивную
пролиферацию ЭСМ, в которой шел активный кливаж. Через 1 мес. культивирования
на этих средах возникали торпедообразные соматические зародыши. При
субкультивировании ЭСМ на базовых средах, содержащих АБК, соматические
зародыши приобретали биполярную структуру: на одном из полюсов формировались
примордии семядолей, на другом – зародышевый корешок и хорошо развитый
суспензор.
Формирование ЭСМ из сегментов вегетативных побегов у лиственницы
сибирской начиналось на 8-12-е сут. культивирования, после переноса эксплантов с
безгормональной среды, на которой они подвергались холодовой обработке, на
индукционную среду, содержащую 2,4-Д и 6-БАП. ЭСМ, полученная из сегментов
вегетативных побегов, представляла собой отдельные клеточные скопления. Через 20
сут. культивирования в ЭСМ были обнаружены зародышеподобные структуры.
Полученные эмбриоиды обнаруживали строение, характерное для зиготических и
соматических зародышей хвойных растений на стадии проэмбрио.
Определение эндогенных гормонов в эмбриогенном каллусе лиственницы
сибирской и кедра сибирского показало, что в них происходило резкое возрастание
уровня цитокининов (в 2 раза) по сравнению с исходными эксплантами. Содержание
ИУК в морфогенном каллусе кедра осталось без изменения, но увеличивалось
содержание АБК. В морфогенном каллусе лиственницы содержание ИУК снизилось
до 9.5 нг/г и увеличилось содержание АБК. Вероятно, компетентность клеток к
гормонам при образовании эмбриогенного каллуса у разных видов зависит от
эндогенного содержания гормонов в эксплантах. Были выявлены генотипы донорских
270
растений лиственницы сибирской и сосны сибирской, способные давать чистые
эмбриогенные линии и соматические зародыши.
Андроклинные культуры лиственницы сибирской
У взятых для микроклонирования микростробилов лиственницы сибирской в
мейотической стадии развития в течение всего осеннее-зимнего и ранневесеннего
периода происходило быстрое завершение мейоза в культуре in vitro (в течение
нескольких дней) и наблюдалось переключение развития с гаметофитного на
спорофитный путь.
При введении микростробилов в период микроспорогенеза (конец марта –
начало апреля) на среду MS с 0,2-0,5 мг/л 2,4-Д, через 1-2 сут. культивирования
наблюдался распад тетрад и происходило образование микроспор. В течение 7-10 сут.
культивирования проходил митоз, и микроспоры делились на две равные клетки, т.е.
становились на аномальный (спорофитный) путь развития. В течение 14-21 сут.
формировался андроклинный каллус, в котором шли активные клеточные деления –
происходило формирование эмбриоидов. При увеличении содержания 2,4-Д до 2-5 мг/л
образование андроклинного каллуса у лиственницы не происходило. Наблюдалось
формирование некротических очагов.
Иммуноферментный анализ микростробилов лиственницы сибирской, в которых
проходит процесс микроспорогенеза, показал, что в них содержаться цитокинины,
ауксины и абсцизовая кислота. Наибольшее количество в микростобилах лиственницы
содержится цитокининов, количество которых было одинаковым как у деревьев
пораженных лиственничной почковой галлицей, так и у здоровых деревьев (288 и 284
нг/г соответственно). Содержание ИУК в микростробилах значительно ниже (≈ в 10
раз). Однако содержание ауксинов в микростробилах пораженных галлицей деревьев
оказалось выше, чем у непораженных. Особого внимания заслуживают данные по
содержанию АБК, которые у пораженных и непораженных деревьев значительно
различаются. Микростробилы пораженных деревьев содержат в 2 раза больше этого
гормона (92 нг/г против 49,7 нг/г).
Вероятно, для успешного роста андроклинного каллуса и вызревания
эмбриоидов культуры лиственницы сибирской не нуждаются в увеличении
концентрации АБК и дополнении цитокининов. Ауксины требуются для роста
андроклинных каллусов в небольших количествах
Таким образом, у представителей сибирских видов хвойных путем подбора
состава питательных сред на тканевом и клеточном уровне были получены
морфогенные каллусы различного генетического и онтогенетического происхождения,
способные продуцировать эмбрионально-суспензорную массу, из которой
формировались соматические зародыши. Образование морфогенных и андроклинных
каллосов требует гормональной регуляции.
