Перспективність використання Tn5-мутантівризобій при виготовленні бактеріальних добрив

За допомогою штаму Escherichia coli S17-1 із вбудованою в нього плазмідою pSUP2021::Tn5 здійснено транспозоновий мутагенез штамів 646, 614а і 71т Bradyrhizobium japonicum. Найвища частота утворення канаміцинрезистентних мутантів складала 10-6 (B. japonicum 646). Із-поміж 1500 одержаних мутантів віді...

Full description

Saved in:

Bibliographic Details
Published in:	Сільськогосподарська мікробіологія
Date:	2008
Main Authors:	Коць, С.Я., Маліченко, С.М., Маменко, П.М., Дрозденко, Г.М.
Format:	Article
Language:	Ukrainian
Published:	Інститут мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України 2008
Subjects:	Ґрунтова мікробіологія
Online Access:	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/24984
Tags:	Add Tag No Tags, Be the first to tag this record!
Journal Title:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Cite this:	Перспективність використання Tn5-мутантівризобій при виготовленні бактеріальних добрив / С.Я. Коць, С.М. Маліченко, П.М. Маменко, Г.М. Дрозденко // Сільськогосподарська мікробіологія: Міжвід. темат. наук. зб. — Чернігів, 2008. — Вип. 8. — С. 32-39. — Бібліогр.: 12 назв. — укр.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-24984
record_format	dspace
spelling	Коць, С.Я. Маліченко, С.М. Маменко, П.М. Дрозденко, Г.М. 2011-07-31T09:30:05Z 2011-07-31T09:30:05Z 2008 Перспективність використання Tn5-мутантівризобій при виготовленні бактеріальних добрив / С.Я. Коць, С.М. Маліченко, П.М. Маменко, Г.М. Дрозденко // Сільськогосподарська мікробіологія: Міжвід. темат. наук. зб. — Чернігів, 2008. — Вип. 8. — С. 32-39. — Бібліогр.: 12 назв. — укр. 1997-3004 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/24984 581.1:579.253.4 За допомогою штаму Escherichia coli S17-1 із вбудованою в нього плазмідою pSUP2021::Tn5 здійснено транспозоновий мутагенез штамів 646, 614а і 71т Bradyrhizobium japonicum. Найвища частота утворення канаміцинрезистентних мутантів складала 10-6 (B. japonicum 646). Із-поміж 1500 одержаних мутантів відібрано кращі за ознаками “вірулентність”, “азотфіксувальна активність” і “ефективність симбіозу”. Незважаючи на різні симбіотичні характеристики відібраних Tn5-мутантів, суттєвих відмінностей у їхньому білковому складі не виявлено. Зроблено висновок про можливість одержання повільнорослих ризобій за допомогою транспозонового мутагенезу. При помощи штамма Escherichia coli S17-1 со встроенной в него плазмидой pSUP2021::Tn5 осуществлен транспозоновый мутагенез штаммов 646, 614а и 71т Bradyrhizobium japonicum. Наивысшая частота образования канамицинрезистентных мутантов составляла 10-6 (B. japonicum 646). Из 1500 полученных мутантов отобраны лучшие по признакам “вирулентность”, “азотфиксирующая активность” и “эффективность симбиоза”. Несмотря на неодинаковые симбиотические характеристики отобранных мутантов, существенных различий в их белковом составе не виявлено. Сделан вывод о возможности получения медленнорастущих ризобий с помощью транспозонового мутагенеза. By using strain of Escherichia coli with build-in plasmid pSUP2021::Tn5 the transposon mutagenesis of Bradyrhizobium japonicum (strains 646, 614a and 71t) was performed. The highest formation frequency of kanamycinresistant mutants was 10-6 (B. japonicum 646). Among the 1500 mutants obtained, the best were selected by the “virulence”, “nitrogen fixation activity” and “symbiosis efficiency” criteria. In spite of different symbiotic characteristics of the selected Tn-5 mutants no considerable differences in their protein composition were determined. The authors made conclusion on the possibility of use of transposon mutagenesis in order to obtain the new forms of slowgrowing bacteria. uk Інститут мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України Сільськогосподарська мікробіологія Ґрунтова мікробіологія Перспективність використання Tn5-мутантівризобій при виготовленні бактеріальних добрив Перспективность использования Tn5-мутантов ризобий при изготовлении бактериальных удобрений Perspective use of Tn5-mutants of rhizobia inpreparation of bacterial fertilizers Article published earlier
