Особливості імуноферментного аналізу рослин картоплі культури in vitro
Проведення імуноферментного аналізу рослин культури in vitro ускладнено особливостями фізіологічного статусу рослин та особливостями інфекційного процесу внаслідок застосування активної терапії. Нами адаптовано використання пероксидазних імуноферментних діагностикумів, сконструйованих з використання...
Gespeichert in:
| Datum: | 2005 |
|---|---|
| Hauptverfasser: | , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Ukrainisch |
| Veröffentlicht: |
Інститут мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України
2005
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/18591 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Особливості імуноферментного аналізу рослин картоплі культури in vitro / І.В. Волкова, Л.П. Коломієць // Сільськогосподарська мікробіологія: Міжвід. темат. наук. зб. — Чернігів, 2005. — Вип. 1-2. — С. 179-187. — Бібліогр.: 12 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860229794716712960 |
|---|---|
| author | Волкова, І.В. Коломієць, Л.П. |
| author_facet | Волкова, І.В. Коломієць, Л.П. |
| citation_txt | Особливості імуноферментного аналізу рослин картоплі культури in vitro / І.В. Волкова, Л.П. Коломієць // Сільськогосподарська мікробіологія: Міжвід. темат. наук. зб. — Чернігів, 2005. — Вип. 1-2. — С. 179-187. — Бібліогр.: 12 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| description | Проведення імуноферментного аналізу рослин культури in vitro ускладнено особливостями фізіологічного статусу рослин та особливостями інфекційного процесу внаслідок застосування активної терапії. Нами адаптовано використання пероксидазних імуноферментних діагностикумів, сконструйованих з використанням препаратів “виснажених” антитіл, для вірусологічного аналізу пробіркових рослин картоплі.
Встановлена необхідність при негативному результаті ТІФА застосовувати додатковий електронномiкроскопiчний контроль зразкiв картоплi культури in vitro через можливість значного зниження концентрації вірусу внаслідок застосування активної терапії, а також проведення аналізу після стабiлiзації фiзiологiчного статусу рослин шляхом вирощування їх у вiдкритому грунтi або оптимiзацiї температурного режиму, фотоперiоду та газообмiну в умовах пробiрки.
Проведение иммуноферментного анализа растений картофеля культуры in vitro усложнено особенностями физиологического статуса растений и инфекционного процесса после применения активной терапии. Нами адаптировано использование пероксидазных иммуноферментных диагностикумов, сконструированных с использованием препаратов “истощенных” антител, для вирусологического анализа пробирочных растений картофеля.
Установлена необходимость, при негативном результате ТИФА дополнительного електронномикроскопического контроля образцов картофеля культуры in vitro из-за возможности значительного снижения концентрации вируса вследствие применения активной терапии и проведения анализа после стабилизации физиологического статуса растений выращиванием их в открытом грунте или оптимизацией температурного режима, фотопериода и газообмена в условиях пробирки.
Immunoferment assay (IFA) of potato plants in vitro has been limited to peculiarity of plants physiological status and property of infection process under the active therapy. Using of peroxidase immunoferment diagnosticums at the base of “exhausted” screening antibodies has been adapted for viruses analysis of test-tube potato plants.
At the negative results of IFA, plants samples must be tested by electron microscopic method for the presence of small quantities of viruses, and by IFA after normalization of plants physiological status at the field conditions or after normalization of temperature, photoperiod, gas exchange at the test tube conditions recognized as necessary.
|
| first_indexed | 2025-12-07T18:21:04Z |
| format | Article |
| fulltext |
178 179
УДК 578.863:632.937: 635.24
ОСОБЛИВОСТІ ІМУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛІЗУ РОСЛИН
КАРТОПЛІ КУЛЬТУРИ IN VITRO
Волкова І.В., Коломієць Л.П.
Інститут сiльськогосподарської мiкробiологiї УААН
вул. Шевченка, 97, м. Чернігів, Україна, 14027
Проведення імуноферментного аналізу рослин культури in vitro ускладне-
но особливостями фізіологічного статусу рослин та особливостями ін-
фекційного процесу внаслідок застосування активної терапії. Нами адап-
товано використання пероксидазних імуноферментних діагностикумів,
сконструйованих з використанням препаратів “виснажених” антитіл,
для вірусологічного аналізу пробіркових рослин картоплі.
