Підвищення ефективності протипухлинної вакцини пробіотичним препаратом субалін
The paper presents the results of preclinical studies on evaluation of efficacy of the unique complex treatment scheme by cancer vaccine (CV), derived from cancer cells exposed to B. subtilis B-7025 cytotoxic lectins, and probiotic agent subalin. The advantages of the tested scheme include increase...
Збережено в:
| Дата: | 2008 |
|---|---|
| Автори: | , , , , , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Українська |
| Опубліковано: |
Iнститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р. Є. Кавецького
2008
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/2345 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Підвищення ефективності протипухлинної вакцини пробіотичним препаратом субалін / Г.П. Потебня, І.М. Воєйкова, Н.Л. Черемшенко, Г.С. Лісовенко, Н.В. Трохименко, В.Н. Базась, Л.П. Дідківська, О.М. Караман, З.Д. Савцова // Онкологія. — 2008. — Т. 10, N 2. — С. 246-251. — Бібліогр.: 32 назв. — укр. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859998632294481920 |
|---|---|
| author | Потебня, Г.П. Воєйкова, І.М. Черемшенко, Н.Л. Лісовенко, Г.С. Трохименко, Н.В. Базась, В.Н. Дідківська, Л.П. Караман, О.М. Савцова, З.Д. |
| author_facet | Потебня, Г.П. Воєйкова, І.М. Черемшенко, Н.Л. Лісовенко, Г.С. Трохименко, Н.В. Базась, В.Н. Дідківська, Л.П. Караман, О.М. Савцова, З.Д. |
| citation_txt | Підвищення ефективності протипухлинної вакцини пробіотичним препаратом субалін / Г.П. Потебня, І.М. Воєйкова, Н.Л. Черемшенко, Г.С. Лісовенко, Н.В. Трохименко, В.Н. Базась, Л.П. Дідківська, О.М. Караман, З.Д. Савцова // Онкологія. — 2008. — Т. 10, N 2. — С. 246-251. — Бібліогр.: 32 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| description | The paper presents the results of preclinical studies on evaluation of efficacy of the unique complex treatment scheme by cancer vaccine (CV), derived from cancer cells exposed to B. subtilis B-7025 cytotoxic lectins, and probiotic agent subalin. The advantages of the tested scheme include increase of tumor latent growth period, inhibition of tumor growth, and prolonged survival of mice with established tumors, as compared with CV used alone. Immunologic effects of complex CV and subalin application were evident by the enhancement of T lymphocyte cytotoxic activity on late stages of tumor growth, positive effect on macrophages activity dynamics, and stabilization of cytokines production (TNF-α, ІL-1 and ІL-2). The obtained results propose the perspectives of future clinical trials of CV combined with subalin.
У роботі наведені результати доклінічного вивчення ефективності оригінальної схеми комплексного застосування протипухлинної вакцини (ПВ), виготовленої з пухлинних клітин за допомогою лектинової фракції, виділеної з фільтрату культуральної рідини B. subtilis B-7025, і пробіотичного препарату
субалін. Переваги запропонованої схеми виявлялись у збільшенні латентного
періоду виходу пухлин, гальмуванні їх росту та подовженні тривалості життя мишей з пухлинами порівняно із застосуванням ПВ у монорежимі. Імунологічними ефектами комплексного застосування ПВ і субаліну у експериментальних
тварин було підвищення активності цитотоксичних Т-лімфоцитів у пізні терміни пухлинного росту, позитивний вплив на динаміку активності макрофагів та стабілізації продукції цитокінів (ФНП-α, ІЛ-1 та ІЛ-2). Отримані результати свідчать про перспективність клінічної апробації комбінованих схем введення ПВ з субаліном.
|
| first_indexed | 2025-12-07T16:34:50Z |
| format | Article |
| fulltext |
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
246 О Н К О Л О Г И Я • Т. 1 0 • № 2 • 2 0 0 8
ВСТУП
Тривають активні дослідження, спрямовані на
розробку засобів імунотерапії пухлин, у тому числі
протипухлинних вакцин (ПВ) [1–3]. Не меншу ува-
гу привертають дослідження цитокінів, які здатні
оптимізувати протипухлинні реакції організму при
застосуванні в якості ад’ювантів та/або препаратів
супроводу [4]. Одним з важливих регуляторів меха-
нізмів неспецифічної резистентності є інтерферон
(ІФ); зокрема відомо, що введений per os ІФ-альфа
впливає майже на всі ланки імунної відповіді [5, 6].
Результатами експериментальних та клінічних до-
сліджень обґрунтовано використання ІФ-альфа в
якості засобу для оптимізації комплексного лікуван-
ня, зниження метастатичного ризику та підвищення
якості життя хворих онкологічного профілю [7–9].
Виходячи з викладеного, доцільним і обґрунтованим
є вивчення ефектів комбінованого застосування ІФ
і активної специфічної імунізації [10, 11].
Метою даної роботи було доклінічне вивчен-
ня ефективності комбінованої схеми введення
ПВ, виготовленої з аутологічних пухлинних клі-
тин за допомогою цитотоксичного лектину (ЦЛ)
B. subtilis B-7025, і пробіотичного препарату су-
баліну. Оригінальна технологія виготовлення ПВ
з аутологічних пухлинних клітин за допомогою
ЦЛ B. subtilis B-7025 була розроблена в ІЕПОР
ім. Р.Є. Кавецького НАН України. На основі ре-
зультатів доклінічного вивчення і 3 фаз клінічно-
го випробування ПВ Державною службою лікар-
ських засобів і виробів медичного призначення МОЗ
України було підтверджено, що досліджувана вак-
цина відповідає вимогам державних та міжнарод-
них стандартів і дозволена до медичного застосу-
вання в Україні, та видано Сертифікат про державну
реєстрацію медичного імунобіологічного препара-
ту (№ 411/03-300200000 від 9 грудня 2003 р.). Пре-
парат субалін відносять до пробіотиків нового по-
коління, основою якого є рекомбінантний штам
бактерій B. subtillis 2335/105, у який вбудовано ген
синтезу ІФ-альфа людини [12]. При використан-
ні субаліну важливим моментом є те, що синтез ІФ
здійснюється бактеріями, які вводять перорально
в шлунково-кишковий тракт [13]. Здатність суба-
ліну індукувати продукцію ІФ та інших цитокінів
(ФНП-альфа, ІЛ-1, ІЛ-2), стимулювати спонтанну і
мітоген-індуковану проліферацію лімфоцитів, а та-
кож активність природних кілерних клітин (ПКК)
і макрофагів (Мф) [14, 15], підвищувати ефект як
хіміопрепаратів, так і вакцинотерапії [16, 17], його
помірна протипухлинна і антиметастатична актив-
ність [18] визначають доцільність детального дослі-
дження цього пробіотика в якості ад’юванта.
