Протекторна дія виноградних вин за нітрозативного стресу, зумовленого експериментальним цукровим діабетом
Виявлено, що за оксидативно-нітрозативного стресу, зумовленого цукровим діабетом, червоне та біле виноградні вина, поліфеноли яких вважаються основними діючими речовинами, знижують рівень нітротирозин-модифікованих протеїнів до рівня контролю в сідничному нерві, дорсальних спинномозкових гангліях та...
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Український біохімічний журнал |
|---|---|
| Datum: | 2010 |
| Hauptverfasser: | , , , , , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Ukrainisch |
| Veröffentlicht: |
Інститут біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України
2010
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/19030 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Протекторна дія виноградних вин за нітрозативного стресу, зумовленого експериментальним цукровим діабетом / В.Р. Дрель, А.Р. Гнатуш, А.Я. Яланецький, В.Г. Гержикова, В.І. Мізін, В.А. Загоруйко, Н.О. Сибірна // Укр. біохім. журн. — 2010. — Т. 82, № 1. — С. 108-116. — Бібліогр.: 20 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859981483341512704 |
|---|---|
| author | Дрель, В.Р. Гнатуш, А.Р. Яланецький, А.Я. Гержикова, В.Г. Мізін, В.І. Загоруйко, В.А. Сибірна, Н.О. |
| author_facet | Дрель, В.Р. Гнатуш, А.Р. Яланецький, А.Я. Гержикова, В.Г. Мізін, В.І. Загоруйко, В.А. Сибірна, Н.О. |
| citation_txt | Протекторна дія виноградних вин за нітрозативного стресу, зумовленого експериментальним цукровим діабетом / В.Р. Дрель, А.Р. Гнатуш, А.Я. Яланецький, В.Г. Гержикова, В.І. Мізін, В.А. Загоруйко, Н.О. Сибірна // Укр. біохім. журн. — 2010. — Т. 82, № 1. — С. 108-116. — Бібліогр.: 20 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Український біохімічний журнал |
| description | Виявлено, що за оксидативно-нітрозативного стресу, зумовленого цукровим діабетом, червоне та біле виноградні вина, поліфеноли яких вважаються основними діючими речовинами, знижують рівень нітротирозин-модифікованих протеїнів до рівня контролю в сідничному нерві, дорсальних спинномозкових гангліях та спинному мозку щурів. Показано нормалізацію активності полі(ADP-рибозо)полімерази-1 в сідничному нерві діабетичних щурів під дією червоного вина. За час експерименту виявлено зростання маси тіла контрольних щурів та тварин із цукровим діабетом, яким вводили червоне вино на 52 та 19% відповідно. Одержані результати свідчать про можливість застосування червоних вин та створення препаратів на їхній основі для профілактики та лікування ускладнень цукрового діабету.
Установлено, что в условиях оксидативно-нитрозативного стресса, вызванном сахарным диабетом, красное и белое виноградные вина, полифенолы которых считаются основными действующими веществами, снижают уровень нитротирозинмодифицированных протеинов до уровня контроля в седалищном нерве, дорсальных спинномозговых ганглиях и спинном мозге крыс. Показано также снижение активности поли(ADP-рибозо)полимеразы-1 до уровня контроля в седалищном нерве диабетических крыс, которым давали красное вино. В течение эксперимента обнаружено увеличение массы тела в контрольной и в группах крыс, больных сахарным диабетом, которым давали красное вино на 52 и 19% соответственно. Полученные результаты обосновывают целесообразность применения красных вин и возможность создания на их основе препаратов для профилактики и лечения нейропатий при сахарном диабете.
It was found that under the diabetes-induced oxidative-nitrosative stress, red and white wines, which polyphenols are considered to be the main active components, decrease the level of nitrotyrosine-modified proteins toward the control level in sciatic nerve, dorsal root ganglia and spinal cord of animals with diabetes mellitus. A decrease of the activity of poly(ADP-ribose)polymerase-1 to the control level in the sciatic nerve of diabetic rats with red wine consumption was also shown. During the experiment the body weight of the control group and diabetic groups of rats with consumption of red wine was significantly increased by 52% and 19% accordingly. The present results allow us to assume an important role of red wine and possibility of production of its preparations for prevention and treatment of diabetic neuropathy.
|
| first_indexed | 2025-12-07T16:26:26Z |
| format | Article |
| fulltext |
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 1108
УДК 577:616.379-008.64:663.2:611.83
протекторна дія виноградних вин
за нітрозативного стресу, зумовленого
експериментальним цукровим діабетом
В. Р. ДРель1, А. Р. ГнАтУш1, А. Я. ЯлАнецький2, В. Г. ГеРжикоВА2,
В. І. МІзІн2, В. А. зАГоРУйко2, н. о. СибІРнА1
1львівський національний університет ім. Івана Франка, Україна;
e-mail: sybirna_natalia@yahoo.com;
2національний інститут винограду та вина “Магарач”, Ялта, Україна
Виявлено, що за оксидативно-нітрозативного стресу, зумовленого цукровим діабетом, чер-
воне та біле виноградні вина, поліфеноли яких вважаються основними діючими речовинами, знижу-
ють рівень нітротирозин-модифікованих протеїнів до рівня контролю в сідничному нерві, дорсальних
спинномозкових гангліях та спинному мозку щурів. Показано нормалізацію активності полі(ADP-
рибозо)полімерази-1 в сідничному нерві діабетичних щурів під дією червоного вина. за час експеримен-
ту виявлено зростання маси тіла контрольних щурів та тварин із цукровим діабетом, яким вводили
червоне вино на 52 та 19% відповідно.
одержані результати свідчать про можливість застосування червоних вин та створення пре-
паратів на їхній основі для профілактики та лікування ускладнень цукрового діабету.
к л ю ч о в і с л о в а: цукровий діабет, оксидативно-нітрозативний стрес, червоне та біле вина,
периферична нервова система.
Останнім часом захворюваність на діабет
досягла епідемічних показників. Так, за
даними Всесвітньої організації охоро-
ни здоров’я у 2009 році більше 240 млн. людей
хворіли на цукровий діабет. Смертність від діа-
бетичних ускладнень становить понад 3 млн.
людей на рік. Відомо, що виникнення діабету
2-го типу, якому належить 85–90% серед усіх
форм захворювань на діабет, супроводжується
розвитком інсулінорезистентності. У 40% хво-
рих на діабет, які контролюють рівень глюкози
у крові та вживають антидіабетичні препара-
ти, проте виникають та розвиваються хронічні
ускладнення в периферичній нервовій системі.
