Агробактеріальна трансформація in planta пшениці озимого сорту Подолянка та ярого сорту Bobwhite
Aims. Triticum aestivum L., being one of the world’s most important staple crops, remains a challenge for genetic transformation. This paper describes the application of in planta method to obtain transformants by treating cells of intact plants with argobacterium. Methods. Analysis of the plant mat...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Фактори експериментальної еволюції організмів |
|---|---|
| Дата: | 2014 |
| Автори: | , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Українська |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
2014
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/178264 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Агробактеріальна трансформація in planta пшениці озимого сорту Подолянка та ярого сорту Bobwhite / І.Р. Горбатюк, А.В. Бавол, Б.В. Моргун // Фактори експериментальної еволюції організмів: Зб. наук. пр. — 2014. — Т. 15. — С. 35-39. — Бібліогр.: 8 назв. — укр. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859479795588399104 |
|---|---|
| author | Горбатюк, І.Р. Бавол, А.В. Моргун, Б.В. |
| author_facet | Горбатюк, І.Р. Бавол, А.В. Моргун, Б.В. |
| citation_txt | Агробактеріальна трансформація in planta пшениці озимого сорту Подолянка та ярого сорту Bobwhite / І.Р. Горбатюк, А.В. Бавол, Б.В. Моргун // Фактори експериментальної еволюції організмів: Зб. наук. пр. — 2014. — Т. 15. — С. 35-39. — Бібліогр.: 8 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Фактори експериментальної еволюції організмів |
| description | Aims. Triticum aestivum L., being one of the world’s most important staple crops, remains a challenge for genetic transformation. This paper describes the application of in planta method to obtain transformants by treating cells of intact plants with argobacterium. Methods. Analysis of the plant material for the presence of nptII transgene was carried out using polymerase chain reaction (PCR). Results. Fresh agrobacterium containing vector p014 was transferred into spikes of wheat. There were 13 seeds (18.0%) collected of cv. Bobwhite out of 72 possible from 12 spikes and 293 seeds (46.4%) of cv. Podolyanka out of 620 possible from 24 spikes. Based on the results of PCR for the presence of nptII transgene there were no positive signals found for the cv. Bobwhite. On the other hand there were 4 clear positive samples detected for cv. Podolyanka indicating the presence of nptII sequence. Conclusions. Agrobacterium-mediated in planta transformation was conducted for winter cv. Podolyanka and spring cv. Bobwhite. The ambient temperature below 28°C during the next 18 hours after agrobacterium application was crucial. Tested probes of cv. Podolyanka (13.3%) were positive for the presence of transgene nptII.
Key words: wheat, transformation, nptII, agrobacterium, GFP.
|
| first_indexed | 2025-11-24T11:48:38Z |
| format | Article |
| fulltext |
35
4. Luzhetskyy A., Fedoryshyn M., Gromyko O., Ostash B., Rebets Y., Bechthold A., Fedorenko V. IncP plasmids are
most effective in mediating conjugation between Escherichia coli and Streptomyces // Genetica. – 2006. – N 42. –
P. 595–601.
5. Horbal L., Zaburannyy N., Ostash B., Shulga S., Fedorenko V. Manipulating the regulatory genes for teicoplanin
production in Actinoplanes teichomyceticus // World J. Microbiol. Biotechnol. – 2012. – N 28. – P. 2905–2100.
6. Wagner N., Osswald C., Biener R., Schwartz D. Comparative analysis oftranscriptional activities of heterologous
promoters in the rare actinomycete Actinoplanes friuliensis // J. Biotechnol. – 2009. – N 142. – P. 200–204.
7. Myronovskyi M., Welle E., Fedorenko V., Luzhetskyy A. в-Glucuronidase as a sensitive and versatile reporter in
actinomycetes // Appl. Environ. Microbiol. – 2011. – N 77. – P. 5370–5383.
8. Horbal L., Kobylyanskyy A., Yushchuk O., Zaburannyi N., Luzhetskyy A., Ostash B., Marinelli F., Fedorenko V.
Evaluation of heterologous promoters for genetic analysis of Actinoplanes teichomyceticus-Producer of teicoplanin,
drug of last defense // J. Biotechnol. – 2013. – N 168. – P. 367–372.