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
title	Перспективність використання Tn5-мутантівризобій при виготовленні бактеріальних добрив
spellingShingle	Перспективність використання Tn5-мутантівризобій при виготовленні бактеріальних добрив Коць, С.Я. Маліченко, С.М. Маменко, П.М. Дрозденко, Г.М. Ґрунтова мікробіологія
title_short	Перспективність використання Tn5-мутантівризобій при виготовленні бактеріальних добрив
title_full	Перспективність використання Tn5-мутантівризобій при виготовленні бактеріальних добрив
title_fullStr	Перспективність використання Tn5-мутантівризобій при виготовленні бактеріальних добрив
title_full_unstemmed	Перспективність використання Tn5-мутантівризобій при виготовленні бактеріальних добрив
title_sort	перспективність використання tn5-мутантівризобій при виготовленні бактеріальних добрив
author	Коць, С.Я. Маліченко, С.М. Маменко, П.М. Дрозденко, Г.М.
author_facet	Коць, С.Я. Маліченко, С.М. Маменко, П.М. Дрозденко, Г.М.
topic	Ґрунтова мікробіологія
topic_facet	Ґрунтова мікробіологія
publishDate	2008
language	Ukrainian
container_title	Сільськогосподарська мікробіологія
publisher	Інститут мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України
format	Article
title_alt	Перспективность использования Tn5-мутантов ризобий при изготовлении бактериальных удобрений Perspective use of Tn5-mutants of rhizobia inpreparation of bacterial fertilizers
description	За допомогою штаму Escherichia coli S17-1 із вбудованою в нього плазмідою pSUP2021::Tn5 здійснено транспозоновий мутагенез штамів 646, 614а і 71т Bradyrhizobium japonicum. Найвища частота утворення канаміцинрезистентних мутантів складала 10-6 (B. japonicum 646). Із-поміж 1500 одержаних мутантів відібрано кращі за ознаками “вірулентність”, “азотфіксувальна активність” і “ефективність симбіозу”. Незважаючи на різні симбіотичні характеристики відібраних Tn5-мутантів, суттєвих відмінностей у їхньому білковому складі не виявлено. Зроблено висновок про можливість одержання повільнорослих ризобій за допомогою транспозонового мутагенезу. При помощи штамма Escherichia coli S17-1 со встроенной в него плазмидой pSUP2021::Tn5 осуществлен транспозоновый мутагенез штаммов 646, 614а и 71т Bradyrhizobium japonicum. Наивысшая частота образования канамицинрезистентных мутантов составляла 10-6 (B. japonicum 646). Из 1500 полученных мутантов отобраны лучшие по признакам “вирулентность”, “азотфиксирующая активность” и “эффективность симбиоза”. Несмотря на неодинаковые симбиотические характеристики отобранных мутантов, существенных различий в их белковом составе не виявлено. Сделан вывод о возможности получения медленнорастущих ризобий с помощью транспозонового мутагенеза. By using strain of Escherichia coli with build-in plasmid pSUP2021::Tn5 the transposon mutagenesis of Bradyrhizobium japonicum (strains 646, 614a and 71t) was performed. The highest formation frequency of kanamycinresistant mutants was 10-6 (B. japonicum 646). Among the 1500 mutants obtained, the best were selected by the “virulence”, “nitrogen fixation activity” and “symbiosis efficiency” criteria. In spite of different symbiotic characteristics of the selected Tn-5 mutants no considerable differences in their protein composition were determined. The authors made conclusion on the possibility of use of transposon mutagenesis in order to obtain the new forms of slowgrowing bacteria.
