Роль Src-тирозинкіназ у підвищенні проникності кровоносних судин при експериментальному виразковому коліті
Показано збільшення активності Src без змін у загальному рівні Src-протеїну на ранніх етапах розвитку спричиненого йодоацетамідом виразкового коліту в щурів. Введення Src інгібітора РР 1 (0,2 мг/100 г, підшкірно) зменшувало (Р ≤ 0,001) проникність кровоносних судин та рівень pSrc^Tyr416 у слизовій о...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Український біохімічний журнал |
|---|---|
| Дата: | 2010 |
| Автори: | , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Українська |
| Опубліковано: |
Інститут біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України
2010
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/19031 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Роль Src-тирозинкіназ у підвищенні проникності кровоносних судин при експериментальному виразковому коліті / Г.М. Толстанова, Т.А. Хоменко, Л.І. Остапченко, Ш. Сабо // Укр. біохім. журн. — 2010. — Т. 82, № 1. — С. 117-122. — Бібліогр.: 22 назв. — укр. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860267579518484480 |
|---|---|
| author | Толстанова, Г.М. Хоменко, Т.А. Остапченко, Л.І. Сабо, Ш. |
| author_facet | Толстанова, Г.М. Хоменко, Т.А. Остапченко, Л.І. Сабо, Ш. |
| citation_txt | Роль Src-тирозинкіназ у підвищенні проникності кровоносних судин при експериментальному виразковому коліті / Г.М. Толстанова, Т.А. Хоменко, Л.І. Остапченко, Ш. Сабо // Укр. біохім. журн. — 2010. — Т. 82, № 1. — С. 117-122. — Бібліогр.: 22 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Український біохімічний журнал |
| description | Показано збільшення активності Src без змін у загальному рівні Src-протеїну на ранніх етапах розвитку спричиненого йодоацетамідом виразкового коліту в щурів. Введення Src інгібітора РР 1 (0,2 мг/100 г, підшкірно) зменшувало (Р ≤ 0,001) проникність кровоносних судин та рівень pSrc^Tyr416 у слизовій оболонці товстої кишки при виразковому коліті, спричиненому йодоацетамідом. Аутофосфорилювання та підвищення експресії VEGFR-2 під впливом йодоацетаміду було асоційоване з активацією Src та збільшенням міжпротеїнової взаємодії β-арестину 2 з VE-кадгерином, що можливо призводить до порушення адгезивних контактів між ендотеліальними клітинами. Дійшли висновку про провідну роль Src-тирозинкінази в механізмах підвищення проникності кровоносних судин товстої кишки при експериментальному виразковому коліті.
Показано увеличение активности Src без изменения общего уровня Src-протеина на ранних этапах развития язвенного колита (ЯК), вызванного йодоацетамидом. Введенние Src ингибитора РР1 (0,2 мг/100 г, подкожно) уменьшало (р ≤ 0,001) проницаемость кровеносных сосудов (ПКС) толстой кишки и уровень pSrc^Tyr416 на фоне ЯК вызванного, йодоацетамидом. Вызванное йодоацетамидом аутофосфорилирование и повышение экспрессии VEGFR-2 ассоциировано с активацией Src и увеличением межпротеинового взаимодействия между β-аррестином 2 и VE-кадгерином, что влечет за собой нарушение адгезивных контактов между эндотелиальными клетками. Сделан вывод о ведущей роли Src киназ в механизмах повышения ПКС толстой кишки при экспериментальном ЯК.
We have shown the increase of Src^Tyr416 phosphorylation in rat colonic mucosa at early stages of 6% iodoacetamide-induced ulcerative colitis (UC), while the level of Src protein expression was not changed. Pretreatment of rats with Src inhibitor PP1 (0.2 mg/100 g, subcutaneously) decreased the colonic vascular permeability (VP) (Р ≤ 0.001) and pSrc^Tyr416 level during iodoacetamide-UC. Iodoacetamide-induced autophosphorylation and upregulation of VEGFR-2 was associated with Src activation in colonic mucosa of rats. Sequentially, protein-protein interaction between β-arrestine2 and VE-cadherine was enhanced, that might be a reason of colonic endothelium barrier disruption. We concluded that Src plays a key role in the mechanisms of increasingthe colonic VP during experimental UC.