ОБ̓ЄКТ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
Досліди проводили на мишах-самцях ліній
BALB/c і С57Вl (2,5 міс, 20–22 г, розводки віварію
ІЕПОР ім. Р.Є. Кавецького НАН України) згідно з
Правилами роботи з лабораторними тваринами на
стандартних моделях пухлинного росту (саркоми-37 і
карциноми легені Льюїс). Саркому-37 (С-37) або кар-
циному легені Льюїс (КЛЛ) прищеплювали мишам у
стегновий м’яз (по 1,5 х 105 та 4,5 х 105 живих пухлин-
них клітин відповідно). Введення ПВ та субаліну здій-
снювали за терапевтичною схемою окремо або комбі-
новано згідно зі схемою експерименту (табл. 1).
ПВ готували з клітин асцитної форми С-37 або з
подрібненої тканини КЛЛ з розрахунку 107 пухлин-
них клітин (або 0,1 г тканини для КЛЛ) на 1 мл роз-
чину ЦЛ (0,5 мг/мл), який виділяли з культураль-
ної рідини В. subtilis B-7025 після її вирощування
на модифікованому середовищі Гаузе [19]. ПВ вво-
ПІДВИЩЕННЯ ЕФЕКТИВНОСТІ
ПРОТИПУХЛИННОЇ ВАКЦИНИ
ПРОБІОТИЧНИМ ПРЕПАРАТОМ
СУБАЛІН
Резюме. У роботі наведені результати доклінічного вивчення ефективності
оригінальної схеми комплексного застосування протипухлинної вакцини (ПВ),
виготовленої з пухлинних клітин за допомогою лектинової фракції, виділеної з
фільтрату культуральної рідини B. subtilis B-7025, і пробіотичного препара-
ту субалін. Переваги запропонованої схеми виявлялись у збільшенні латент-
ного періоду виходу пухлин, гальмуванні їх росту та подовженні тривалості
життя мишей з пухлинами порівняно із застосуванням ПВ у монорежимі.
Імунологічними ефектами комплексного застосування ПВ і субаліну у екс-
периментальних тварин було підвищення активності цитотоксичних
Т-лімфоцитів у пізні терміни пухлинного росту, позитивний вплив на динаміку
активності макрофагів та стабілізації продукції цитокінів (ФНП-α, ІЛ-1
та ІЛ-2). Отримані результати свідчать про перспективність клінічної
апробації комбінованих схем введення ПВ з субаліном.
Г.П. Потебня
І.М. Воєйкова
Н.Л. Черемшенко
Г.С. Лісовенко
Н.В. Трохименко
В.Н. Базась
Л.П. Дідківська
О.М. Караман
З.Д. Савцова
Інститут експериментальної
патології, онкології
і радіобіології
ім. Р.Є. Кавецького
НАН України, Київ, Україна
Ключові слова: протипухлинна
вакцина, субалін, ефективність,
доклінічне вивчення.
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
247О Н К О Л О Г И Я • Т. 1 0 • № 2 • 2 0 0 8
дили 5-кратно, підшкірно (п/ш), в однакових дозах
(0,3 мл), на 1-шу, 4-ту, 7-му (8-му), 11-ту і 15-ту добу
після прищеплення пухлини. Мишам контроль них
груп у відповідні строки вводили фізіологічний роз-
чин хлориду натрію.
Препарат субалін був наданий для досліджень
співробітниками відділу антибіотиків Інститу-
ту мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотно-
го НАН України [20]. Розчин субаліну готували
ex tempore і вводили per os, 5-разово. Схема його вве-
дення залежала від модельної пухлини: при прище-
пленні С-37 вводили по 2,5 х 108 колонієутворюю-
чих одиниць (КУО) на 1-шу, 3-тю, 6-ту, 10-ту, 14-ту
добу після прищеплення пухлини (перше введен-
ня за 3 год до ПВ, решта — за 24 год до ПВ); КЛЛ –
по 108 КУО, кожного разу за 2 год до введення ПВ.
У попередніх дослідженнях продемонстровано, що
саме такі дози субаліну найбільш ефективні щодо
використаних модельних пухлин [18].
Оцінку ефективності лікування проводили за ве-
личиною латентного періоду (ЛП), індексом гальму-
вання росту пухлин (ІГРП) та показниками серед-
ньої тривалості життя (СТЖ) дослідних тварин.
Імунологічне обстеження мишей включало ви-
значення цитотоксичної активності Т-лімфоцитів
(ЦТЛ), Мф та ПКК у цитотоксичних тестах in vitro
[21]; цитохімічної активності перитонеальних Мф
за допомогою НСТ-тесту [22]; рівня продукції пе-
ритонеальними Мф фактора некрозу пухлин (ФНП)
з використанням ФНП-чутливої культури клітин
L-929 [23], рівня продукції ІЛ-1 прилипаючою та
ІЛ-2 не прилипаючою фракціями спленоцитів (Сн)
за допомогою стандартних радіометричних методів
[24, 25]. Дослідження імунологічних показників у
мишей з С-37 проводили на 10-ту, 21-шу та 58-му
добу, з КЛЛ — на 28-му та 45-ту добу після прище-
плення пухлини.
