Експресiя ФНП, ТФР-β та р53 у клітинах клінічно чутливого та резистентного до дії цисплатину раку яєчника
Досліджено зв’язок між рівнями експресії фактора некрозу пухлин (ФНП), трансформуючого фактор росту (ТФР)-β та р53 у зразках раку яєчника (РЯ) та клінічною відповіддю пухлини на хіміотерапію (ХТ) цисплатином. У поживному середовищі первинних культур клінічно резистентного до ХТ РЯ, виявлено вірог...
Gespeichert in:
| Datum: | 2009 |
|---|---|
| Hauptverfasser: | , , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Ukrainisch |
| Veröffentlicht: |
Iнститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р. Є. Кавецького
2009
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/19653 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Експресiя ФНП, ТФР-β та р53 у клітинах клінічно чутливого та резистентного до дії цисплатину раку яєчника / Н.А. Володько, М.І. Ломницька, Ю.Б. Черних, В.А. Барилка // Онкологія. — 2009. — Т.11, № 4. — С. 274-278. — Бібліогр.: 21 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859830023089815552 |
|---|---|
| author | Володько, Н.А. Ломницька, М.І. Черних, Ю.Б. Барилка, В.А. |
| author_facet | Володько, Н.А. Ломницька, М.І. Черних, Ю.Б. Барилка, В.А. |
| citation_txt | Експресiя ФНП, ТФР-β та р53 у клітинах клінічно чутливого та резистентного до дії цисплатину раку яєчника / Н.А. Володько, М.І. Ломницька, Ю.Б. Черних, В.А. Барилка // Онкологія. — 2009. — Т.11, № 4. — С. 274-278. — Бібліогр.: 21 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| description | Досліджено зв’язок між рівнями експресії фактора некрозу пухлин
(ФНП), трансформуючого фактор росту (ТФР)-β та р53 у зразках раку
яєчника (РЯ) та клінічною відповіддю пухлини на хіміотерапію (ХТ) цисплатином. У поживному середовищі первинних культур клінічно резистентного
до ХТ РЯ, виявлено вірогідно вищі рівні ФНП — 0,79 ± 0,13 нг/мл порівняно із
середовищем культур пухлин, чутливих до ХТ — 0,35 ± 0,08 нг/мл (р < 0,05).
Експресія ТФР-β була вищою в групі чутливих до ХТ пухлин — 4,60 ±
1,20 нг/мл та знижувалась у групі резистентних пухлин — 3,76 ± 0,90 нг/мл.
Рівень експресії ФНП в РЯ після проведення 3 циклів неоад’ювантної ХТ був
вищим (0,54 ± 0,12 нг/мл), ніж у хворих, лікування яких починалось із оперативного втручання (0,31 ± 0,08 нг/мл). У зразках первинно оперованих
РЯ рівень ТФР-β становив 5,45 ± 0,91 нг/мл, а після XT і операції — 3,72 ±
1,2 нг/мл. У пухлинних зразках хворих із клінічно резистентним до ХТ РЯ
виявлено вищі рівні експресії р53, які асоційовані зі зростанням експресії
ФНП у пухлинах. Отримані результати щодо ролі ФНП у підтримці
резистентності РЯ до XT можуть стати основою для розробки лікувальних
підходів із використанням інгібіторів ФНП з метою профілактики формування резистентності РЯ до цисплатину. Ключові слова: рак яєчника,
лікарська резистентність,
цисплатин, пухлинне
мікрооточення, ФНП,
ТФР-β, р53.
Relationship was studied between the
expression levels of TNF, TGF-β, and р53 in samples
from ovarian carcinoma (OC) and clinical response of
the tumor to cisplatin-based chemotherapy (CT). The
growing media of primary OC cell cultures clinically
resistant to CT showed significantly higher TNF levels
(0,79 ± 0,13 ng/ml) compared to the media of tumor
cell cultures sensitive to CT (0,35 ± 0,08 ng/ml;
р < 0.05). TGF-β expression in the OC samples clinically
sensitive and resistant to CT was higher in the group of
CT-sensitive tumors (4,60 ± 1,20 ng/ml) and decreased
in the group of resistant tumors (3,76 ± 0,90 ng/ml). The
TNF expression level in OC after 3 cycles of neoadjuvant
CT was higher (0,54 ± 0,12 ng/ml) compared to primary
operated patients (0,31 ± 0,08 ng/ml). Samples of primary
operated OC showed a TGF-β level of 5,45 ± 0,91 ng/ml,
while samples of tumors from patients who underwent
both CT and surgery showed a TGF-β level of 3,72 ±
1,2 ng/ml. Tumor samples from patients with clinically
CT-resistant OC showed higher levels of р53 associated
with the increased TNF expression in tumors. These
findings show the role of TNF in the maintenance of OC
resistance to CT and can be a basis for the development
of treatment approaches with the use of TNF inhibitors
with the view to prevent OC resistance to cisplatin. Key Words: ovarian carcinoma, drug resistance,
cisplatin, tumor microenvironment, TNF, TGF-β,
р53.