Встановлена необхідність при негативному результаті ТІФА застосову-
вати додатковий електронномiкроскопiчний контроль зразкiв картоплi
культури in vitro через можливість значного зниження концентрації віру-
су внаслідок застосування активної терапії, а також проведення аналізу
після стабiлiзації фiзiологiчного статусу рослин шляхом вирощування їх
у вiдкритому грунтi або оптимiзацiї температурного режиму, фотопе-
рiоду та газообмiну в умовах пробiрки.
Ключові слова: рослини каротоплі культури in vitro, твердофазовий іму-
ноферментний аналіз (ТІФА), “виснажені” антитіла.
Виробництво високоякісного насіннєвого матеріалу є основою галузі
картоплярства і має забезпечувати найбільш повну реалізацію генетично
визначеного потенціалу сортів. Метод культури апікальних меристем для
звільнення рослин від вірусів широко використовується як складова ча-
стина системи первинного насінництва картоплі.
Важливим елементом на всіх етапах оздоровлення та відтворення
оздоровленого насіннєвого матеріалу є контроль його якості з викори-
станням комплексу методів. У практиці насінництва картоплі широкого
застосування набув імуноферментний аналіз завдяки високій чутливості
(10-15 –55 нг/мл, залежно від модифікації) та специфічності.
Рівень чутливості ІФА дозволяє діагностувати віруси в рослинно-
му матеріалі з високим ступенем надійності. Проте розробка методу ІФА
для кожного конкретного збудника потребує досліджень, спрямованих на
оптимізацію умов відбору проб, підготовки зразків та проведення аналізів
– емпіричний підхід необхідний для кожної системи вірус – рослина [1].
Рослини картоплі культури in vitro відрізняються фізіологічними
особливостями, які ускладнюють вірусологічний контроль матеріалу. В
180 181
процесі оздоровлення картоплі методами активної терапії не завжди дося-
гається повне звільнення від інфекції, може відбуватись елімінація чи зни-
ження концентрації вірусу до рівня, нижчого за межу чутливості методів
діагностики [2-4]. Крім того, фізіологічна адаптація рослин пробіркової
культури до умов вирощування включає активний синтез білків і фермен-
тів, як реакцію на бiологiчно активні компоненти поживних середовищ,
температуру, світловий режим [5]. Одним із функціонально лабільних
ферментів є пероксидаза: спостерігається значне збільшення активно-
сті ферменту та зміни ізоферментних форм за умов водного дефіциту,
механічних пошкоджень, при старінні рослин, патогенезі та дії високої
температури тощо [5, 6]. Стресові білки активно синтезуються рослинами
культури in vitro та неспецифічно зв’язуються із сироватковими антитіла-
ми незалежно вiд специфiчностi останнiх, що дає хибнопозитивні реакції
при серологічному аналiзi цього матеріалу [7].
Метою наших досліджень було визначити умови проведення віру-
сологічного контролю рослин картоплі культури in vitro.
Матеріали і методи. Дослідження проводили на оздоровлених
та інфікованих Х-вірусом рослинах картоплі культури in vitro, які виро-
щували в умовах люміностату при фотоперiодi в 16 годин та температурi
18-22 оС.
Для контролю пробіркових рослин використовували електронну
мікроскопію нативних препаратів листків, контрастованих ФВК, та твер-
дофазовий імуноферментний аналіз (“сендвіч”-варіант).
Препарати ХВК для iмунiзацiї тварин отримували з листя рослини-
накопичувача вірусу Datura stramonium L. Заморожене листя гомогенізу-
вали з одним об’ємом 0,05М цитратного буфера, рН 9,0; екстракт освiт-
лювали хлороформом (1:7), хроматографували на колонцi з молселектом
Г-50 та рехроматографували на колонцi з ДЕАЕ-50. Концентрацiю вiрус-
ного бiлка та його чистоту визначали за допомогою спектрофотометра
СФ-46. Антиген у вiдiбраних фракцiях концентрували полiетиленглiколем
(м.в. 6000) та ресуспендували у фiзiологiчному розчинi.