Математичну обробку результатів проводили з
використанням t-критерію Стьюдента [26], розра-
хунки та побудову графіків виконували з викорис-
танням програми Microsoft Excel. Порівнюючи тва-
рин контрольної і дослідних груп за показниками
ЛП і СТЖ, додатково обраховували індекси моду-
ляції (ІМ) кожного з показників [27].
РЕЗУЛЬТАТИ ТА ЇХ ОБГОВОРЕННЯ
Результати дослідження тривалості ЛП та СТЖ
тварин в обох серіях досліджень свідчать про зна-
чну перевагу комбінованого застосування ПВ і су-
баліну перед використанням цих препаратів у мо-
норежимі (табл. 2).
У мишей з С-37, яким вводили ПВ + субалін, ЛП
складав 21,9 ± 3,9 доби і перевищував аналогічні по-
казники при окремому використанні ПВ (в 1,7 раза,
0,05 < p < 0,1) або субаліну (майже в 2,0 рази, p < 0,05).
Подібні закономірності відзначали і при аналізі СТЖ.
Зокрема, у тварин, яким вводили ПВ і субалін за ком-
бінованою схемою, остання сягала 80,8 ± 4,3 доби,
що майже вдвічі (на 98%) перевищувало контроль-
ний показник, а також вірогідно відрізнялася від та-
кої мишей, які одержували ПВ або субалін у моно-
режимі (в 1,4 і 1,7 раза відповідно, р < 0,05). Комбі-
новане застосування ПВ та субаліну призводило до
більш значного гальмування росту пухлини порівня-
но з групою тварин, яка одержувала тільки ПВ (ІГРП
80 і 64% відповідно, p < 0,01) (рисунок).
Слід підкреслити, що у мишей, які одержували тіль-
ки субалін, ІГРП складав лише 36%, а СТЖ майже не
перевищувала показник «контролю прищеплення».
Вивчення в динаміці протипухлинної цитотоксичнос-
ті ефекторів клітинного імунітету дозволило ви явити
деякі відмінності між контрольною і дослідними гру-
пами (табл. 3). Зокрема, встановлено, що цитотоксич-
на активність (ЦТА) Мф у тварин, які одержували ПВ
або ПВ + субалін, виявляє тенденцію до збільшення
на 10-ту добу пухлинного росту; на 21-шу добу цей по-
казник вірогідно збільшений порівняно з групою «кон-
троль прищеплення» у всіх дослідних тварин (у серед-
Таблиця 1
Схема експерименту по вивченню ефективності комбінованого застосування ПВ та субаліну на моделях саркоми-37 та КЛЛ
Штам модельної
пухлини Група мишей ПВ Субалін
доза, шлях введення термін введення, діб доза, шлях введення термін введення, діб
С-37 (1,5 х 105, в/м) «ПВ» 0,3 мл, п/ш 1, 4, 7, 11, 15 – —
«Субалін» – – 2,5 х 108 КУО, per os 1, 3, 6, 10, 14
«ПВ + субалін» 0,3 мл, п/ш 1, 4, 7, 11, 15 2,5 х 108 КУО, per os 1, 3, 6, 10, 14
«Контроль прищеплення» – – – –
КЛЛ (4,5 х 105, в/м) «ПВ» 0,3 мл, п/ш 1, 4, 8, 11, 15 – –
«Субалін» – – 1,0 х 108 КУО, per os 1, 4, 8, 11, 15
«ПВ + субалін» 0,3 мл, п/ш 1, 4, 8, 11, 15 1,0 х 108 КУО, per os 1, 4, 8, 11, 15
«Контроль прищеплення» – – – –
Таблиця 2
Порівняння ЛП та СТЖ мишей з різними модельними пухлинами
Модельна
пухлина Група мишей ЛП, діб СТЖ, діб
Х ± m t ІМ, % Х ± m t ІМ, %
С-37 «ПВ» 13,2 ± 1,4 3,9* +72,1 59,1 ± 2,2 5,5* +44,6
«Субалін» 11,2 ± 1,2 2,9* +46,0 47,2 ± 2,1 1,9 +15,4
«ПВ + субалін» 21,9 ± 3,9 3,7* +185,1 80,8 ± 4,3 8,1* +97,7
«Контроль прищеплення» 7,7 ± 0,4 – – 40,8 ± 2,5 – –
КЛЛ «ПВ» 11,1 ± 1,3 1,4 +13,5 53,7 ± 4,0 2,8* +35,0
«Субалін» 10,1 ± 0,9 0,9 +3,2 40,2 ± 1,3 0,5 +1,0
«ПВ + субалін» 12,9 ± 1,5 2,6* +31,5 57,5 ± 3,3 4,1* +44,4
«Контроль прищеплення» 9,0 ± 0,8 – – 39,8 ± 1,8 – –
*p < 0,05 порівняно з відповідним показником контрольної групи.
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
248 О Н К О Л О Г И Я • Т. 1 0 • № 2 • 2 0 0 8
ньому у 3,6 раза). Аналогічним чином змінювалась і ак-
тивність ПКК (на 10-ту, 21-шу добу), проте достовірних
відмінностей між контрольною і дослідними групами
не зафіксовано в жодний з термінів дослідження. Най-
більш виразною особливістю комбінованої дії ПВ з су-
баліном було збереження високої активності ЦТЛ у тер-
мінальні строки пухлинного росту (58-ма доба).