|
| first_indexed | 2025-12-07T15:32:32Z |
| format | Article |
| fulltext |
ÎÐÈÃÈÍÀËÜÍÛÅ ÈÑÑËÅÄÎÂÀ ÍÈß
274 Î Í Ê Î Ë Î Ã È ß • Ò. 1 1 • ¹ 4 • 2 0 0 9
ВСТУП
Рак яєчника (РЯ) — одна з найскладніших нозоло-
гій онкогінекології, його етіологія та патогенез оста-
точно не з’ясовані. Відсутність патогномонічних симп-
томів, раннє імплантаційне та лімфогенне метаста-
зування зумовлюють те, що понад 70% випадків РЯ
діагностується в розповсюдженій ІІІ–ІV стадії. Такі па-
цієнтки потребують складного і тривалого комбінова-
ного лікування із залученням різних підходів сучасної
онкології. Зокрема, широке впровадження протягом
останніх двох декад процедури хірургічного стадію-
вання, циторедуктивних операцій, обов’язкове засто-
сування хіміотерапії (ХТ) похідними платини і такса-
нами дозволили досягти певного покращання резуль-
татів лікування [1]. Незважаючи на це, РЯ є основною
причиною смерті онкогінекологічних пацієнток. Ре-
цидиви захворювання виникають навіть при опти-
мальному об’ємі хірургічного лікування, відповідній
ХТ, проведеній в неоад’ювантному та ад’ювантному
режимах. Провідною причиною рецидиву є первин-
на чи набута резистентність РЯ до цитостатиків [1, 2].
Інтенсивні дослідження цієї проблеми дозволили ви-
ділити кілька груп механізмів, які спричиняють мно-
жинну хіміорезистентність (ХР) пухлинних клітин,
а саме: функціонування систем зворотного транспорту
лікарських засобів з клітини; внутрішньоклітинна де-
токсикація цитостатика; підвищена активність ДНК-
репараз; порушення генетичних систем запуску апо-
птозу тощо [3–5].
Очевидно, що резистентність клітин РЯ до по-
хідних платини є результатом дії кількох незалеж-
них механізмів. З одного боку, це механізми, що за-
побігають потраплянню похідних платини до ядра
клітини та зв’язуванню з ДНК, блокуючи таким чи-
ном їх протипухлинну дію. Серед найчастіше на-
ведених в літературі механізмів ХР є внутрішньо-
клітинна детоксикація тіоловмісними сполуками
(глютатіон, металотіоніни), рівень яких підвище-
ний у цитоплазмі клітин РЯ. Інактивація сполук
платини відбувається за рахунок заміщення їх тіо-
ловими групами [6]. Не менш важливим є вплив біл-
ків, що відповідають за транспорт лікарських засо-
бів із клітини проти градієнта концентрації. Серед
цих енергозалежних помп є Р-глікопротеїн, MDP-2
(multidrug resistance protein-2), активний транспор-
тер CTR-1 тощо [7]. Інші механізми ХР реалізуються
за рахунок утворення в ядрах ракових клітин комп-
лексів ДНК з платиною, внаслідок чого посилюєть-
ся репарація ДНК, підвищується опірність ДНК до
пошкоджень, порушується система апоптозу [4].
Зв’язані з платиною ділянки ДНК можуть видаляти-
ся білками, що розпізнають пошкодження (damage
recognition proteins). Докази функціонування цього
механізму отримані в системах in vitro [8] та в паці-
єнток з РЯ [9]. Важливим механізмом ХР до похід-
них платини є порушення функції гена р53. Мута-
ції цього гена – індуктора апоптозу, спостерігають
у 50–70% хворих на РЯ [10, 11].
Не лише внутрішньоклітинні механізми бе-
руть участь у формуванні ХР. Важливу роль у цьо-
му процесі відіграють елементи клітинного мікро-
оточення пухлини. У мікрооточенні РЯ виявлено
ЕКСПРЕСIЯ ФНП, ТФР-β ТА р53
У КЛІТИНАХ КЛІНІЧНО ЧУТЛИВОГО
ТА РЕЗИСТЕНТНОГО ДО ДІЇ
ЦИСПЛАТИНУ РАКУ ЯЄЧНИКА
Резюме. Досліджено зв’язок між рівнями експресії фактора некрозу пухлин
(ФНП), трансформуючого фактор росту (ТФР)-β та р53 у зразках раку
яєчника (РЯ) та клінічною відповіддю пухлини на хіміотерапію (ХТ) циспла-
тином. У поживному середовищі первинних культур клінічно резистентного
до ХТ РЯ, виявлено вірогідно вищі рівні ФНП — 0,79 ± 0,13 нг/мл порівняно із
середовищем культур пухлин, чутливих до ХТ — 0,35 ± 0,08 нг/мл (р < 0,05).
Експресія ТФР-β була вищою в групі чутливих до ХТ пухлин — 4,60 ±
1,20 нг/мл та знижувалась у групі резистентних пухлин — 3,76 ± 0,90 нг/мл.
Рівень експресії ФНП в РЯ після проведення 3 циклів неоад’ювантної ХТ був
вищим (0,54 ± 0,12 нг/мл), ніж у хворих, лікування яких починалось із опе-
ративного втручання (0,31 ± 0,08 нг/мл). У зразках первинно оперованих
РЯ рівень ТФР-β становив 5,45 ± 0,91 нг/мл, а після XT і операції — 3,72 ±
1,2 нг/мл. У пухлинних зразках хворих із клінічно резистентним до ХТ РЯ
виявлено вищі рівні експресії р53, які асоційовані зі зростанням експресії
ФНП у пухлинах. Отримані результати щодо ролі ФНП у підтримці
резистентності РЯ до XT можуть стати основою для розробки лікувальних
підходів із використанням інгібіторів ФНП з метою профілактики форму-
вання резистентності РЯ до цисплатину.
Н.А. Володько
М.І. Ломницька
Ю.Б. Черних
В.А. Барилка
Львівський національний
медичний університет
ім. Данила Галицького,
Львів, Україна
Ключові слова: рак яєчника,
лікарська резистентність,
цисплатин, пухлинне
мікрооточення, ФНП,
ТФР-β, р53.