9. van Wezel P.G., McDowall J.K. The regulation of the secondary metabolism of Streptomyces: new links and
experimental advances // Nat. Prod. Rep. – 2011. – N 28. – P. 1311–1333.
HORBAL L.O. 1, YUSHCHUK O.S. 1, ZABURANNYI N. 1, KOBYLYANSKYY A.M. 2, OSTASH
B.O. 1, MARINELLI F. 2, LUZHETSKYY A.M. 3, FEDORENKO V.O. 1
1 Ivan Franko national university of Lviv,
Ukraine, 79005, Lviv, Hrushevskogo str., 4, e-mail: v_fedorenko@franko.lviv.ua
2 Department of Biotechnology and Life Sciences, University of Insubria,
Varese, Italy
3 Helmholtz-Institute for Pharmaceutical Research Saarland,
Germany, Saarbrucken
GENE ENGINEERING METHODS FOR THE CONSTRUCTION OF THE ACTINOPLANES
TEICHOMYCETICUS STRAINS WITH INCREASED LEVEL OF TEICOPLANIN PRODUCTION
Aims. Random mutagenesis and selection were extensively applied to teicoplanin producers, while the gene
engineering methods were not used, because of the paucity of genetic tools for A. teichomyceticus. Methods.
A set of microbiological, biochemical and genetic methods were used in the study. Results. We worked out
an effective method of transfer of integrative and replicative vectors in A. teichomyceticus by means of
conjugation. Successful adaptation of the gusA reporter for the use in this strain let us to estimate the strength
of different heterologous promoters that might be used for gene expressions in it. Several strains with in
average 30–40 times increased level of teicoplanin production in comparison to the wild type were obtained.
Conclusions. Based on the obtained results we proposed a new approach for the improvement of teicoplanin
production.
Key words: Actinoplanes, teicoplanin, conjugation, reporter system, overproducer.
УДК 577.21: 57.085.1:577.233.3:633.11
ГОРБАТЮК І.Р., БАВОЛ А.В., МОРГУН Б.В.
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України,
Україна, 03680, м. Київ, вул. Акад. Заболотного, 148, e-mail: molgen@icbge.org.ua
АГРОБАКТЕРІАЛЬНА ТРАНСФОРМАЦІЯ IN PLANTA ПШЕНИЦІ ОЗИМОГО СОРТУ
ПОДОЛЯНКА ТА ЯРОГО СОРТУ BOBWHITE
На даний час у молекулярній біології
рослин науковці значну увагу приділяють
розвитку методів трансформації, що дозволяє
запобігти довготривалим процедурам отримання
культури тканин. Останні досягнення у сфері
генетичної трансформації показали, що можливе
отримання трансгенних рослин без будь-яких
процедур in vitro. У 1998 р. Bechtold зі
співавторами [1] запропонували новий метод
трансформації, названий трансформація in
planta.
Однією із проблем трансформації in vitro,
яка пов’язана з регенерацією, є химерність
отриманих трансформантів і сомаклональна
мінливість. Для однодольних рослин
регенерація ускладнюється ще й низьким
морфогенетичним потенціалом, що у деяких
випадках не дозволяє отримати фертильні
36
рослини [2].
Технологія агробактеріальної
трансформації in planta дозволяє подолати
наведені вище труднощі під час отримання
трансгенних рослин шляхом трансформації
клітин інтактної рослини [3].
З огляду на зазначене вище, метою нашої
роботи було провести агробактеріальну
трансформацію пшениці озимого сорту
Подолянка [4] та ярого сорту іноземної селекції
Bobwhite в умовах in planta.
Матеріали і методи
Колоски рослин, які були вибрані для
трансформації in planta, у довжину становили
приблизно 6–7 см і ще не повністю вийшли з
прапорцевого листка [5, 6]. Проводили
кастрування, залишаючи по 12–14 колосочків.
Після закінчення на кожний колосок вдягався
індивідуальний ізолятор із пергаментного
паперу. Через 3 доби проводили інокуляцію
суспензією агробактерії. Однодобову
суспензійну культуру наносили на приймочки
маточок та проводили запилення після повного
висихання розчину.