Таблиця 3
Цитотоксична активність клітин-ефекторів протипухлинного
імунітету у мишей з С-37
Показник
Те
рм
ін
д
ос
лі
д-
же
н н
я,
д
об
а
Група мишей
«П
В»
«С
уб
ал
ін
»
«П
В
+
су
ба
лі
н»
«К
он
тр
ол
ь
пр
ищ
еп
ле
н н
я»
Цитотоксична
активність Мф (індекс
цитотоксичності (ІЦ), %)
10 22,9 ± 7,7 9,1 ± 5,1 22,1 ± 6,6 17,4 ± 6,8
21 45,4 ± 8,9* 41,2 ± 4,3* 37,9 ± 7,4* 11,5 ± 5,2
58 21,6 ± 7,2 6,5 ± 4,0 2,5 ± 1,8 –
Активність ЦТЛ (ІЦ, %) 10 – – – –
21 26,1 ± 6,7 32,1 ± 8,8 36,6 ± 2,3* 22,2 ± 5,9
58 13,5 ± 6,0 7,1 ± 5,3 27,1 ±
1,9 **, ***
–
Активність ПКК (ІЦ, %) 10 34,1 ± 8,1 22,7 ± 5,4 35,1 ± 6,7 20,1 ± 7,2
21 13,9 ± 6,4 23,9 ± 8,4 6,5 ± 2,2 4,8 ± 1,8
58 20,0 ± 4,3 24,8 ± 5,7 14,5 ± 6,5 –
*p < 0,05 порівняно з «контролем прищеплення»; **0,05 < р < 0,1 порівняно
з групою «ПВ», ***p < 0,05 порівняно з групою «Субалін».
У мишей з КЛЛ, які отримували ПВ і субалін в
комбінованому режимі, показники ЛП та СТЖ не
відрізнялися від таких у тварин, які отримували тіль-
ки ПВ, і достовірно перевищували зазначені показ-
ники у мишей групи «контроль прищеплення» (у 1,4
і 1,4 раза відповідно, p < 0,05) (див. табл. 2).
При аналізі динаміки росту КЛЛ на 10-ту–28-му
добу після прищеплення пухлини (див. рисунок) при
комбінованому застосуванні ПВ з субаліном відзна-
чено вірогідне зростання середнього ІГРП порівня-
но з використанням ПВ у монорежимі (52 і 42% від-
повідно, р < 0,05). У мишей, які одержували тільки
субалін, ЛП та СТЖ не перевищували показників
«контролю прищеплення», а ІГРП КЛЛ був най-
меншим — 25%. Проаналізовано також зміни іму-
нологічних показників у тварин з КЛЛ, які отриму-
вали зазначені препарати (табл. 4).
Таблиця 4
Активність клітин-ефекторів протипухлинного імунітету у мишей
з КЛЛ на 28-му добу пухлинного росту
Група мишей
ІЦ, % Активність Мф
у НСТ-тесті,
опт. од.ПКК ЦТЛ
«ПВ» 43,2 ± 2,31, 2 7,8 ± 4,53, 4 0,176 ± 0,0153
«Субалін» 43,1 ± 2,91, 2 2,9 ± 1,53, 4 0,217 ± 0,0143
«ПВ + субалін» 12,8 ± 4,93 30,6 ± 4,031 0,300 ± 0,0051, 3
«Контроль прищеплення» 35,5 ± 2,61 24,5 ± 13,8 0,393 ± 0,0131
«Інтактний контроль» 6,4 ± 2,0 2,0 ± 1,2 0,219 ± 0,007
1р < 0,05 порівняно з інтактним контролем; 20,05 < р < 0,1; 3р < 0,05
порівняно з «контролем прищеплення»; 4р < 0,05 порівняно з групою
«ПВ + субалін».
Фонові значення активності ефекторів протипух-
линної резистентності (інтактний контроль) були:
для Мф — 0,219 опт. од., для ПКК — 6,4 ± 2,0%, для
ЦТЛ — 2,0 ± 1,2%. У групі «контроль прищеплення»
на 28-му добу пухлинного процесу ЦТА ПКК та Мф
вірогідно перевищувала показники інтактного контро-
лю; показник активності ЦТЛ мав високу гетероген-
ність (m > 50% M), тому його підвищення порівняно з
інтактними тваринами не є статистично достовірним.
Функціональні характеристики імунної системи тва-
рин дослідних груп значною мірою залежали від того,
який препарат було використано. У мишей, які отри-
мували ПВ або субалін окремо, відзначали суттєву ак-
тивацію ПКК порівняно з обома контрольними група-
ми, у той час як показники активності ЦТЛ та Мф не
відрізнялися суттєво від таких у інтактному контролі і
були вірогідно нижчими, ніж у «контролі прищеплен-
ня». При комбінованому застосуванні ПВ та субаліну
виявляли вірогідну активацію ЦТЛ та Мф і тенденцію
до підвищення активності ПКК порівняно з інтактним
контро лем. Порівняно з «контролем прищеплення»
активність ПКК і Мф була вірогідно нижчою, актив-
ність ЦТЛ мала тенденцію до підвищення.
Враховуючи роль цитокінів у формуванні як не-
специфічної, так і специфічної клітинної імунної
відповіді [28, 29] та відомості про механізм дії ПВ,
виготовленої з аутологічних пухлинних клітин за
допомогою ЦЛ B. subtilis B-7025 [27, 30], досліджу-
вали рівень продукції ФНП, ІЛ-1 і ІЛ-2 у тварин
контроль них і дослідних груп.
Рисунок. ІГРП у мишей, які отримували досліджувані препарати, порівняно з «контролем прищеплення»
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
249О Н К О Л О Г И Я • Т. 1 0 • № 2 • 2 0 0 8
При визначенні рівня ФНП встановлено, що у
інтактних тварин титр ФНП складав 2,6 ± 0,4 log2,
ІЦ Сн у розведенні 1 : 2 — 119,1 ± 20,4% (табл. 5).