ÎÐÈÃÈÍÀËÜÍÛÅ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍ È ß
275Î Í Ê Î Ë Î Ã È ß • Ò. 1 1 • ¹ 4 • 2 0 0 9
низку біологічно активних речовин, а саме мета-
лопротеїнази, цитокіни (фактор некрозу пухлин
(ФНП), епідермальний фактор росту (ЕФР), транс-
формуючі фактори росту (ТФР)-α і ТФР-β, інтер-
лейкін (ІЛ)-1 тощо) [12]. Численні цитокіни, що
беруть участь у регуляції проліферації та міжклі-
тинних взаємодіях, можуть модифікувати відомі
механізми ХР та формувати незалежні нові умови,
що сприятимуть виживанню клітин РЯ після впли-
ву на них цитостатиків. Зокрема, ФНП та ТФР-β є
регуляторами проліферації, ангіогенезу, індуктора-
ми апоптозу тощо.
Мета дослідження — вивчення зв’язку між рів-
нями експресії цитокінів ФНП, ТФР-β та білка р53
у пухлинних зразках РЯ та клінічною відповіддю
пухлини на ХТ цисплатином.
ОБ’ЄКТ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
Проаналізовано матеріал від 110 пацієнток з РЯ,
які отримували комбіноване лікування з 1999 по
2003 p. на базі гінекологічного відділення Львів-
ського державного онкологічного регіонального
лікувально-діагностичного центру. Середній вік па-
цієнток становив 58,2 року, при цьому наймолодшій
пацієнтці було 42 роки, а найстаршій — 70. Після хі-
рургічного стадіювання РЯ І стадія за класифікаці-
єю FIGO була виявлена у 6 (5%) хворих, II — у 19
(17%), III — у 74 (68%), IV — у 11 (10%) хворих. За гіс-
тологічною будовою пухлини розподілялись таким
чином: серозно-папілярних карцином — 36 (33%),
низькодеференційованих карцином — 32 (29%), се-
розних аденокарцином — 27 (25%), псевдомуциноз-
них аденокарцином — 15 (12%).
Циторедуктивні операції виконано 49 хво-
рим, відтак проведено 5–6 циклів ХТ за протоко-
лом СР (циклофосфамід — 750 мг/м2, цисплатин —
75 мг/м2). 61 пацієнтка отримала неоад’ювантну ХТ
(3 цикли СР), циторедуктивне оперативне лікуван-
ня з подальшою ад’ювантною ХТ.
Проведено аналіз тривалості безрецидивного пе-
ріоду та розподілено пацієнток на групи із клініч-
ною чутливістю та резистентністю до проведеної
ХТ. Чутливими до використаної схеми ХТ вважали
пухлинні процеси, які не проявляли ознак рециди-
вування протягом 12 міс після закінчення останньо-
го циклу ХТ. Пухлини, що рецидивували протягом
12 міс після закінчення ХТ, вважали ХР. Із 61 хворої,
яка отримувала неоад’ювантну ХТ і комбіноване лі-
кування, у 30 (49%) не виявлено ознак рецидивуван-
ня протягом 1 року після закінчення терапії (група
клінічно чутливих до ХТ пухлинних процесів). Реш-
ту — 31 (51%) хвору віднесли до групи із клінічною
резистентністю до ХТ.
Отримання первинних пухлинних культур РЯ [12].
Забір пухлинного матеріалу проводили безпосе-
редньо в операційній у стерильних умовах. У сте-
рильний флакон об’ємом 50 мл наливали 20 мл се-
редовища RPMI-1640, поміщали в нього пухлин-
ний зразок розміром близько 1 см3 та протягом 5 хв
транспортували його в лабораторію, де в стериль-
них умовах тканину переносили у пластикову чаш-
ку Петрі (d = 9 см), наповнену 5–6 мл свіжого се-
редовища RPMI-1640 з гентаміцином. При потребі
тканину очищували від жиру і ділянок некрозу, ме-
ханічно подрібнювали на фрагменти 1–2 мм3, що
збільшувало площу контакту тканини з розчином
ферментів. Ферментативну дезагрегацію тканини
здійснювали за допомогою 0,02% розчину колаге-
нази (Wornington, USA) у ФСБ та розчину ДНКази
(Wornington, USA, 3 мкг/мл ФСБ, рН 7,2) при кім-
натній температурі протягом 20 хв. Суспензію клі-
тин фільтрували; блокували залишкову фермен-
тативну активність промиванням клітин у повно-
му середовищі RPMI-1640, що містило 200 мкг/мл
гентаміцину, 20% бичачої сироватки крові (Sigma),
25 мМ HEPES (Sigma) в об’ємі 5 мл; тричі промива-
ли в 10 мл ФСБ (центрифугування при 1000 об./хв
протягом 3 хв). Осад ресуспендували в повному се-
редовищі RPMI-1640, що містило 200 мкг/мл гента-
міцину, 10% телячої ембріональної сироватки крові
(Sigma), 25 мМ HEPES (Sigma). Життєздатні кліти-
ни підраховували в камері Горяєва у наявності 0,1%
водного розчину трипанового синього. Для роботи
використовували суспезії, в яких кількість життє-
здатних клітин перевищувала 80%.
Отримані пухлинні клітини (500 тис./мл середо-
вища RPMI-1640) інкубували в пластиковому або
скляному культуральному посуді (найчастіше кліти-
ни висівали у пластикові культуральні чашки Costar,
d = 5 см). Час інкубації становив 24 год у вологій ка-
мері, в атмосфері СО2 при 37 °С.
Після інкубації поживне середовище зливали у ко-
нічні пробірки і центрифугували 7 хв при 1000 об./хв.
Надосад збирали у пластикові пробірки і зберігали
при –30 °С до визначення активності цитокінів.