Гiперiмунну кролячу антисироватку отримували після iмунiзації
тварин препаратами ХВК з ад’ювантом мантанид ІSA N 206 у спiввiд-
ношеннi 1:1 (маса/маса) за розробленою нами схемою з використанням
мiкродоз. Імунiзацiя передбачала 4 iн’єкцiї по 0,2 мг вiрусного антигену з
чергуванням пiдшкiрних та внутрішньошкiрних (8-10 мiсць вздовж хреб-
та) введень. Пiсля першої iмунiзацiї iнтервал становив тиждень, пiсля
другої – два днi. Через тиждень пiсля останньої iмунiзацiї вiдбирали кров
та визначали титр сироватки крапельним методом.
180 181
Для отримання очищених препаратiв iмуноглобулiнiв класу G по-
передньо проводили триразове висолювання гаммаглобулiнової фракцiї
антивірусної сироватки насиченим (66 %) розчином сульфату амонiю
[8, 9]. Пiсля останнього центрифугування при 3000 об/хв протягом 20
хвилин осад ресуспендували у 0,01М Nа-фосфатному буферi (рН 7,4) та
дiалiзували при 4ОС протягом ночi проти цього ж буфера. Пiсля дiалiзу
та центрифугування (2500 об/хв, 15 хвилин) розчин iмуноглобулiнiв
використовували для одержання препаратiв стандартних та “виснажених”
антитiл з використанням хроматографiї на ДЕАЕ-целюлозi. Якість
“виснажених” препаратів імуноглобулінів визначали за допомогою методу
iмунодифузiї в 0,8 %-ному агарозному гелi на забуференому фiзрозчинi з
рН 7,4 . В центральну лунку вносили препарат в розведеннi 1:4, в крайовi
- препарат бiлкiв пробiркових рослин картоплi в розведеннях 1:2, 1:4,
1:8, 1:16. Препарат антитіл вважався повністю виснаженим за умови
відсутності ліній преципітації.
Отриманi фракцiї антитiл аналiзували методом твердофазового
імуноферментного аналізу (ТІФА). Концентрацiю бiлка в препаратах
визначали за допомогою спектрофотометра СФ-46 за формулою Калькара:
С= 1,45 А280 – 0,74 (мг/мл), де А280 – оптична густина при 280 нм, А260
– оптична густина при 260 нм.
Кон’югацію антитiл з пероксидазою хрону проводили методом
перйодатного окислення. Отриманий розчин кон’югату стабiлiзува-
ли шляхом додавання бичачого сироваткового альбумiну (10 мг/мл).
Імуноферментні тест-системи конструювали у відповідності з відомими
[8, 10, 11] та модіфікованими нами методиками. ТІФА проводили за стан-
дартною методикою [11] на полiстиролових планшетах фiрми Sarstedt
(США). Для сенсибiлiзацiї лунок планшету використовували препарат
вірусоспецифічних iмуноглобулiнiв у концентрацiї 10 мкг/мл в 0,05 М
карбонат-бiкарбонатному буферi, рН 9,6 протягом 12-18 годин при 4ОС у
робочему об’ємі 100 мкл. Ферментативну активність виявляли за допо-
могою ортофенiлендiамiну (ОФД) спектрофотометрично за величиною
оптичної густини (ОГ) при довжинi хвилi 492 нм.
Умови проведення ТІФА передбачали порiвняння спiввiдношення
оптичної густини позитивного контролю до оптичної густини негативно-
го контролю. Показник свiдчить про наявнiсть вiрусного антигену в до-
слiдному матерiалi, якщо його значення перевищує 2 [12].
Результати та їх обговорення. При проведенні ТІФА з викори-
станням стандартних імунореагентів здорових за результатами електрон-
номікроскопічного тестування рослин картоплі in vitro не вдалося вста-
182 183
новити достовірність аналізу внаслідок високого рівня неспецифiчного
зв’язування з боку покривних антитiл. Слід відмітити, що при ТІФА
уражених ХВК рослин фонової реакції не спостерігали. Тобто, вірусне
ураження суттєво впливає на фізіологічний стан рослин пробіркової куль-
тури, можливо, підвищуючи рівень їх адаптації до стресових чинників.
Попередньо для оптимізації умов імуноферментного аналізу рос-
лин картоплі культури in vitro випробували варіанти:
– нормалiзацiї фiзiологiчного статусу шляхом витримки пробiрко-
вих рослин протягом 2-3 дiб в прохолодному примiщеннi (за температури
18-22оС) з природним фотоперiодом та газообмiном;
– зменшення неспецифiчного зв’язування з боку покривних антитiл
за допомогою рiзних реагентiв при постановці реакції (Ig G нормальної
сироватки кроля в концентрацiї 5, 20 та 30 мкг/мл, об’єм/об’єм; розчин
БСА в концентрацiї 50 та 100 мкг/мл, об’єм/ об’єм).