Таблиця 5
Продукція ФНП у мишей з КЛЛ на 28-му добу пухлинного росту
Група
мишей
Титр
актив нос-
ті, log2
ІЦ, %
1 : 2 1 : 4 1 : 8 1 : 16
«ПВ» 1,13 ± 0,29 127,5 ± 20,2 23,6 ± 8,8 0 0
«Субалін» < 1,0 23,6 ± 10,9 0 0 0
«ПВ +
субалін»
2,0 ± 0,41 121,9 ± 19,5 65,7 ± 14,7 9,5 ± 9,0 0
«Контроль
прищеп-
лен ня»
1,25 ± 0,31 75,3 ± 15,4 49,4 ± 23,3 0 0
«Інтактний
контроль»
2,6 ± 0,40 119,1 ± 20,4 107,9 ± 7,7 62,9 ± 6,8 6,7 ± 2,1
У мишей групи «контроль прищеплення» аналогіч-
ні показники вірогідно знижені (р < 0,05). У тварин, які
отримували субалін у монорежимі, вони були суттєво
нижчими навіть за значення «контролю прищеплен-
ня»; при використанні ПВ у монорежимі титр ФНП
на рівні «контролю прищеплення», а ІЦ — на рівні ін-
тактного контролю. При використанні ПВ з субаліном
титр ФНП і ІЦ Сн у розведенні 1 : 2 були практично
такими ж, як і в інтактних тварин. Слід також зазначи-
ти, що Сн інтактних тварин проявляли достовірну ци-
тотоксичність у розведеннях 1 : 2–1 : 8, після введення
субаліну — 1 : 2, ПВ або ПВ + субаліну — 1 : 4.
У табл. 6 наведені дані щодо продукції in vitro ІЛ-1 та
ІЛ-2 спленоцитами мишей з КЛЛ. Встановлено, що на
28-му добу пухлинного росту у мишей групи «конт роль
прищеплення» титр активності ІЛ-1 був на рівні показ-
ника інтактних тварин і складав 2,0 log2. Індекс стимуля-
ції (ІС) дещо перевищував показники інтактного конт-
ролю: в розведенні 1 : 2 — 3,2 ± 0,3 (0,05 < p < 0,01), в
1 : 4 — 2,4 ± 0,4. Титри активності Сн спленоцитів ми-
шей, які одержували ПВ з субаліном за комбінованою
схемою або ПВ у монорежимі, достовірно не відрізня-
лися від таких в обох контрольних групах, ІС в розве-
денні Сн 1 : 2 мав тенденцію до зменшення порівняно
з «контролем прищеплення». У мишей, які отримували
лише субалін, титр активності ІЛ-1 і ІС були найнижчи-
ми (p < 0,05 порівняно з контрольними групами).
У цей же термін спостереження рівень про-
дукції in vitro ІЛ-2 лімфоцитами тварин групи
«контроль прищеплення» був суттєво вищим за по-
казники інтактного контролю (у 2,3 раза, p < 0,05)
(див. табл. 6).
Таблиця 6
Продукція in vitro ІЛ-1 та ІЛ-2 спленоцитами мишей з КЛЛ
на 28-му добу пухлинного росту
Група
мишей
Продукція ІЛ-1 моноцитами/
макрофагами
Продукція ІЛ-2
Т-лімфоцитами
Титр актив-
ності, log2
ІС, % Титр актив-
ності, log2
1 : 2 1 : 4
«ПВ» 1,3 ± 0,3 2,6 ± 0,1 1,8 ± 0,4 < 1*, **
«Субалін» < 1,0 1,5 ± 0,1*, ** 1,4 ± 0,3 < 1*, **
«ПВ + субалін» 1,0 ± 0,6 2,4 ± 0,3** 1,9 ± 0,3 1,5 ± 0,01**
«Контроль
прищеплення»
2,0 ± 0,0 3,2 ± 0,3 2,4 ± 0,4 3,57 ± 0,08*
«Інтактний
контроль»
2,4 ± 0,4 2,5 ± 0,04 2,3 ± 0,1 1,54 ± 0,07
*p < 0,05 порівняно з «інтактним контролем»; **p < 0,05 порівняно з «конт-
ролем прищеплення».
У мишей, які отримували ПВ або субалін у мо-
норежимі титри ІЛ-2 були < 1 log2, (p < 0,05 порів-
няно з обома контрольними групами). У мишей,
які одержували ПВ у комбінації з субаліном, титр
ІЛ-2 був суттєво нижчий за такий у «контролі при-
щеплення» та не відрізнявся від показника «інтакт-
ного контролю».
На нашу думку, заслуговує уваги, що у 20% ми-
шей, які отримували ПВ і субалін за комбінованою
схемою, пухлини не розвинулися взагалі (у інших
групах прищеплення КЛЛ — 100%). Результати іму-
нологічного дослідження цих тварин показали, що
на 45-ту добу після прищеплення КЛЛ (коли всі тва-
рини «контролю прищеплення» вже загинули) збе-
рігалася суттєва активація клітин-ефекторів як не-
специфічного (ІЦ ПКК 11,6 ± 4,2 проти 3,1 ± 1,1%
у інтактних мишей, 0,05 < p < 0,1; активність пулу
Мф у НСТ-тесті 0,273 проти 0,219 опт. од. у інтакт-
них тварин), так і специфічного (ІЦ ЦТЛ 26,4 ± 7,2
проти 2,1 ± 1,4% у інтактних мишей, p < 0,05) за-
хисту, що, очевидно, і забезпечило стійкий проти-
пухлинний ефект.
Таким чином, ранні стадії росту С-37 відбува-
лися у мишей груп «ПВ» і «ПВ + субалін» на фоні
активації (порівняно з «контролем прищеплення»)
Мф і ПКК, у мишей групи «субалін» — активації
тільки ПКК, що співпадає з мірою подовження ла-
тентного періоду в кожній з груп. Гальмування рос-
ту С-37 в усіх дослідних групах обумовлене, вірогід-
но, як активацією ефекторів неспецифічної резис-
тентності (10-та–21-ша доба), так і формуванням
специфічної цитотоксичної Т-клітинної відповіді.