Визначення активності ФНП проводили біоло-
гічним методом з використанням чутливих до ФНП
культури клітин трансформованих мишачих фібро-
бластів L-929 [12]. Визначення активності TФP-β
проводили біологічним методом із використанням
чутливої до TФP-β культури CCL-64 епітелію ле-
гень норки (MvlLu; American Type Culture Collection,
Rockville, Md.) [12].
Імуногістохімічне дослідження експресії р53. Зраз-
ки пухлини були фіксовані у 10% формаліні та па-
рафінізовані. Тканинні зрізи товщиною 4 мкм на-
носили на предметне скло, вкрите 0,5% желатином
(Serva) із 0,4% K(Cr(SO4)2). Скельця підсушували
при 37 °С 12 год, депарафінізували та регідратува-
ли у серії ксилолів (І, II) по 5 хв та спиртів (96; 90;
80; 70; 50%) по 2 хв. Візуалізацію р53 проводили
кип’ятінням у мікрохвильовій печі (800 W) 3 рази
по 3 хв у 0,1 м Na-цитратному буфері (рН 6,0). Ен-
догенну пероксидазу інгібували 3% пероксидом вод-
ню 5 ± 1 хв. Імуногістохімічне дослідження прово-
дили, використовуючи первинні МкАТ до р53 (клон
DO-7, DAKO) (експозиція 15–20 хв) та візуалізую-
чу систему LSAB®2 System (DAKO). Зрізи додатко-
ÎÐÈÃÈÍÀËÜÍÛÅ ÈÑÑËÅÄÎÂÀ ÍÈß
276 Î Í Ê Î Ë Î Ã È ß • Ò. 1 1 • ¹ 4 • 2 0 0 9
во забарвлювали гематоксиліном, промивали 37 мМ
NH4OH та наклеювали DAKO Faramount. Усі ета-
пи виконували при кімнатній темпераурі у вологій
камері. Ступінь експресії р53 визначали за відно-
шенням кількості позитивно забарвлених клітин
до загальної кількості клітин у кожному з 10 полів
зору (×1500). Експресію вважали негативною (–),
якщо позитивну реакцію не спостерігали або ви-
значали менше ніж у 10% клітин; слабким ступе-
нем експресії (+) вважали позитивну реакцію у 10–
25%, помірним ступенем (++) — у 25–50%, висо-
ким ступенем експресії (+++) — більше ніж у 50%
забарвлених клітин.
Статистична обробка результатів. Достовір-
ність різниці досліджених параметрів обраховува-
ли за критерієм Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТИ ТА ЇХ ОБГОВОРЕННЯ
У середовищі культур пухлин первинно про-
оперованих та хворих з передопераційною XT при
узагальненому аналізі було визначено майже од-
накові рівні ФНП (0,51 ± 0,09 та 0,54 ± 0,12 нг/мл
відповідно). Проте при зіставленні результатів
дослідження зразків пухлин з однаковою роспо-
всюдженістю (III–IV стадія за FIGO) виявилося,
що рівень ФНП у зразках після XT — істотно ви-
щий (0,54 ± 0,12 нг/мл), ніж у первинно проопе-
рованих (0,31 ± 0,08 нг/мл, р < 0,05). Між концен-
трацією ТФР-β у середовищі культур РЯ від пер-
винно оперованих хворих та тих, яким проводили
неоад’ювантну XT, виявлено обернену залежність.
Зокрема, при розповсюджених стадіях РЯ у пер-
винно оперованих пухлинах активність ТФР-β ста-
новила 5,45 ± 0,91 нг/мл, а після XT і операції —
3,72 ± 1,20 нг/мл (табл. 1).
Таблиця 1
Рівні ФНП та ТФР-β у середовищі первинних клітинних
культур РЯ хворих із розповсюдженим захворюванням
(III–IV стадія за FIGO)
Цитокін
Концентрація цитокіну, нг/мл
Хірургічне лікування
(n = 49)
Неоад’ювантна XT +
хірургічне лікування (п = 61)
ТФР-β 5,45 ± 0,91 3,72 ± 1,20
ФНП 0,31 + 0,08 0,54 ± 0,12
У табл. 1 і 2: р < 0,05 (для ФНП).
Аналіз тривалості безрецидивного періоду до-
зволив розподілити пацієнток на групи клінічно
чутливих і резистентних до проведеної ХТ. Осо-
бливу увагу спрямовано на групу хворих, які отри-
мали перед операційну XT. У більшості з них (50 із
61 (82%)) об’єктивно (за даними УЗД, бімануаль-
но) визначали позитивний ефект від проведено-
го лікування, що дозволило виконати хірургічне
втручання. Тобто 82% хворих демонстрували від-
повідь на XT. Проте у 25 (40 %) хворих протягом
12 міс після закінчення лікування діагностовано
рецидиви РЯ. З 11 хворих, які не відповідали на
неоад’ювантну XT, після комбінованого лікуван-
ня у 5 не виявлено ознак прогресування хвороби,
що дозволило віднести ці випадки до групи клініч-
но чутливих до XT.
У виділених таким чином групах хворих із клі-
нічно чутливим та резистентним до ХТ РЯ проа-
налізовано рівні ФНП та ТФР-β. Виявлено суттєву
різницю між рівнями ФНП: зокрема, концентрація
цього цитокіну в середовищі пухлин клінічно резис-
тентних до ХТ хворих була високою і сягала майже
0,8 нг/мл (табл. 2). Натомість, у підгрупі клінічно
чутливих до ХТ пухлин відповідний показник був
значно нижчим і становив 0,35 ± 0,08 нг/мл.