issn	1997-3004
url	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/24984
citation_txt	Перспективність використання Tn5-мутантівризобій при виготовленні бактеріальних добрив / С.Я. Коць, С.М. Маліченко, П.М. Маменко, Г.М. Дрозденко // Сільськогосподарська мікробіологія: Міжвід. темат. наук. зб. — Чернігів, 2008. — Вип. 8. — С. 32-39. — Бібліогр.: 12 назв. — укр.
work_keys_str_mv	AT kocʹsâ perspektivnístʹvikoristannâtn5mutantívrizobíiprivigotovlenníbakteríalʹnihdobriv AT malíčenkosm perspektivnístʹvikoristannâtn5mutantívrizobíiprivigotovlenníbakteríalʹnihdobriv AT mamenkopm perspektivnístʹvikoristannâtn5mutantívrizobíiprivigotovlenníbakteríalʹnihdobriv AT drozdenkogm perspektivnístʹvikoristannâtn5mutantívrizobíiprivigotovlenníbakteríalʹnihdobriv AT kocʹsâ perspektivnostʹispolʹzovaniâtn5mutantovrizobiipriizgotovleniibakterialʹnyhudobrenii AT malíčenkosm perspektivnostʹispolʹzovaniâtn5mutantovrizobiipriizgotovleniibakterialʹnyhudobrenii AT mamenkopm perspektivnostʹispolʹzovaniâtn5mutantovrizobiipriizgotovleniibakterialʹnyhudobrenii AT drozdenkogm perspektivnostʹispolʹzovaniâtn5mutantovrizobiipriizgotovleniibakterialʹnyhudobrenii AT kocʹsâ perspectiveuseoftn5mutantsofrhizobiainpreparationofbacterialfertilizers AT malíčenkosm perspectiveuseoftn5mutantsofrhizobiainpreparationofbacterialfertilizers AT mamenkopm perspectiveuseoftn5mutantsofrhizobiainpreparationofbacterialfertilizers AT drozdenkogm perspectiveuseoftn5mutantsofrhizobiainpreparationofbacterialfertilizers
first_indexed	2025-11-25T23:21:45Z
last_indexed	2025-11-25T23:21:45Z
_version_	1850577141008171008
fulltext	32 У�� 581.�1:579.�253.�4 ПЕРСПЕКТИВНІСТЬ ВИКОРИСТАННЯ TN5- МУТАНТІВ РИЗОБІЙ ПРИ ВИГОТОВЛЕННІ БАКТЕРІАЛЬНИХ ДОБРИВ Коць С.Я., Маліченко С.М., Маменко П.М., Дрозденко Г.М. Інститут фізіології рослин і генетики НАН України, вул.� Васильківська, 31/17, м.� �иїв, 03022, Україна E-mail: mamenko@ifrg.�kiev.�ua За допомогою штаму Escherichia coli S17-1 із вбудованою в нього плазмідою pSUP2021::Tn5 здійснено транспозоновий мутагенез штамів 646, 614а і 71т Bradyrhizobium japonicum. Найвища частота утворення канаміцинрезистентних мутантів складала 10-6 (B. japonicum 646). Із-поміж 1500 одержаних мутантів відібрано кращі за ознаками “вірулентність”, “азотфіксувальна активність” і “ефективність симбіозу”. Незважаючи на різні симбіотичні характеристики відібраних Tn5-мутантів, суттєвих відмінностей у їхньому білковому складі не виявлено. Зроблено висновок про можливість одержання повільнорослих ризобій за допомогою транспозонового мутагенезу. �лючові слова: транспозоновий мутагенез ризобій, соя, сим- біоз, азотфіксація. Серед заходів поліпшення азотного живлення рослин особливе місце належить теоретичним і практичним розробкам, спрямованим на суттєве підвищення існуючого рівня біологічного перетворення молекулярного азоту в органічні азотовмісні сполу- ки мікроорганізмами-азотфіксаторами.� Інтенсивність процесу симбіотичної фіксації азоту атмосфери визначається взаємодією макро- і мікросимбіонтів [6].� Ефективність симбіозу істотно залежить від добору сортів вирощуваних бобових рослин і комплементарних їм активних штамів бульбочкових бактерій [3].� Тривалий час одним із способів підвищення інтенсивності симбіотичної азотфіксації була аналітична селекція активних штамів бульбочкових бактерій із природних популяцій [1].