Остання була найвищою у групі мишей «ПВ + суба-
лін», що добре узгоджується з найбільшим відсот ком
гальмуванням (див. рисунок). Максимальне подо-
вження СТЖ у цій групі можна зв’язати з високою
ЦТА Т-лімфоцитів у віддалені строки росту пухлин
(21-ша–58-ма доба). Співставлення динаміки актив-
ності ЦТЛ у дослідних групах мишей дозволяє при-
пустити, що у тварин групи «ПВ + субалін» гальму-
ється розвиток пов’язаної з пухлинним ростом су-
пресії Т-лімфоцитів.
На моделі КЛЛ підвищення дії ПВ при комбіно-
ваному використанні з субаліном за сукупністю по-
казників ефективності було менш вираженим, що,
можливо, пов’язане з властивостями клітин КЛЛ:
резистентністю до дії ПКК і низькою імуногенніс-
тю [31]. Оскільки переважна більшість пухлин люди-
ни також має низьку імуногенність, особливої ува-
ги заслуговує суттєве збільшення середнього ІГРП
у мишей цієї групи, що, вірогідно, пов’язано з до-
стовірною активацією специфічної імунної відпо-
віді (див. табл. 4).
На 28-му добу показники продукції досліджених
цитокінів (ФНП, ІЛ-1 і ІЛ-2) у мишей з КЛЛ, які отри-
мували ПВ і субалін за комбінованою схемою, прак-
тично не відрізнялися від таких у інтакт них тварин,
у той час як в інших групах знижувались або підви-
щувалася з різним ступенем вірогідності. Це свідчить
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
250 О Н К О Л О Г И Я • Т. 1 0 • № 2 • 2 0 0 8
про більш тривале збереження збалансованості меха-
нізмів регуляції як моноцитарної, так і лімфоцитарної
ланок імунної системи при комбінованому впливі ПВ
і субаліну порівняно з їх дією в монорежимі. Слід та-
кож зазначити, що в усіх дослідних групах показни-
ки активності Мф в НСТ-тесті і продукції ІЛ-1 були
нижчими, ніж в «контролі прищеплення». Це можли-
во розцінити як позитивний прогностичний чинник,
оскільки при вивченні механізмів дії ПВ, виготовле-
ної з аутологічних пухлинних клітин за допомогою ЦЛ
B. subtilis 7025, було виявлено сильну від’ємну кореля-
цію між гіперактивацією Мф у динаміці пухлинного
росту і антиметастатичною дією вакцини [32]. Як відо-
мо, гіперактивація Мф призводить до зміни їх функ-
ційного стану: з ефекторів реакцій неспецифічного
імунітету вони перетворюються на їх супресори.
Таким чином, отримані результати дозволяють
зробити висновок про перспективність комплексно-
го застосування ПВ і пробіотичного препарату суба-
лін, основою якого є рекомбінантний штам бакте-
рій, що містить ген ІФ-альфа людини. Імуномоду-
люючі властивості субаліну забезпечують вірогідне
покращання ефективності вакцинотерапії експе-
риментальних пухлин (у тому числі модельної ме-
тастазуючої пухлини — карциноми легені Льюїс).
Враховуючи, що ПВ та субалін дозволені до клініч-
ного використання в Україні, розроблену комбіно-
вану схему застосування цих препаратів можна ре-
комендувати до клінічних випробувань.
ЛІТЕРАТУРА
1. Rosenberg S. Progress in human tumour immunology and
immunotherapy. Nature 2001; 411 (6835): 380–4.
2. Балдуева ИА. Противоопухолевые вакцины. Практ он-
кол 2003; 4 (3): 157–66.
3. Berzofsky JA, Terabe M, Oh S, et al. Progress on new vaccine
strategies for the immunotherapy and prevention of cancer. J Clin
Invest 2004; 113 (11): 1515–25.
4. Mesa C, Fernandez LE. Challenges facing adjuvants
for cancer immunotherapy. Immunol Cell Biol 2004; 82 (6):
644–50.
5. Белоцкий СМ, Спивак НЯ. Интерфероны: биологиче-
ские и клинические эффекты. Киев, 2006: 287 с.
6. Воронцова АЛ. Иммунотропное действие интерферо-
нов и перспективы его клинического применения. Иммунол
и аллергол 2004; 1: 69–70.
7. Воронцова АЛ, Кудрявец ЮИ. Интерферон как важный
элемент оптимизации лечения онкологических больных. Он-
кология 2000; 2 (1–2): 16–20.
8. Kirkwood J. Cancer immunotherapy: The interferon-α
Experience. Semin Oncol 2002: 29 (3), suppl 7: 18–26.
9. Жильчук ВЄ, Воронцова АЛ, Кудрявець ЮЙ та ін.
Вплив неоад’ювантної інтерферонотерапії на патоморфоз
та імунохімічні особливості раку молочної залози. Онколо-
гия 2005; 7 (2): 157–60.
10. Vaishampayan U, Abrams J, Darrah D, et al. Active
immunotherapy of metastatic melanoma with allogeneic
melanoma lysates and interferon alpha. Clin Cancer Res 2002; 8
(12): 3696–701.
11. Dillman RO, Wiemann M, Nayak SK, et al. Interferon-
gamma or granulocyte-macrophage colony-stimulating factor
administered as adjuvants with a vaccine of irradiated autologous
tumor cells from short-term cell line cultures: a randomized phase
2 trial of the cancer biotherapy research group. J Immunother
2003; 26 (4): 367–73.
12. Патент № 26068 Україна «Профілактичний біопрепарат
субалін» / ВВ Смирнов (UA), СР Резник (UA), ІБ Соро-
кулова (UA), ЛС Сахдахчієв (RU), ВА Петренко (RU),
АА Ільічов (RU), ВА Бєлявская (RU), ІВ Тимофєєв (RU);
Опубл 30.04.99, Бюл (2).
13. Сорокулова ИЮ, Белявская ВА, Масычева ВИ, Ильи-
чев АА. Рекомбинантные пробиотики: проблемы и перспек-
тивы использования для медицины и ветеринарии. Вестн
РАМН 1997; 3: 46–9.