Результати показали, що спроби оптимiзацiї процесу ІФА шляхом
змiн означених параметрiв при аналiзi пробiркових рослин не дали ба-
жаного ефекту: не вдалося знизити рівень фонової реакції. Пiдвищення
надiйностi виявлення вiрусiв отримали при стабiлiзації фiзiологiчного та
бiохiмiчного статусу пробiркових рослин, що вiдбувається за умов виро-
щування їх у вiдкритому грунтi.
Беручи до уваги дані літератури [7] щодо зменшення інтенсивності
неспецифiчної реакції шляхом додавання соку здорової рослини на за-
ключних етапах проведення реакції, ми поставили собі за мету одержати
бiологiчнi компоненти, використовуючи методи виснаження антивiрусних
сироваток, дослiдити їх iмунохiмiчнi властивостi, сконструювати на їх
основi iмуноферментний дiагностикум для виявлення фiтовiрусiв карто-
плi культури in vitro.
З метою виснаження антисироватки отримували препарат білків із
соку рослин картоплі культури in vitro шляхом концентрування поліети-
ленгліколем (м.в. 6000) після попереднього освітлення хлороформом.
Для отримання очищених препаратiв “виснажених” антивiрусних
iмуноглобулiнiв використовували специфічну сироватку з титром в реак-
ції крапельної аглютинації 1:8192. Розчин iмуноглобулiнiв, виділених за
наведеною методикою, пiсля дiалiзу та центрифугування (2500 об/хв, 15
хвилин) дiлили на двi рiвнi частини та використовували для одержання
стандартних та “виснажених” препаратiв антитiл з використанням хрома-
тографiї на ДЕАЕ -целюлозi.
Виснаження препарату антитіл проводили за наступною схемою:
інкубували при 4 оС протягом ночi препарат iмуноглобулiнiв з пре-
182 183
паратом бiлкiв пробiркової картоплi у спiввiдношеннi 2:1 (об’єм/об’єм);
центрифугували препарат при 3000 об/хв протягом 15 хвилин;
осад вiдкидали, а рiдину хроматографували на колонцi з ДЕАЕ-це-
люлозою 0,01М Nа-фосфатним буфером (рН 7,4);
вiдбирали фракцiї, якi мiстять перший бiлковий пiк.
В отриманих препаратах стандартних та “виснажених”
iмуноглобулiнiв паралельно визначали концентрацiю бiлка та наявнiсть
перехресних реакцiй з концентрованим препаратом бiлкiв пробiркової
картоплi в реакцiї iмунодифузiї. Як показали результати наших аналізів
(табл.1), виснаження антивiрусної сироватки веде до значного зниження
концентрацiї антитiл, але супроводжується пiдвищенням специфiчно-
стi, оскiльки найбiльш реактивнi по вiдношенню до стресових бiлкiв
iмуноглобулiни виключаються з препаратiв антитiл.
Таблиця1. Вихiд бiлка та наявнiсть перехресних серологiчних
реакцiй в препаратах iмуноглобулiнiв
Дослiджуванi препа-
рати Вихiд бiлка, мг
Наявнiсть перехрестних ре-
акцiй з рослинними бiлками,
розведення 1:4
Стандартнi антитiла 9,63 +
“Виснаженi” антитiла 5,53 –
Результати дослiдження бiологiчних реагентiв, отриманих мето-
дом ТІФА, наводені в табл. 2 та 3. Дослiджуванi фракцiї iмуноглобулiнiв
вносили в лунки в однаковiй концетрацiї – 10 мкг/мл. При проведеннi
ТІФА для порiвняння специфiчностi негативним контролем слугував
сік оздоровлених пробiркових рослин картоплi в розведеннi 1:30, пози-
тивним- той самий сік з доданим вiрусним антигенои. При аналiзi чутли-
востi розведення соку пробiркових рослин в негативному та позитивному
контролях дорiвнювало 1:30, тоді як антиген ХВК брали в розведенні вiд
1:30 до 1:1200.