|
| first_indexed | 2025-12-07T19:03:06Z |
| format | Article |
| fulltext |
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 1 117
УДК: 616.34-002.44-092+616.345:616.13/14+616-008.831
роль src-тирозинкіназ у підвищенні
проникності кровоносних судин
при експериментальному виразковому коліті
Г. М. ТОЛСТАНОВА1,2, Т. А. ХОМЕНКО1, Л. І. ОСТАПЧЕНКО2,
Ш. САБО1, С. ШАНдОр1
1Каліфорнійський університет, Ірвайн, США;
2Київський національний університет імені Тараса Шевченка, Україна;
e-mail: gtolstanova@gmail.com
Показано збільшення активності Src без змін у загальному рівні Src-протеїну на ранніх ета-
пах розвитку спричиненого йодоацетамідом виразкового коліту в щурів. Введення Src інгібітора рр1
(0,2 мг/100 г, підшкірно) зменшувало (р ≤ 0,001) проникність кровоносних судин та рівень pSrcTyr416 у
слизовій оболонці товстої кишки при виразковому коліті, спричиненому йодоацетамідом. Аутофос-
форилювання та підвищення експресії VEGFR-2 під впливом йодоацетаміду було асоційоване з ак-
тивацією Src та збільшенням міжпротеїнової взаємодії β-арестину 2 з VE-кадгерином, що можливо
призводить до порушення адгезивних контактів між ендотеліальними клітинами. дійшли висновку
про провідну роль Src-тирозинкінази в механізмах підвищення проникності кровоносних судин товстої
кишки при експериментальному виразковому коліті.
К л ю ч о в і с л о в а: йодоацетамід, Src-тирозинкінази, виразковий коліт, проникність крово-
носних судин, VEGF.
Запальні захворювання кишечника, до
яких належать виразковий коліт (ВК)
та хвороба Крона – хронічні запален-
ня стінки кишечника невизначеної етіоло-
гії [1]. Роботами останніх років показано роль
неконтрольованого ангіогенезу в патогенезі
запальних захворювань кишечника [2, 3]. Но-
воутворені судини в місці запалення характе-
ризуються порушеною архітектонікою, підви-
щеною проникністю, що сприяє збільшенню
інфільтрації лейкоцитів, затримці процесу
гоєння виразок та хронізації процесу запален-
ня [4].
Дослідження терапевтичної ефективності
різних проангіогенних факторів росту при
запальних захворюваннях кишечника вияви-
ли їхню різноспрямовану дію. Так, введення
рекомбінантного протеїну до тромбоцитарно-
го фактора росту (PDGF) [5], фактора росту
фібробластів (bFGF) [5] чи фактора росту ге-
патоцитів (HGF) [6] на моделях запальних за-
хворювань кишечника справляло лікувальну
дію. Навпаки, підвищення рівня фактора росту
кровоносних судин (VEGF) шляхом введення
VEGF аденовірусу погіршувало стан хворого
[7], а нейтралізуюче антитіло до VEGF покра-
щувало його [8]. VEGF, на відміну від інших
проангіогенних факторів росту (PDGF, bFGF,
HGF), окрім стимуляції проліферації та мігра-
ції ендотеліальних клітин, здатен підвищувати
проникність кровоносних судин і за потужніс-
тю дії є сильнішим за гістамін у 50 тис. разів
[9]. У наших дослідженнях було показано, що
патологічна дія VEGF при експерименталь-
ному ВК пов’язана саме з підвищенням про-
никності кровоносних судин у місці ураження
та збільшенням інфільтрації лейкоцитів [8]. Ці
дані узгоджуються з результатами, одержани-
ми іншими дослідниками [7].
Родину Src-протеїнкіназ (абревіатура від
саркома) вперше описано та найбільш до-
сліджено родину нерецепторних тирозинкі-
наз. До цієї родини належать Src, Fyn, Yes,
Fgr, які широко представлені в різних ткани-
нах, та Lck, Blk, Lyn, Hck, локалізація яких
обмежується гематопоетичними клітинами
[10]. Дослідження на мишах із відсутнім ге-
ном c-Src (c-Src-/--миші) показали провідну
роль цих кіназ в VEGF-опосередкованій про-
никності кровоносних судин, тоді як вплив
VEGF на проліферацію та міграцію ендо-
теліальних клітин залишався без змін [11].
Інтрадермальне введення VEGF аденовіруса у
вухо чи стереотаксичне – в півкулі головного
мозку c-Src-/--мишей не спричинювало збіль-
шення проникності кровоносних судин у зоні
введення порівняно з нормальними тварина-
ми. Більше того, J. Gavard та J. S. Gutkind [12]
детально дослідили Src-залежний внутрішньо-
клітинний шлях VEGF-опосередкованої про-
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 1118
никності шару ендотеліальних клітин. Вони
показали, що активація VEGF рецептора-2
(VEGFR-2/Flk-1) VEGF зумовлює Src-залежне
фосфорилювання цитоплазматичного кінця
VE-кадгерину. Фосфорильований VE-кадге-
рин зв’язується з β-арестином 2, що сприяє ін-
терналізації VE-кадгерину у везикулу, вкриту
клатрином, та, як наслідок, роз’єднанню адге-
зивних контактів між ендотеліальними кліти-
нами.