Таблиця 2
Концентрація ФНП та ТФР-β у середовищі первинних культур РЯ
хворих, клінічно чутливих і резистентних до ХТ
Цитокін
Концентрація цитокіну, нг/мл
Клінічно чутливі до XT
(n = 30)
Клінічно резистентні до ХТ
(n = 31)
ТФР-β 4,61 ± 0,82 3,76 ± 0,54
ФНП 0,35 ± 0,08 0,79 ± 0,13
Концентрація ТФР-β у зразках клінічно чутливих
та резистентних до XT пухлин також відрізнялась,
була вищою в групі чутливих до ХТ пухлин (4,6 ±
1,2 нг/мл) та знижувалась у групі резистентних до
ХТ пухлин (3,76 ± 0,90 нг/мл) (див. табл. 2).
При дослідженні експресії р53 позитивне забарв-
лення спостерігали загалом у 51% випадків. Екс-
пресія р53 при І–ІІ стадії захворювання була не-
гативною у 66,7% та середньою у 33,3% випадків.
При РЯ III–IV стадії експресія р53 була негатив-
ною у 62,0% випадків, у 23,8% — середньою (40,3 ±
7,4% клітин), і у 14,3% — високою (58,7 ± 4,8% клі-
тин). Ця відмінність була статистично достовірною.
Серед зразків пухлин після циторедуктивних опе-
рацій експресію р53 виявлено в 30% випадків, піс-
ля неоад’ювантної XT та операції — у 60%. Подаль-
ший аналіз інтенсивності експресії р53 виконували
в групі хворих, які отримали неоад’ювантну XT, від-
так були прооперовані.
У цій групі слабкий (+) ступінь експресії р53 ви-
явлено у 31% хворих, помірний (++) — у 39%, а ви-
сокий(+++) — у 30%. При аналізі зразків у групах
клінічно чутливих та резистентних до XT виявлено
статистично вірогідну різницю в частоті різних сту-
пенів експресії р53. Високий ступінь експресії часті-
ше відзначали в резистентній до XT підгрупі хворих
(48%), відтак помірну і слабку експресію частіше ви-
являли в пухлинах, чутливих до XT (табл. 3).
Таблиця 3
Розподіл хворих на РЯ за експресією р53 у тканині пухлини
та клінічною чутливістю та резистентністю до ХТ
Чутливість до ХТ
Розподіл хворих за експресією р53
у тканині РЯ, n (%)
Відсутня
(–)
Слабка
(+)
Помірна
(++)
Висока
(+++)
Пухлини, клінічно чутливі
до XT
3 (10,0) 12 (39,0) 15 (49,0) 0 (0,0)
Пухлини, клінічно
резистентні до XT
5 (16,1) 4 (12,9)* 6 (19,4)* 15 (48,0)*
*р < 0,05.
При аналізі зв’язку експресії р53 та концентра-
ції ФНП виявлено зростання останньої із підвищен-
ням рівня експресії р53 у тканині пухлини. Зокре-
ма, більшу концентрацію ФНП спостерігали у се-
редовищі культур пухлин з високою експресією р53
порівняно з культурами пухлин із слабкою експре-
ÎÐÈÃÈÍÀËÜÍÛÅ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍ È ß
277Î Í Ê Î Ë Î Ã È ß • Ò. 1 1 • ¹ 4 • 2 0 0 9
сію р53 або її відсутністю (1,20 ± 0,40 проти 0,48 ±
0,12 нг/мл) (рисунок).
Рисунок. Концентрація ФНП у середовищі первинних
клітинних культур РЯ із різною експресією білка р53
у тканині пухлини
Таким чином, продемонстровано вищі рівні
ФНП у зразках РЯ, клінічно резистентних до дії
цисплатину. Імовірно ФНП проявляє себе як фак-
тор виживання ракових клітин, що зазнали ток-
сичного впливу. Вважають, що ФНП відіграє важ-
ливу роль у біології клітин РЯ; зокрема, його рів-
ні знач но зростають при РЯ, корелюючи із таким
параметром агресивності, як ступінь диференціа-
ції клітин [13]. За даними M. Cuello та співавторів
[5], резистентні до цисплатину клітини РЯ є нечут-
ливими також до проапоптотичного впливу ФНП.
Нагадаємо, що до факторів виживаності відносять
низку білків, які сприяють блокаді проапоптотич-
них стимулів. Зокрема, це білки родини ІАР, які
вперше були виявлені у бакуловірусів. До родини
білків ІАР людини належать Хіар, Ніар-1.-2, Niap,
сурвівін (surviving) та лівін (livin) [14]. Функціону-
вання цих білків захищає клітину від загибелі. У
чутливих до ХТ пухлинах рівень екпресії Хіар зни-
жується під впливом цисплатину. Натомість, одні-
єю із основ ХР є нездатність цисплатину пригнічу-
вати Xiap [13].
Попередніми дослідженнями в експерименті вста-
новлено, що ФНП може модифікувати експресію білків,
які зумовлюють резистентність клітини до цисплатину.
Зокрема, ФНП здатен пригнічувати Xiap у клітинах РЯ,
внаслідок чого у них не запускається під дією додатко-
вих апоптогенних чинників апоптоз [13]. Наші резуль-
тати свідчать на користь даних про роль ФНП у форму-
ванні резистентності пухлин (зокрема РЯ) до XT.
