Биохимико-вирусологическое обоснование антипротеазной терапии гриппа

Проведені дослідження дозволяють припустити, що вірус індуцировані інгібітори, знайдені в перші години після зараження, блокують активність протеази кліток господарів, внаслідок чого білки вірусу грипу захищені від протеолітичного гідролізу. Коли інгібітори вичерпуються, протеаза починає розщеплюват...

Full description

Saved in:

Bibliographic Details
Published in:	Актуальні проблеми транспортної медицини
Date:	2008
Main Authors:	Михальчук, В.Н., Дивоча, В.А., Гоженко, А.И.
Format:	Article
Language:	Russian
Published:	Фізико-хімічний інститут ім. О.В. Богатського НАН України 2008
Subjects:	Клинические проблемы медицины транспорта
Online Access:	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/23027
Tags:	Add Tag No Tags, Be the first to tag this record!
Journal Title:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Cite this:	Биохимико-вирусологическое обоснование антипротеазной терапии гриппа / В.Н. Михальчук, В.А. Дивоча, А.И. Гоженко // Актуальні проблеми транспортної медицини. — 2008. — № 2 (12). — С. 118-124. — Бібліогр.: 14 назв. — рос.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

_version_	1859799708107538432
author	Михальчук, В.Н. Дивоча, В.А. Гоженко, А.И.
author_facet	Михальчук, В.Н. Дивоча, В.А. Гоженко, А.И.
citation_txt	Биохимико-вирусологическое обоснование антипротеазной терапии гриппа / В.Н. Михальчук, В.А. Дивоча, А.И. Гоженко // Актуальні проблеми транспортної медицини. — 2008. — № 2 (12). — С. 118-124. — Бібліогр.: 14 назв. — рос.
collection	DSpace DC
container_title	Актуальні проблеми транспортної медицини
description	Проведені дослідження дозволяють припустити, що вірус індуцировані інгібітори, знайдені в перші години після зараження, блокують активність протеази кліток господарів, внаслідок чого білки вірусу грипу захищені від протеолітичного гідролізу. Коли інгібітори вичерпуються, протеаза починає розщеплювати гемаглютинін і відбувається зростання титру вірусу. Тому, доцільно через 6 годин після зараження додатково вводити інгібітор для блокування протеазної активності. З легких здорових мишей виділений інгібітор трипсиноподібних протеаз з молекулярною масою 47500 Да, який володів здатністю пригнічувати розвиток інфекційної і гемаглютинуючої активності вірусу грипу на курячих ембріонах і блокував розвиток грипозної інфекції у білих мишей в загальній дозі 0,126 мкг/мишу. Our researches allow us to assume, that the viral induced ingibitors, found out in the first hours after infection, block activity of owner cells proteases. Therefore flu virus proteins are protected from protheolytic hydrolysis. When the ingibitors run low, the protease starts to split the hemagglutinine and there is an increase of a virus titre. Therefore, it is expedient in 6 hours after infection in addition to enter ingibitor for blocking the protease activity. From the lungs of healthy mices it is allocated an ingibitor of trypsin like proteases with molecular weight of 47500Da which had ability to suppress development infectious and hemagglutinine activity of a flu virus on chicken embryos and blocked development of an influenzal infection in white mice in the common doze of 0,126 mkg/mouse.