Таким чином, зважаючи на провідну
роль Src-кіназ в VEGF-опосередкованій про-
никності кровоносних судин, метою нашої ро-
боти було дослідити роль Src-тирозинкіназ у
підвищенні проникності кровоносних судин
при експериментальному виразковому коліті.
матеріали і методи
Дослідження проводили на 50 щурах-сам-
ках лінії Sprague-Dawley з масою тіла 160–200 г.
Виразковий коліт спричинювали одноразовим
ректальним введенням (7 см від анального
отвору) 0,1 мл 6%-го розчину йодоацетаміду
(Sigma, США), розчиненим в 1%-му розчині
метилцелюлози (Sigma, США), за допомогою
гумового катетера S8 (Rüsch, Німеччина) [13].
Тваринам контрольної групи вводили 0,1 мл
1%-го розчину метилцелюлози. Щурів умертв-
ляли шляхом інгаляції з СО2 та наступною
цервікальною дислокацією через 0,5, 1, 2 і
6 год після введення йодоацетаміду. Потім ви-
даляли ділянку товстої кишки довжиною 7 см
від анального отвору та відразу занурювали її
в рідкий азот.
Ізольовану ділянку товстої кишки гомо-
генізували в лізуючому буфері (50 мМ трис-
HCl, pH 8,0; 150 мМ NaCl; 1% IGEPAL) з до-
даванням інгібіторів протеїназ (Sigma, США)
та фосфатаз (ThermoScientific, США). Кон-
центрацію загального протеїну вимірювали
за методом Бредфорд з використанням набору
«Bio-Rad для протеїнового аналізу» (Bio-Rad,
США). Розділення та визначення протеїну
(50 чи 100 мкг заг. протеїну/зразок) методом
вестерн-блотинг проводили в 10%- чи 7%-му
SDS-поліакріламідному гелі з наступним пе-
реносом на Hybond-ECL нітроцелюлозну мем-
брану (Amersham Biosciences, США) згідно зі
стандартним протоколом фірми Bio-Rad. Ан-
титіла проти VEGFR-2 (1 : 200), pVEGFR-2/
Flk-1Tyr951 (1 : 250) (Santa-Cruz Biotech., США),
Src (1 : 1000) (Cell signaling, США) викорис-
товували для визначення рівня відповідних
протеїнів у стінці товстої кишки з наступною
інкубацією із вторинним HRP-кон’югованим
антитілом (1 : 3000; Santa-Cruz Biotech., США).
Як відомо, активність Src регулюється шляхом
фосфорилювання двох тирозинових залишків:
розташованого в активному центрі каталітич-
ного домену Tyr416, який відповідає за акти-
вацію, та Tyr527, локалізованого в С-кінцевій
області ензиму, що пов’язаний з інактивацією
[15]. Для визначення ступеня активації Src-
протеїну ми вимірювали експресію фосфо-
рильованого Src-протеїну, використовуючи
первинне антитіло, що розпізнає ендогенний
рівень Src у стані фосфорилювання за ти-
розином 416 [pSrcTyr416 (1 : 750), Cell signaling,
США)]. Візуалізацію вестерн-блотингу прово-
дили ECL-реагентом (Amersham Biosciences,
США). Результати різних експериментів (не
менше трьох) аналізували за допомогою про-
грами Phoretix1D.
Для імунопреципітації використовували
3 мкг первинного антитіла проти VE-кадге-
рину (Santa Cruz Biotech., США) із розрахун-
ку на 250 мкг загального протеїну на про-
бу та 100 мкл гранул Dynabeads-протеїну G
(Invitrogen, США). Зазначені компоненти
змішували на роторі протягом однієї годи-
ни при 4 °C. Після цього імунний комплекс
промивали 3 рази 1 мл фосфатного буфера
(PBS, рН 7,4), додавали 40 мкл буфера Леммлі
для вестерн-блотингу та інкубували 5 хв, при
95 °C. Імунопреципітовані протеїни розділяли
та візуалізували за допомогою вестерн-блотин-
гу з використанням первинних антитіл проти
VE-кадгерину (1 : 500), β-арестину 2 (1 : 500)
(Santa Cruz Biotech., США).