У тканинних зразках РЯ виявлено певні відмін-
ності в експресії ТФР-β під впливом ХТ. Спостері-
гали тенденцію до зниження рівня ТФР-β у пожив-
ному середовищі первинних пухлинних культур від
хворих після неоад’ювантної XT. Нижчі концентра-
ції цитокіну виявили і у клінічно резистентних до XT
РЯ. ТФР-β є інгібуючим ріст цитокіном щодо епіте-
ліальних клітин [15]. Проте в ході пухлинної прогре-
сії ракові клітини втрачають чутливість до його ріст-
гальмівної дії [15, 16]. У багатьох злоякісних пух-
линах , в тому числі і в РЯ, виявлено доволі значні
рівні експресії цього цитокіну. В таких випадках дія
цитокіну може навіть змінюватися з ріст-інгібуючої
на ріст-індукуючу внаслідок порушення внутріш-
ньоклітинної передачі сигналу. Зокрема, для пев-
них РЯ характерною є зміна продукції ТФР-β, пере-
важно у бік зростання та втрати рецепторів ТФР-β з
поверхні клітин. Зазначені зміни призводять до зна-
чного порушення передачі сигналу від ТФР-β, осо-
бливо у рецидивному та ХР РЯ [15].
Пошкодження гена р53 (втрата алелі, мутація чи
гіперекспресія) часто спостерігаються у карцино-
мах яєчника. Успадкований та спорадичний РЯ ха-
рактеризуються однаковою частотою мутацій гена
р53 [17]. Нами продемонстровано, що тканина ре-
зистентного до XT РЯ характеризується вищим сту-
пенем експресії р53 у ядрах клітин, ніж тканина чут-
ливого до XT РЯ. Виявлено також, що вищі рівні
експресії р53 асоційовані зі зростанням експресії
ФНП. Вірогідне пояснення такого зв’язку може зна-
ходитися на рівні механізмів регуляції транскрип-
ції обох білків.
Гени, що кодують синтез ФНП, мають ділянки
з’єднання з активатором транскрипції NFB по-
близу їх промоторів [18]. ФНП активує експресію
NFkb, підвищує приєднання NFB до промотора
гена р53 [19]. Опосередкована через NFB активація
транскрипції гена р53 відбувається у відповідь на гі-
поксію/реоксигенацію [18]. Експресія р53 є вищою
на запущених стадіях захворювання. На І–ІІ ста-
дії частота та ступінь експресії р53 були нижчими,
а на III–IV — вищими, що також продемонстрова-
но у наших попередніх дослідженнях [20]. У проце-
сі розвит ку захворювання, очевидно, відбувається
нагромадження частоти мутацій гена р53, хоча іс-
нує думка, що різні альтерації цього гена відбува-
ються лише на початку розвитку РЯ [21]. Функціо-
нальною активністю p53 визначається можливість
розвитку Xiap-залежної ХР [13]. Цисплатин акти-
вує p53, однак це продемонстровано на чутливих
до ХТ клітинах, коли у ХР такої активації не спо-
стерігається [13].
Отримані результати щодо ролі ФНП у підтримці
резистентності РЯ до XT вказують на доцільність за-
стосування інгібіторів ФНП з метою профілактики
формування резистентності РЯ до цисплатину.
ВИСНОВКИ
1. Зростання експресії ФНП та нижчі рівні експресії
ТФР-β виявлено в зразках РЯ, які клінічно прояви-
ли себе як резистентні до ХТ.
2. У поживному середовищі первинних культур
РЯ, видаленого у хворих, яким проведено 3 цикли
неоад’ювантної ХТ, виявлено зростання рівня ФНП
поряд зі зниженням ТФР-β, на відміну від первин-
них культур РЯ хворих, лікування яких починалось
із хірургічного.
3. У пухлинних зразках хворих із клінічно ре-
зистентним до ХТ РЯ виявлено вищі рівні експре-
сії білка р53, які асоційовані зі зростанням експре-
сії ФНП в пухлинах.
ÎÐÈÃÈÍÀËÜÍÛÅ ÈÑÑËÅÄÎÂÀ ÍÈß
278 Î Í Ê Î Ë Î Ã È ß • Ò. 1 1 • ¹ 4 • 2 0 0 9
ЛІТЕРАТУРА
1. Воробьева ЛИ, Доценко ЮС, Винницкая АБ и др.
Фармакотерапія злокачественных опухолей женских гени-
талий. Фармакол Вісн 2000; 1: 59–63.
2. Горбунова ВА, Хохлова СВ, Бесова НС и др. Эффек-
тивность и токсичность комбинации таксотер и циспластин
в первой линии химиотерапии у больных распространенным
раком яичников. Вопр Онкол 2001; 47 (5): 1–6.
3. Чехун ВФ, Шишова ЮВ. Современные взгляды фор-
мирования лекарственной устойчивости опухолей. Онколо-
гия 2000; 2 (1): 11–5.
4. Kelland LR. Preclinical perspectives on platinum resistance.
Drugs 2000; 59 (Suppl 4): 1–8.
5. Cuello M, Etfenberg SA, Nau MM, et al. Synergistik
induction of apoptosis by the combination of TRAIL and
chemotherapy in chemoresistant ovarian cancer cells. Gynecol
Oncol 2001; 81 (3): 380–90.
6. Piccart MJ, Lamb H, Vermorken JB. Current and future
potential roles of platinum drugs in treatment of ovarian cancer
Ann Oncol 2001; 12: 1195–203.
7. Samimi G, Safaei R, Katano K, et al. Increased expression of
copper efflux transporter ATP7A mediates resistance to cisplatin,
carboplatin, oxaliplatin in ovarian cancer cells. Clin Cancer Res
2004; 10: 4661–9.
8. O’Neill CF, Koberle B, Masters JRW, et al. Gene-specific repair
of Pt/DNA lesion and induction of apoptosis by the oral platinum
drug JM216 in three human adenocarcinoma cell lines sensitive and
resistance to cisplatin. Br J Cancer 1999; 81: 1294–303.
9. Giaccone G. Clinical perspectives on platinum resistance.
Drug 2000; 59: 9–17.