Результати порiвняльного аналiзу експериментальних систем ТІФА
показали, що найбiльшими показниками специфiчностi та чутливостi ха-
рактеризується iмуноферментна система з модифiкованими реагентами:
знижується сигнал оптичної густини негативних зразкiв, значно пiдвищу-
ється спiввiдношення середніх значень оптичної густини позитивних і не-
гативних зразкiв, що, в свою чергу, дозволяє достовiрно виявити вiрусний
антиген у меншiй концентрацiї.
184 185
Таблиця 2. Порiвняльний аналiз специфiчностi ТІФА при
виявленнi антигену ХВК
Дослiджуванi зразки Використання антитiл для сенсибiлiзацiї*
стандартнi антитiла “виснаженi” антитiла
ОГ сер. (+) 2,673 2,585
ОГ сер. (-) 0,204 0,094
ОГ сер. (+)/ ОГ сер. (-) 27,57 13,10
* Концентрацiя бiлка – 10 мкг/мл
ОГ сер. (+), ОГ сер.(-) – середні значення оптичної густини позитивних та
негативних зразкiв, відповідно;
ОГ сер. (+)/ ОГ сер. (-) – спiввiдношення середніх значень оптичної густи-
ни позитивних та негативних зразкiв.
Таким чином, результати аналiзу iмунохiмiчних властивостей пре-
парату “виснажених” антитiл в iмунодифузiї та iмуноферментних тестах
свідчать про його переваги над стандартним реагентом і дає підстави ви-
користовувати препарати “виснажених” антитіл при конструюваннi тест-
систем для виявлення фiтовiрусiв картоплi культури in vitro.
Встановлена ефективність пероксидазних імуноферментних діаг-
ностикумів, сконструйованих з використанням модифікованих реагентів,
для контролю ураженості вірусами рослин картоплі пробіркової культу-
ри.
Таблиця 3.Порiвняльний аналiз чутливостi ТІФА при виявленнi
антигену ХВК
Дослiджуванi
зразки
Використання антитiл для сенсибiлiзацiї*
стандартнi антитiла “виснаженi” антитiла
розведення в соку антигену ХВК
1:30 1:120 1:560 1:1200 1:30 1:120 1:560 1:1200
ОГ сер. (+) 2,583 2,091 0,557 0,331 2,757 1,821 0,648 0,380
ОГ сер. (-) 0,221 0,343
ОГ сер. (+)
/ ОГ сер. (-) 11,69 9,46 2,52 1,48 8,02 5,31 1,89 1,11
* Концентрацiя бiлка – 10 мкг/мл
ОГ сер. (+), ОГ сер.(-) – середні значення оптичної густини позитивних та
негативних зразкiв, відповідно;
ОГ сер. (+)/ ОГ сер. (-) – спiввiдношення середніх значень оптичної густи-
ни позитивних та негативних зразкiв.
184 185
Незважаючи на пiдвищення достовiрностi виявлення вiрусних
антигенiв при використаннi оптимізованих тест-систем, обов’язковим є
електронномiкроскопiчний контроль зразкiв картоплi культури in vitro, в
яких методом ТІФА не встановлено iнфiкування, оскільки концентрація
вірусу при застосуванні активної терапії може бути нижчою за чутливість
імуноферментного аналізу.
Крім того, виходячи з особливостей взаємодії вірус – рослина, які
складаються при застосуванні методів активної терапії, для пiдвищення
надiйностi діагностики вiрусiв у пробiркових рослинах необхiдно стабi-
лiзувати фiзiологiчний та бiохiмiчний статус рослин, що вiдбувається при
вирощуваннi у вiдкритому грунтi та оптимізацією температурного режи-
му, фотоперiоду та газообмiну в умовах пробiрки.
Проведені дослідження дозволили визначити умови проведення
вірусологічного контролю рослин картоплі культури in vitro, ускладнені
особливостями фізіологічного статусу рослин та особливостями інфек-
ційного процесу внаслідок застосування активної терапії.
1. Dedic P. Diagnoza viru bramboru metodou ELISA v duznine sekund-
arne infikovanych hliz a v kliccich // Ved. Prace Vyzk. Slecht. Ustavu Brambor.
v Havlickove Brode. – 1988. – 11. – S. 83-95
2. Шмыгля В.А.; Николаева О.И.; Большакова Л.В. Достоверность
иммуноферментной диагностики вирусов картофеля и томата и пути ее
повышения // Состояние и перспективы развития с.-х. биотехнологии.