За гіперглікемії виникають мікро- і макроан-
гіопатії, множинні патологічні зміни у багатьох
тканинах та органах, з яких периферична нер-
вова система, нирки та сітківка ока є одними
з найуразливіших. Так, мікроангіопатії поряд
із частковою втратою епідермальних нервових
закінчень, демієлінізацією аксонів перифе-
ричних нервів та, відповідно, сповільненням
передачі сигналів моторними та сенсорними
нервами призводить до виникнення синдрому
«діабетичної стопи» [1].
Внаслідок гіперглікемії посилюється ут-
ворення вільних радикалів, в першу чергу су-
пероксид-аніону, який взаємодіючи з іншими
активними формами кисню перетворюється у
гідроксил-радикал, пероксид водню та перок-
синітрит (ONOO–) [2]. Зростання вмісту пе-
роксинітриту, який на сьогодні є визнаним ок-
сидантом номер один у біологічних системах,
призводить до розвитку оксидативно-нітроза-
тивного стресу, що супроводжується нітрози-
люванням протеїнів, пероксидним окислен-
ням ліпідів, розривами в ДНК, змінами у
клітинній сигналізації, активацією полі(ADP-
рибозо)полімерази-1 (PARP-1), індукцією не-
крозу та апоптозу. Високий вміст нітрози-
льованих протеїнів за залишками тирозину
у тканинах організму є одним із ранніх мар-
керів, який свідчить про початок або наявність
хронічних ускладнень при цукровому діабеті
[3]. Так, підвищений рівень нітрозильованих
протеїнів було виявлено як за діабету 1-го, так
і 2-го типів у сідничному нерві (шванівських
клітинах), нирках (мезангіальних клітинах) та
сітківці ока [3, 4]. Існують дані про те, що тра-
диційні антиоксиданти (вітаміни Е і С, дибу-
нол та ін.) є малоефективними в руйнуванні та
запобіганні утворення пероксинітриту [5].
Дослідженнями в останні роки виявлено
важливу роль поліфенолів червоних виноград-
них вин, серед яких вирізняють проантоціані-
ди, похідні катехінів та низку інших похідних
флавоноїдів, у профілактиці серцево-судин-
них захворювань [6]. Відомо, що поліфеноли
екСПеРиМентАльнІ Роботи
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 1 109
червоних вин здатні взаємодіяти з протеїна-
ми плазми та клітинними елементами крові,
запобігаючи передчасному окисленню їхніх
молекулярних комплексів, спричиненому ок-
сидативним стресом. Також показано значну
бактерицидну та антивірусну дію цих речовин.
За оксидативного стресу виявлено протекторну
дію поліфенолів червоних вин на функціону-
вання деяких систем та органів при цукровому
діабеті та метаболічному синдромі [7]. Однак
питання стосовно протекторної здатності ви-
ноградних вин на функціонування перифе-
ричної нервової системи за цукрового діабету
на сьогодні є маловивченим.
Метою роботи було дослідити та порівня-
ти вплив червоного та білого вин, основними
діючими речовинами яких вважають полі-
феноли, на здатність запобігати утворенню
нітротирозинмодифікованих протеїнів та ак-
тивації PARP-1 у периферичній нервовій сис-
темі щурів при експериментальному цукрово-
му діабеті.
матеріали і методи
Дослідження проводили на щурах-самцях
лінії Вістар з масою тіла 120–150 г. Експери-
менти проводили згідно із «Загальними прин-
ципами роботи на тваринах», затвердженими
I Національним конгресом по біоетиці (Київ,
Україна, 2001) і погодженими з положеннями
«Європейської конвенції по захисту хребетних
тварин, які використовуються в експеримен-
тальних та інших наукових цілях» (Страсбург,
Франція, 1985).
У роботі використовували кролячі анти-
нітротирозинові антитіла (Upstate, США),
мишачі анти-полі(ADP)-рибоза антитіла
(Trevigen, Inc., США), козячі анти-кролячі, мі-
чені Alexa Fluor 488, (Molecular Probes, США),
козячі анти-кролячі, мічені пероксидазою,
(Vector Laboratories, США), реагент для підси-
лення флуоресцентного сигналу гістохімічних
зрізів (Invitrogen, США), реактив для поси-
леної хемілюмінесценції (Amersham, Велика
Британія).
Для індукції 1-го типу діабету щурам
внутрішньочеревно вводився стрептозото-
цин (50 мг/кг) в цитратному буфері (pH 5,5).
Хворими на діабет вважалися ті тварини, в
яких рівень глюкози у крові був > 13,8 мМ/л
(240 мг/дл). Вміст глюкози вимірювали за до-
помогою глюкометра «Accu-Check» на 3-ю добу
після індукції діабету та в кінці 4-тижневого
періоду захворювання.
Щурі споживали розведене у питній воді
вино у дозі, що відповідає 300 мл вина/70 кг
маси тіла/добу (з моніторингом та корекцією
об’єму кожної доби), протягом двох тижнів пе-
ред та протягом місяця після індукції діабету.
Вибрана нами концентрація вина є середньою
по відношенню до низьких (150–200 мл) та ви-
соких концентрацій (400–500 мл вина/70 кг
маси тіла/добу) [7]. Біле столове вино було
виготовлене з винограду сорту «Ркацителі» за
кахетинською технологією, червоне – з виног-
раду сорту «Каберне-Совіньон» за класичною
технологією. Вміст титрованих кислот був 4,5,
та 5,47 г/дм3; масова концентрація фенольних
сполук – 1700,00 та 2309,31 мг/дм3 відповідно;
масова концентрація барвників становила 0 та
443,8 мг/дм3 відповідно, а масова концентра-
ція проціанідинів – 780,0 та 936,0 мг/дм3 відпо-
відно.
Щурів було розділено на 6 груп: 1) конт-
рольні щури (К); 2) контрольні щури, які одер-
жували біле вино (К+БВ); 3) контрольні щури,
які одержували червоне вино (К+ЧВ); 4) щури
хворі на діабет (Д); 5) щури, хворі на діабет,
які одержували біле вино (Д+БВ); 6) щури
хворі на діабет, які одержували червоне вино
(Д+ЧВ).