У дослідженні використовувалася
генетична конструкція р014 в Agrobacterium
tumefaciens штамі АВІ (рис. 1). Бактерія
нарощувалася у рідкому живильному
середовищі Himedia М002 (аналог LB) з
відповідними антибіотиками (спектиноміцин
50 мг/л та канаміцин 100 мг/л) [7] на шейкері
протягом 16 годин. Бактеріальні клітини
осаджували центрифугуванням при 5000×g
10 хв. і ресуспендували у стерильній
дистильованій воді до оптичної щільності
OD600 = 1,0 [3, 5–7]. До суспензії бактерій
додавали 100 мкM acetosyringone [5, 6] та 0,05 %
Silvet L77, pH доводилося до 4,0 [2].
Отримане насіння, у випадку Bobwhite,
обробляли протруйником Максим Стар 025 FS
(Сінгента), пророщували на фільтрувальному
папері [7]. Проростки були висаджені у
вегетаційні посудини. У випадку озимого сорту
Подолянка насіння висаджувалося
безпосередньо у посудини з ґрунтом і
культивувалося у тепличних умовах.
Зелений матеріал аналізували
полімеразною ланцюговою реакцією (ПЛР) на
присутність трансгену nptII. Для цього
використовувалися праймери: форвардний – 5’-
CCT-GAA-TGA-ACT-CCA-GGA-CGA-GGC-A-
3’ та реверсний – 5’-GCT-CTA-GAT-CCA-GAG-
TCC-CGC-TCA-GAA-G-3’, очікуваний фрагмент
становив 647 п.н. [8].
Результати та обговорення
Кастрували та обробляли
агробактеріальною суспензією 12 колосків сорту
Bobwhite. З них нами отримано 13 насінин із 72
можливих. Середня зав’язуваність становила
18,0 % (рис. 2). Одержане насіння було
поміщене у чашки Петрі для проростання без
періоду спокою. Приблизно через 3 тижні
з’явилися проростків, які були перенесені у
вегетаційні посудини об’ємом 0,65 л.
Після того, як рослини вкоренилися,
частину одного з листків зрізали для виділення
загальної ДНК та ПЛР аналізу.
Паралельно проводилася робота з озимим
сортом Подолянка, наданим Інститутом
фізіології рослин і генетики НАН України.
Загалом було кастровано 24 колоски, проведено
обробку агробактерією і запилено власним
пилком відповідно до зазначеної методики.
Після завершення вегетаційного періоду
отримано 293 насінини з 620 можливих. За
нашими спостереженнями середня
зав’язуваність насіння складала 46,4 % (табл.).
Отримане насіння відзначалося
виповненістю і задовільним зовнішнім виглядом
(рис. 3).
Зерна Т0 висаджувалися у вегетаційні
посудини по 2 зернини, і культивувались в
умовах теплиці за температури 22 °С і 16-
годинного фотоперіоду. Після того, як рослини
досягли фази двох листків, частину одного з них
зрізали для проведення ПЛР-аналізу.
Рис. 1. Схематичне зображення Т-ДНК генетичної конструкції р014. Показано кодуючі
послідовності генів неоміцин фосфотрансферази (nptII) та зеленого флуоресцентного білку (GFP),
підсилений промотор вірусу мозаїки цвітної капусти (P35e), термінатори нопалінсинтази (Tnos) і
білку теплового шоку (Thsp), плечі Т-ДНК (RB, LB)
37
Рис. 2. Зав’язуваність насіння у досліджуваних сортів
Таблиця. Зведені дані мінімальної та максимальної кількості очікуваного і отриманого насіння,
відсоток зав’язуваності
Кількість насінин
всього
отримано
максимально
можлива
Зав’язуваність насіння, %
293 620
min 1 18 3,6
max 23 30 88,5
Середнє значення % зав’язуваності 46,4
Середня довжина колоса, см 5,9
Рис. 3. Типовий колосок та насіння, отримане після обробки in planta агробактеріальною
суспензією
За результатами ПЛР на присутність
трансгену nptII із 12-ти протестованих проб
сорту Bobwhite позитивних сигналів не
виявлено.