� Сьогодні, завдяки застосуванню нових біотехнологічних підходів, у тому числі, методів молекулярної генетики і генної інженерії мікроорганізмів, з’явилася реальна можливість прискореного 33 конструювання високоефективних штамів бульбочкових бактерій.� Одним із таких методів є транспозоновий мутагенез, застосування якого дозволяє маркувати симбіотичні гени ризобій, які не мають самостійного фенотипового прояву, відкриваючи тим самим можливість з’ясування окремих ланок механізму формування симбіотичних взаємовідносин між бобовими рослинами і ризобіями [4, 7, 11].� Важливою перевагою цього методу є набуття мутантами маркеру стійкості до антибіотиків, завдяки чому з’являється можливість ідентифікувати мутантні штами ризобій у кореневих бульбочках бобових і в ґрунті, слідкувати за їхньою поведінкою після передпосівної інокуляції у різних ґрунтах і за неоднакових екологічних умов, з’ясувати їхню здатність приживатися в ризо- сфері рослин, бути конкурентоспроможними не лише стосовно бактерій інших штамів свого виду, але і до інших ґрунтових мікроорганізмів, у тому числі й патогенів.� Метою роботи було отримати мутанти повільнорослих бульбочкових бактерій сої зі зміненими симбіотичними влас- тивостями та відібрати кращі з них за конкурентоздатністю, азотфіксувальною активністю і ефективністю симбіозу з рослиною- хазяїном.� Впровадження відібраних штамів у рослинництво сприятиме інтенсифікації залучення азоту повітря до біологічного циклу і отриманню високоякісної, екологічно чистої продукції бобових культур.� Матеріали і методи. Об’єктами дослідження були 16 штамів Bradyrhizobium japonicum (634б, 614а, 631, 622, 646, 606, 603, 102с, W12, �, 71т, 10к, В1, 69r, G80, М8) із музейної колекції азотфіксувальних мікроорганізмів ІФРГ НАН України.� �ля проведення транспозонового мутагенезу цих штамів використано штам-донор Escherichia coli S17-1, який містив плазміду pSUP2021::Tn5 із маркером стійкості до канаміцину [12].� Рослиною- хазяїном у роботі слугувала соя сорту Мар’яна, рекомендована для вирощування у зонах Лісостепу і Полісся України.� Транспозоновий мутагенез штамів B. japonicum проводили за методикою Новикової зі співавт.� [5], пристосувавши її для мутування повільнорослих ризобій із використанням плазміди pSUP2021::Tn5.� Наявність транспозона Tn5 у мутантах ризобій визначали за методикою Гюльхабера зі співавт.� [8], а кількісний і якісний 34 склад білків – за допомогою градієнтного електрофорезу в поліакриламідному гелі [10].� Азотфіксувальну активність визначали ацетиленовим ме- тодом [9].� Усі результати обраховували статистично за загально- прийнятою методикою [2].� Результати та їх обговорення. У процесі перевірки 16-ти штамів B. japonicum виявилося, що лише три з них, а саме 646, 614а і 71т, чутливі до 50-70 мкг/мл канаміцину (Km) і стійкі до 500-1000 мкг/мл стрептоміцину (Str).� Отже, їх можна вико- ристовувати як реципієнти плазміди pSUP2021 при проведенні транспозонового мутагенезу (табл.� 1).� При кон’югації ризобій з E. coli S17-1, що несе плазміду із вбудованим у неї транспозоном Tn5, частота утворення канаміцинрезистентних мутантів була найвищою у штаму 646 і становила 10-6.� Після проведення транспозонового мутагенезу цього штаму нами було отримано понад 1500 Tn5-мутантів.� Штами 614а і 71т за ознаками стійкості до антибіотиків виявилися також придатними для проведення транспозонового мутагенезу, але частота транспозиції у них була нижчою і становила 10-7 та 10-8.