first_indexed	2025-12-07T15:12:06Z
format	Article
fulltext	АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ ТРАНСПОРТНОЙ МЕДИЦИНЫ № 2 (12), 2008 г. 118118118118118 ACTUAL PROBLEMS OF TRANSPORT MEDICINE #2 (12), 2008 Клинические проблемы медицины транспорта The Clinical Problems of Transport Medicine Разработка эффективных мер борь5 бы против вирусных инфекций остается одной из наиболее актуальных проблем здравоохранения. Успехи фундаменталь5 ных исследований позволили глубоко проникнуть в механизмы вирусной реп5 родукции, структурной организации и функции отдельных вирусных структур, но пока ещё не обеспечили надежных и эффективных способов борьбы с подав5 ляющим большинством возбудителей массовых острых вирусных заболеваний человека и животных [1]. Решение этой проблемы нуждается в привлечении но5 вых идей и подходов, в поиске новой методологии исследований в области фундаментальной и практической виру5 сологии, в комплексном анализе взаимо5 действия двух систем — паразита и хо5 зяина. Это взаимодействие являет собой единое целое, представляющее совокуп5 ность сложных внутренних отношений двух противоположных начал. Конечный результат этого взаимодействия генети5 чески определен хозяином и возбудите5 лем и зависит от уровня регуляции, как процесса вирусной репродукции, так и защитных сил организма. Баланс между этими процессами определяет исход взаимодействия, которое может приве5 сти к гибели хозяина, к его полному выз5 доровлению или к формированию хрони5 ческой формы инфекции [2]. Впервые в начале 805х годов при очистке и концентрации разных штаммов вируса гриппа, для получения поливален5 тных противогрипозных вакцин мы стол5 кнулись с тем, что не можем освободить вирус гриппа от протеолитической актив5 УДК 577.1.616.988.616.921.5 БИОХИМИКО-ВИРУСОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ АНТИПРОТЕАЗНОЙ ТЕРАПИИ ГРИППА Михальчук В.Н., Дивоча В.А., Гоженко А.И. УкрНИИ медицины транспорта, г. Одесса ности [3]. Для решения данного вопроса мы усовершенствовали методы очистки. Но какой бы метод очистки мы не исполь5 зовали, освободить вирус гриппа от про5 теолитической активности нам не удава5 лось. Эту связь не может разрушить ни воздействие 0,1 % раствора додецисуль5 фата натрия, ни силы электрофоретичес5 кой подвижности заряженных отрица5 тельно молекул, ни центробежные силы. На основании этого можно говорить о мощном гидрофобном взаимодействии вирусных и клеточных молекул. В связи с этим, определение протеолитической активности в очищенных и концентриро5 ванных препаратах вируса гриппа может служить маркером качества очистки ви5 руса [4]. Следует отметить, что протеолити5 ческая активность обнаружена также в составе вируса Сендай [5], ящура [6] и гепатита В [7]. Наши результаты и дан5 ные литературы послужили основанием для изучения нами ассоциированной с вирусами протеазы. Для изучения природы вирусассо5 циированной протеазы мы получили спе5 цифичные иммунные крысиные сыворот5 ки к нормальным хорионаллантоисным оболочками куриного эмбриона и с их помощью нейтрализовали протеазу, ас5 социированную с вирусом гриппа, что дало основание сделать вывод, что про5 теаза имеет клеточное происхождение. Еще в начале 605х годов ХХ века наличие в вирусных препаратах антиген5 ных компонентов, источником происхож5 дения которых является клетка хозяина, ACTUAL PROBLEMS OF TRANSPORT MEDICINE #2 (12), 2008 АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ ТРАНСПОРТНОЙ МЕДИЦИНЫ № 2 (12), 2008 г. 119119119119119 было подтверждено рядом исследовате5 лей [8, 9]. Так, в составе очищенных ча5 стиц вируса гриппа, парагриппозного вируса Сендай и вируса болезни Ньюкас5 ла обнаружены гетерогенный антиген типа Форсмана; антиген, подобный груп5 посцецическому антигену А человека, и антиген, несущий видовую специфич5 ность тех клеток, на которых вирус раз5 вивается [10]. В настоящее время «неоальбумино5 вый» антиген (ОА) – единственный антиген хозяина, нормируемый и контролируемый при изготовлении гриппозных вакцин. Анализ очищенных препаратов ви5 руса гриппа на наличие протеолитичес5 кой активности в наших исследования показал, что очистка вируса гриппа ме5 тодами