Із 30 проб сорту Подолянка, тільки у
чотирьох (48A, 51A, 56A, 57B) виявлено
позитивний сигнал присутності nptII трансгену
(рис. 4).
38
Рис. 4. Електрофореграма проб озимого сорту пшениці Подолянка на присутність послідовності
трансгену nptII. Доріжки 1-5 – досліджувані проби 57B, 62B, 56A, 48A, 51A відповідно, 6 –
позитивний контроль, N. tabacum трансформований конструкцією p014, 7 – нетрансформована
пшениця сорту Подолянка у якості негативного контролю, 8 – негативний контроль (ТЕ буфер), М –
маркер молекулярної маси DNA Ladder Mix
Слід зазначити, що температура
навколишнього середовища може мати
вирішальне значення на перебіг процесу
трансформації і суттєво впливати на його
ефективність. Не завжди можна ефективно
контролювати цей параметр. Нами було
помічено, що під час обробки колосків пшениці
сорту Подолянка температура навколишнього
середовища становила 17–18 °С, а в процесі
обробки колосків пшениці ярого сорту іноземної
селекції Bobwhite – 22–25 °С.
Таким чином, було проведено
агробактеріальну трансформацію in planta
озимого сорту Подолянка та ярого Bobwhite.
Для ефективного перебігу трансформації та
забезпечення життєдіяльності агробактерій
важливо, щоб температура навколишнього
середовища була нижчою 28 °С протягом
наступних 18 годин. У випадку сорту Подолянка
було зібрано 293 насінини з 620 можливих, що
становить 46,4 %. Аналіз отриманих форм за
допомогою ПЛР дозволив виявити 4 чітких
позитивних сигнали на присутність трансгена
nptII, що становить 13,3 % від загальної
кількості протестованого матеріалу. Разом з тим
було отримано 13 насінин сорту Bobwhite із 72
можливих, що становить лише 18,0%
зав’язуваності. Подальша перевірка рослинного
матеріалу на присутність трансгених
послідовностей дала негативний результат.
Ймовірно, що у даному випадку саме висока
температура навколишнього середовища під час
нанесення бактеріальної суспензії була кри-
тичним фактором і вчинила негативний вплив
на процес агробактеріальної трансформації
in planta.
Література
1. Bechtold N., Pelletier G. In planta Agrobacterium-mediated transformation of adult Arabidopsis. – 266.
2. Curtis I.S., Nam H.G. Transgenic radish (Raphanus sativus L. Longipinnatus Bailey) by floral-dip method – plant
development and surfactant are important in optimizing transformation efficiency // Transgenic Research – 2001. –
10. – P. 363–371.
3. Чумаков М.И., Моисеева Е.М. Технологии агробактериальной трансформации растений in planta //
Биотехнология. – 2012. – № 1. – С. 8–20.
4. Гончарук О.М., Бавол А.В., Дубровна О.В. Морфогенний потенціал високопродуктивних сортів озимої
пшениці в культурі апікальних меристем пагонів // Фактори експериментальної еволюції організмів:
збірник наукових праць – 2011. – 11. – С. 237–241.
5. Agarwal S., Loar S., Steber C.M., Zale J. Floral transformation of wheat // Methods in Molecular Biology.
Transgenic Wheat, Barley and Oats. – 2009. – 478. – P. 105–113.
6. Zale J.M., Agarwal S., Loar S., Steber C.M. Evidence for stable transformation of wheat by floral dip in
Agrobacterium tumefaciens // Plant Cell Rep. – 2009. – N 28. – Р. 903–913.
7. Supartana P., Shimizu Ts., Nogawa M., Shioiri H., Nakajima T., Haramoto N., Nozue M., Kojima M. Development
of simple and efficient in planta transformation method for wheat (Triticum aestivum L.) using Agrobacterium
tumefaciens // Journal of Bioscience and Bioengineering. – 2006. – 102, N 3. – P. 162–170.
39
8. Kim Y.-Y., Kim D.-Y., Shim D. et al. Expression of the novel wheat gene TM20 confers enhanced cadmium
tolerance to bakers’ yeast // J. of Biological Chemistry. – 2008. – 283 (23). – P. 15893–15902.