14. Чердынцева НВ, Белявская ВА, Литвяков НВ и др.
Влия ние микробиотика субалина на функциональную актив-
ность и экспрессию цитокинов иммунокомпетентными клет-
ками крови здоровых лиц. Иммунол 2001; (6): 54–7.
15. Белявская ВА, Игнатьев ГГ, Чердынцева НВ, Литвя-
ков НВ. Адъювантные свойства рекомбинантного пробио-
тика субалина, продуцирующего интерферон. Журн микро-
биол 2001; (6): 77–82.
16. Чердынцева НВ, Литвяков НВ, Смольянинов ЕС и др.
Модуляция противоопухолевой активности циклофосфа-
на рекомбинантным пробиотиком субалином. Вопр онкол
1997; 43 (3): 313–6.
17. Потебня ГП, Сафронова ЛА, Черемшенко НЛ та ін.
Вплив пробіотика субаліну на ефективність протипухлинної
вакцини. Мікроб журн 2006; 68 (6): 51–8.
18. Литвяков НВ, Чердынцева НВ, Белявская ВА и др.
Роль макрофагов в реализации антибластомного действия
рекомбинантного пробиотика субалина. Вопр онкол 2001;
47 (1): 86–9.
19. Potebnya GP, Tanasienko OA, Titova GP, et al. Specifity
and biological activity of cytotoxic lectins synthesized by Bacillus
subtilis B-7025. Exp Oncol 2002; 24 (2): 150–2.
20. Сорокулова ИБ, Рыбалко СН, Руденко АА и др. Про-
биотик субалин — принципиально новый подход к лечению
бактериальных и вирусных инфекций. Киев, 2006. 36 с.
21. Рыкова МП, Спирадзе ИВ, Зедгенидзе МС, и др. Но-
вая высокочувствительная техника тестирования нормаль-
ных киллеров. Иммунол 1981; (3): 88–90.
22. Передерий ВГ, Земсков АМ, Бычкова НГ, Земсков ВМ.
Иммунный статус, принципы его оценки и коррекции им-
мунных нарушений. Киев, 1995: 61–2.
23. Fisch H, Gifford G. In vitro production of rabbit macrophage
tumor cell cytotoxin. Int J Cancer 1983; 32 (1): 105–12.
24. Haskova V, Kaslik J, Matl I, Matejckova M. New technique
of circulating immunocomplex estimation in human sera. Cas Lek
Cesk 1977; 116 (14): 436–7.
25. Лимфоциты. Методы / Под ред Дж Клауса / Москва:
Мир, 1990. 395 с.
26. Лакин ГФ. Биометрия. Москва: Высшая школа, 1980:
293 с.
27. Савцова ЗД, Усач ОМ, Воєйкова ІМ та ін. Особливості
впливу протипухлинних вакцин (серія ІЕПОР), виготовлених
за різними технологіями, на ефекторні реакції специфічного і
неспецифічного імунітету. Наукові записки НаУКМА. Серія:
Біологія та екологія (Національний університет «Києво-
Могилянська академія»), 2001; 19: 26–31.
28. Возианов АФ, Бутенко АК, Зак КП. Цитокины. Био-
логические и противоопухолевые свойства. Киев: Наукова
думка, 1989. 320 с.
29. Бережная НМ, Чехун ВФ. Иммунология злокачествен-
ного роста. Киев: Наук думка, 2005. 792 с.
30. Федосова НІ, Усач ОМ, Юдіна ОЮ та ін. Вплив про-
типухлинних аутовакцин на активність макрофагів. Наукові
записки НаУКМА. Серія: Біологія та екологія (Національний
університет «Києво-Могилянська академія»), 2002; 20:
441–4.
31. Усач ОМ. Особливості впливу вакцин, виготовле-
них на основі пухлинних клітин за різними технологіями, на
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
251О Н К О Л О Г И Я • Т. 1 0 • № 2 • 2 0 0 8
специфічні і неспецифічні реакції протипухлинного імунітету
(експериментальні дослідження). [Дис … канд біол наук].
Київ, 2003. 172 с.
32. Федосова НІ, Усач ОМ, Мельник ТВ та ін. Визначен-
ня кореляційних зв’язків між впливом протипухлинних вак-
цин серії ІЕПОР на дискретні імунологічні показники та
ефективністю вакцинотерапії. Наукові записки НаУКМА.
Серія: Біологія та екологія (Національний університет
«Києво-Могилянська академія»), 2003; 22: 388–92.
SUBALIN PROBIOTIC PREPARATION
INCREASES THE EFFICIENCY OF CANCER
VACCINE
G.P. Potebnya, I.M. Voeykova, N.L. Cheremshenko,
G.S. Lisovenko, N.V. Trokhimenko, V.N. Basas,
L.P. Didkivska, O.M. Karaman, Z.D. Savtsova
Summary. The paper presents the results of preclinical
studies on evaluation of efficacy of the unique complex
treatment scheme by cancer vaccine (CV), derived from
cancer cells exposed to B. subtilis B-7025 cytotoxic
lectins, and probiotic agent subalin. The advantages
of the tested scheme include increase of tumor latent
growth period, inhibition of tumor growth, and prolonged
survival of mice with established tumors, as compared
with CV used alone. Immunologic effects of complex
CV and subalin application were evident by the
enhancement of T lymphocyte cytotoxic activity on late
stages of tumor growth, positive effect on macrophages
activity dynamics, and stabilization of cytokines
production (TNF-α, ІL-1 and ІL-2). The obtained
results propose the perspectives of future clinical trials
of CV combined with subalin.
Key Words: cancer vaccine, subalin, efficacy,
preclinical trial.
Адреса для листування:
Потебня Г.П.