ультрацентрифугирования не ос5 вобождает вирус гриппа от протеолити5 ческой активности. Причем, в градиенте сахарозы (15560 %) протеолитическая активность четко разделилась на не5 сколько изоферментов. Доочистка в электрофорезе полиак5 риламидного геля приводила также к четкому разделению протеазы трипсино5 подобного типа на 759 фракций, облада5 ющих высокой протеолитической актив5 ностью. Сходный ферментный профиль был обнаружен и в препаратах нормальной хорионаллантоисной жидкости и хорио5 наллантоисных оболочках куриного эмб5 риона. Разница была в том, что протео5 литическая активность в них была значи5 тельно ниже и протеаза быстрее генери5 ровалась из элюатов. Антисыворотки к хориналлантоисным оболочкам нейтра5 лизовали протеолитическую активность, ассоциированную с вирусом гриппа [11]. Полученные результаты позволили нам сделать вывод, что с вирусом грип5 па ассоциирована серинсодержащая протеаза трипсиноподобного типа кле5 точного происхождения, которая к тому же имеет молекулярную гетерогенность. Эта протеаза прочно адсорбируется как на поверхностных, так и на глубоко рас5 положенных полипептидах вириона, о чем свидетельствуют наши исследования по удалению его поверхностных гликоп5 ротеинов гемагглютинина и нейрамини5 дазы с помощью твина590 и эфира. Основная масса протеолитической активности была сосредоточена во фрак5 ции РНП. Наличие клеточных элементов в составе очищенного вируса гриппа кон5 статировали многие авторы [12], но ник5 то до нас не изучал наличие протеолити5 ческих ферментов в составе очищенно5 го вируса гриппа. Как показали наши исследования, очищенный вирус гриппа всегда содержал белок с протеолитичес5 кой активностью. В то же время при вы5 делении V – антигена, который представ5 ляет комплекс гемагглютинина и нейтра5 минидазы, не обнаружено протеазной активности. В препаратах РНП мы обна5 руживали протеазную активность. На этом основании мы предположили, что протеаза играет «цементирующую» роль для белков вируса гриппа, который, со5 зревая в клетке5хозяине, использует для своего строения ферменты клетки. Мы предположили, что этот фер5 мент играет важную роль в морфогенезе вируса гриппа и в значительной мере определяет его патогенные и вирулент5 ные свойства. Система протеиназ и ингибиторов представлена в организме большой груп5 пой белков. Известно, что ингибиторы протеолитических ферментов выполняют роль постоянного регулятора уровня со5 ответствующих ферментов в организме, находятся с последними в постоянном динамическом равновесии. Нарушение равновесия между ферментами и инги5 биторами имеет значение для развития патологических процессов. Проведенные нами исследования показывают, что в легких и сыворотке крови незараженных животных и куриных эмбрионах уровень протеазной и ингиби5 рующей протеазу активности находятся в равновесии, которое нарушается при АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ ТРАНСПОРТНОЙ МЕДИЦИНЫ № 2 (12), 2008 г. 120120120120120 ACTUAL PROBLEMS OF TRANSPORT MEDICINE #2 (12), 2008 заражении вирусом гриппа А. В инфекционном процессе можно выделить несколько периодов, которые характеризуются разной степенью раз5 множения вируса, и разным уровнем протеазной и ингибирующей протеазу активности. Наиболее глубокие изменения про5 исходят в первые часы после заражения. Через 6 часов после заражения снижает5 ся количество протеазы как в легких, так и в сыворотке зараженных животных и возрастает ингибирующая активность. Аналогичное явление было отмечено и для вирусов ньюкасловской болезни и болезни Ауески [13]. Таким образом, можно предполо5 жить, что в первые минуты после зара5 жения наблюдаемые изменения фермен5 тно5ингибиторного баланса в организме животных, по5видимому связаны с тем, что используемые вирусы гриппа содер5 жат и ферменты и их ингибиторы. В даль5 нейшем уменьшение протеолитической активности связано с соответствующим накоплением ингибитора протеазы в за5 раженном организме. По5видимому, за5 раженные вирусом гриппа клетки инду5 цируют появление ингибитора, как в ле5 гочной ткани, так и в сыворотке крови. Таким образом, ингибиторы легочной ткани являются как бы первой линией обороны органа при действии различных штаммов вируса гриппа. В период наибольшего накопления инфекционного вируса (вторые сутки после заражения для вируса гриппа А) протеолитическая активность также сни5 жается, однако это снижение сопровож5 дается уже уменьшением ингибиторной активности. Это позволяет предполо5 жить, что повторное снижение протеаз5 ной активности вызвано другими причи5 нами. Возможно, одной из причин явля5 ется использование клеточных трипсид5 ных протеаз для протеолитической акти5 вации вируса в легких зараженных мы5 шей и истощением пула в организме за5 раженных мышей. В работах М.