10. Ferreira CA, Tolis C, Giaccone G. P-53 and chemosensitivity
Ann Oncol 1999; 10: 1011–21.
11. Fu S, Kavanagh JJ, Huw, et al. Clinical application of
oxaleplatin inepithelial ovarian cancer. Inter. J Gynecol Cancer
2006; 16: 1717–32.
12. Володько НА. Метастазування злоякісних пухлин:
роль факторів пухлинного мікроточення. Львів: Медицина
світу, 2002. 198 с.
13. Fraser M, Leung B, Jahani-Asl A, et al. Chemoresistance
in human ovarian cancer: the role of apoptotic regulators [review].
Reproduct Biol Endocrinol 2003; 1: 66.
14. Krambeck A, Dong H, Thompson P, et al. Survivin and
b-7h-7 are collaborative predictors of survival and represent
potential therapeutic targets for patients with renal cell carcinoma.
Clin Cancer Res 2007; 15: 1749–56.
15. Bristow RE, Baldwin RL, Yamada SD, et al. Altered
expression of transforming growth factor-β ligands and receptors
in primary and recurrent ovarian carcinoma. Cancer 2000; 85:
658–68.
16. Stoika RS, Yakymovych MY, Yakymovych IA, et al.
Cisplatin resistant derivatives of murine L1210 leukemia cells are
not susceptible to growth inhibiting and apoptosis — inducing
actions of transforming growth factor-β1. Anti-cancer drugs 1999;
10: 457–63.
17. Lieberman DA, Hoffman B, Stainmann RA. Molecular
control of growth arrest and apoptosis: p53 dependant and
independent pathways. Oncogene 1995; 11: 199–210.
18. Liu Z, Hsu H, Goeddel DV, et al. Dissection of TNF
receptor 1 effector funktions: JNK activation is not linked to
apoptosis while NFβ activation prevents cell death. Cell 1996;
87: 565–76.
19. Makin J, Dive C. Modulating sensitivity to drug induced
apoptosis: the future for chemotherapy? Breast cancer 2001; 3 (3):
150–3.
20. Ломницька МІ, Володько НА, Барилка ВА та ін. Зв’язок
ангіогенезу в раку яєчника людини з експресією білків р53 і
BRCA1, продукцією цитокінів ФНП-α та ТФР-β. Онкологія
2005; 7 (3): 195–200.
21. McManus DT, Yap EP, Maxwell P, et al. p53 expression,
mutation and allele deletion in ovarian cancer. J Pathol 1994:
147: l59–68.
TNF, TGF-β AND р53 EXPRESSION
IN CELLS OF CISPLATIN SENSITIVE
AND RESISTANT OVARIAN CARCINOMA
N.A. Volodko, M.I. Lomnytska, Y.B. Chernykh,
V.A. Barylka
Summary. Relationship was studied between the
expression levels of TNF, TGF-β, and р53 in samples
from ovarian carcinoma (OC) and clinical response of
the tumor to cisplatin-based chemotherapy (CT). The
growing media of primary OC cell cultures clinically
resistant to CT showed significantly higher TNF levels
(0,79 ± 0,13 ng/ml) compared to the media of tumor
cell cultures sensitive to CT (0,35 ± 0,08 ng/ml;
р < 0.05). TGF-β expression in the OC samples clinically
sensitive and resistant to CT was higher in the group of
CT-sensitive tumors (4,60 ± 1,20 ng/ml) and decreased
in the group of resistant tumors (3,76 ± 0,90 ng/ml). The
TNF expression level in OC after 3 cycles of neoadjuvant
CT was higher (0,54 ± 0,12 ng/ml) compared to primary
operated patients (0,31 ± 0,08 ng/ml). Samples of primary
operated OC showed a TGF-β level of 5,45 ± 0,91 ng/ml,
while samples of tumors from patients who underwent
both CT and surgery showed a TGF-β level of 3,72 ±
1,2 ng/ml. Tumor samples from patients with clinically
CT-resistant OC showed higher levels of р53 associated
with the increased TNF expression in tumors. These
findings show the role of TNF in the maintenance of OC
resistance to CT and can be a basis for the development
of treatment approaches with the use of TNF inhibitors
with the view to prevent OC resistance to cisplatin.
Key Words: ovarian carcinoma, drug resistance,
cisplatin, tumor microenvironment, TNF, TGF-β,
р53.
Адреса для листування:
Володько Н.А.
