Вплив навантаження тіолактоном гомоцистеїну на обмін аденозину у щурів: зв’язок з гіперреактивністю тромбоцитів, корекція порушень його обміну вітамінно-мікроелементним комплексом
Досліджено вплив навантаження тіолактоном D,L-гомоцистеїну (в дозі 100 мг/кг маси тіла інтрагастрально протягом 28 діб) на активність ензимів обміну аденілових нуклеотидів та аденозину в сироватці крові, фракції тромбоцитів та печінки щурів, оцінено зв’язок виявлених порушень з гіперреактивністю тро...
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Український біохімічний журнал |
|---|---|
| Datum: | 2010 |
| 1. Verfasser: | |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Ukrainisch |
| Veröffentlicht: |
Інститут біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України
2010
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/19042 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Вплив навантаження тіолактоном гомоцистеїну на обмін аденозину у щурів: зв’язок з гіперреактивністю тромбоцитів, корекція порушень його обміну вітамінно-мікроелементним комплексом / Н.В. Заічко // Укр. біохім. журн. — 2010. — Т. 82, № 2. — С. 59-66. — Бібліогр.: 20 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859610682578698240 |
|---|---|
| author | Заічко, Н.В. |
| author_facet | Заічко, Н.В. |
| citation_txt | Вплив навантаження тіолактоном гомоцистеїну на обмін аденозину у щурів: зв’язок з гіперреактивністю тромбоцитів, корекція порушень його обміну вітамінно-мікроелементним комплексом / Н.В. Заічко // Укр. біохім. журн. — 2010. — Т. 82, № 2. — С. 59-66. — Бібліогр.: 20 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Український біохімічний журнал |
| description | Досліджено вплив навантаження тіолактоном D,L-гомоцистеїну (в дозі 100 мг/кг маси тіла інтрагастрально протягом 28 діб) на активність ензимів обміну аденілових нуклеотидів та аденозину в сироватці крові, фракції тромбоцитів та печінки щурів, оцінено зв’язок виявлених порушень з гіперреактивністю тромбоцитів. Встановлено, що у щурів з гіпергомоцистеїнемією (ГГЦ) в тромбоцитах знижується активність апірази і 5′-нуклеотидази, а аденозиндезамінази – підвищується; також порушується утворення аденозину в сироватці крові та печінці. За цих умов істотно посилюється чутливість тромбоцитів щурів до ADP-стимуляції. Вітамінно-мікроелементний комплекс зменшує ГГЦ-індуковані порушення обміну аденозину та запобігає формуванню гіперреактивності тромбоцитів. In vitro гомоцистеїн інгібує гідроліз ADP та АМР фракцією тромбоцитів щурів і цей ефект зменшується у присутності донора гідроген сульфіду-NaHS.
Исследовано влияние нагрузки тиолактоном D,L-гомоцистеина (в дозе 100 мг/кг массы тела, интрагастрально в течение 28 суток) на активность энзимов обмена адениловых нуклеотидов и аденозина в сыворотке крови, фракции тромбоцитов и печени крыс, изучена связь выявленных нарушений с функциональным состоянием тромбоцитов. Установлено, что у крыс с гипергомоцистеинемией (ГГЦ) снижается активность апиразы и 5′-нуклеотидазы и повышается активность аденозиндезаминазы в тромбоцитах, а также нарушается образование аденозина в сыворотке крови и печени. При этих условиях существенно усиливается чувствительность тромбоцитов крыс к ADP-стимуляции. Витаминно-микроэлементный комплекс уменьшает индуцированные ГГЦ нарушения обмена аденозина и предотвращает формирование гиперреактивности тромбоцитов. In vitro гомоцистеин дозозависимо ингибирует гидролиз ADP и АМР фракцией тромбоцитов крыс и этот эффект уменьшается в присутствии донора гидрогенсульфида – NaHS.
Influence of DL-homocysteine thiolactone loading (100 mg/kg by intragastric administration for 28 days) on enzymes activity of adenylic nucleotide and adenosine metabolism in the blood serum, platelets and liver of rats was investigated. The relation between revealed disturbance and platelet hyper-reactivity was estimated. It was established, that apyrase and 5′-nucleotidase activities decreased and adenosine deaminase activity increased in platelets of the rats with hyperhomocysteinemia (HHC). HHC also interrupted adenosine production in the blood serum and liver in rats. Under this condition the platelet sensitivity to ADP-stimulation was significantly increased. Vitamin-microelement complex decreased HHC-induced disorder of adenosine metabolism and prevented platelet hyper-reactivity formation. In vitro homocysteine inhibited platelet hydrolysis of ADP and AMP in a dose-dependent manner and this effect reduced in the presence of hydrogen sulfide donor NaHS.
|
| first_indexed | 2025-11-28T11:23:31Z |
| format | Article |
| fulltext |
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 2 59
УДК 612.015: 591.41:591.85: 577.15:577.16
вплив навантаження тіолактоном
гомоцистеїну на обмін аденозину у щурів:
зв’язок з гіперреактивністю тромбоцитів,
корекція порушень його обміну
вітамінно-мікроелементним комплексом
Н. В. ЗАІЧКО
Науково-дослідний інститут реабілітації інвалідів Вінницького національного
медичного університету ім. М. І. Пирогова, Україна;
e-mail: nzaichko@mail.ru
Досліджено вплив навантаження тіолактоном D,L-гомоцистеїну (в дозі 100 мг/кг маси тіла
інтрагастрально протягом 28 діб) на активність ензимів обміну аденілових нуклеотидів та аденозину
в сироватці крові, фракції тромбоцитів та печінки щурів, оцінено зв’язок виявлених порушень з гіпер-
реактивністю тромбоцитів. Встановлено, що у щурів з гіпергомоцистеїнемією (ГГЦ) в тромбоцитах
знижується активність апірази і 5′-нуклеотидази, а аденозиндезамінази – підвищується; також по-
рушується утворення аденозину в сироватці крові та печінці. За цих умов істотно посилюється чут-
ливість тромбоцитів щурів до ADP-стимуляції. Вітамінно-мікроелементний комплекс зменшує ГГЦ-
індуковані порушення обміну аденозину та запобігає формуванню гіперреактивності тромбоцитів. In
vitro гомоцистеїн інгібує гідроліз ADP та АМР фракцією тромбоцитів щурів і цей ефект зменшується
у присутності донора гідроген сульфіду-NaHS.