Для кількісного аналізу проникності кро-
воносних судин товстої кишки ми використо-
вували трипановий синій (фарба Еванса) згід-
но з рекомендаціями [14]. Витікання фарби у
стінку кишки свідчить про підвищення про-
никності судин. Щурів анестезували ізофлу-
раном. Фарбу Еванса (0,4 мг/100 г у фосфат-
ному буфері (рН 7,4; Sigma, США) вводили
внутрішньовенно за 15 хв до аутопсії. Щурів
умертвляли через 30 хв після ректального вве-
дення 6%-го йодоацетаміду або 1%-го розчину
метилцелюлози (контрольна група). Видалену
ділянку товстої кишки, промивали, промо-
кали фільтрувальним папером та зважували.
Фарбу Еванса зі слизової оболонки товстої
кишки екстрагували хлороформом [16]. Кон-
центрацію фарби вимірювали за довжини хвилі
610 нм на спектрофотометрі Beckman Coulter
DU (Beckman, США). Дані розраховували у
міліграмах фарби Еванса/г товстої кишки.
Для визначення ролі Src-тирозинкіназ у
збільшенні проникності кровоносних судин
товстої кишки при експериментальному ВК ми
ЕКСПЕриМЕНТАЛьНІ рОБОТи
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 1 119
використовували селективний блокатор роди-
ни Src-тирозинкіназ PP1 (піразолопіримідин,
4-аміно-5-(4-метилфеніл) – 7– (t-бутил) піра-
золо [3,4-d] піримідин) (Biomol International,
L.P., США) в дозі 0,2 мг/100 г в диметилсуль-
фоксиді (ДМСО) підшкірно. Контрольній
групі тварин вводили 0,1 мл ДМСО підшкірно
за 1,5 год до моделювання ВК йодоацетамідом.
Щурів умертвляли через 30 хв після введення
йодоацетаміду.
Результати обробляли статистично за
t-критерієм Стьюдента. Дані представлені у
вигляді М ± σ, n – кількість тварин у групі.
Статистично значущою для всіх показників
вважали різницю р ≤ 0,05.
результати та обговорення
Визначено експресію та активність
Src-протеїну в протеїновому екстракті слизової
оболонки товстої кишки щурів на ранніх ета-
пах розвитку ВК, спричиненого йодоацетамі-
дом. Рівень експресії загального Src-протеїну
не змінюється в різні терміни після введення
йодоацетаміду (рис. 1). Не дивлячись на від-
сутність змін в експресії загального Src-про-
теїну, ми спостерігали достовірне збільшення
рівня фосфорильованого Src (Tyr416) протеїну
на ранніх етапах розвитку ВК спричиненого
йодоацетамідом (рис. 1). На сьогоднішній день
відомості щодо змін активності Src-кіназ при
запальних захворюваннях кишечника обмежу-
ються дослідженнями на ізольованих клітинах
епітелію кишечника та не відображають за-
гальної картини можливої ролі Src-кіназ в ме-
ханізмах цієї патології. Так, встановлено зни-
ження загального рівня та активності Src-кіназ
в ізольованих епітеліальних клітинах товстої
кишки хворих на запальні захворювання ки-
шечника, яке може бути пов’язано з порушен-
ням Src-залежного механізму виживання епі-
теліальних клітин [17].
Вивчено проникність кровоносних судин
товстої кишки при ВК спричиненого йодо-
ацетамідом. ВК спричинений йодоацетамідом
характеризується швидким розвитком ознак
хвороби з утворенням ерозій та виразок вже
через 6 годин після його введення. За нашими
гістологічними даними перші прояви перивас-
кулярного набряку, що є ознакою збільшення
проникності кровоносних судин, спостеріга-
ються вже через 30 хв після ректального вве-
дення йодоацетаміду [18] поряд зі збільшенням
ступеня фоcфорилювання Src (Tyr416) (рис. 1).
Беручи до уваги вищезазначене, для перевірки
ролі Src-кіназ у збільшенні проникності крово-
носних судин товстої кишки, щурам вводили
рис. 1. Експресія загального протеїну Src та
рSrcTyr416 в слизовій оболонці товстої кишки
щурів у різні терміни розвитку виразкового колі-
ту, спричиненого йодоацетамідом (вестерн-бло-
тинг; n = 3; M ± σ)
β-актин
Контроль 0,5 1 2 6 годО
пт
ич
на
г
ус
ти
на
,
ум
. о
д.
pSrc
500
400
300
200
100
0
43 кДа
60 кДа
60 кДа
Src
Контроль 0,5 1 2 6 годО
пт
ич
на
г
ус
ти
на
,
ум
. о
д.
500
400
300
200
100
0
600
700
селективний блокатор родини Src-тирозинкі-
наз PP1 (0,2 мг/100 г) за 1,5 год до ректаль-
ного введення йодоацетаміду. Через 30 хв дії
йодоацетаміду перевіряли вплив селективного
блокатора на проникність судин. Ефективну
дозу PP1 розраховували, виходячи з його дії
у попередженні набряку на моделі інсульту в
мишей in vivo [19].