79000, Львів, вул. Марка Вовчка, 14/6
Львівський національний медичний
університет ім. Данила Галицького,
кафедра онкології та медичної радіології
E-mail: nvolodko@yahoo.com
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-19653 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 1562-1774,0204-3564 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-12-07T15:32:32Z |
| publishDate | 2009 |
| publisher | Iнститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р. Є. Кавецького |
| record_format | dspace |
| spelling | Володько, Н.А. Ломницька, М.І. Черних, Ю.Б. Барилка, В.А. 2011-05-11T22:48:03Z 2011-05-11T22:48:03Z 2009 Експресiя ФНП, ТФР-β та р53 у клітинах клінічно чутливого та резистентного до дії цисплатину раку яєчника / Н.А. Володько, М.І. Ломницька, Ю.Б. Черних, В.А. Барилка // Онкологія. — 2009. — Т.11, № 4. — С. 274-278. — Бібліогр.: 21 назв. — укр. 1562-1774,0204-3564 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/19653 Досліджено зв’язок між рівнями експресії фактора некрозу пухлин (ФНП), трансформуючого фактор росту (ТФР)-β та р53 у зразках раку яєчника (РЯ) та клінічною відповіддю пухлини на хіміотерапію (ХТ) цисплатином. У поживному середовищі первинних культур клінічно резистентного до ХТ РЯ, виявлено вірогідно вищі рівні ФНП — 0,79 ± 0,13 нг/мл порівняно із середовищем культур пухлин, чутливих до ХТ — 0,35 ± 0,08 нг/мл (р < 0,05). Експресія ТФР-β була вищою в групі чутливих до ХТ пухлин — 4,60 ± 1,20 нг/мл та знижувалась у групі резистентних пухлин — 3,76 ± 0,90 нг/мл. Рівень експресії ФНП в РЯ після проведення 3 циклів неоад’ювантної ХТ був вищим (0,54 ± 0,12 нг/мл), ніж у хворих, лікування яких починалось із оперативного втручання (0,31 ± 0,08 нг/мл). У зразках первинно оперованих РЯ рівень ТФР-β становив 5,45 ± 0,91 нг/мл, а після XT і операції — 3,72 ± 1,2 нг/мл. У пухлинних зразках хворих із клінічно резистентним до ХТ РЯ виявлено вищі рівні експресії р53, які асоційовані зі зростанням експресії ФНП у пухлинах. Отримані результати щодо ролі ФНП у підтримці резистентності РЯ до XT можуть стати основою для розробки лікувальних підходів із використанням інгібіторів ФНП з метою профілактики формування резистентності РЯ до цисплатину. Ключові слова: рак яєчника, лікарська резистентність, цисплатин, пухлинне мікрооточення, ФНП, ТФР-β, р53. Relationship was studied between the expression levels of TNF, TGF-β, and р53 in samples from ovarian carcinoma (OC) and clinical response of the tumor to cisplatin-based chemotherapy (CT). The growing media of primary OC cell cultures clinically resistant to CT showed significantly higher TNF levels (0,79 ± 0,13 ng/ml) compared to the media of tumor cell cultures sensitive to CT (0,35 ± 0,08 ng/ml; р < 0.05). TGF-β expression in the OC samples clinically sensitive and resistant to CT was higher in the group of CT-sensitive tumors (4,60 ± 1,20 ng/ml) and decreased in the group of resistant tumors (3,76 ± 0,90 ng/ml). The TNF expression level in OC after 3 cycles of neoadjuvant CT was higher (0,54 ± 0,12 ng/ml) compared to primary operated patients (0,31 ± 0,08 ng/ml). Samples of primary operated OC showed a TGF-β level of 5,45 ± 0,91 ng/ml, while samples of tumors from patients who underwent both CT and surgery showed a TGF-β level of 3,72 ± 1,2 ng/ml. Tumor samples from patients with clinically CT-resistant OC showed higher levels of р53 associated with the increased TNF expression in tumors. These findings show the role of TNF in the maintenance of OC resistance to CT and can be a basis for the development of treatment approaches with the use of TNF inhibitors with the view to prevent OC resistance to cisplatin. Key Words: ovarian carcinoma, drug resistance, cisplatin, tumor microenvironment, TNF, TGF-β, р53. uk Iнститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р. Є. Кавецького Оригинальные исследования Експресiя ФНП, ТФР-β та р53 у клітинах клінічно чутливого та резистентного до дії цисплатину раку яєчника TNF, TGF-Β and Р53 expression in cells of cisplatin sensitive and resistant ovarian carcinoma Article published earlier |
| spellingShingle | Експресiя ФНП, ТФР-β та р53 у клітинах клінічно чутливого та резистентного до дії цисплатину раку яєчника Володько, Н.А. Ломницька, М.І. Черних, Ю.Б. Барилка, В.А. Оригинальные исследования |
| title | Експресiя ФНП, ТФР-β та р53 у клітинах клінічно чутливого та резистентного до дії цисплатину раку яєчника |
| title_alt | TNF, TGF-Β and Р53 expression in cells of cisplatin sensitive and resistant ovarian carcinoma |
| title_full | Експресiя ФНП, ТФР-β та р53 у клітинах клінічно чутливого та резистентного до дії цисплатину раку яєчника |
| title_fullStr | Експресiя ФНП, ТФР-β та р53 у клітинах клінічно чутливого та резистентного до дії цисплатину раку яєчника |
| title_full_unstemmed | Експресiя ФНП, ТФР-β та р53 у клітинах клінічно чутливого та резистентного до дії цисплатину раку яєчника |
| title_short | Експресiя ФНП, ТФР-β та р53 у клітинах клінічно чутливого та резистентного до дії цисплатину раку яєчника |
| title_sort | експресiя фнп, тфр-β та р53 у клітинах клінічно чутливого та резистентного до дії цисплатину раку яєчника |
| topic | Оригинальные исследования |
| topic_facet | Оригинальные исследования |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/19653 |
| work_keys_str_mv | AT volodʹkona ekspresiâfnptfrβtar53uklítinahklíníčnočutlivogotarezistentnogododíícisplatinurakuâêčnika AT lomnicʹkamí ekspresiâfnptfrβtar53uklítinahklíníčnočutlivogotarezistentnogododíícisplatinurakuâêčnika AT černihûb ekspresiâfnptfrβtar53uklítinahklíníčnočutlivogotarezistentnogododíícisplatinurakuâêčnika AT barilkava ekspresiâfnptfrβtar53uklítinahklíníčnočutlivogotarezistentnogododíícisplatinurakuâêčnika AT volodʹkona tnftgfβandr53expressionincellsofcisplatinsensitiveandresistantovariancarcinoma AT lomnicʹkamí tnftgfβandr53expressionincellsofcisplatinsensitiveandresistantovariancarcinoma AT černihûb tnftgfβandr53expressionincellsofcisplatinsensitiveandresistantovariancarcinoma AT barilkava tnftgfβandr53expressionincellsofcisplatinsensitiveandresistantovariancarcinoma |