К л ю ч о в і с л о в а: гіпергомоцистеїнемія, тромбоцити, аденозин, апіраза, 5′-нуклеотидаза,
вітамінно-мікроелементний комплекс.
Гіпергомоцистеїнемія (ГГЦ) – відомий
фактор ризику артеріальних і венозних
тромбозів. Тригерним механізмом тром-
богенної дії ГГЦ вважають здатність високого
рівня гомоцистеїну (ГЦ) активувати судин-
но-тромбоцитарну ланку системи гемостазу
внаслідок оксидативного пошкодження ендо-
теліальних та тромбоцитарних клітин, пору-
шення синтезу вазодилататорів та антиагре-
гантів – нітроген монооксиду, простацикліну,
гідроген сульфіду (H2S) та зменшення чутли-
вості клітин-мішеней до цих молекул [1, 2].
Не виключаються і інші механізми впливу ГЦ
на судинно-тромбоцитарний гемостаз, напри-
клад, через пуринергічну сигнальну систему.
Остання, крім пуринових рецепторів тромбо-
цитів та ендотеліоцитів, включає також ен-
зими: апіразу (КФ 3.6.1.5), що гідролізує ADP
до AMP, 5′-нуклеотидазу (КФ 3.1.3.5), що пе-
ретворює AMP до аденозину, аденозиндезамі-
назу (КФ 3.5.4.4), яка забезпечує деградацію
аденозину з вивільненням аміаку, та ін. [3–5].
Відомо, що ADP та аденозин по-різному впли-
вають на функціональну активність тромбо-
цитів: перший – потужний індуктор агрегації,
тоді як другий, навпаки, має антиагрегантну
дію. Тому очевидно, що швидкість деградації
аденілових нуклеотидів та аденозину залежить
від ектоензимів та циркулюючих нуклеоти-
даз плазми крові і значною мірою визначає
функціональний стан тромбоцитів. Важливим
джерелом аденозину в організмі вважають ре-
акцію розщеплення S-аденозилгомоцистеїну,
яку каталізує S-аденозилгомоцистеїнгідролаза
(КФ 3.3.1.1). Ймовірно, що за ГГЦ зменшення
загального пулу екстрацелюлярного аденози-
ну також може створювати умови для форму-
вання гіперреактивності тромбоцитів. Раніше
було показано, що введення щурам тіолактону
ГЦ спричинює зниження активності апірази в
сироватці крові тварин [2].
Мета цієї роботи – вивчення зв’язку по-
рушень обміну аденілових нуклеотидів та
аденозину з гіперреактивістю тромбоцитів за
тривалого навантаження тіолактоном ГЦ та
оцінка здатності вітамінно-мікроелементно-
го комплексу (ВМК) запобігати формуванню
пов’язаних з цим розладів.
матеріали і методи
Досліди проводили на 30 білих безпород-
них щурах-самцях масою 250–270 г. Під час
експерименту тварини отримували стандар-
тну напівсинтетичну крохмально-казеїнову
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 260
дієту, яка забезпечувала надходження в ор-
ганізм щурів оптимальної кількості всіх мак-
ро- і мікронутрієнтів [6]. Тварин перевели на
напівсинтетичний раціон за 10 діб до початку
експерименту для адаптації. Щурів розділили
на 3 групи по 10 тварин у кожній. Модель ГГЦ
створювали на тваринах 2- та 3-ої груп шляхом
введення тіолактону D,L-ГЦ в дозі 100 мг/кг
1 раз на добу, інтрагастрально у 1%-му розчині
крохмалю протягом 28 діб [7]. Крім того, щурам
групи 3 до базової дієти протягом всього екс-
перименту додавали вітамінно-мікроелемент-
ний комплекс (ВМК) у кількості, що забезпе-
чувала надходження біля 714 мкг вітаміну В6,
143 мкг вітаміну В9, 14,3 мкг вітаміну В12, 1 мг
іонів цинку (Zn2+), 7,5 мкг іонів хрому (Cr3+) та
0,93 мкг іонів ванадію (V5+) на 1 кг маси тіла
тварин. Зазначені дози вітамінів перевищують
мінімальну добову потребу щурів у 7–15 разів,
при цьому вважаються нетоксичними та вияв-
ляють максимальний гіпогомоцистеїнемічний
ефект, а мікроелементи є незалежними чин-
никами нормального функціонування серце-
во-судинної системи [8]. Тваринам контроль-
ної групи (1) 1 раз на добу інтрагастрально
вводили відповідну кількість 1%-го розчину
крохмалю. Досліди виконували згідно з пра-
вилами гуманного поводження з експеримен-
тальними тваринами, затвердженими коміте-
том з біоетики ВНМУ ім. М. І. Пирогова.
Зразки крові брали із серця щурів після
анестезування кетаміном (100 мг/кг, інтрапе-
ритоніально). Для виділення тромбоцитів та
дослідження їх агрегації зразки крові наби-
рали у пластикові пробірки Vacuette (Greiner
Bio-One, Австрія), які містили 3,8%-й розчин
цитрату натрію у співвідношенні 9 : 1. Плазму,
багату на тромбоцити (ПБТ), одержували цен-
трифугуванням стабілізованої крові при 300 g
упродовж 5 хв при 18 °С. Потім ПБТ центри-
фугували при 1500 g упродовж 20 хв при 18 °С,
супернатант видаляли, осад тромбоцитів тричі
промивали 0,05 М трис-HCl-буфером (pH 7,4) з
0,13 М NaCl [9], потім ресуспендували в 1,0 мл
цього ж буферу і одержану фракцію тромбо-
цитів використовували для досліджень.
Агрегацію тромбоцитів досліджували у
зразках ПБТ на фотооптичному агрегометрі
АР2110 (Солар, Білорусь). ADP як індуктор
агрегації використовували в кінцевих концен-
траціях 2,5, 5, 10, 25 мкМ (Технологія-Стан-
дарт, Росія).