По закінченні експерименту щурів дека-
пітували. Половину препарованого матеріалу
(сідничний нерв, дорсальні спинномозкові
ганглії (ДСМГ) поперекового відділу, спинний
мозок) негайно заморожували в рідкому азоті
для подальших експериментів з використан-
ням імуноблот-аналізу, а другу половину фік-
сували в 4%-му забуференому формаліні для
імуногістохімічого аналізу.
Заморожені зразки тканин зважували,
гомогенізували в буфері екстракції протеїнів
(1 : 10 вага/об’єм, у скляному гомогенізаторі
(Kimble-Kontes, США) на льодяній бані при
4 °С. Буфер екстракції містив 50 мМ трис-HCl,
pH 7,2; 150 мМ NaCl; 0,1% додецилсульфату
натрію (SDS); 1% NP-40; 5 мМ EДTA; 1 мМ
EGTA; 1% дезоксихолату натрію та інгібіторів
протеаз і фосфатаз: 1 мМ фенілметансуль-
фонілфторид (PMSF) (Fluka, Швейцарія),
10 мМ бензамідин (Sigma, США), 20 мкг/мл
апротиніну (Sigma, США), 10 мкг/мл лей-
пептину (Sigma, США), 1 мкг/мл пепстати-
ну (Fluka, Швейцарія), 1 мМ Na3VO4 (Sigma,
США). Гомогенат додатково обробляли на уль-
тразвуковому дезінтеграторі (3 рази по 10 сек)
та залишали екстрагуватися на льоду 20 хв.
Нерозчинну в детергенті фракцію осаджува-
ли центрифугуванням при 14 000 g протягом
20 хв при 4 °C. Концентрацію протеїну визна-
чали методом Петерсона [8]. Для наступного
розділення протеїнів у поліакриламідному гелі
(ПААГ), загальний протеїн лізатів тканин (10–
В. Р. ДРель, А. Р. ГнАтУш, А. Я. ЯлАнецький та ін.
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 1110
100 мкг) змішували з буфером для нанесення
(62,5 мМ трис-HCl, 1 мМ ЕДТА, 2% SDS, 5%
β-меркаптоетанол, 10% гліцерол, 0,025% бро-
мфеноловий синій, pH 6,8) у співвідношенні
1 : 1 (v/v) і прогрівали 5 хв на водяній бані при
95 °С [9]. Електрофорез в ПААГ проводили в
буферній системі Леммлі [9]. Для визначення
молекулярної маси протеїнів на електрофоре-
грамах використовували стандарти протеїнів
Kaleidoscope prestained standards (Bio-Rad
Laboratories, США).
Після електрофорезу протеїни переноси-
ли з ПААГ під дією електричного струму про-
тягом 2 год при 250 мА [10] в камері для елек-
трофорезу та електропереносу Mini-Protean III
(Bio-Rad Laboratories, США) на нітроцелюлоз-
ну мембрану (Whathman, Велика Британія) у
буфері, що містив: 25 мМ трис-HCl (pH 8,3),
20%-й метанол, 192 мМ гліцин. Вільні центри
зв’язування блокували протягом 2 год 2%-им
БСА в забуференому (137 мМ NaCl, 2,7 мМ
KCl, 4,3 мМ Na2HPO4, 1,7 мМ KH2PO4, pH 7,3)
фізіологічному розчині (ЗФР) з 0,05% тві-
ну-20. Мембрану інкубували з першим анти-
тілом (поліклональним антинітротирозиновим
у розведенні 1 : 1000) у блокуючому буфері
протягом 2 год. Відмивали мембрану у ЗФР з
0,1% твіну-20 3 рази по 5 хв. Відмиту мембра-
ну інкубували з другим антитілом, міченими
пероксидазою хрону: антикролячим, у розве-
денні 1:2000, у блокуючому буфері протягом
1 год. Мембрану відмивали у ЗФР з 0,1% тві-
ну-20, 3 рази по 5 хв. Імунореактивні сигнали
на мембрані виявляли за допомогою інкубації
мембрани з реактивами для посиленої хемілю-
мінесценції (згідно з протоколом виробника).
Мембрану після інкубації з хемілюмінесцент-
ними реактивами експонували на рентгенівсь-
кій плівці. Плівку проявляли у стандартному
фенідон-гідрохіноновому проявнику та фік-
сували кислим фіксажем. Для контролю од-
накового вмісту протеїнів у пробах, мембра-
ну звільняли від перших та других антитіл у
буфері, що містив: 25 мМ гліцин-HCl, pH 2,5;
1% SDS протягом 30 хв. Мембрану повтор-
но блокували в блокуючому буфері протягом
30 хв та повторно інкубували з анти-β-актино-
вими антитілами (Sigma, США). Денситограму
інтенсивності сигналів на відсканованих рент-
генівських плівках проводили з допомогою
програми Gel Pro Analyser 3.1.
Після фіксації тканини відмивали ЗФР та
переносили в 70%-й етиловий спирт з наступ-
ною дегідратацією та заливкою у парафінові
блоки. Депарафінізацію, гідратацію та від-
новлення антигензв’язувальних детермінант
5 мкм секцій сідничних нервів (поздовжнього
перерізу), дорсальних спинно-мозкових ганг-
ліїв та спинного мозку (поперечного перерізу)
здійснювали як описано [11]. Вільні центри
зв’язування блокували за допомогою інкубу-
вання протягом 1 год в 1%-му розчині БСА
та 10%-му розчині сироватки кози у ЗФР. Для
детекції полі-(ADP)-рибозильованих протеїнів
секції інкубували протягом ночі при 4 °С з
першим моноклональним анти-полі-(ADP)-
рибозильним антитілом у розведенні 1 : 250 у
ЗФР, який містив 1% БСА. Відмиті у ЗФР з
0,05%-им тритоном X-100 секції знову інкубу-
вали протягом 1 год з другим козячим анти-
мишачим антитілом, міченим Alexa Fluor 488
в робочому розведенні 1 : 200 у ЗФР, який
містив 1% БСА. Інкубацію здійснювали у при-
сутності флуоресцентного хромогену в камері,
захищеній від денного світла.
Флуоресцентну мікроскопію сідничних
нервів, ДСМГ та сірої речовини спинного моз-
ку (дорсальний ріг) здійснювали за допомогою
x40 акропланового об’єктива мікроскопа Nikon
Optiphot 2 (Nikon, Японія) та відеокамери для
мікроскопа DCM310 з програмним забезпе-
ченням ScopePhoto. Інтенсивність сигналів на
знімках визначали за допомогою програмно-
го забезпечення ImageJ 1.32 software (National
Institutes of Health, США); імуногістохімічні
результати оцінювали як M ± m для кожної
експериментальної групи. Для кожної тварини
із певної тканини знімали 5–7 фотографій та
розраховували середнє значення інтенсивності
свічення. Репрезентативні фотографії пред-
ставляли середнє значення інтенсивності сві-
чення для кожної групи (n = 5–7).