Е. Ewasyshin и Z.R. Sabina (1986) было по5 казано, что в процессе репликации раз5 личных штаммов вирусов гриппа в кури5 ных эмбрионах наблюдается отчетливое подавление протеазной активности в аллантоисной жидкости, когда выход ин5 фекционного вируса приближается к сво5 ему максимуму [14]. Третий период накопления протеаз5 ной активности совпадает с повторным увеличением инфекционного потомства вируса и, по5видимому, связан с послед5 ствиями вирусной инфекции и наслоени5 ем бактериальной инфекции. Так было показано, что протеаза стафилококка вызывает протеолитическую активацию вирусов гриппа . Таким образом, для изучения трип5 синоподобной протеазы, выделенной из легких мышей, зараженных вирусом гриппа А, следует брать мышей через 72 часа после заражения, а протеазу лучше всего выделять из легких незараженных мышей. В своих исследованиях мы обна5 ружили ингибиторы протеаз с различны5 ми свойствами и функциями. Первая изо5 форма ингибиторов, которые блокируют протеазу, выполняет роль защитных фак5 торов организма, т.к. в этот период не отмечается образование инфекционного вируса. Вторая изоформа ингибитора протеаз, выделяемых из легких мышей, зараженных малой дозой вируса гриппа, не подавляет протеазную активность и выполняет какие5то иные функции, т.к. в этот период происходит повышение и протеазной и инфекционной активности. В сыворотке крови не обнаруживается первая изоформа ингибитора, а вторая изоформа подавляет протеазную актив5 ность, которая предшествует достиже5 нию максимальных уровней инфекцион5 ного вируса и гемагглютина. Третья изоформа ингибитора обра5 зуется в процессе развития инфекцион5 ного процесса, и по5видимому, является результатом некроза ткани легкого. О неоднородности ингибиторов се5 риновых протеаз, индуцируемых вируса5 ACTUAL PROBLEMS OF TRANSPORT MEDICINE #2 (12), 2008 АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ ТРАНСПОРТНОЙ МЕДИЦИНЫ № 2 (12), 2008 г. 121121121121121 ми гриппа, утверждают и другие авторы. Так, ингибитор аллантоисной жидкости отличался от ингибиторов трипсина 175 дневной амниотической жидкости и ово5 мукоида в белке куриного эмбриона. Ингибитор протеазы аллантоисной жидкости имел свойства, сходные со свойствами ингибиторов субтилизина, которые описаны для овоингибиторов и овомакроглобулина куриных эмбрионов, семян черных бобов и фильтрата культу5 ры Streptomyces Subtilisin inhibitor. Ингибиторы протеазы в цикле реп5 родукции аденовирусов, вируса везику5 лярного стоматита и вируса герпеса про5 стого типа 2 являются вирусоспецифи5 ческими ингибиторами, блокирующими критические этапы метаболизма инфи5 цированных клеток. Наши исследования позволяют нам предположить, что вирусиндуцирован5 ные ингибиторы, обнаруженные в первые часы после заражения, блокируют актив5 ность протеазы клеток5хозяев, в резуль5 тате чего белки вируса гриппа защище5 ны от протеолитического гидролиза. Ког5 да ингибиторы иссякают, протеаза начи5 нает расщеплять гемагглютинин и проис5 ходит возрастание титра вируса. Поэто5 му, целесообразно через 6 часов после заражения дополнительно вводить инги5 битор для блокировки протеазной актив5 ности. При изучении изменений протеаз5 ной и ингибирующей активности в кури5 ных эмбрионах под действием больших и малых заражающих доз вируса гриппа А/РР/8/34 установлено, что в них проис5 ходили изменения, аналогичные тем, которые наблюдались в организме белых мышей. В первые 30 минут после зара5 жения, отмечалась увеличение протеаз5 ной и ингибирующей активности. Под действием большой заражающей дозы, начиная с 6 часов после