Контрольна група щурів, яким ректально
вводили метилцелюлозу, мала незначну про-
никність кровоносних судин товстої кишки,
яка становила 2,91 ± 2,11 (мг фарби Еванса/г
тканини товстої кишки). Введення щурам йо-
доацетаміду вірогідно збільшує цей показник
до 7,10 ± 2,66 (р ≤ 0,001). Блокада активності
Src-тирозинкіназ РР1 майже повністю знімає
спричинене йодоацетамідом збільшення про-
никності кровоносних судин товстої кишки і
зменшує цей показник до 3,15 ± 1,29 (P ≤ 0,001)
(рис. 2, А).
Для підтвердження зменшення активності
Src-кінази ми перевірили рівень експресії за-
гального Src-протеїну та фосфорильованого
Src (Tyr416) за дії РР1. Показано, що РР1 не
впливає на рівень експресії загального Src-
протеїну, але пригнічує активність Src, що
призводить до зменшення рівня його фосфо-
рилювання (р = 0,017). Так, оптична густина
смужок імуноблотингу в групі, що отриму-
Г. М. ТОЛСТАНОВА, Т. А. ХОМЕНКО, Л. І. ОСТАПЧЕНКО та ін.
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 1120
вала ДМСО, становить 204,6 ± 97,7 (ум. од.),
а у групі, якій вводили РР1 – 78,98 ± 46,68
(ум. од.) (рис. 2, Б).
Роль Src-кіназ в VEGF-опосередкованій
проникності кровоносних судин була показана
в дослідженнях багатьох авторів на різноманіт-
них об’єктах: ендотеліальних клітинах сітків-
ки свиней [20], моделях церебральної ішемії
[21] та інсульту [19]. Причому відомо, що Src
переважно зв’язується з VEGFR-2/FLK-1 ніж
VEGFR-1/Flt-I за опосередкування VEGF-
залежної проникності шару ендотеліальних
клітин [22]. Важливо також зауважити, що
Src-активність є необхідним компонентом
VEGF-опосередкованого впливу на проник-
ність кровоносних судин та ангіогенез і не бере
участі у трансдукції bFGF-опосередкованих
сигналів [11]. У дослідженнях на ізольованих
ендотеліальних клітинах людини показано,
що кінцевою ланкою VEGF-VEGFR-2-Src-за-
лежного шляху збільшення проникності ендо-
теліального шару є зв’язування β-арестину 2 з
рис. 2. Вплив Src-інгібітора рр1 (0,2 мг/100 г)
на проникність кровоносних судин товстої кишки
на фоні виразкового коліту, спричиненого йодо-
ацетамідом. А – проникність кровоносних судин,
визначено методом екстракції фарби Еванса.
Б – експресія протеїнів методом вестерн-бло-
тингу (n = 10, M±σ)
рис. 3. Внутрішньоклітинний шлях VEGFR-2-
Src-залежного шляху збільшення проникності
кровоносних судин товстої кишки на фоні ви-
разкового коліту, спричиненого йодоацетамі-
дом, ІБ – імуноблот; ІП – імунопреципітація
(n = 3)
Метилцелюлоза ДМСО РР1
Ф
ар
ба
Е
ва
нс
а
(м
г/г
т
ов
ст
ої
к
иш
ки
)
12
10
8
6
4
0
2
А
Р ≤ 0,001 Р ≤ 0,001
6% Йодоацетамід
Src
Б
pSrc
ДМСО РР1
60 кДа
60 кДа
VE-кадгерином та наступною інтерналізацією
VE-кадгерину у клітину, що призводить до
порушення адгезивних контактів між ендо-
теліальними клітинами та роз’єднанню їх [12].
У наших дослідженнях введення йодоаце-
таміду спричинює не тільки збільшення екс-
пресії VEGFR-2, а також його активацію шля-
хом аутофосфорилювання у слизовій оболонці
товстої кишки щурів. Паралельно спостері-
гається активація Src, яка виявляється збіль-
шенням фосфорилювання за Tyr416. Ми по-
казали вірогідне підвищення міжпротеїнової
взаємодії β-арестину 2 та VE-кадгерину, тоді
як загальний рівень VE-кадгерину залишався
без змін (рис. 3).