Статистичне оброблення одержаних даних
проводили з використанням загальноприйня-
тих методів параметричної і непараметричної
варіаційної статистики. У разі множинних
співвідношень груп використовували критерії
Стьюдента-Ньюмана-Кейля та багатофактор-
ного дисперсійного аналізу ANOVA (F-зна-
чення). Дані представлені у вигляді M ± m для
кожної експериментальної групи. Достовір-
ними вважали результати за показників віро-
гідності Р ≥ 0,95 (рівень значимості Р < 0,05).
Статистичне оброблення експериментальних
даних проводили за допомогою програми
Origin 7.0, Biostat 2008, Excel-2003.
результати та обговорення
По закінченні експерименту кінцева маса
контрольних щурів та щурів, які споживали
біле та червоне вина збільшується в середньо-
му на 52% порівняно із початком експерименту
екСПеРиМентАльнІ Роботи
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 1 111
(таблиця). На відміну від контролю, у групах
діабетичних тварин і діабетичних тварин, які
споживали біле вино, маса тіла щурів незначно
зменшується. Водночас у діабетичних щурів,
які споживали червоне вино, вона достовір-
но збільшується на 19% порівняно з вихідни-
ми даними на момент початку експерименту
(P < 0,05). Із результатів представлених в таб-
лиці, за порівняння показників, одержаних на
початку та по закінченні експерименту, видно
наростання гіперглікемії в діабетичних групах
тварин, а також відсутність гіпо- та гіперглі-
кемічних ефектів у групах тварин, яким дава-
ли виноградні вина.
Іншими дослідниками було показано, що
відносно високі дози ресвератролу (представ-
ника фітоалексинів), який входить до складу
поліфенолів червоних виноградних вин, до-
стовірно знижують рівень глюкози до норми
у щурів із діабетом, індукованим стрептозото-
цином [12]. Одержані результати вказують на
те, що зниження глюкози у крові діабетичних
тварин залежить як від одержаної дози, так і
від сорту вина.
Встановлено, що червоне вино не зни-
жує рівня глюкози у крові діабетичної групи
щурів, які його споживали, в той же час спос-
терігається збільшення маси тіла (P < 0,05).
Відомо, що при цукровому діабеті (в основно-
му 1-го типу) відбувається накопичення кето-
нових тіл із наступною дегідратацією тканин
організму, яка спричинює зниження маси тіла
тварин. При цьому розвивається кетоацидоз і
кома, яка може призвести до смерті [13, 14].
Можна припустити, що протекторна дія чер-
воного вина здійснюється на етапі утилізації/
виведення з організму кетонових тіл системою
клубочків та канальців нирок і стимуляції
реабсорбції електролітів і води із первинної
Маса тіла та концентрація глюкози у крові контрольних та хворих на діабет щурів, які споживали
червоне та біле вина(M ± m, n = 5–7)
Групи тварин
Вміст глюкози у крові, мМ Маса тіла, г
Початковий § Кінцевий Початковий § Кінцевий
К 6,2 ± 0,9 6,1 ± 1,3 136,6 ± 15,5 208,8 ± 18,9
К + БВ 6,0 ± 1,3 6,1 ± 1,2 148,8 ± 9,8 202,4 ± 16,7
К + ЧВ 6,4 ± 0,7 6,5 ± 0,9 138,8 ± 12,4 203,4 ± 18,4
Д 14,5 ± 1,4** 23,2 ± 2,4** 141,0 ± 11,7 133,4 ± 8,2**
Д + БВ 14,3 ± 1,5** 23,1 ± 3,7** 147,0 ± 9,9 138,0 ± 14,4**
Д + ЧВ 14,1 ± 1,7** 24,4 ± 4,8** 144,0 ± 13,9 171,8 ± 10,9*,#
*,** Р < 0,05 та Р < 0,01, відповідно, проти контрольної групи; # Р < 0,05 проти групи щурів, хворих на діабет,
яким не давали вина; § – 3-а доба після індукції діабету.
сечі, однак таке припущення потребує подаль-
ших досліджень.
Роль активних форм азотвмісних сполук,
у тому числі пероксинітриту, в патогенезі діа-
бету та його ускладнень є визначальною [3, 11].
Так, нітротирозин як маркер оксидативно-ніт-
розативного стресу акумулюється в ендотелії
судин, серці [3], сітківці ока та нирках тварин
із діабетом, індукованим стрептозотоцином, а
також у кровотоці [15], підшкірних кровонос-
них судинах, міокарді та нирках людей, хворих
на цукровий діабет як 1-го, так і 2-го типів. У
низці робіт показано, що нітротирозин нако-
пичується в сідничному нерві, сірій речовині
спинного мозку, дорсальних спинномозкових
гангліях щурів і мишей, хворих на цукровий
діабет, Zucker-ожирілих та Zucker-ожирілих
діабетичних щурів, а також лептин-нокаутних
мишах, і мишах, які споживали їжу з висо-
ким вмістом жиру [16, 17]. Ці дані вказують на
наявність ушкоджень периферичної нервової
системи, індукованих пероксинітритом як на
ранніх, так і пізніх етапах цукрового діабету
1-го і 2-го типів, а також на предіабетичних
стадіях.
Встановлено, що підвищений вміст нітро-
тирозину у плазмі крові корелює із ендо-
теліальними дисфункціями та перерозподі-
лом іннервації судомоторних нервів та їхніх
реакцій і є раннім маркером функціональних
порушень симпатичної нервової системи. По
суті рівень нітротирозину – один із важливих
інтегрованих факторів, що свідчить про роз-
виток периферичних діабетичних нейропатій у
пацієнтів, хворих на цукровий діабет 1-го типу
[15].
За допомогою імуноблот-аналізу виявле-
но зростання на 48% вмісту протеїнів, модифі-
кованих нітротирозином у сідничному нерві
В. Р. ДРель, А. Р. ГнАтУш, А. Я. ЯлАнецький та ін.