Активність ензимів визначали у зраз-
ках сироватки крові, фракції тромбоцитів,
пост’ядерній фракції гомогенату печінки. Пе-
чінку гомогенізували в середовищі 1,15%-му
калію хлориду у співвідношенні 1 : 4,
пост’ядерну фракцію одержували центрифугу-
ванням гомогенатів при 600 g упродовж 30 хв.
Вміст протеїну у препаратах визначали за Лоу-
рі [10].
Активність апірази (КФ 3.6.1.5) та 5′-нук-
леотидази (КФ 3.1.3.5) визначали за кількіс-
тю неорганічного фосфату, який утворювався
в процесі гідролізу ADP чи AMP відповідно
[4, 11]. Активність S-аденозилгомоцистеїнгід-
ролази (КФ 3.3.1.1) визначали за швидкістю
гідролізу S-аденозилгомоцистеїну за збіль-
шенням вмісту гомоцистеїну [12]. Активність
аденозиндезамінази (КФ 3.5.4.4) оцінювали за
кількістю аміаку, що утворився за гідролітич-
ного дезамінування аденозину [13]. Вміст аде-
нозину в сечі визначали методом тонкошарової
хроматографії [14].
Загальний рівень ГЦ в сироватці крові
визначали імуноферментним методом (набор
Axis-Shield, Англія), а вміст H2S в сироватці
крові – за утворенням тіонінового барвника
за взаємодії сульфід-аніону з парафенілендіа-
міном [15]. Вміст цистеїну визначали за реак-
цією з нінгідрином у кислому середовищі [16].
Зв’язаний з протеїнами цистеїн вивільняли
дитіотреїтолом. Рівень SН-груп протеїнів у
плазмі крові визначали за реакцією з реакти-
вом Елмана.
Для визначення впливу ГЦ на швидкість
гідролізу ADP in vitro в інкубаційне середови-
ще об’ємом 1,0 мл, що містить 120 мМ NaCl,
5,0 мМ KCl, 6,0 мМ глюкози, 5,0 мМ CaCl2,
50 мМ трис-HCl-буфер (pH 7,5), 1,0 мг про-
теїну фракції тромбоцитів додавали D,L-ГЦ в
діапазоні концентрацій від 0,2 до 10 мМ і після
5-хвилинної інкубації розпочинали реакцію,
додаючи ADP в кінцевій концентрації 0,5 мМ.
Для визначення впливу ГЦ на швидкість гід-
ролізу AMP в інкубаційне середовище об’ємом
1,0 мл, що містило 1 мМ MgCl2, 50 мМ трис-
HCl-буфера (pH 7,4), 1,0 мг протеїну фракції
тромбоцитів додавали D,L-ГЦ в діапазоні кон-
центрацій 0,2 до 10 мМ і після 5-хвилинної
інкубації розпочинали реакцію додаванням
AMP в кінцевій концентрації 4,0 мМ. Швид-
кість гідролізу нуклеотидів оцінювали за утво-
ренням неорганічного фосфату (Рі ).
У роботі використовували тіолактон DL-
гомоцистеїну (Fluka, Німеччина), DL-гомо-
цистеїн, L-цистеїн, аденозин, АDP, AMP,
S-аденозилгомоцистеїн, Na2S ⋅ 9H2O, дитіо-
треїтол (Sigma, США), набір Homocysteine EIA
(Axis-Shield, Англія). Інші реактиви були віт-
чизняного виробництва категорії хч.
Статистичне оброблення результатів про-
водили за допомогою стандартних програм
еКсПеРиМеНтАльНІ РОбОти
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 2 61
MS Exel XP. Вірогідність відмінностей оціню-
вали за t-критерієм Стьюдента, а також прово-
дили парний кореляційний аналіз за Пірсоном.
результати та обговорення
Введення щурам тіолактону ГЦ у дозі
100 мг/кг маси тіла протягом 28 діб спричиню-
вало розвиток помірної ГГЦ. Так, рівень ГЦ в
сироватці крові у тварин групи 2 збільшився в
2,3 раза порівняно з контролем (табл. 1). На-
копичення у плазмі крові ГЦ супроводжуєть-
ся зниженням (на 21,7 та 34,0%) вмісту його
метаболітів – цистеїну та H2S, що може бути
наслідком порушення процесів транс- та де-
сульфування сірковмісних амінокислот у разі
перевантаження тіолактоном ГЦ. Відомо, що
високий рівень ГЦ індукує розвиток оксида-
тивного та нітрозативного стресу [1], тоді як
H2S, навпаки, знижує рівень активних форм
кисню та азоту, а також забезпечує регене-
рацію сульфгідрильних груп протеїнів [17].
Отже, дефіцит H2S за ГГЦ може промотувати
окислення у клітинах-мішенях, порушувати
мембранне оточення їхніх ектоензимів, змі-
нювати редокс-статус протеїнів, у тому числі
і у тромбоцитах. Дійсно, у тварин з ГГЦ кіль-
кість протеїнових SH-груп у плазмі крові на
19,5% менша, ніж в контрольній групі. Най-
більш чітко дефіцит H2S при ГГЦ відображає
коефіцієнт ГЦ/H2S: в інтактних тварин цей
показник становить 0,09, а у тварин із ГГЦ
зростає до 0,34 (тобто в 3,5 раза). Виявляється,
що коефіцієнт ГЦ/H2S достовірно корелює з
рівнем протеїнових SH-груп у плазмі крові, і
ця залежність посилюється при ГГЦ (r = -0,45
та -0,64 відповідно). Збагачення дієти ВМК
стримує формування індукованих навантажен-
ням тіолактоном ГЦ порушень в обміні сірко-
вмісних сполук: ступінь ГГЦ, ознаки дефіциту
H2S та падіння кількості протеїнових SH-груп
у щурів групи 3 (ГГЦ + ВМК) були достовірно
менші, ніж у тварин групи 2, що не отримува-
ли ВМК. Здатність ВМК запобігати зниженню
рівня H2S у плазмі крові при ГГЦ пов’язана з
тим, що до його складу входять вітамін В6 та
іони Zn2+ – есенціальні чинники реакцій де-
сульфурування цистеїну та ГЦ [1, 17].