Выявлены генотипы донорских растений лиственницы сибирской и сосны
сибирской, способные давать чистые эмбриогенные линии и соматические зародыши.
Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ № 06-04-08040-офи_а, гранта
РФФИ-ККФН «Енисей» № 04-040-96810
Литература
1. Иванова А.Н., Третьякова И.Н., Вязовецкова А.С. Индукция андрогенных культур
у лиственницы сибирской // Онтогенез. – 2006. – Т. 37. № 1. – С. 32-42.
2. Круглова Н. Н., Горбунова В. Ю. Каллусогенез как путь морфогенеза в культуре
пыльников злаков // Успехи современной биологии. – 1997. – Вып. 1. Т . 117. – С.
83-94.
3. Круглова, . Горбунова Н.Н. Стресс как фактор индукции андроклинии у злаков.
Стресс-реакция in situ морфогенных спорогенных клеток пыльника // Успехи
современной биологии. – 2001. – Т. 121. - №4. – С. 378-387.
271
4. Круглова Н. Н., Куксо П.А. Стрессовая индукция андроклинии // Успехи
современной биологии. – 2006. – Т. 126. № 3. – С. 256-272.
5. Кудоярова .Г.Р.Иммуноферментный анализ регуляторов роста: применение в
физиологии растений и экологии / Уфа: БНЦ УрО АН СССР, 1990. 132 с.
6. Кудоярова Г.Р., Веселов С.Ю., Еркеев М.И. Иммуноферментное определение
содержания индолилуксусной кислоты в семенах кукурузы с использованием
меченых антител // Физиология растений, 1986. Т. 33. № 6. С. 1221-1227.
7. Deutsch F., Kumlehn J., Zeigenhagen B., Fladung M. Stable haploid poplar callus lines
from immature pollen culture / Physiologia plantarum. – 2004. – V. 120. – P. 613-622.
8. Hakman I., Fowke L.C., von Arnold S., Eriksson T. The development of somatic
embryogenesis in tissue cultures initiated from immature embryos of Picea abies
(Norway spruce). Plant Science. – 1985. – V. 38. – P. 53–59.
9. Malabadi R. B., Van Staden J. Somatic embryogenesis from vegetative shoot apices; of
mature trees of Pinus patula // Tree Physiology. – 2005. – V. 25. – P. 11-16.
10. Murashige T., Skoog F.A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco
tissue cultures // Physiol. Plant. – 1962. – V. 15. – №4. – P. 473-497.
11. Plant cell, tissue and organ culture: fundamental methods / Eds. O.L. Gamborg, G.C.
Phillips. – Berlin: Springer-Velag, 1995. – 358 p.
Резюме
Инициация соматического эмбриогенеза у хвойных видов – лиственницы
сибирской (Larix sibirica Ledeb.) и сосны сибирской (Pinus sibirica Du Tour)
проводилась с использованием зиготических зародышей на разных стадиях их развития
и сегментов вегетативных побегов, андроклинии из микроспор и недозрелых мужских
гаметофитов. Культивирование велось на среде MS и ½ MS, ½ LV и MSG, DCR и K99 с
гормонами 2,4-Д, 6-БАП, ИМК и АБК в разных концентрациях. Образование
морфогенного и андрогенного каллусов требует гормональной регуляции. Успешность
соматического эмбриогенеза и андроклинии у хвойных видов связана с генотипом
дерева и зависит от стадии развития эксплантов.
Induction of somatic embryogenesis in Siberian coniferous species - Siberian larch
(Larix sibirica Ledeb.) and Siberian pine (Pinus sibirica Du Tour) has been conducted from
zygotic embryos on different stages and segments of vegetative shoots, androgenesis in vitro
from microspores and immature male gametophytes. Culturing was made on MS, ½ MS, ½
LV, MSG, DCR and K99 nutrition media with hormones 2,4-D, 6-BAP, IBA and ABK in
different concentrations. The formation of morphogenic and androgenic callus depend on
hormonal regulation .Success of somatic embryogenesis procedure of Siberian coniferous
species connected with tree genotype and depends on stage of explants development.
ТРУХАНОВЕЦ Н. Л., МОЗГОВА Г. В.