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 1112
щурів, хворих на діабет (рис. 1, А, б), на 60%
у дорсальних спинномозкових гангліях (рис. 2,
А, б) та на 40% у спинному мозку (рис. 3, А,
б). За дії червоного вина спостерігали частко-
ве (сідничний нерв) та повне (ДСМГ, спин-
ний мозок) повернення рівня нітротирозину
до рівня контролю у тварин, хворих на діабет.
Водночас у разі споживання білого вина має
місце часткове зменшення рівня нітротирози-
ну у ДСМГ та тенденція до його зменшення в
сідничному нерві та спинному мозку.
Визначення вмісту нітротирозину в сід-
ничному нерві, ДСМГ та у спинному мозку
показало його зростання у групі щурів із діа-
бетом на 48, 60 та 40% відповідно. Відомо, що
запобігання утворенню пероксинітриту як за
допомогою агентів, що його розщеплюють [17],
так і опосередковано через інгібування PARP-
1 та альдозоредуктази (поліоловий шлях) [18],
зумовлює відновлення провідності сенсорних
і моторних нервів та епідермальних нервових
закінчень. Можна припустити, що червоне
вино частково або повністю запобігає зростан-
ню нітрозильованих протеїнів і, таким чином,
відновлює або стабілізує функціонування пе-
риферичної нервової системи. Слід також за-
значити, що нещодавні клінічні дослідження
показали кореляцію між накопиченням перок-
синітриту у кровотоці та наявністю ускладнень
периферичної нервової системи при діабеті та
нейропатією автономної нервової системи сер-
ця в людей, хворих на цукровий діабет [19].
Рис. 1. Репрезентативний імуноблот-аналіз зразків сідничного нерва щурів із використанням анти-
нітротирозинових антитіл (А) та вміст нітротирозин-модифікованих протеїнів (б), (денситограма
з використанням програми GelPro 3.1). Вміст нітротирозину в контрольній групі прийнято за 100%
(M ± m, n = 5–7). ** P < 0,01 проти контрольної групи. # P < 0,05 проти групи щурів, хворих на діа-
бет, яким не давали вина
18
Рис. 1.
. 2.
87
116
39
200
кДa A.
β-актин
К К+
БВ
К+
ЧВ
Д Д+
БВ
Д+
ЧВ
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
.
**
#
К К+
БВ
К+
ЧВ
Д Д+
БВ
Д+
ЧВ
%
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
.
**
##
К К+
БВ
К+
ЧВ
Д Д+
БВ
Д+
ЧВ
%
#
200
A.
К К+
БВ
К+
ЧВ
Д Д+
БВ
Д+
ЧВ
39
кДа
β-актин
31
17
А Б
Ушкодження, спричинені пероксинітри-
том, можуть призводити до моторних і сенсор-
них нейропатій через різні механізми, серед
яких активація PARP-1 посідає одне із провід-
них місць [17]. Так, у відповідь на ушкодження
ДНК активними формами кисню активується
репараційний комплекс, до складу якого вхо-
дить ензим PARP, який полі-(ADP)-рибозилює
понад 300 протеїнів ядра і окремих цитоплаз-
матичних протеїнів. Серед цитоплазматичних
протеїнів є ензим гліколітичного циклу глі-
церальдегід-3-фосфатдегідрогеназа (G-3-PD).
Пригнічення активності G-3-PD поряд із висо-
ким вмістом глюкози у клітині призводить до
активації низки метаболічних та сигнальних
шляхів, внаслідок чого накопичуються мета-
боліти (сорбітол, фруктоза, уридинфосфат-N-
ацетилглюкозамін, метилгліоксаль (альдегідна
форма піровиноградної кислоти), не характер-
ні для фізіологічних процесів у нормі. Все це
призводить до значного посилення неензима-
тичного глікозилювання та запальних про-
цесів [2].
Інтенсивність світіння на імунофлуорес-
центних знімках, за яким визначали вміст
полі-(ADP)-рибозильованих протеїнів (про-
дуктів активованого ензиму PARP-1) у ядрах
шванівських клітин сідничного нерва зростає
на 51% в щурів, хворих на діабет. Це зростан-
ня нівелювалося у разі споживання червоного
вина (рис. 4, А, б). Біле вино спричинює час-
ткове зменшення вмісту полі-(ADP)-рибози-
екСПеРиМентАльнІ Роботи
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 1 113
Рис. 2. Репрезентативний імуноблот-аналіз зразків ДСМГ щурів із використанням антинітроти-
розинових антитіл (А) та вміст нітротирозинмодифікованих протеїнів (б), (денситограма з вико-
ристанням програми GelPro 3.1). Вміст нітротирозину в контрольній групі прийнято за 100% (M ± m,
n = 5–7). ** P < 0,01 проти контрольної групи. #,## P < 0,05 та < 0,01 проти групи щурів, хворих на
діабет, яким не давали вина
Рис. 3. Репрезентативний імуноблот-аналіз зразків спинного мозку щурів із використанням анти-
нітротирозинових антитіл (А) та вміст нітротирозин-модифікованих протеїнів (б), (денситограма
з використанням програми GelPro 3.1). Вміст нітротирозину в контрольній групі прийнято за 100%
(M ± m, n = 5–7). ** P < 0,01 проти контрольної групи. ## P < 0,01 проти групи щурів, хворих на
діабет, яким не давали вина
18
Рис. 1.
. 2.
87
116
39
200
кДa A.
β-актин
К К+
БВ
К+
ЧВ
Д Д+
БВ
Д+
ЧВ
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
.
**
#
К К+
БВ
К+
ЧВ
Д Д+
БВ
Д+
ЧВ
%
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
.
**
##
К К+
БВ
К+
ЧВ
Д Д+
БВ
Д+
ЧВ
%
#
200
A.
К К+
БВ
К+
ЧВ
Д Д+
БВ
Д+
ЧВ
39
кДа
β-актин
31
17
А Б
19
. 3.
. 4.
.
К К+БВ
Д
К+ЧВ
Д+ЧВД+БВ К К+
БВ
К+
ЧВ
Д Д+
БВ
Д+
ЧВ
. **
У
О
Ф
, x
10
6
##
0
2
4
6
8
.
**
##
К К+
БВ
К+
ЧВ
Д Д+
БВ
Д+
ЧВ
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
%
17
31
39
кДа
β-актин
A.
6
К К+
БВ
К+
ЧВ
Д Д+
БВ
Д+
ЧВ
А Б
льованих протеїнів у групі діабетичних щурів.