Аналіз активності ензимів обміну аденіло-
вих нуклеотидів та аденозину показує (табл. 2),
що за тривалого навантаження тіолактоном ГЦ
створюються умови для підвищення екстра-
целюлярної концентрації індуктора агрегації
тромбоцитів ADP, при цьому сповільнюється
утворення та посилюється деградація антиаг-
реганта аденозину. Зокрема, у щурів з ГГЦ ак-
тивність апірази в сироватці крові достовірно
знижується на 22,5%, на рівні тенденції змен-
шується активність 5′-нуклеотидази та підви-
щується активність аденозиндезамінази. Од-
нак виразніше змінюється активність ензимів
тромбоцитів: у щурів з ГГЦ активність апірази
та 5′-нуклеотидази вірогідно знижується на
28,3 та 25,6%, тоді як активність аденозиндез-
амінази зростає на 32,1%. Аналогічні зміни ак-
тивності досліджуваних ензимів виявлено в пе-
чінці. Тривале навантаження тіолактоном ГЦ
спричинювало достовірне зниження (на 33,8%)
активності S-аденозилгомоцистеїнгідролази в
печінці. Зниження активності S-аденозилго-
моцистеїнгідролази, з одного боку, веде до
накопичення S-аденозилгомоцистеїну – по-
тужного інгібітора реакцій метилювання [1],
а, з іншого боку, – пригнічує утворення аде-
нозину. Отже, за ГГЦ формуються такі зміни
активності ензимів нуклеотидного обміну, які
в цілому спрямовані на зменшення пулу віль-
ного аденозину в організмі. Цей факт до деякої
міри підтверджується достовірним зниженням
т а б л и ц я 1. Показники обміну сірковмісних амінокислот у сироватці крові щурів за довгострокового
введення тіолактону, гомоцистеїну (ГЦ) та вітамінно-мікроелементного комплексу (ВМК) (M ± m;
n = 10)
* Р < 0,05 – відносно групи 1; # Р < 0,05 – відносно групи 2
Показник
Групи щурів
1 2 3
Контроль Тіолактон ГЦ Тіолактон ГЦ та ВМК
ГЦ, мкМ 6,54 ± 0,23 15,30 ± 0,84* 9,71 ± 0,67*,#
Цистеїн, мкМ 124,40 ± 6,83 97,40 ± 4,21* 110,5 ± 3,4#
H2S, мкМ 78,30 ± 6,45 51,7 ± 4,8* 69,2 ± 3,2*,#
Коефіцієнт ГЦ/H2S 0,09 ± 0,01 0,34 ± 0,06* 0,14 ± 0,01*,#
SH-групи протеїнів, мМ 8,38 ± 0,36 6,74 ± 0,41* 7,93 ± 0,37#
Н. В. ЗАІЧКО
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 262
(на 25,6%) екскреції аденозину із сечею у групі
тварин з ГГЦ. Застосування ВМК ефективно
протидіє розвитку порушень в обміні адені-
лових нуклеотидів та аденозину, що підтвер-
джується нормалізацією активності апірази,
5′-нуклеотидази, аденозиндезамінази в сиро-
ватці крові, тромбоцитах та печінці, підвищен-
ням активності S-аденозилгомоцистеїнгідро-
лази в печінці, а також збільшенням екскреції
аденозину із сечею у щурів групи 3.
Наступним етапом роботи було дослі-
дження впливу порушень обміну аденозину
на функціональну активність тромбоцитів у
щурів з ГГЦ. Оскільки одним із проявів гіпер-
реактивності тромбоцитів вважають збільшен-
ня їхньої чутливості до дії індукторів агрегації,
оцінювали зміну порогу активації тромбо-
цитів до ADP-стимуляції, адже при ГГЦ ство-
рюються умови для накопичення в крові саме
цього тромбоцитарного агоністу (рисунок).
З’ясувалось, що кінцева концентрація ADP, яка
спричинює незворотну агрегацію тромбоцитів
у 100% тварин, у контрольній групі становить
10 мкМ, а у групі щурів з ГГЦ – лише 5 мкМ.
У щурів з ГГЦ ступінь агрегації тромбоцитів,
індукованої ADP в концентрації 2,5, 5, 10 та
25 мкМ, перевищує такий у групі контролю в
5,6, 2,0, 1,5 та 1,3 раза відповідно. Отже, най-
більші відмінності в реакції тромбоцитів на
ADP-стимуляцію спостерігаються між група-
ми 1 та 2 у разі низьких концентрацій цього
індуктора. Виявляється, що в контролі ADP
(2,5 мкМ) не зумовлює агрегації тромбоцитів у
60% тварин, в той же час у 40% тварин – інду-
кує зворотну агрегацію з дезагрегацією. У 70%
тварин 2-ї групи виникає незворотна агрегація
тромбоцитів у відповідь на таку саму концен-
трацію ADP. Застосування ВМК достовірно
зменшує ознаки ГГЦ-індукованої гіперреак-
тивності тромбоцитів у щурів.
Показано, що ступінь ADP-індукованої
агрегації тромбоцитів як у нормі, так і при
ГГЦ, тісно корелює з рівнем ГЦ та коефіцієн-
том ГЦ/H2S (табл. 3). Кореляційний аналіз під-
твердив, що функціональний стан тромбоцитів
значною мірою визначається активністю їхніх
ензимів: ADP-індукована агрегація обернено
корелює з активністю апірази і 5′-нуклеотида-
зи тромбоцитів, і прямо – з активністю адено-
зиндезамінази. Між рівнем ГЦ та активністю
апірази тромбоцитів виявлено достовірний ко-
реляційний зв’язок, який посилюється за ГГЦ.