Таким чином, можна дійти наступного
висновку: 1) Src-кінази відіграють провідну
роль у механізмах підвищення проникності
кровоносних судин товстої кишки при екс-
периментальному ВК; 2) утворення комплек-
су між β-арестином 2 та VE-кадгерином, що
призводить до порушення адгезивних контак-
тів між ендотеліальними клітинами, можливо
є основним у VEGFR-2-Src-залежному підви-
щенні проникності кровоносних судин товстої
кишки при експериментальному ВК.
150
Контроль 0,5 1 год
6% Йодоацетамід
кДа
150
50
50
130ІБ: VE-кадгерин
ІП: VE-кадгерин
ІБ: VE-кадгерин
ІБ: β-арестин 2
pVEGFR-2
VEGFR-2
pSrc
ЕКСПЕриМЕНТАЛьНІ рОБОТи
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 1 121
роль src-тирозинкиназ
в повЫШении прониЦаемости
кровеноснЫх сосудов
при Экспериментальном
Язвенном колите
А. Н. Толстанова1,2, Т. А. Хоменко1,
Л. и. Остапченко2, Ш. Сабо1, С. Шандор1
1Калифорнийский университет, Ирвайн, США;
2Киевский национальный университет
имени Тараса Шевченко, Украина;
e-mail: gtolstanova@gmail.com
Показано увеличение активности Src
без изменения общего уровня Src-протеина
на ранних этапах развития язвенного колита
(ЯК), вызванного йодоацетамидом. Введен-
ние Src ингибитора РР1 (0,2 мг/100 г, под-
кожно) уменьшало (р ≤ 0,001) проницаемость
кровеносных сосудов (ПКС) толстой кишки
и уровень pSrcTyr416 на фоне ЯК вызванного,
йодоацетамидом. Вызванное йодоацетамидом
аутофосфорилирование и повышение экспрес-
сии VEGFR-2 ассоциировано с активацией Src
и увеличением межпротеинового взаимодейс-
твия между β-аррестином 2 и VE-кадгерином,
что влечет за собой нарушение адгезивных
контактов между эндотелиальными клетками.
Сделан вывод о ведущей роли Src киназ в ме-
ханизмах повышения ПКС толстой кишки при
экспериментальном ЯК.
К л ю ч е в ы е с л о в а: йодоацетамид, Src-
киназы, язвенный колит, проницаемость кро-
веносных сосудов, VEGF.
the role of src tyrosine
kinases in increasing
vascular permeability during
experimental ulcerative
colitis
G. M. Tolstanova1,2, T. A. Khomenko1,
L. I. Ostapchenko2, S. Szabo1, Zs. Sandor1
1University of California-Irvine,
Long Beach, CA, USA,
2Taras Shevchenko Kyiv National University, Ukraine;
e-mail: gtolstanova@gmail.com
S u m m a r y
We have shown the increase of SrcTyr416 phos-
phorylation in rat colonic mucosa at early stages
of 6% iodoacetamide-induced ulcerative colitis
(UC), while the level of Src protein expression was
not changed. Pretreatment of rats with Src inhibi-
tor PP1 (0.2 mg/100 g, subcutaneously) decreased
the colonic vascular permeability (VP) (р ≤ 0.001)
and pSrcTyr416 level during iodoacetamide-UC. Iodo-
acetamide-induced autophosphorylation and up-
regulation of VEGFR-2 was associated with Src
activation in colonic mucosa of rats. Sequentially,
protein-protein interaction between β-arrestine2
and VE-cadherine was enhanced, that might be
a reason of colonic endothelium barrier disrup-
tion. We concluded that Src plays a key role in the
mechanisms of increasing the colonic VP during
experimental UC.
K e y w o r d s: iodoacetamide, Src-kinase, ul-
cerative colitis, vascular permeability, VEGF.
1. Abreu M. T. // Curr. Gastroenterol. Rep. –
2002. – 4, N 6. – P. 481–489.
2. Spalinger J., Patriquin H., Miron M. C. et al. //
Radiology. – 2000. – 217, N 3. – P. 787–791.
3. Chidlow J. H. Jr., Langston W., Greer . J. et
al. // Am. J. Pathol. – 2006. – 169, N 6. –
P. 2014–2030.
4. Carmeliet P. // Nature Med. – 2003. – 9,
N 6. – P. 653–660.
5. Szabo S., Sandor Z. // Baillieres. Clin.
Gastroenterol. – 1996. – 10, N 1. – P. 97–
112.
6. Thatch K. A., Mendelson K. G., Haber M. M.,
Schwartz M. Z. // J. Surg. Res. – 2009. – 156,
N 2. – P. 245–249.
7. Scaldaferri F., Vetrano S., Sans M. et al. //
Gastroenterology. – 2009. – 136, N 2. –
P. 585–595.
8. Tolstanova G., Khomenko T., Deng X. et al. //
Gut. – 2008. – 57. – P. A39.