03022, Київ, вул. Васильківська, 45
Інститут експериментальної патології, онкології
і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-2345 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 1562-1774,0204-3564 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-12-07T16:34:50Z |
| publishDate | 2008 |
| publisher | Iнститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р. Є. Кавецького |
| record_format | dspace |
| spelling | Потебня, Г.П. Воєйкова, І.М. Черемшенко, Н.Л. Лісовенко, Г.С. Трохименко, Н.В. Базась, В.Н. Дідківська, Л.П. Караман, О.М. Савцова, З.Д. 2008-09-18T11:29:58Z 2008-09-18T11:29:58Z 2008 Підвищення ефективності протипухлинної вакцини пробіотичним препаратом субалін / Г.П. Потебня, І.М. Воєйкова, Н.Л. Черемшенко, Г.С. Лісовенко, Н.В. Трохименко, В.Н. Базась, Л.П. Дідківська, О.М. Караман, З.Д. Савцова // Онкологія. — 2008. — Т. 10, N 2. — С. 246-251. — Бібліогр.: 32 назв. — укр. 1562-1774,0204-3564 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/2345 The paper presents the results of preclinical studies on evaluation of efficacy of the unique complex treatment scheme by cancer vaccine (CV), derived from cancer cells exposed to B. subtilis B-7025 cytotoxic lectins, and probiotic agent subalin. The advantages of the tested scheme include increase of tumor latent growth period, inhibition of tumor growth, and prolonged survival of mice with established tumors, as compared with CV used alone. Immunologic effects of complex CV and subalin application were evident by the enhancement of T lymphocyte cytotoxic activity on late stages of tumor growth, positive effect on macrophages activity dynamics, and stabilization of cytokines production (TNF-α, ІL-1 and ІL-2). The obtained results propose the perspectives of future clinical trials of CV combined with subalin. У роботі наведені результати доклінічного вивчення ефективності оригінальної схеми комплексного застосування протипухлинної вакцини (ПВ), виготовленої з пухлинних клітин за допомогою лектинової фракції, виділеної з фільтрату культуральної рідини B. subtilis B-7025, і пробіотичного препарату
 субалін. Переваги запропонованої схеми виявлялись у збільшенні латентного
 періоду виходу пухлин, гальмуванні їх росту та подовженні тривалості життя мишей з пухлинами порівняно із застосуванням ПВ у монорежимі. Імунологічними ефектами комплексного застосування ПВ і субаліну у експериментальних
 тварин було підвищення активності цитотоксичних Т-лімфоцитів у пізні терміни пухлинного росту, позитивний вплив на динаміку активності макрофагів та стабілізації продукції цитокінів (ФНП-α, ІЛ-1 та ІЛ-2). Отримані результати свідчать про перспективність клінічної апробації комбінованих схем введення ПВ з субаліном. uk Iнститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р. Є. Кавецького Оригинальные исследования Підвищення ефективності протипухлинної вакцини пробіотичним препаратом субалін Subalin probiotic preparation increases the efficiensy of cancer vaccine Article published earlier |
| spellingShingle | Підвищення ефективності протипухлинної вакцини пробіотичним препаратом субалін Потебня, Г.П. Воєйкова, І.М. Черемшенко, Н.Л. Лісовенко, Г.С. Трохименко, Н.В. Базась, В.Н. Дідківська, Л.П. Караман, О.М. Савцова, З.Д. Оригинальные исследования |
| title | Підвищення ефективності протипухлинної вакцини пробіотичним препаратом субалін |
| title_alt | Subalin probiotic preparation increases the efficiensy of cancer vaccine |
| title_full | Підвищення ефективності протипухлинної вакцини пробіотичним препаратом субалін |
| title_fullStr | Підвищення ефективності протипухлинної вакцини пробіотичним препаратом субалін |
| title_full_unstemmed | Підвищення ефективності протипухлинної вакцини пробіотичним препаратом субалін |
| title_short | Підвищення ефективності протипухлинної вакцини пробіотичним препаратом субалін |
| title_sort | підвищення ефективності протипухлинної вакцини пробіотичним препаратом субалін |
| topic | Оригинальные исследования |
| topic_facet | Оригинальные исследования |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/2345 |
| work_keys_str_mv | AT potebnâgp pídviŝennâefektivnostíprotipuhlinnoívakciniprobíotičnimpreparatomsubalín AT voêikovaím pídviŝennâefektivnostíprotipuhlinnoívakciniprobíotičnimpreparatomsubalín AT čeremšenkonl pídviŝennâefektivnostíprotipuhlinnoívakciniprobíotičnimpreparatomsubalín AT lísovenkogs pídviŝennâefektivnostíprotipuhlinnoívakciniprobíotičnimpreparatomsubalín AT trohimenkonv pídviŝennâefektivnostíprotipuhlinnoívakciniprobíotičnimpreparatomsubalín AT bazasʹvn pídviŝennâefektivnostíprotipuhlinnoívakciniprobíotičnimpreparatomsubalín AT dídkívsʹkalp pídviŝennâefektivnostíprotipuhlinnoívakciniprobíotičnimpreparatomsubalín AT karamanom pídviŝennâefektivnostíprotipuhlinnoívakciniprobíotičnimpreparatomsubalín AT savcovazd pídviŝennâefektivnostíprotipuhlinnoívakciniprobíotičnimpreparatomsubalín AT potebnâgp subalinprobioticpreparationincreasestheefficiensyofcancervaccine AT voêikovaím subalinprobioticpreparationincreasestheefficiensyofcancervaccine AT čeremšenkonl subalinprobioticpreparationincreasestheefficiensyofcancervaccine AT lísovenkogs subalinprobioticpreparationincreasestheefficiensyofcancervaccine AT trohimenkonv subalinprobioticpreparationincreasestheefficiensyofcancervaccine AT bazasʹvn subalinprobioticpreparationincreasestheefficiensyofcancervaccine AT dídkívsʹkalp subalinprobioticpreparationincreasestheefficiensyofcancervaccine AT karamanom subalinprobioticpreparationincreasestheefficiensyofcancervaccine AT savcovazd subalinprobioticpreparationincreasestheefficiensyofcancervaccine |