Активність 5′-нуклеотидази та аденозиндез-
амінази тромбоцитів меншою мірою залежить
т а б л и ц я 2. Показники обміну аденозину у щурів у разі довгострокового введення тіолактону, гомо-
цистеїну (ГЦ) та вітамінно-мікроелементного комплексу (ВМК) (M ± m; n = 10)
Показник
Групи щурів
1 2 3
Контроль Тіолактон ГЦ
Тіолактон ГЦ
та ВМК
Аденозин в сечі, мкмоль/моль креатиніну 6,24 ± 0,19 4,61 ± 0,33* 5,64 ± 0,30#
Активність ензимів у сироватці крові, нмоль/хв⋅мл
Апіраза 7,67 ± 0,52 5,94 ± 0,38* 7,10 ± 0,26#
5′-Нуклеотидаза 8,85 ± 0,51 7,61 ± 0,44 8,29 ± 0,31
Аденозиндезаміназа 46,5 ± 3,78 59,7 ± 6,19 55,0 ± 5,77
Активність ектоензимів у фракції тромбоцитів, нмоль/хв на 1 мг протеїну
Апіраза 5,08 ± 0,22 3,64 ± 0,21* 4,83 ± 0,15#
5′-Нуклеотидаза 2,07 ± 0,09 1,54 ± 0,10* 1,87 ± 0,08#
Аденозиндезаміназа 13,2 ± 1,06 17,5 ± 1,02* 15,6 ± 0,99
Активність ензимів у гомогенаті печінки, нмоль/хв на 1 мг протеїну
Апіраза 6,35 ± 0,27 4,92 ± 0,31* 6,19 ± 0,37#
5′-Нуклеотидаза 7,40 ± 0,41 6,05 ± 0,39* 7,08 ± 0,33
Аденозиндезаміназа 198,6 ± 9,41 218,5 ± 6,91 206,2 ± 10,0
S-Аденозилгомоцистеїнгідролаза 3,88 ± 0,41 2,57 ± 0,35* 3,61 ± 0,35#
* Р < 0,05 – відносно групи 1; # Р < 0,05 – відносно групи 2
еКсПеРиМеНтАльНІ РОбОти
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 2 63
від рівня ГЦ і достовірні кореляційні зв’язки
між цими показниками встановлюються лише
при ГГЦ. Аналогічну кореляцію виявлено між
рівнем ГЦ і активністю ензимів обміну адено-
зину в сироватці крові та печінці щурів. Одер-
жані дані свідчать про те, що у фізіологічних
концентраціях ГЦ, ймовірно, один із чинни-
ків, який регулює чутливість тромбоцитів до
ADP-стимуляції. В той же час, порушення
балансу в системі «деградація ADP/утворення
аденозину» при ГГЦ стає патерном для форму-
вання гіперреактивності тромбоцитів.
Які ж механізми лежать в основі розвитку
асоційованих з ГГЦ порушень нуклеотидного
Залежність ступеня агрегації тромбоцитів від концентрації індуктора агрегації ADP в інтактних
щурів, щурів з ГГЦ та у щурів з ГГЦ, що отримували ВМК. * Р < 0,05 відносно контролю
14
0
10
20
30
40
50
60
0 5 10 15 20 25 30
ADP,
+*
*
*
*
*
*
*
*
. 1.
С
ту
пі
нь
а
гр
ег
ац
ії
тр
ом
бо
ци
ті
в,
%
т а б л и ц я 3. Кореляції між рівнем ГЦ в сироватці крові, коефіцієнтом ГЦ/H2S, ступенем агрегації
тромбоцитів, активністю ектоензимів тромбоцитів і екскрецією аденозину у щурів
Показники
Групи щурів
1 2
Контроль Тіолактон ГЦ
ГЦ ГЦ/H2S
Ступінь
агрегації
тромбоцитів
ГЦ ГЦ/H2S
Ступінь
агрегації
тромбоцитів
Ступінь агрегації
тромбоцитів 0,56* 0,39 – 0,64* 0,70* –
Апіраза тромбоцитів -0,48 -0,36 -0,43 -0,73* -0,56* -0,68*
5′-Нуклеотидаза
тромбоцитів -0,21 -0,12 -0,42 0,54* -0,38 -0,53*
Аденозиндезаміназа
тромбоцитів 0,28 0,26 0,35 0,48 0,34 0,53*
Аденозин сечі -0,33 -0,37 -0,22 -0,47 -0,43 -0,47
*Вірогідні коефіцієнти кореляції
Н. В. ЗАІЧКО
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 264
обміну? Як відомо, негативна дія ГГЦ на ор-
ганізм реалізується як на геномному рівні, так
і на рівні протеому. Хронічне навантаження
тіолактоном ГЦ може індукувати зміни актив-
ності тромбоцитарних, циркулюючих та печін-
кових ензимів обміну аденілових нуклеотидів
внаслідок порушення експресії відповідних
генів при ГГЦ [1]. Ще одним механізмом впли-
ву високого рівня ГЦ на активність нуклеоти-
даз може бути післятрансляційна модифікація
їхніх молекул. Адже відомо, що ГЦ та тіолак-
тон легко утворюють аддукти із протеїнами (S-
та N-гомоцистеїнування), змінюючи функціо-
нальні властивості їх. Крім того, надлишок ГЦ
індукує генерацію активних форм кисню [1], а
ензими нуклеотидного обміну, як відомо, інак-
тивуються під їхньою дією [18]. Цей механізм
підтверджує виявлений кореляційний зв’язок
між коефіцієнтом ГЦ/H2S та активністю ек-
тоапірази тромбоцитів, який посилюється при
ГГЦ.
В дослідах in vivo встановлено здатність
ГГЦ знижувати активність апірази та 5′-нук-
леотидази, у зв’язку з цим було перевірено,
чи виявляє ГЦ пряму інгібуючу дію на ці ен-
зими in vitro. Для досліджень використовува-
ли фракцію тромбоцитів, яку отримали від 5
інтактних щурів-самців. За деякими даними
ГЦ здатен гальмувати гідроліз ADP та AMP
сироваткою крові щурів in vitro [19]. Було за-
стосовано загальноприйнятий метод визначен-
ня ІС50 – параметра, який вказує на концен-
трацію інгібітора, що забезпечує зменшення
швидкості реакції вдвічі.
Встановлено, що присутність ГЦ в інку-
баційному середовищі спричинює зниження
швидкості гідролізу ADP і, меншою мірою,
гідролізу AMP фракцією тромбоцитів (табл. 4).