Водночас у дорсальних спинномозкових ганг-
ліях та спинному мозку вміст полі-(ADP)-ри-
бозильованих протеїнів у контрольних і діабе-
тичних групах щурів значно не відрізняється
між собою (рис. 5, А, б та В). Мікрофотогра-
фії відповідних тканин інших груп тварин не
представлено, оскільки вони не відрізняється
між собою.
Відомо, що патологічні зміни при ней-
ропатіях виникають, розвиваються і поши-
рюються в дистальних частинах нервів. Так,
при діабетичних нейропатіях спочатку відбу-
вається втрата сенсорної чутливості (зменшен-
ня кількості епідермальних нервових закін-
чень), а потім демієлінізація нерва із втратою
швидкості провідності сенсорних та моторних
нервів. Дегенерація як окремого аксона, так і
нервового волокна відбувається в напрямку із
периферії до центру і характеризується термі-
ном «смерть назад» [20]. Одержані результати
вказують на те, що при 4-тижневому діабеті у
щурів активується PARP-1 у сідничному нерві,
однак така активація відсутня у дорсальних
В. Р. ДРель, А. Р. ГнАтУш, А. Я. ЯлАнецький та ін.
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 1114
Рис. 4. Репрезентативні мікрофотографії імунофлуоресцентної мікроскопії зразків сідничного нерва
щурів з використанням антитіл до полі(ADP)-рибоза (А) та флуоресценція полі(ADP)-рибозильова-
них протеїнів (б), виражена в умовних одиницях флуоресценції (УоФ) з допомогою програми ImageJ.
к – контроль; Д – діабет; бВ – біле вино; ЧВ – червоне вино. збільшення x100 (M ± m, n = 5–7),
** P < 0,01, проти контрольної групи. ## P < 0,01 проти групи щурів, хворих на діабет, що додатково
не споживали вина
Рис. 5. Репрезентативні мікрофотографії імунофлуоресцентної мікроскопії зразків ДСМГ (А) і сірої
речовини спинного мозку на рівні поперекового відділу (задні роги) (б) щурів із використанням антитіл
до полі(ADP)-рибози та флуоресценція полі(ADP)-рибозильованих протеїнів (В), виражена в умовних
одиницях флуоресценції (УоФ) з допомогою програми ImageJ. к – контроль; Д – діабет. збільшення
x100 (M ± m, n = 5–7)
19
. 3.
. 4.
.
К К+БВ
Д
К+ЧВ
Д+ЧВД+БВ К К+
БВ
К+
ЧВ
Д Д+
БВ
Д+
ЧВ
. **
У
О
Ф
, x
10
6
##
0
2
4
6
8
.
**
##
К К+
БВ
К+
ЧВ
Д Д+
БВ
Д+
ЧВ
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
%
17
31
39
кДа
β-актин
A.
6
К К+
БВ
К+
ЧВ
Д Д+
БВ
Д+
ЧВ
А Б
20
. 5.
К Д
.
У
О
Ф
, x
10
6
0
2
4
6
8
К Д
Спинний мозок ДСМГ
.
К Д
К Д
.
ВА
Б
спинномозкових гангліях та спинному моз-
ку, для яких показники імунофлуоресценції
значно не відрізняється між собою (рис. 5, А,
б). Це підтвердило та розширило можливість
трактування попередніх дослідженнь, в яких
було показано, що структурновідмінні інгібі-
тори PARP-1 відновлювали провідність як
моторних, так і сенсорних нервів, нівелювали
екСПеРиМентАльнІ Роботи
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 1 115
явища нейроваскулярних дисфункцій, віднов-
лювали енергетичне забезпечення периферич-
ної нервової системи, а також знімали прояви
сенсорних нейропатій в щурів із 4-тижневим
діабетом [17]. Тому активація PARP-1 в сід-
ничному нерві та відсутність такої у ДСМГ та
спинному мозку свідчить про роль цього ен-
зиму в розвитку саме ранніх нейропатій пери-
феричної нервової системи при діабеті. Здат-
ність червоного вина проявляти інгібуючу дію
на PARP-1 може свідчити про його потенційну
можливість запобігати розвиткові ранніх ней-
ропатій при цукровому діабеті.
Таким чином, наші дослідження підтвер-
джують гіпотезу про те, що оксидативно-ніт-
розативний стрес проявляється вже на ранніх
етапах розвитку цукрового діабету, про що
свідчить накопичення нітротирозину, одного
із ранніх маркерів даного процесу в сіднич-
ному нерві, дорсально спинномозкових ган-
гліях та спинному мозку. Активація PARP-1
у сідничному нерві також може бути раннім
тестовим показником розвитку нейропатій,
поряд із накопиченням нітротирозину. Здат-
ність червоного вина запобігати накопиченню
нітротирозину та полі-(ADP)-рибозильованих
протеїнів, а також позитивно впливати на зрос-
тання маси тіла діабетичних тварин протягом
експерименту, може бути доказом його про-
текторної дії. Виявлений нами протекторний
ефект червоного вина на досліджувані показ-
ники найімовірніше здійснюється за рахунок
поліфенолів, які містяться в ньому. Проведені
дослідження свідчать про перспективність за-
стосування червоних вин під час лікування
ускладнень цукрового діабету та при створенні
нових препаратів на їхній основі.
протекторное деЙствие
винограднЫх вин
при нитрозативном
стрессе, вЫзванном
ЭкспериментальнЫм
сахарнЫм диабетом
В. Р. Дрель1, А. Р. Гнатуш1,
А. Я. Яланецкий2, В. Г. Гержиковая2,
В. и. Мизин2, В. А. загоруйко2,
н. А. Сибирная1
1Львовский национальный университет
им. Ивана Франко, Украина;
e-mail: sybirna_natalia@yahoo.com;
2Национальный институт винограда и
вина “Магарач”, Ялта, Украина
Установлено, что в условиях оксидативно-
нитрозативного стресса, вызванном сахарным
диабетом, красное и белое виноградные вина,
полифенолы которых считаются основными
действующими веществами, снижают уровень
нитротирозинмодифицированных протеинов
до уровня контроля в седалищном нерве, дор-
сальных спинномозговых ганглиях и спинном
мозге крыс. Показано также снижение ак-
тивности поли(ADP-рибозо)полимеразы-1 до
уровня контроля в седалищном нерве диабети-
ческих крыс, которым давали красное вино. В
течение эксперимента обнаружено увеличение
массы тела в контрольной и в группах крыс,
больных сахарным диабетом, которым давали
красное вино на 52 и 19% соответственно.