9. Dvorak H. F., Nagy J. A., Feng D. et al. // Curr.
Top. Microbiol. Immunol. – 1999. – 237. –
P. 97–132.
10. Neet K., Hunter T. // Genes cells. – 1996. –
1. – P. 147–169.
11. Eliceiri B. P., Paul R., Schwartzberg P. L. et al.
// Mol. Cell. – 1999. – 4, N 6. – P. 915–924.
12. Gavard J., Gutkind J. S. // Nat. Cell. Biol. –
2006. – 8, N 11. – P. 1223–1234.
13. Satoh H., Sato F., Takami K., Szabo S. // Jpn. J.
Pharmacol. – 1997. – 73, N 3. – P. 299–309.
14. Rogers D. F., Boschetto P., Barnes P. J. // J.
Pharmacol. methods. – 1989. – 21, N 4. –
Р. 309–315.
15. Thomas J. E., Soriano P., Brugge J. S. //
Science. – 1991. – 254, N 5031. – P. 568–571.
16. Baluk P., Thurston G., Murphy T. J. et al. // Br.
J. Pharmacol. – 1999. – 126, N 2. – P. 522–528.
17. Hofmann C., Lippert E., Falk W. et al. //
Biochem. Biophys. Res. Commun. – 2009. –
390, N 3. – P. 908–914.
Г. М. ТОЛСТАНОВА, Т. А. ХОМЕНКО, Л. І. ОСТАПЧЕНКО та ін.
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 1122
18. Tolstanova G., Deng X. M., Khomenko T. et al.
// Gastroenterology. – 2009. – 136, N 5. –
P. A774.
19. Paul R., Zhang Z. G., Eliceiri B. P. et al. // Nat.
Med. – 2001. – 7, N 2. – P. 222–227.
20. Sheikpranbabu S., Kalishwaralal K., Venkatara-
man D. et al. // Nanobiotechnology. – 2009. –
7. – P. 8.
21. Liang S., Pong K., Gonzales C. et al. //
Pharmacol. Exp. Ther. – 2009. – 331, N 3. –
P. 827–835.
22. Chou M. T., Wang J., Fujita D. J. // BMC
Biochem. – 2002. – 3. – P. 32.
Отримано 28.12.2009
ЕКСПЕриМЕНТАЛьНІ рОБОТи
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-19031 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0201-8470 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-12-07T19:03:06Z |
| publishDate | 2010 |
| publisher | Інститут біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Толстанова, Г.М. Хоменко, Т.А. Остапченко, Л.І. Сабо, Ш. 2011-04-16T09:54:02Z 2011-04-16T09:54:02Z 2010 Роль Src-тирозинкіназ у підвищенні проникності кровоносних судин при експериментальному виразковому коліті / Г.М. Толстанова, Т.А. Хоменко, Л.І. Остапченко, Ш. Сабо // Укр. біохім. журн. — 2010. — Т. 82, № 1. — С. 117-122. — Бібліогр.: 22 назв. — укр. 0201-8470 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/19031 616.34-002.44-092+616.345:616.13/14+616-008.831 Показано збільшення активності Src без змін у загальному рівні Src-протеїну на ранніх етапах розвитку спричиненого йодоацетамідом виразкового коліту в щурів. Введення Src інгібітора РР 1 (0,2 мг/100 г, підшкірно) зменшувало (Р ≤ 0,001) проникність кровоносних судин та рівень pSrc^Tyr416 у слизовій оболонці товстої кишки при виразковому коліті, спричиненому йодоацетамідом. Аутофосфорилювання та підвищення експресії VEGFR-2 під впливом йодоацетаміду було асоційоване з активацією Src та збільшенням міжпротеїнової взаємодії β-арестину 2 з VE-кадгерином, що можливо призводить до порушення адгезивних контактів між ендотеліальними клітинами. Дійшли висновку про провідну роль Src-тирозинкінази в механізмах підвищення проникності кровоносних судин товстої кишки при експериментальному виразковому коліті. Показано увеличение активности Src без изменения общего уровня Src-протеина на ранних этапах развития язвенного колита (ЯК), вызванного йодоацетамидом. Введенние Src ингибитора РР1 (0,2 мг/100 г, подкожно) уменьшало (р ≤ 0,001) проницаемость кровеносных сосудов (ПКС) толстой кишки и уровень pSrc^Tyr416 на фоне ЯК вызванного, йодоацетамидом. Вызванное йодоацетамидом аутофосфорилирование и повышение экспрессии VEGFR-2 ассоциировано с активацией Src и увеличением межпротеинового взаимодействия между β-аррестином 2 и VE-кадгерином, что влечет за собой нарушение адгезивных контактов между эндотелиальными клетками. Сделан вывод о ведущей роли Src киназ в механизмах повышения ПКС толстой кишки при экспериментальном ЯК. We have shown the increase of Src^Tyr416 phosphorylation in rat