Институт генетики и цитологии Национальной академии наук Беларуси
220072 Минск, ул. Академическая, 27, e-mail: N.Trukhanovets@igc.bas-net.by
УЛЬТРАСТУКТУРА КЛЕТОК МЕЗОФИЛЛА ЛИСТА АЛЬБИНОСНЫХ И
ЗЕЛЕНЫХ РАСТЕНИЙ, ПОЛУЧЕННЫХ В КУЛЬТУРЕ ПЫЛЬНИКОВ
ПШЕНИЦЫ
В ходе естественного развития микроспоры растений проходят несколько этапов
дифференцировки и превращаются в пыльцевые зерна. Однако при создании
определенных условий в культуре клеток и тканей in vitro они могут развиваться по
пути формирования гаплоидных зародышей. Такой андрогенетический путь развития
называется также пыльцевым эмбриогенезом. Индукция пыльцевого эмбриогенеза
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-178263 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 2219-3782 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-02T01:33:49Z |
| publishDate | 2008 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Третьякова, И.Н. Иваницкая, А.С. Барсукова, А.В. Ижболдина, М.В. Носкова, Н.Е. 2021-02-18T12:25:02Z 2021-02-18T12:25:02Z 2008 Биотехнологии хвойных in vitro: проблемы и перспективы / И.Н. Третьякова, А.С. Иваницкая, А.В. Барсукова, М.В. Ижболдина, Н.Е. Носкова // Фактори експериментальної еволюції організмів: Зб. наук. пр. — 2008. — Т. 5. — С. 267-271. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. 2219-3782 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/178263 Инициация соматического эмбриогенеза у хвойных видов – лиственницы сибирской (Larix sibirica Ledeb.) и сосны сибирской (Pinus sibirica Du Tour) проводилась с использованием зиготических зародышей на разных стадиях их развития и сегментов вегетативных побегов, андроклинии из микроспор и недозрелых мужских гаметофитов. Культивирование велось на среде MS и ½ MS, ½ LV и MSG, DCR и K99 с гормонами 2,4-Д, 6-БАП, ИМК и АБК в разных концентрациях. Образование морфогенного и андрогенного каллусов требует гормональной регуляции. Успешность соматического эмбриогенеза и андроклинии у хвойных видов связана с генотипом дерева и зависит от стадии развития эксплантов. Induction of somatic embryogenesis in Siberian coniferous species - Siberian larch (Larix sibirica Ledeb.) and Siberian pine (Pinus sibirica Du Tour) has been conducted from zygotic embryos on different stages and segments of vegetative shoots, androgenesis in vitro from microspores and immature male gametophytes. Culturing was made on MS, ½ MS, ½ LV, MSG, DCR and K99 nutrition media with hormones 2,4-D, 6-BAP, IBA and ABK in different concentrations. The formation of morphogenic and androgenic callus depend on hormonal regulation .Success of somatic embryogenesis procedure of Siberian coniferous species connected with tree genotype and depends on stage of explants development. Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ № 06-04-08040-офи_а, гранта РФФИ-ККФН «Енисей» № 04-040-96810. ru Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Фактори експериментальної еволюції організмів Технології in vitro: проблеми та перспективи Биотехнологии хвойных in vitro: проблемы и перспективы Article published earlier |
| spellingShingle | Биотехнологии хвойных in vitro: проблемы и перспективы Третьякова, И.Н. Иваницкая, А.С. Барсукова, А.В. Ижболдина, М.В. Носкова, Н.Е. Технології in vitro: проблеми та перспективи |
| title | Биотехнологии хвойных in vitro: проблемы и перспективы |
| title_full | Биотехнологии хвойных in vitro: проблемы и перспективы |
| title_fullStr | Биотехнологии хвойных in vitro: проблемы и перспективы |
| title_full_unstemmed | Биотехнологии хвойных in vitro: проблемы и перспективы |
| title_short | Биотехнологии хвойных in vitro: проблемы и перспективы |
| title_sort | биотехнологии хвойных in vitro: проблемы и перспективы |
| topic | Технології in vitro: проблеми та перспективи |
| topic_facet | Технології in vitro: проблеми та перспективи |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/178263 |
| work_keys_str_mv | AT tretʹâkovain biotehnologiihvoinyhinvitroproblemyiperspektivy AT ivanickaâas biotehnologiihvoinyhinvitroproblemyiperspektivy AT barsukovaav biotehnologiihvoinyhinvitroproblemyiperspektivy AT ižboldinamv biotehnologiihvoinyhinvitroproblemyiperspektivy AT noskovane biotehnologiihvoinyhinvitroproblemyiperspektivy |