– М.:Наука, 1986. – C. 109-113.
3. Braun A.L.; Opgenorth D.C. Comparative detectability of potato
leafroll virus, potato virus X and potato virus S using enzyme-linked immuno-
sorbent assay (ELISA) and serologically specific electron microscopy (SSEM)
// Am. Potato J. – 1987. – 64, N 4. – P. 205-207.
4. Різник В.С. Оздоровлення картоплі: проблеми і перспективи //
Картоплярство. – 1997. – Вип. 27. – С. 23-34.
5. Бутенко Р.Г. Некоторые физиологические проблемы при
культивировании in vitro картофеля // Регуляция роста и развития
картофеля. – М.: Наука, 1990. – C. 88-98.
6. Савич И.М. Пероксидазы – стрессовые белки растений // Успехи
соврем. биологии. –1989. – 107, No 3. – С. 406-417.
7. Gunn L.V.; Pares R.D. Effect of potato physiology on the interpre-
tation of ELISA results for potato leafroll virus // Plant Pathol. – 1988. – 37,
No 4. – P. 516-521
8. Иммунологические методы: Пер. с нем./ Под ред. Г. Фримеля.
186 187
– М.: Медицина, 1987. – 472 с.
9. Кленина Н.В., Антонов В.С., Михайлова С.А. Методические
рекомендации по выделению иммуноглобулинов. – Харьков, 1983. –23 с.
10. Антитела. Методы. / Под ред. Д.Кэтти. – М.: Мир, 1991.
– 384 с.
11. Clark M.F., Adams A.N. Characteristics of the micro-plate method
of enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of plant viruses// J.
Gen. Virol. – 1977. – 34. – P. 475-483.
12. Егоров А.М., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б. и др. Теория и практика
иммуноферментного анализа. – М.: Высшая школа, 1991. – 288 с.
УДК 578.863:632.937:635.24
ОСОБЕННОСТИ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА
РАСТЕНИЙ КАРТОФЕЛЯ КУЛЬТУРЫ IN VITRO
Волкова И.В., Коломиец Л.П.
Институт сельскохозяйственной микробиологии УААН, г. Чернигов
Проведение иммуноферментного анализа растений картофеля культуры
in vitro усложнено особенностями физиологического статуса растений
и инфекционного процесса после применения активной терапии. Нами
адаптировано использование пероксидазных иммуноферментных диагно-
стикумов, сконструированных с использованием препаратов “истощен-
ных” антител, для вирусологического анализа пробирочных растений
картофеля.
Установлена необходимость, при негативном результате ТИФА допол-
нительного електронномикроскопического контроля образцов картофеля
культуры in vitro из-за возможности значительного снижения концен-
трации вируса вследствие применения активной терапии и проведения
анализа после стабилизации физиологического статуса растений вы-
ращиванием их в открытом грунте или оптимизацией температурного
режима, фотопериода и газообмена в условиях пробирки.
Ключевые слова: растения картофеля in vitro, твердофазний иммуно-
ферментный анализ (ТИФА), “истощенные” антитела.
186 187
THE PECULIARITY OF IMMUNOFERMENT ASSAY OF POTATO
PLANTS IN VITRO
Volkova I.V., Kolomiec L.P.
Institute of Agricultural Microbiology, UAAS, Chernihiv
Immunoferment assay (IFA) of potato plants in vitro has been limited to pecul-
iarity of plants physiological status and property of infection process under the
active therapy. Using of peroxidase immunoferment diagnosticums at the base
of “exhausted” screening antibodies has been adapted for viruses analysis of
test-tube potato plants.
At the negative results of IFA, plants samples must be tested by electron mi-
croscopic method for the presence of small quantities of viruses, and by IFA
after normalization of plants physiological status at the field conditions or after
normalization of temperature, photoperiod, gas exchange at the test tube cond-
itions recognized as necessary.
Key words: potato plants in vitro, immunoferment assay (IFA), “exhausted”
screening antibodies.