colonic mucosa at early stages of 6% iodoacetamide-induced ulcerative colitis (UC), while the level of Src protein expression was not changed. Pretreatment of rats with Src inhibitor PP1 (0.2 mg/100 g, subcutaneously) decreased the colonic vascular permeability (VP) (Р ≤ 0.001) and pSrc^Tyr416 level during iodoacetamide-UC. Iodoacetamide-induced autophosphorylation and upregulation of VEGFR-2 was associated with Src activation in colonic mucosa of rats. Sequentially, protein-protein interaction between β-arrestine2 and VE-cadherine was enhanced, that might be a reason of colonic endothelium barrier disruption. We concluded that Src plays a key role in the mechanisms of increasingthe colonic VP during experimental UC. uk Інститут біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України Український біохімічний журнал Експериментальні роботи Роль Src-тирозинкіназ у підвищенні проникності кровоносних судин при експериментальному виразковому коліті Роль Src-тирозинкиназ в повышении проницаемости кровеносных сосудов при экспериментальном язвенном колите The role of Src tyrosine kinases in increasing vascular permeability during experimental ulcerative colitis Article published earlier |
| spellingShingle | Роль Src-тирозинкіназ у підвищенні проникності кровоносних судин при експериментальному виразковому коліті Толстанова, Г.М. Хоменко, Т.А. Остапченко, Л.І. Сабо, Ш. Експериментальні роботи |
| title | Роль Src-тирозинкіназ у підвищенні проникності кровоносних судин при експериментальному виразковому коліті |
| title_alt | Роль Src-тирозинкиназ в повышении проницаемости кровеносных сосудов при экспериментальном язвенном колите The role of Src tyrosine kinases in increasing vascular permeability during experimental ulcerative colitis |
| title_full | Роль Src-тирозинкіназ у підвищенні проникності кровоносних судин при експериментальному виразковому коліті |
| title_fullStr | Роль Src-тирозинкіназ у підвищенні проникності кровоносних судин при експериментальному виразковому коліті |
| title_full_unstemmed | Роль Src-тирозинкіназ у підвищенні проникності кровоносних судин при експериментальному виразковому коліті |
| title_short | Роль Src-тирозинкіназ у підвищенні проникності кровоносних судин при експериментальному виразковому коліті |
| title_sort | роль src-тирозинкіназ у підвищенні проникності кровоносних судин при експериментальному виразковому коліті |
| topic | Експериментальні роботи |
| topic_facet | Експериментальні роботи |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/19031 |
| work_keys_str_mv | AT tolstanovagm rolʹsrctirozinkínazupídviŝenníproniknostíkrovonosnihsudinprieksperimentalʹnomuvirazkovomukolítí AT homenkota rolʹsrctirozinkínazupídviŝenníproniknostíkrovonosnihsudinprieksperimentalʹnomuvirazkovomukolítí AT ostapčenkolí rolʹsrctirozinkínazupídviŝenníproniknostíkrovonosnihsudinprieksperimentalʹnomuvirazkovomukolítí AT saboš rolʹsrctirozinkínazupídviŝenníproniknostíkrovonosnihsudinprieksperimentalʹnomuvirazkovomukolítí AT tolstanovagm rolʹsrctirozinkinazvpovyšeniipronicaemostikrovenosnyhsosudovpriéksperimentalʹnomâzvennomkolite AT homenkota rolʹsrctirozinkinazvpovyšeniipronicaemostikrovenosnyhsosudovpriéksperimentalʹnomâzvennomkolite AT ostapčenkolí rolʹsrctirozinkinazvpovyšeniipronicaemostikrovenosnyhsosudovpriéksperimentalʹnomâzvennomkolite AT saboš rolʹsrctirozinkinazvpovyšeniipronicaemostikrovenosnyhsosudovpriéksperimentalʹnomâzvennomkolite AT tolstanovagm theroleofsrctyrosinekinasesinincreasingvascularpermeabilityduringexperimentalulcerativecolitis AT homenkota theroleofsrctyrosinekinasesinincreasingvascularpermeabilityduringexperimentalulcerativecolitis AT ostapčenkolí theroleofsrctyrosinekinasesinincreasingvascularpermeabilityduringexperimentalulcerativecolitis AT saboš theroleofsrctyrosinekinasesinincreasingvascularpermeabilityduringexperimentalulcerativecolitis |