При цьому ІС50 ГЦ для гідролізу ADP знахо-
диться в межах 5–6 мМ, а ІС50 ГЦ для гід-
ролізу AMP – в межах 8–9 мМ. Оскільки in
vivo активність нуклеотидаз корелює не лише
з рівнем ГЦ, а і з коефіцієнтом ГЦ/H2S було
досліджено залежність інгібуючої дії ГЦ від
донора H2S – NaHS, який додавали до наведе-
них вище модельних систем у вигляді водного
розчину Na2S ⋅ 9H2O в кінцевій концентра-
ції 1 мМ. Показано, що у присутності NaHS
вплив ГЦ на гідроліз аденілових нуклеотидів
зменшується, про що свідчить підвищення
значення ІС50 ГЦ для гідролізу ADP до 9 мМ,
а для гідролізу AMP – вище 10 мМ. Різна чут-
ливість апірази та 5′-нуклеотидази тромбо-
цитів до інгібуючої дії ГЦ, а також зменшення
цього ефекту у присутності H2S вказує на те,
що каталітична активність цих ектоензимів
змінюється скоріше через ковалентну модифі-
кацію їхніх есенціальних тіолових залишків,
ніж через окислювальне пошкодження мемб-
ранного оточення тромбоцитарних протеїнів.
Це узгоджується з даними, що й інші тіоли (на-
приклад, глутатіон) також виявляють здатність
знижувати активність нуклеотидаз [20]. В той
же час, H2S має не лише потужні антиокси-
дантні властивості, а і забезпечує регенерацію
сульфгідрильних груп протеїнів [17].
Таким чином, індуковані тіолактоном ГЦ
порушення обміну аденілових нуклеотидів та
аденозину створюють умови для формуван-
ня гіперреактивності тромбоцитів. Введення
щурам вітамінів В6, В9, В12 та мікроелементів
(Zn2+, Cr3+, V5+) не лише зменшує ступінь ГГЦ,
а й стабілізує функціональний стан тромбо-
цитів, у тому числі і за рахунок нормалізації
активності їхніх ензимів. Наслідки порушень
нуклеотидного обміну при ГГЦ, очевидно, не
т а б л и ц я 4. Вплив ГЦ на швидкість гідролізу ADP та AMP фракцією тромбоцитів інтактних щурів
(М ± m; n = 3)
ГЦ, мМ
Швидкість утворення Рі, нмоль/хв на 1 мг протеїну
Гідроліз ADP
Гідроліз ADP +
1 мМ NaHS
Гідроліз AMP
Гідроліз AMP +
1 мМ NaHS
0 5,45 ± 0,13 – 2,43 ± 0,08 –
0,2 4,72 ± 0,11 5,13 ± 0,10 1,99 ± 0,05 2,10 ± 0,02
0,5 4,20 ± 0,06 4,73 ± 0,18 1,82 ± 0,02 1,95 ± 0,01
1,0 3,79 ± 0,09 4,42 ± 0,08 1,71 ± 0,08 1,83 ± 0,01
2,0 3,24 ± 0,08 3,94 ± 0,06 1,49 ± 0,03 1,61 ± 0,02
5,0 2,84 ± 0,11 3,50 ± 0,13 1,27 ± 0,03 1,48 ± 0,03
10,0 2,09 ± 0,08 2,98 ± 0,06 1,08 ± 0,03 1,21 ± 0,04
еКсПеРиМеНтАльНІ РОбОти
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 2 65
обмежуються розвитком тромбофілії, оскіль-
ки ці молекули беруть участь у багатьох фізіо-
логічних процесах – пуриновому сигналінгу,
нейромодуляції, апоптозі тощо. Подальше вив-
чення впливу порушень обміну сірковмісних
амінокислот на нуклеотидний обмін покра-
щить розуміння механізмів формування різ-
них патологічних станів і дозволить оптимізу-
вати підходи до їхньої фармакотерапії.
Узагальнюючи, треба відзначити, що на-
вантаження щурів тіолактоном ГЦ (в дозі
100 мг/кг маси тіла, протягом 28 днів) спри-
чинює порушення обміну аденілових нуклео-
тидів: зниження (на 22–27%) активності апіра-
зи та 5′-нуклеотидази і підвищення активності
аденозиндезамінази у сироватці крові, фракції
тромбоцитів та печінці; зниження (на 33,8%)
активності S-аденозилгомоцистеїнгідролази в
печінці, зменшення (на 25,6%) екскреції аде-
нозину із сечею. Порушення активності тром-
боцитарних ектоензимів при ГГЦ корелюють
зі ступенем агрегації тромбоцитів, підвищен-
ням рівня ГЦ та дефіцитом H2S. Ознакою фор-
мування гіперреактивності тромбоцитів, асо-
ційованої з ГГЦ, є зниження (в 2 рази) порога
активації цих клітин ADP. Застосування ВМК
запобігає порушенням обміну аденозину при
ГГЦ і практично нормалізує функціональний
стан тромбоцитів. В модельних системах in
vitro ГЦ дозозалежно інгібує гідроліз ADP та
AMP (з ІС50 ≈ 6 та 9 мМ відповідно) фракцією
тромбоцитів і цей ефект зменшується у при-
сутності донора H2S – NaHS.
влияние хронической
нагрузки тиолактоном
гомоцистеина на обмен
аденозина у крыс: связь
с гиперреактивностью
тромбоцитов, коррекция
нарушений его
обмена витаминно-
микроэлементным
комплексом
Н. В. Заичко
Научно-исследовательский институт реабилитации
инвалидов Винницкого национального
медицинского университета им. Н. И. Пирогова;
e-mail: nzaichko@mail.ru
Исследовано влияние нагрузки тиолакто-
ном D,L-гомоцистеина (в дозе 100 мг/кг мас-
сы тела, интрагастрально в течение 28 суток)
на активность энзимов обмена адениловых
нуклеотидов и аденозина в сыворотке крови,
фракции тромбоцитов и печени крыс, изучена
связь выявленных нарушений с функциональ-
ным состоянием тромбоцитов. Установлено,
что у крыс с гипергомоцистеинемией (ГГЦ)
снижается активность апиразы и 5′-нуклео-
тидазы и повышается активность аденозиндез-
аминазы в тромбоцитах, а также нарушается
образование аденозина в сыворотке крови и
печени. При этих условиях существенно уси-
ливается чувствительность тромбоцитов крыс
к ADP-стимуляции. Витаминно-микроэле-
ментный комплекс уменьшает индуциро-
ванные ГГЦ нарушения обмена аденозина и
предотвращает формирование гиперреактив-
ности тромбоцитов. In vitro гомоцистеин до-
зозависимо ингибирует гидролиз ADP и АМР
фракцией тромбоцитов крыс и этот эффект
уменьшается в присутствии донора гидроген-
сульфида – NaHS.