заражения, про5 исходило угнетение протеазной и инги5 бирующей активности. В это время шло накопление инфекционной и гемагглюти5 нирующей активности, которое достига5 ло своего максимума к 24 часам. В этот период уже не обнаруживалась ни про5 теазная, ни ингибирующая активность. В работе M.S. Ewasyshin и Z.R.Sabina (1986) было также показано, что в процессе репликации различных штаммов вирусов гриппа наблюдается отчетливое подавле5 ние протеазной активности аллантоисной жидкости в период, когда выход инфек5 ционного вируса приближается к своему максимуму. Через 72 часа происходил подъем протеазной активности, который достигал к 122 часам исходных цифр. Полное подавление ингибирующей активности запаздывало на сутки и про5 исходило к 48 часам, держалось до 96 часов и к 122 часам достигало исходных величин. В период блокады ингибитора (48596 часов) протеазная активность быстро возрастала. Это говорит о том, что мы имеем разные ингибиторы. Пер5 вая изоформа ингибитора выполняет роль защитной функции организма на внедрение инфекции. Вторая изоформа ингибитора подавлялась незначительно, хотя в этот период инфекционный вирус достигал своего максимума, а при малой дозе заражения вторая изоформа вооб5 ще не подвергалась изменениям. Третья изоформа резко угнеталась большой дозой и мало изменялась при действии малой дозой. Если основная роль тре5 тьей изоформы ингибитора состоит в сохранении инфекционного вируса за счет его защиты от протеолитической деградации, то интерференция с синте5 зом ингибитора может иметь важное те5 рапевтическое значение. Поэтому целью дальнейших наших исследований было получение ингибито5 ра трипсиноподобных протеаз из легких здоровых и инфицированных вирусом гриппа А мышей. Нами впервые выделен ингибитор трипсиноподобных протеаз из легких здоровых мышей. Он характеризовался высокой степенью чистоты и содержал незначительное количество примесей. Ингибитор имел молекулярную массу 47500 Да. Разработана методика получе5 ния и очистки ингибитора трипсинопо5 АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ ТРАНСПОРТНОЙ МЕДИЦИНЫ № 2 (12), 2008 г. 122122122122122 ACTUAL PROBLEMS OF TRANSPORT MEDICINE #2 (12), 2008 добных протеаз и на нее получен патент. Выделенный ингибитор похож на альфа5 15 ингибитор протеаз сыворотки крови человека (м.м. 48000555000 Да) и инги5 битор трипсина из яичного белка (м.м. 49000 Да), но не похож на ингибитор трипсина выделенный из легких крупно5 го рогатого скота (ингибитор типа Кунит5 ца5Нортропа), который имел молекуляр5 ную массу 65000Да. При изучении его действия на протеолитическую актив5 ность изоформ трипсиноподобных про5 теаз пробирочным методом выяснилось, что он подавлял активность почти всех изоформ, за исключением 4 (41,8 %) и 7 (28,3 %). В проведенных исследованиях при использовании выделенного нами кле5 точного ингибитора для подавления раз5 вития вируса гриппа в куриных эмбрио5 нах установлено, что он подавлял разви5 тие инфекционной и гемагглютинирую5 щей активности и образование общего белка. В тоже время ингибитор трипси5 ноподобных протеаз, выделенный из лег5 ких мышей, предварительно зараженных вирусом гриппа, не обладал данной спо5 собностью. Поэтому в дальнейших иссле5 дованиях для лечения гриппозной инфек5 ции у животных мы использовали инги5 битор, который выделяли из легких здо5 ровых мышей. При лечении этим препа5 ратом белых мышей, предварительно зараженных летальной дозой вируса гриппа, 80% животных выздоравливали и оставались живы до 14 суток после зара5 жения. Введение ингибитора мышам снижало их гибель от гриппа вследствие торможения расщепления НА при репро5 дукции вируса в легких и недопущения генерализации процесса, а также в ре5 зультате предотвращения повышения протеолиза в легких и предупреждения аэрогематического барьера, усиления некоторых реакций местной защиты. Выводы 1. Очистка и концентрация вируса гриппа методами центрифугирова5 ния не освобождали вирус гриппа от белков с протеазной активностью. Первоначально ассоциированная с вирусом гриппа протеаза в градиен5 те сахарозы разделилась на четыре изоформы, а нормальных хорионал5 лантоисных оболочек – на три изо5 формы, которые в 345 раз были ниже, чем вирусассоциированные. 