Полученные результаты обосновывают
целесообразность применения красных вин и
возможность создания на их основе препара-
тов для профилактики и лечения нейропатий
при сахарном диабете.
К л ю ч е в ы е с л о в а: сахарный диабет,
оксидативно-нитрозативный стресс, красное и
белое вина, периферическая нервная система.
В. Р. ДРель, А. Р. ГнАтУш, А. Я. ЯлАнецький та ін.
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 1116
PROTECTIVE EFFECT OF GRAPE WINE
UNDER EXPERIMENTAL NITROSATIVE
DIABETES-ASSOCIATED OXIDATIVE
STRESS
V. R. Drel1, A. R. Gnatush1,
A. Ya. Yalanecky2, V. G. Gerzhykova2,
V. I. Mizin2, V. A. Zagoruyko2, N. O. Sybirna1
1Ivan Franko National University of Lviv, Ukraine;
e-mail: sybirna_natalia@yahoo.com;
2National Institute for Vine and Wine
“Magarach”, Yalta, Ukraine
S u m m a r y
It was found that under the diabetes-induced
oxidative-nitrosative stress, red and white wines,
which polyphenols are considered to be the main
active components, decrease the level of nitrotyro-
sine-modified proteins toward the control level in
sciatic nerve, dorsal root ganglia and spinal cord
of animals with diabetes mellitus. A decrease of
the activity of poly(ADP-ribose)polymerase-1 to
the control level in the sciatic nerve of diabetic
rats with red wine consumption was also shown.
During the experiment the body weight of the con-
trol group and diabetic groups of rats with con-
sumption of red wine was significantly increased
by 52% and 19% accordingly.
The present results allow us to assume an im-
portant role of red wine and possibility of produc-
tion of its preparations for prevention and treat-
ment of diabetic neuropathy.
K e y w o r d s: diabetes mellitus, oxidative-
nitrosative stress, red and white wines, peripheral
nervous system.
1. King H., Aubert R. E., Herman W. H. // Diabetes
Care. – 1998. – 21, N 9. – P. 1414–1431.
2. Brownlee M. // Diabetes. – 2005. – 54, N 6. –
P. 1615–1625.
3. Pacher P., Beckman J. S., Liaudet L. // Physiol.
Rev. – 2007. – 87, N 1. – P. 315–424.
4. Drel V. R., Pacher P., Stevens M. J., Obroso-
va I. G. // Free Radic. Biol. Med. – 2006. –
40, N 8. – P. 1454–1465.
5. Economides P. A., Khaodhiar L., Caselli A. et al.
// Diabetes. – 2005. – 54, N 1. – P. 204–211.
6. Marfella R., Cacciapuoti F., Siniscalchi M. et al.
// Diabet. Med. – 2006. – 23, N 9. – P. 974–981.
7. Montilla P., Barcos M., Munoz M. C. et al. //
J. Biochem. Mol. Biol. – 2005. – 38, N 5. –
P. 539–544.
8. Peterson G. L. // Anal. Biochem. – 1977. – 83,
N 2. – P. 346–356.
9. Laemmli U. K. // Nature. – 1970. – 227,
N 5259. – P. 680–684.
10. Towbin H., Staehelin T., Gordon J. // Biotech-
nology. – 1992. – 24. – P. 145–149.
11. Drel V. R., Pacher P., Vareniuk I. et al. // Eur. J.
Pharmacol. – 2007. – 569, N 1–2. – P. 48–58.
12. Palsamy P., Subramanian S. // Biomed. Pharma-
cother. – 2008. – 62, N 9. – P. 598–560.
13. Gouni-Berthold I., Krone W. // Med. Klin.
(Munich). – 2006. – 101 (Suppl 1). – P. 100–105.
14. Kitabchi A. E., Umpierrez G. E., Fisher J. N. et
al. // J. Clin. Endocrin. Metab. – 2008. – 93,
N 5. – P. 1541–1552.
15. Ceriello A. // Int. J. Clin. Pract. Suppl. –
2002. – 129. – P. 51–58.
16. Coppey L. J., Gellett J. S., Davidson E. P. et
al. // Br. J. Pharmacol. – 2001. – 134, N 1. –
P. 21–29.
17. Obrosova I. G., Drel V. R., Oltman C. L. et al. //
Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. – 2007. –
293. – P. E1645–E1655.
18. Obrosova I. G., Xu W., Lyzogubov V. V. et al. //
Free Radic. Biol. Med. – 2008. – 44, N. 6. –
P. 972–981.
19. Ziegler D., Sohr C. G., Nourooz-Zadeh J. //
Diabetes Care. – 2004. – 27. – P. 2178–2183.