К л ю ч е в ы е с л о в а: гипергомоцис-
теинемия, тромбоциты, аденозин, апираза,
5′-нуклеотидаза, витаминно-микроэлемент-
ный комплекс.
influence of chronic
homocysteine thiolactone
loading on adenosine
metabolism in rats:
relationship with platelet
hyper-reactivity, correction
of this metabolism
disturbances by vitamin-
microelement complex
N. V. Zaichko
Scientific-research Institute оf Invalid
rehabilitation, Pirogov Vinnytsia National
Medical University, Vinnytsia;
e-mail: nzaichko@mail.ru
S u m m a r y
Influence of DL-homocysteine thiolactone
loading (100 mg/kg by intragastric administration
for 28 days) on enzymes activity of adenylic nu-
cleotide and adenosine metabolism in the blood
serum, platelets and liver of rats was investigated.
The relation between revealed disturbance and
platelet hyper-reactivity was estimated. It was es-
tablished, that apyrase and 5′-nucleotidase activi-
ties decreased and adenosine deaminase activity
increased in platelets of the rats with hyperhomo-
cysteinemia (HHC). HHC also interrupted adeno-
sine production in the blood serum and liver in
rats. Under this condition the platelet sensitivity to
ADP-stimulation was significantly increased. Vi-
Н. В. ЗАІЧКО
ISSN 0201 — 8470. Укр. біохім. журн., 2010, т. 82, № 266
tamin-microelement complex decreased HHC-in-
duced disorder of adenosine metabolism and pre-
vented platelet hyper-reactivity formation. In vitro
homocysteine inhibited platelet hydrolysis of ADP
and AMP in a dose-dependent manner and this
effect reduced in the presence of hydrogen sulfide
donor NaHS.
K e y w o r d s: hyperhomocysteinemia, plate-
let, adenosine, apyrase, 5′-nucleotidase, vitamin-
microelement complex.
1. Пентюк О. О., луцюк М. б., Заічко Н. В. та
ін. // Biomed. Вiosoc. Anthropol. – 2008. –
№ 10. – С. 297–303.
2. Заічко Н. В. // Мед. хімія. – 2008. – 10,
№ 2. – С. 54–58.
3. Birk A. V., Broekman M. J., Gladek E. M. //
J. Lab. Clin. Med. – 2002. – 140, N 3. –
Р. 166–175.
4. Frassetto S. S., Schetinger M. R., Schierholt R.
et al. // Braz. J. Med. Biol. res. – 2000. – 33,
N 11. – Р. 1369–1377.
5. Franco R., Aran J. M., Colomer D. et al. // J.
Histochem. Cytochem. – 1990. – 38, N 5. –
Р. 653–658.
6. Пентюк О. О., луцюк М. б., Постовітен-
ко К. П. та ін. // Досягнення біології та
медицини. – 2004. – № 1 (3). – С. 35–38.
7. Stangl G. I., Weisse K., Dinger C. et al. // Exp.
Biol. Med (Maywood). – 2007. – 232, N 1. –
Р. 81–87.
8. Артемчук М. А. // Biomed. Biosoc.
Anthropol. – 2006. – № 7. – С. 17–20.
9. Карбовський В. л., савчук О. М., Волков Г. л.
та ін. // Укр. біохім. журн. – 2007. – 79,
№ 4. – С. 82–89.
10. Lowry O. H., Rosenbrough N. J., Farr A. L.,
Randall R. J. // J. Biol. Chem. – 1951. –
193. – P. 265–276.
11. Рыбальченко В. К., Коганов М. М. Структура
и функции мембран: Практикум. – К.:
Вища школа, 1988. – 312. – P. 239–241.
12. Isa Y., Tsuge H., Hayakawa T. // J. Nutr. Sci.
Vitaminol. – 2006. – 52, N 5. – Р. 302–306.
13. современные методы в биохимии / Под ред.
Ореховича В. Н. – М.: Медицина, 1968. –
372. – С. 121–123.
14. Pull I., McIlwain H. // Biochem. J. – 1972. –
126, N 4. – Р. 965–973.
15. Заічко Н. В., Пентюк Н. О., Пентюк л. О.
та ін. // Вісн. наук. досліджень. – 2009. –
№ 1. – С. 29–32.
16. Gaitonde M. // Biochem. J. – 1967. – 104,
N 2. – P. 627–633.
17. Lowicka E., Beltowski J. // Pharmacol. rep. –
2007. – 59, N 1. – Р. 4–24.
18. Liu X. W., Sok D. E. // Neurochem. res. –
2000. – 25, N 11. – Р. 1475–1484.
19. Böhmer A., Pochmann D., Sarkis J. // Chem.
Biol. Interact. – 2006. – 160, N 2. – P. 159–
164.
20. Frassetto S. S., Dias R. D., Sarkis J. J. //
Biochem. Mol. Biol. Int. – 1997. – 41, N 1. –
Р. 161–168.