GORBATYUK I.R, BAVOL A.V., MORGUN B.V.
Institute of Cell Biology and Genetic Engineering, National Academy of Sciences of Ukraine,
Ukraine, 03680, Kyiv, Akad. Zabolotnoho str., 148, е-mail: molgen@icbge.org.ua
AGROBACTERIUM-MEDIATED IN PLANTA TRANSFORMATION OF WINTER WHEAT CV.
PODOLYAKA AND SPRING WHEAT CV. BOBWHITE
Aims. Triticum aestivum L., being one of the world’s most important staple crops, remains a challenge for
genetic transformation. This paper describes the application of in planta method to obtain transformants by
treating cells of intact plants with argobacterium. Methods. Analysis of the plant material for the presence of
nptII transgene was carried out using polymerase chain reaction (PCR). Results. Fresh agrobacterium
containing vector p014 was transferred into spikes of wheat. There were 13 seeds (18.0 %) collected of cv.
Bobwhite out of 72 possible from 12 spikes and 293 seeds (46.4 %) of cv. Podolyanka out of 620 possible
from 24 spikes. Based on the results of PCR for the presence of nptII transgene there were no positive
signals found for the cv. Bobwhite. On the other hand there were 4 clear positive samples detected for cv.
Podolyanka indicating the presence of nptII sequence. Conclusions. Agrobacterium-mediated in planta
transformation was conducted for winter cv. Podolanka and spring cv. Bobwhite. The ambient temperature
below 28 °C during the next 18 hours after agrobacterium application was crucial. Tested probes of cv.
Podolyanka (13.3 %) were positive for the presence of transgene nptII.
Key words: wheat, transformation, nptII, agrobacterium, GFP.
УДК 167.33:616.36-004+599.323.41
ГУЛЬКО Т.П. 1, 5, ДРАГУЛЯН М.В. 1, ДЕРЯБИНА Е.Г. 1, 5, КОРДЮМ В.А. 1, ЛЕВКИВ М.Ю. 2,
БУБНОВ Р.В. 3, 4
1 Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины,
Украина, 03143, г. Киев, ул. Акад. Заболотного, 150, e-mail: kordium@imbg.org.ua
2 Киевский национальный университет им. Тараса Шевченка,
Украина, 01601, г. Киев, ул. Владимирская, 64/13
3 Институт микробиологии и вирусологии им. Д.К. Заболотного НАН Украины,
Украина, 03143, г. Киев, ул. Акад. Заболотного, 154
4 Центр ультразвуковой диагностики и интервеционной сонографии Клинической больницы
«Феофания» Государственного Управления делами,
Украина,03680, г. Киев, ул. Акад. Заболотного, 21
5 ГУ «Институт генетической и регенеративной медицины НАМНУ»,
Украина, 04114, г. Киев, ул. Вышгородская, 67
МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРОЦЕССОВ ПОВРЕЖДЕНИЯ,
КОМПЕНСАЦИИ И ПРИСПОСОБЛЕНИЯ В ПАТОЛОГИЧЕСКИ ИЗМЕНЕННОЙ ПЕЧЕНИ
ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ССl4
Многие заболевания печени
характеризуются наличием воспалительного
процесса, при котором происходит интенсивное
отмирание гепатоцитов, в результате чего орган
теряет свои функции. Однако следует заметить,
что многие авторы при комплексном лечении
заболеваний печени рассматривают
компенсаторно-приспособительные (адаптив-
ные) реакции. К таким реакциям исследователи
относят регенерацию, гипертрофию и
перестройку тканей [1, 2]. В связи с этим,
актуальным представляется исследование
повреждения печени на экспериментальной
модели, индуцированной четыреххлористым
углеродом (ССl4), а также изучение
регенеративной способности в измененной
печени на протяжении 2 месяцев после
окончания затравки токсином.
Материалы и методы
Исследования проведены на 20 мышах-
самцах линии ICR, которые в начале
эксперимента были разделены на 3 группы.