2. Протеаза, ассоциированная с виру5 сом гриппа, является клеточным ферментом, так как иммунные сыво5 ротки к нормальным хорионалланто5 исным оболочкам куриного эмбрио5 на нейтрализовали протеазу в зоне 35545% сахарозы, где локализовался очищенный вирус гриппа, а гемаг5 глютинирующая активность сохрани5 лась. 3. При заражении животных (белых мышей) вирусом гриппа А происхо5 дит нарушение ферментно5ингиби5 рующего баланса. Наиболее глубо5 кие изменения происходят в первые часы после заражения. Снижение протеазной активности в первые часы после заражения объясняются увеличением ингибирующей протеа5 зу активности. 4. Вирусиндуцированный клеточный ингибитор в первые часы после за5 ражения играет важную роль в бло5 кировке протеазы, после его истоще5 ния главную роль в развитии патоло5 гии берут на себя трипсиноподобные протеазы, которые начинают наре5 зать гемагглютинин и происходит возрастание инфекционного титра. 5. Из лёгких здоровых мышей выделен ингибитор трипсиноподобных проте5 аз с молекулярной массой 47500 Да, который обладал способностью по5 давлять развитие инфекционной и гемагглютинирующей активности ви5 руса гриппа на куриных эмбрионах и блокировал развитие гриппозной ин5 фекции у белых мышей в общей дозе 0,126 мкг/мышь. Литература 1. Klenk H.5D., and Rott R. The molecular basis of influenza virus pathogeniciti. / ACTUAL PROBLEMS OF TRANSPORT MEDICINE #2 (12), 2008 АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ ТРАНСПОРТНОЙ МЕДИЦИНЫ № 2 (12), 2008 г. 123123123123123 /Adv. Virus Res. – 1988. 5V.34. 5P.2475 281. 2. Букринская А.Г. Молекулярные меха5 низмы раннего взаимодействия ви5 руса гриппа с клетками. //Молеку5 лярная биология вирусов. Ч.1.5 М., 1985. 5C.4520. 3. Дивоча В. А., Дегтяренко В. И., Зева5 ков В. Ф. Клеточная протеаза вируса гриппа // Тезисы докладов 25го съез5 да инфекционистов УССР.5 К., 1983. – С. 36538. 4. Дивоча В.А. Клеточная трипсинопо5 добная протеаза – маркер качества очистки вируса гриппа. //Актуальные вопросы медицинской биотехноло5 гии. –Харьков, 1991. – С. 30531. 5. Жирнов О.П., Букринская А.Г. Изуче5 ние белков вируса Сендай: Протео5 литическая активность в составе ви5 русных частиц. //Вопросы вирусоло5 гии. – 1977. 5 №5. – С.5715577. 6. Grubman Marvin J. Fur ther characterization of a proteinkinase from foot5and5morith disease virus //J. Virol. – 1982. 5vol. 44. 5№3. 5P.110251105. 7. Qerlich Wolfram H., Addmann Udo, Muller Rainer, Stibbe Werner, Wolff Wilhelm. Specificity and localization of the hepatitis B virus associated protein kinase. //J.Virol. 51982. –V.42. 5№3. – P.7615766. 8. Груздева Н.М., Косяков Г.Н. О дей5 ствии гомологичных и гетерологич5 ных иммунных сывороток на разви5 тие вирусной инфекции. //Вопросы вирусологии. 51963. 5№2. 5C.1635 167. 9. Ровнова З.И., Косяков П.Н. Исследо5 вание свойств антигенов хозяина в структуре миксовирусов. //Вопросы вирусологии. 51966. 5№4. 5C.4135 418. 10. Платонова А.Л., Рогачева Г.А., Исае5 ва С.И., Ровнова З.Н. Выявление и идентификация антигена клетки хо5 зяина в составе вируса гриппа В. // Вопросы вирусологии. 51987. 5№3. 5 C.1595163. 11. Дівоча В.О. Вірус грипу і ферменти клітини. //Ж. Експериментальна і клінічна медицина.5 Харків,1999. – С.1005105 12. Дивоча В.А., Григорьева И.Г., Букрин5 ская А.Г. Изменение протеазной ак5 тивности в легких мышей, заражен5 ных вирусом гриппа А. //Вопросы ви5 русологии. 51999. 5№5. 5С.3705377. 13. Логинов А.С., Амиров Н.Ш., Черно5 ярова О.Д. Ингибиторы протеолити5 ческих ферментов поджелудочной железы. //Вестник АМН СССР. 51989. 5№1. 5С.53561. 14. Ewasyshyn M.E., Sabina L.R. Влияние репродукции вируса гриппа на нейт5 ральную протеолитическую актив5 ность в жидкостях куриных эмбрио5 нов. //Acta virol. 51983. 5№27. 5Р. 1935 199. Резюме БІОХІМІКО5ВІРУСОЛОГІЧНЕ ОБГРУНТОВУВАННЯ АНТІПРОТЕАЗНОЙ ТЕРАПІЇ ГРИПУ Михальчук В.Н., Дивоча В.А., Гоженко А.