Отримано 11.02.2010
еКсПеРиМеНтАльНІ РОбОти
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-19042 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0201-8470 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-11-28T11:23:31Z |
| publishDate | 2010 |
| publisher | Інститут біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Заічко, Н.В. 2011-04-16T17:52:56Z 2011-04-16T17:52:56Z 2010 Вплив навантаження тіолактоном гомоцистеїну на обмін аденозину у щурів: зв’язок з гіперреактивністю тромбоцитів, корекція порушень його обміну вітамінно-мікроелементним комплексом / Н.В. Заічко // Укр. біохім. журн. — 2010. — Т. 82, № 2. — С. 59-66. — Бібліогр.: 20 назв. — укр. 0201-8470 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/19042 612.015: 591.41:591.85: 577.15:577.16 Досліджено вплив навантаження тіолактоном D,L-гомоцистеїну (в дозі 100 мг/кг маси тіла інтрагастрально протягом 28 діб) на активність ензимів обміну аденілових нуклеотидів та аденозину в сироватці крові, фракції тромбоцитів та печінки щурів, оцінено зв’язок виявлених порушень з гіперреактивністю тромбоцитів. Встановлено, що у щурів з гіпергомоцистеїнемією (ГГЦ) в тромбоцитах знижується активність апірази і 5′-нуклеотидази, а аденозиндезамінази – підвищується; також порушується утворення аденозину в сироватці крові та печінці. За цих умов істотно посилюється чутливість тромбоцитів щурів до ADP-стимуляції. Вітамінно-мікроелементний комплекс зменшує ГГЦ-індуковані порушення обміну аденозину та запобігає формуванню гіперреактивності тромбоцитів. In vitro гомоцистеїн інгібує гідроліз ADP та АМР фракцією тромбоцитів щурів і цей ефект зменшується у присутності донора гідроген сульфіду-NaHS. Исследовано влияние нагрузки тиолактоном D,L-гомоцистеина (в дозе 100 мг/кг массы тела, интрагастрально в течение 28 суток) на активность энзимов обмена адениловых нуклеотидов и аденозина в сыворотке крови, фракции тромбоцитов и печени крыс, изучена связь выявленных нарушений с функциональным состоянием тромбоцитов. Установлено, что у крыс с гипергомоцистеинемией (ГГЦ) снижается активность апиразы и 5′-нуклеотидазы и повышается активность аденозиндезаминазы в тромбоцитах, а также нарушается образование аденозина в сыворотке крови и печени. При этих условиях существенно усиливается чувствительность тромбоцитов крыс к ADP-стимуляции. Витаминно-микроэлементный комплекс уменьшает индуцированные ГГЦ нарушения обмена аденозина и предотвращает формирование гиперреактивности тромбоцитов. In vitro гомоцистеин дозозависимо ингибирует гидролиз ADP и АМР фракцией тромбоцитов крыс и этот эффект уменьшается в присутствии донора гидрогенсульфида – NaHS. Influence of DL-homocysteine thiolactone loading (100 mg/kg by intragastric administration for 28 days) on enzymes activity of adenylic nucleotide and adenosine metabolism in the blood serum, platelets and liver of rats was investigated. The relation between revealed disturbance and platelet hyper-reactivity was estimated. It was established, that apyrase and 5′-nucleotidase activities decreased and adenosine deaminase activity increased in platelets of the rats with hyperhomocysteinemia (HHC). HHC also interrupted adenosine production in the blood serum and liver in rats. Under this condition the platelet sensitivity to ADP-stimulation was significantly increased. Vitamin-microelement complex decreased HHC-induced disorder of adenosine metabolism and prevented platelet hyper-reactivity formation. In vitro homocysteine inhibited platelet hydrolysis of ADP and AMP in a dose-dependent manner and this effect reduced in the presence of hydrogen sulfide donor NaHS. uk Інститут біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України Український біохімічний журнал Експериментальні роботи Вплив навантаження тіолактоном гомоцистеїну на обмін аденозину у щурів: зв’язок з гіперреактивністю тромбоцитів, корекція порушень його обміну вітамінно-мікроелементним комплексом Влияние хронической нагрузки тиолактоном гомоцистеина на обмен аденозина у крыс: связь с гиперреактивностью тромбоцитов, коррекция нарушений его обмена витаминно-микроэлементным комплексом Influence of chronic homocysteine thiolactone loading on adenosine metabolism in rats: relationship with platelet hyper-reactivity, correction of this metabolism disturbances by vitamin-microelement complex Article published earlier |
| spellingShingle | Вплив навантаження тіолактоном гомоцистеїну на обмін аденозину у щурів: зв’язок з гіперреактивністю тромбоцитів, корекція порушень його обміну вітамінно-мікроелементним комплексом Заічко, Н.В. Експериментальні роботи |
| title | Вплив навантаження тіолактоном гомоцистеїну на обмін аденозину у щурів: зв’язок з гіперреактивністю тромбоцитів, корекція порушень його обміну вітамінно-мікроелементним комплексом |
| title_alt | Влияние хронической нагрузки тиолактоном гомоцистеина на обмен аденозина у крыс: связь с гиперреактивностью тромбоцитов, коррекция нарушений его обмена витаминно-микроэлементным комплексом Influence of chronic homocysteine thiolactone loading on adenosine metabolism in rats: relationship with platelet hyper-reactivity, correction of this metabolism disturbances by vitamin-microelement complex |
| title_full | Вплив навантаження тіолактоном гомоцистеїну на обмін аденозину у щурів: зв’язок з гіперреактивністю тромбоцитів, корекція порушень його обміну вітамінно-мікроелементним комплексом |
| title_fullStr | Вплив навантаження тіолактоном гомоцистеїну на обмін аденозину у щурів: зв’язок з гіперреактивністю тромбоцитів, корекція порушень його обміну вітамінно-мікроелементним комплексом |
| title_full_unstemmed | Вплив навантаження тіолактоном гомоцистеїну на обмін аденозину у щурів: зв’язок з гіперреактивністю тромбоцитів, корекція порушень його обміну вітамінно-мікроелементним комплексом |
| title_short | Вплив навантаження тіолактоном гомоцистеїну на обмін аденозину у щурів: зв’язок з гіперреактивністю тромбоцитів, корекція порушень його обміну вітамінно-мікроелементним комплексом |
| title_sort | вплив навантаження тіолактоном гомоцистеїну на обмін аденозину у щурів: зв’язок з гіперреактивністю тромбоцитів, корекція порушень його обміну вітамінно-мікроелементним комплексом |
| topic | Експериментальні роботи |
| topic_facet | Експериментальні роботи |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/19042 |
| work_keys_str_mv | AT zaíčkonv vplivnavantažennâtíolaktonomgomocisteínunaobmínadenozinuuŝurívzvâzokzgíperreaktivnístûtrombocitívkorekcíâporušenʹiogoobmínuvítamínnomíkroelementnimkompleksom AT zaíčkonv vliâniehroničeskoinagruzkitiolaktonomgomocisteinanaobmenadenozinaukryssvâzʹsgiperreaktivnostʹûtrombocitovkorrekciânarušeniiegoobmenavitaminnomikroélementnymkompleksom AT zaíčkonv influenceofchronichomocysteinethiolactoneloadingonadenosinemetabolisminratsrelationshipwithplatelethyperreactivitycorrectionofthismetabolismdisturbancesbyvitaminmicroelementcomplex |