20. Dobretsov M., Romanovsky D., Stimers J. R. //
World J. Gastroenterol. – 2007. – 13, N 2. –
P. 175–191.
Отримано 22.10.2009
екСПеРиМентАльнІ Роботи
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-19030 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0201-8470 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-12-07T16:26:26Z |
| publishDate | 2010 |
| publisher | Інститут біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Дрель, В.Р. Гнатуш, А.Р. Яланецький, А.Я. Гержикова, В.Г. Мізін, В.І. Загоруйко, В.А. Сибірна, Н.О. 2011-04-16T09:51:13Z 2011-04-16T09:51:13Z 2010 Протекторна дія виноградних вин за нітрозативного стресу, зумовленого експериментальним цукровим діабетом / В.Р. Дрель, А.Р. Гнатуш, А.Я. Яланецький, В.Г. Гержикова, В.І. Мізін, В.А. Загоруйко, Н.О. Сибірна // Укр. біохім. журн. — 2010. — Т. 82, № 1. — С. 108-116. — Бібліогр.: 20 назв. — укр. 0201-8470 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/19030 577:616.379-008.64:663.2:611.83 Виявлено, що за оксидативно-нітрозативного стресу, зумовленого цукровим діабетом, червоне та біле виноградні вина, поліфеноли яких вважаються основними діючими речовинами, знижують рівень нітротирозин-модифікованих протеїнів до рівня контролю в сідничному нерві, дорсальних спинномозкових гангліях та спинному мозку щурів. Показано нормалізацію активності полі(ADP-рибозо)полімерази-1 в сідничному нерві діабетичних щурів під дією червоного вина. За час експерименту виявлено зростання маси тіла контрольних щурів та тварин із цукровим діабетом, яким вводили червоне вино на 52 та 19% відповідно. Одержані результати свідчать про можливість застосування червоних вин та створення препаратів на їхній основі для профілактики та лікування ускладнень цукрового діабету. Установлено, что в условиях оксидативно-нитрозативного стресса, вызванном сахарным диабетом, красное и белое виноградные вина, полифенолы которых считаются основными действующими веществами, снижают уровень нитротирозинмодифицированных протеинов до уровня контроля в седалищном нерве, дорсальных спинномозговых ганглиях и спинном мозге крыс. Показано также снижение активности поли(ADP-рибозо)полимеразы-1 до уровня контроля в седалищном нерве диабетических крыс, которым давали красное вино. В течение эксперимента обнаружено увеличение массы тела в контрольной и в группах крыс, больных сахарным диабетом, которым давали красное вино на 52 и 19% соответственно. Полученные результаты обосновывают целесообразность применения красных вин и возможность создания на их основе препаратов для профилактики и лечения нейропатий при сахарном диабете. It was found that under the diabetes-induced oxidative-nitrosative stress, red and white wines, which polyphenols are considered to be the main active components, decrease the level of nitrotyrosine-modified proteins toward the control level in sciatic nerve, dorsal root ganglia and spinal cord of animals with diabetes mellitus. A decrease of the activity of poly(ADP-ribose)polymerase-1 to the control level in the sciatic nerve of diabetic rats with red wine consumption was also shown. During the experiment the body weight of the control group and diabetic groups of rats with consumption of red wine was significantly increased by 52% and 19% accordingly. The present results allow us to assume an important role of red wine and possibility of production of its preparations for prevention and treatment of diabetic neuropathy. uk Інститут біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України Український біохімічний журнал Експериментальні роботи Протекторна дія виноградних вин за нітрозативного стресу, зумовленого експериментальним цукровим діабетом Протекторное действие виноградных вин при нитрозативном стрессе, вызванном экспериментальным сахарным диабетом Protective effect of grape wine under experimental nitrosative diabetes-associated oxidative stress Article published earlier |
| spellingShingle | Протекторна дія виноградних вин за нітрозативного стресу, зумовленого експериментальним цукровим діабетом Дрель, В.Р. Гнатуш, А.Р. Яланецький, А.Я. Гержикова, В.Г. Мізін, В.І. Загоруйко, В.А. Сибірна, Н.О. Експериментальні роботи |
| title | Протекторна дія виноградних вин за нітрозативного стресу, зумовленого експериментальним цукровим діабетом |
| title_alt | Протекторное действие виноградных вин при нитрозативном стрессе, вызванном экспериментальным сахарным диабетом Protective effect of grape wine under experimental nitrosative diabetes-associated oxidative stress |
| title_full | Протекторна дія виноградних вин за нітрозативного стресу, зумовленого експериментальним цукровим діабетом |
| title_fullStr | Протекторна дія виноградних вин за нітрозативного стресу, зумовленого експериментальним цукровим діабетом |
| title_full_unstemmed | Протекторна дія виноградних вин за нітрозативного стресу, зумовленого експериментальним цукровим діабетом |
| title_short | Протекторна дія виноградних вин за нітрозативного стресу, зумовленого експериментальним цукровим діабетом |
| title_sort | протекторна дія виноградних вин за нітрозативного стресу, зумовленого експериментальним цукровим діабетом |
| topic | Експериментальні роботи |
| topic_facet | Експериментальні роботи |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/19030 |
| work_keys_str_mv | AT drelʹvr protektornadíâvinogradnihvinzanítrozativnogostresuzumovlenogoeksperimentalʹnimcukrovimdíabetom AT gnatušar protektornadíâvinogradnihvinzanítrozativnogostresuzumovlenogoeksperimentalʹnimcukrovimdíabetom AT âlanecʹkiiaâ protektornadíâvinogradnihvinzanítrozativnogostresuzumovlenogoeksperimentalʹnimcukrovimdíabetom AT geržikovavg protektornadíâvinogradnihvinzanítrozativnogostresuzumovlenogoeksperimentalʹnimcukrovimdíabetom AT mízínví protektornadíâvinogradnihvinzanítrozativnogostresuzumovlenogoeksperimentalʹnimcukrovimdíabetom AT zagoruikova protektornadíâvinogradnihvinzanítrozativnogostresuzumovlenogoeksperimentalʹnimcukrovimdíabetom AT sibírnano protektornadíâvinogradnihvinzanítrozativnogostresuzumovlenogoeksperimentalʹnimcukrovimdíabetom AT drelʹvr protektornoedeistvievinogradnyhvinprinitrozativnomstressevyzvannoméksperimentalʹnymsaharnymdiabetom AT gnatušar protektornoedeistvievinogradnyhvinprinitrozativnomstressevyzvannoméksperimentalʹnymsaharnymdiabetom AT âlanecʹkiiaâ protektornoedeistvievinogradnyhvinprinitrozativnomstressevyzvannoméksperimentalʹnymsaharnymdiabetom AT geržikovavg protektornoedeistvievinogradnyhvinprinitrozativnomstressevyzvannoméksperimentalʹnymsaharnymdiabetom AT mízínví protektornoedeistvievinogradnyhvinprinitrozativnomstressevyzvannoméksperimentalʹnymsaharnymdiabetom AT zagoruikova protektornoedeistvievinogradnyhvinprinitrozativnomstressevyzvannoméksperimentalʹnymsaharnymdiabetom AT sibírnano protektornoedeistvievinogradnyhvinprinitrozativnomstressevyzvannoméksperimentalʹnymsaharnymdiabetom AT drelʹvr protectiveeffectofgrapewineunderexperimentalnitrosativediabetesassociatedoxidativestress AT gnatušar protectiveeffectofgrapewineunderexperimentalnitrosativediabetesassociatedoxidativestress AT âlanecʹkiiaâ protectiveeffectofgrapewineunderexperimentalnitrosativediabetesassociatedoxidativestress AT geržikovavg protectiveeffectofgrapewineunderexperimentalnitrosativediabetesassociatedoxidativestress AT mízínví protectiveeffectofgrapewineunderexperimentalnitrosativediabetesassociatedoxidativestress AT zagoruikova protectiveeffectofgrapewineunderexperimentalnitrosativediabetesassociatedoxidativestress AT sibírnano protectiveeffectofgrapewineunderexperimentalnitrosativediabetesassociatedoxidativestress |