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-18591 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 1997-3004 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-12-07T18:21:04Z |
| publishDate | 2005 |
| publisher | Інститут мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Волкова, І.В. Коломієць, Л.П. 2011-04-05T17:39:23Z 2011-04-05T17:39:23Z 2005 Особливості імуноферментного аналізу рослин картоплі культури in vitro / І.В. Волкова, Л.П. Коломієць // Сільськогосподарська мікробіологія: Міжвід. темат. наук. зб. — Чернігів, 2005. — Вип. 1-2. — С. 179-187. — Бібліогр.: 12 назв. — укр. 1997-3004 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/18591 578.863:632.937: 635.24 Проведення імуноферментного аналізу рослин культури in vitro ускладнено особливостями фізіологічного статусу рослин та особливостями інфекційного процесу внаслідок застосування активної терапії. Нами адаптовано використання пероксидазних імуноферментних діагностикумів, сконструйованих з використанням препаратів “виснажених” антитіл, для вірусологічного аналізу пробіркових рослин картоплі.
 Встановлена необхідність при негативному результаті ТІФА застосовувати додатковий електронномiкроскопiчний контроль зразкiв картоплi культури in vitro через можливість значного зниження концентрації вірусу внаслідок застосування активної терапії, а також проведення аналізу після стабiлiзації фiзiологiчного статусу рослин шляхом вирощування їх у вiдкритому грунтi або оптимiзацiї температурного режиму, фотоперiоду та газообмiну в умовах пробiрки. Проведение иммуноферментного анализа растений картофеля культуры in vitro усложнено особенностями физиологического статуса растений и инфекционного процесса после применения активной терапии. Нами адаптировано использование пероксидазных иммуноферментных диагностикумов, сконструированных с использованием препаратов “истощенных” антител, для вирусологического анализа пробирочных растений картофеля.
 Установлена необходимость, при негативном результате ТИФА дополнительного електронномикроскопического контроля образцов картофеля культуры in vitro из-за возможности значительного снижения концентрации вируса вследствие применения активной терапии и проведения анализа после стабилизации физиологического статуса растений выращиванием их в открытом грунте или оптимизацией температурного режима, фотопериода и газообмена в условиях пробирки. Immunoferment assay (IFA) of potato plants in vitro has been limited to peculiarity of plants physiological status and property of infection process under the active therapy. Using of peroxidase immunoferment diagnosticums at the base of “exhausted” screening antibodies has been adapted for viruses analysis of test-tube potato plants.
 At the negative results of IFA, plants samples must be tested by electron microscopic method for the presence of small quantities of viruses, and by IFA after normalization of plants physiological status at the field conditions or after normalization of temperature, photoperiod, gas exchange at the test tube conditions recognized as necessary. uk Інститут мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України Вірусологія рослин Особливості імуноферментного аналізу рослин картоплі культури in vitro Особенности иммуноферментного анализа растений картофеля культуры in vitro The peculiarity of immunoferment assay of potato plants in vitro Article published earlier |
| spellingShingle | Особливості імуноферментного аналізу рослин картоплі культури in vitro Волкова, І.В. Коломієць, Л.П. Вірусологія рослин |
| title | Особливості імуноферментного аналізу рослин картоплі культури in vitro |
| title_alt | Особенности иммуноферментного анализа растений картофеля культуры in vitro The peculiarity of immunoferment assay of potato plants in vitro |
| title_full | Особливості імуноферментного аналізу рослин картоплі культури in vitro |
| title_fullStr | Особливості імуноферментного аналізу рослин картоплі культури in vitro |
| title_full_unstemmed | Особливості імуноферментного аналізу рослин картоплі культури in vitro |
| title_short | Особливості імуноферментного аналізу рослин картоплі культури in vitro |
| title_sort | особливості імуноферментного аналізу рослин картоплі культури in vitro |
| topic | Вірусологія рослин |
| topic_facet | Вірусологія рослин |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/18591 |
| work_keys_str_mv | AT volkovaív osoblivostíímunofermentnogoanalízuroslinkartoplíkulʹturiinvitro AT kolomíêcʹlp osoblivostíímunofermentnogoanalízuroslinkartoplíkulʹturiinvitro AT volkovaív osobennostiimmunofermentnogoanalizarasteniikartofelâkulʹturyinvitro AT kolomíêcʹlp osobennostiimmunofermentnogoanalizarasteniikartofelâkulʹturyinvitro AT volkovaív thepeculiarityofimmunofermentassayofpotatoplantsinvitro AT kolomíêcʹlp thepeculiarityofimmunofermentassayofpotatoplantsinvitro |