І. Проведені дослідження дозволяють припустити, що вірус індуцировані інгібітори, знайдені в перші години після зараження, блокують активність протеа5 зи кліток5господарів, внаслідок чого білки вірусу грипу захищені від протеолітично5 го гідролізу. Коли інгібітори вичерпують5 ся, протеаза починає розщеплювати ге5 маглютинін і відбувається зростання тит5 ру вірусу. Тому, доцільно через 6 годин після зараження додатково вводити інгібітор для блокування протеазної ак5 тивності. З легких здорових мишей виділений інгібітор трипсиноподібних протеаз з молекулярною масою 47500 Да, який володів здатністю пригнічувати розвиток інфекційної і гемаглютинуючої активності вірусу грипу на курячих ембріонах і бло5 кував розвиток грипозної інфекції у білих мишей в загальній дозі 0,126 мкг/мишу. АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ ТРАНСПОРТНОЙ МЕДИЦИНЫ № 2 (12), 2008 г. 124124124124124 ACTUAL PROBLEMS OF TRANSPORT MEDICINE #2 (12), 2008 Summary BIOCHEMICAL AND VIROLOGIC SUBSTANTIATION OF THE FLU ANTIPROTEASAL THERAPY Mihalchuk V.N., Divocha V.A., Gozhenko A.I. Our researches allow us to assume, that the viral induced ingibitors, found out in the first hours after infection, block activity of owner cells proteases. Therefore flu virus proteins are protected from protheolytic hydrolysis. When the ingibitors run low, the protease starts to split the hemagglutinine and there is an increase of a virus titre. Therefore, it is expedient in 6 hours after infection in addition to enter ingibitor for blocking the protease activity. From the lungs of healthy mices it is allocated an ingibitor of trypsin like proteases with molecular weight of 47500 Da which had ability to suppress development infectious and hemagglutinine activity of a flu virus on chicken embryos and blocked development of an influenzal infection in white mice in the common doze of 0,126 mkg/mouse. Впервые поступила в редакцию 29.01.2008 г. Рекомендована к печати на заседании ученого совета НИИ медицины транспорта (протокол № 3 от 29.05.2008 г.). Несмотря на более чем 1505ти лет5 нее научно обоснованное изучение яз5 венной болезни (ЯБ) многие вопросы этиологии и патогенеза данной патоло5 гии остаются неразрешёнными [6]. От5 крытие в 1983 году лауреатами Нобелев5 ской премии Б.Маршаллом и Дж. Уорре5 ном хеликобактерной инфекции (НР) 5 доказанным этиологическим фактором хронического гастрита (ХГ) типа В и ЯБ 5 стало революцией в гастроэнтерологии [4]. Однако многое остаётся неясным, и, в первую очередь, различие по локали5 зации и численности язвенных дефектов гастродуоденальной зоны при ЯБ по сравнению с дефектами, получаемыми при моделировании данного патологи5 ческого процесса на животных. Проведе5 ние исследований по уточнению данных различий и стало поводом для нашей работы. Материалы и методы Было комплексно обследовано 109 больных хроническим гастритом типа В с язвенными поражениями гастродуоде5 нальной зоны желудочно5кишечного тракта (ЖКТ) различной локализации в активной фазе (мужчин 5 68, женщин 5 41 человек; возраст 5 от 15 до 56 лет; стаж заболевания 5 от 35х до 215го года; срок обострения патологического процесса – от 55ти до 145ти дней), которое включа5 ло проведение внутрижелудочной поша5 говой рН5метрии (прибор ИКЖ52, СКБ «МЭТ», г. Каменец5Подольский, Украина) по методике Чернобрового В.Н. [7], эзо5 фагогастродуоденоскопии (панэндоскоп «Z – 1», фирма «Фуджинон», Япония), двойного тестирования на НР: тест на уреазную активность и микроскопирова5 ние окрашеных по Гимза мазков5отпечат5 ков, материал для которого брался из 55 ти топографических зон: из 125ти перст5 УДК 616.33 – 002.2 – 07: 579. 835. 12 К ВОПРОСУ О ЛОКАЛИЗАЦИИ И ЧИСЛЕННОСТИ ЯЗВЕННЫХ ДЕФЕКТОВ, КОТОРЫЕ ОБРАЗУЮТСЯ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ХЕЛИКОБАКТЕРИОЗОМ И ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ МОДЕЛИРОВАНИИ НА КРЫСАХ Авраменко А.А., Гоженко А.И., Гойдык В.С. Проблемная лаборатория по вопросам хеликобактериоза, г. Николаев Украинский НИИ медицины транспорта, г. Одесса Одесский государственный медицинский университет
id	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-23027
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
issn	1818-9385
language	Russian
last_indexed	2025-12-07T15:12:06Z
publishDate	2008
publisher	Фізико-хімічний інститут ім. О.В. Богатського НАН України
record_format	dspace