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-178264 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 2219-3782 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-11-24T11:48:38Z |
| publishDate | 2014 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Горбатюк, І.Р. Бавол, А.В. Моргун, Б.В. 2021-02-18T12:25:03Z 2021-02-18T12:25:03Z 2014 Агробактеріальна трансформація in planta пшениці озимого сорту Подолянка та ярого сорту Bobwhite / І.Р. Горбатюк, А.В. Бавол, Б.В. Моргун // Фактори експериментальної еволюції організмів: Зб. наук. пр. — 2014. — Т. 15. — С. 35-39. — Бібліогр.: 8 назв. — укр. 2219-3782 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/178264 577.21: 57.085.1:577.233.3:633.11 Aims. Triticum aestivum L., being one of the world’s most important staple crops, remains a challenge for genetic transformation. This paper describes the application of in planta method to obtain transformants by treating cells of intact plants with argobacterium. Methods. Analysis of the plant material for the presence of nptII transgene was carried out using polymerase chain reaction (PCR). Results. Fresh agrobacterium containing vector p014 was transferred into spikes of wheat. There were 13 seeds (18.0%) collected of cv. Bobwhite out of 72 possible from 12 spikes and 293 seeds (46.4%) of cv. Podolyanka out of 620 possible from 24 spikes. Based on the results of PCR for the presence of nptII transgene there were no positive signals found for the cv. Bobwhite. On the other hand there were 4 clear positive samples detected for cv. Podolyanka indicating the presence of nptII sequence. Conclusions. Agrobacterium-mediated in planta transformation was conducted for winter cv. Podolyanka and spring cv. Bobwhite. The ambient temperature below 28°C during the next 18 hours after agrobacterium application was crucial. Tested probes of cv. Podolyanka (13.3%) were positive for the presence of transgene nptII. Key words: wheat, transformation, nptII, agrobacterium, GFP. uk Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Фактори експериментальної еволюції організмів Клітинні, генні та молекулярні біотехнології Агробактеріальна трансформація in planta пшениці озимого сорту Подолянка та ярого сорту Bobwhite Agrobacterium-mediated in planta transformation of winter wheat cv. Podolyaka and spring wheat cv. Bobwhite Article published earlier |
| spellingShingle | Агробактеріальна трансформація in planta пшениці озимого сорту Подолянка та ярого сорту Bobwhite Горбатюк, І.Р. Бавол, А.В. Моргун, Б.В. Клітинні, генні та молекулярні біотехнології |
| title | Агробактеріальна трансформація in planta пшениці озимого сорту Подолянка та ярого сорту Bobwhite |
| title_alt | Agrobacterium-mediated in planta transformation of winter wheat cv. Podolyaka and spring wheat cv. Bobwhite |
| title_full | Агробактеріальна трансформація in planta пшениці озимого сорту Подолянка та ярого сорту Bobwhite |
| title_fullStr | Агробактеріальна трансформація in planta пшениці озимого сорту Подолянка та ярого сорту Bobwhite |
| title_full_unstemmed | Агробактеріальна трансформація in planta пшениці озимого сорту Подолянка та ярого сорту Bobwhite |
| title_short | Агробактеріальна трансформація in planta пшениці озимого сорту Подолянка та ярого сорту Bobwhite |
| title_sort | агробактеріальна трансформація in planta пшениці озимого сорту подолянка та ярого сорту bobwhite |
| topic | Клітинні, генні та молекулярні біотехнології |
| topic_facet | Клітинні, генні та молекулярні біотехнології |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/178264 |
| work_keys_str_mv | AT gorbatûkír agrobakteríalʹnatransformacíâinplantapšenicíozimogosortupodolânkataârogosortubobwhite AT bavolav agrobakteríalʹnatransformacíâinplantapšenicíozimogosortupodolânkataârogosortubobwhite AT morgunbv agrobakteríalʹnatransformacíâinplantapšenicíozimogosortupodolânkataârogosortubobwhite AT gorbatûkír agrobacteriummediatedinplantatransformationofwinterwheatcvpodolyakaandspringwheatcvbobwhite AT bavolav agrobacteriummediatedinplantatransformationofwinterwheatcvpodolyakaandspringwheatcvbobwhite AT morgunbv agrobacteriummediatedinplantatransformationofwinterwheatcvpodolyakaandspringwheatcvbobwhite |