spelling	Михальчук, В.Н. Дивоча, В.А. Гоженко, А.И. 2011-07-02T15:27:00Z 2011-07-02T15:27:00Z 2008 Биохимико-вирусологическое обоснование антипротеазной терапии гриппа / В.Н. Михальчук, В.А. Дивоча, А.И. Гоженко // Актуальні проблеми транспортної медицини. — 2008. — № 2 (12). — С. 118-124. — Бібліогр.: 14 назв. — рос. 1818-9385 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/23027 577.1.616.988.616.921.5 Проведені дослідження дозволяють припустити, що вірус індуцировані інгібітори, знайдені в перші години після зараження, блокують активність протеази кліток господарів, внаслідок чого білки вірусу грипу захищені від протеолітичного гідролізу. Коли інгібітори вичерпуються, протеаза починає розщеплювати гемаглютинін і відбувається зростання титру вірусу. Тому, доцільно через 6 годин після зараження додатково вводити інгібітор для блокування протеазної активності. З легких здорових мишей виділений інгібітор трипсиноподібних протеаз з молекулярною масою 47500 Да, який володів здатністю пригнічувати розвиток інфекційної і гемаглютинуючої активності вірусу грипу на курячих ембріонах і блокував розвиток грипозної інфекції у білих мишей в загальній дозі 0,126 мкг/мишу. Our researches allow us to assume, that the viral induced ingibitors, found out in the first hours after infection, block activity of owner cells proteases. Therefore flu virus proteins are protected from protheolytic hydrolysis. When the ingibitors run low, the protease starts to split the hemagglutinine and there is an increase of a virus titre. Therefore, it is expedient in 6 hours after infection in addition to enter ingibitor for blocking the protease activity. From the lungs of healthy mices it is allocated an ingibitor of trypsin like proteases with molecular weight of 47500Da which had ability to suppress development infectious and hemagglutinine activity of a flu virus on chicken embryos and blocked development of an influenzal infection in white mice in the common doze of 0,126 mkg/mouse. ru Фізико-хімічний інститут ім. О.В. Богатського НАН України Актуальні проблеми транспортної медицини Клинические проблемы медицины транспорта Биохимико-вирусологическое обоснование антипротеазной терапии гриппа Біохіміко-вірусологічне обгрунтовування антіпротеазной терапії грипу Biochemical and virologic substantiation of the flu antiproteasal therapy Article published earlier
spellingShingle	Биохимико-вирусологическое обоснование антипротеазной терапии гриппа Михальчук, В.Н. Дивоча, В.А. Гоженко, А.И. Клинические проблемы медицины транспорта
title	Биохимико-вирусологическое обоснование антипротеазной терапии гриппа
title_alt	Біохіміко-вірусологічне обгрунтовування антіпротеазной терапії грипу Biochemical and virologic substantiation of the flu antiproteasal therapy
title_full	Биохимико-вирусологическое обоснование антипротеазной терапии гриппа
title_fullStr	Биохимико-вирусологическое обоснование антипротеазной терапии гриппа
title_full_unstemmed	Биохимико-вирусологическое обоснование антипротеазной терапии гриппа
title_short	Биохимико-вирусологическое обоснование антипротеазной терапии гриппа
title_sort	биохимико-вирусологическое обоснование антипротеазной терапии гриппа
topic	Клинические проблемы медицины транспорта
topic_facet	Клинические проблемы медицины транспорта
url	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/23027
work_keys_str_mv	AT mihalʹčukvn biohimikovirusologičeskoeobosnovanieantiproteaznoiterapiigrippa AT divočava biohimikovirusologičeskoeobosnovanieantiproteaznoiterapiigrippa AT goženkoai biohimikovirusologičeskoeobosnovanieantiproteaznoiterapiigrippa AT mihalʹčukvn bíohímíkovírusologíčneobgruntovuvannâantíproteaznoiterapíígripu AT divočava bíohímíkovírusologíčneobgruntovuvannâantíproteaznoiterapíígripu AT goženkoai bíohímíkovírusologíčneobgruntovuvannâantíproteaznoiterapíígripu AT mihalʹčukvn biochemicalandvirologicsubstantiationofthefluantiproteasaltherapy AT divočava biochemicalandvirologicsubstantiationofthefluantiproteasaltherapy AT goženkoai biochemicalandvirologicsubstantiationofthefluantiproteasaltherapy

Биохимико-вирусологическое обоснование антипротеазной терапии гриппа

Institution

Similar Items