� �еякі інші штами, наприклад, 622, 606, �, В-1, також можуть бути потенційними реципієнтами даної плазміди після їх адаптації до 1000 мкг/мл Str.� Таким чином, їх також можна використовувати для проведення транспозонового мутагенезу.� Таблиця 1. Ріст штамів Bradyrhizobium japonicum на середовищах із різною концентрацією антибіотиків �онцентрація антибіотиків, мкг/мл Штам B. japonicum 646 614а 71т Без антибіотиків (контроль) ++++ ++++ ++++ �анаміцин, 50 – + + Стрептоміцин, 500 ++++ ++++ ++++ Стрептоміцин, 1000 +++ +++ ++++ Частота транспозиції 10-6 10-7 10-8 Примітка: ріст ризобій: «++++» – на рівні контролю, «+++» – дещо слабший, «+» – ледь помітний, «–» – відсутній.� Первинний скринінг одержаних мутантів за набутою ознакою стійкості до Km здійснювали за їх здатністю рости на 35 манітно-дріжджовому агаризованому середовищі з 200 мкг/мл Km.� Наявність у них транспозона Tn5 перевіряли за допомогою полімеразної ланцюгової реакції.� Виявилося, що відібрані нами для аналізу мутанти і, зокрема, мутант 21-2, містив у своєму складі означений транспозон.� �рім того, необхідно було з’ясувати, чи існує відмінність у кількісному і якісному складі білків штамів ризобій і транспозоно- вих мутантів і визначити білки, характерні для активних мутантів.� Однак, незважаючи на різні симбіотичні характеристики дослід- жуваних ризобій, суттєвих відмінностей у їхньому білковому складі не виявлено (рис.� 1).� Це здається логічним, адже симбіотичні властивості ризобій проявляються лише за умов симбіозу з бобовими рослинами.� Проте, на основі отриманих результатів не можна однозначно констатувати відсутність таких білків.� Подальші дослідження з використанням більш широкого спектру Tn-5 мутантів зі зміненими симбіотичними характеристиками дозволять ідентифікувати протеїни, задіяні в процесах фіксації молекулярного азоту.� М – білкові маркери; 1– Bradyrhizobium japonicum 646; Tn5-мутанти: 2 – 35-2; 3 – 9-1; 4 – 21-2; 5 – 113; 6 – 118-8 Рис. 1. Білковий склад Bradyrhizobium japonicum 646 та його Tn5-мутантів: Наступним етапом досліджень був скринінг отриманих транспозонових мутантів ризобій сої за ознаками “азотфіксація”, “вірулентність” і “ефективність симбіозу”.� Спочатку ці мутанти 1 2 3 4 5 6 36 відбирали за вказаними ознаками в умовах мікровегетаційних експериментів.� Показано, що більшість із них не відрізнялися за симбіотичними характеристиками від вихідного штаму.� �ля подальших досліджень ми взяли близько 100 мутантів бульбочко- вих бактерій сої, аналіз яких продовжили у вегетаційних та польо- вих умовах.� �онтролем слугували рослини, інокульовані вихідним 646 і виробничим 634б штамами.� Із контрастних за азотфіксувальною активністю і вірулен- тністю відібрано сім Tn5-мутантів ризобій сої, а саме мутанти 21-2, 9-1, 17-2, 35-2, 107, 113, 118-8.� У вегетаційних умовах вони були використані для створення модельних симбіотичних систем із різним рівнем ефективності.� Tn5-мутанти 21-2, 9-1, 17-2 за вірулентністю, швидкістю формування бульбочок, їх розташуван- ням на кореневій системі рослини-хазяїна і, що найважливіше, азотфіксувальною активністю у різні фази вегетації перевищували контрольні штами (рис.� 2).� Проте, виявлено також три культури (107, 113 і 118-8), які характеризувалися високою вірулентністю, але низькою азотфіксувальною активністю.� Таким чином, одержані нами результати свідчать, що у повільнорослих бульбочкових бактерій сої за допомогою вектора pSUP2021::Tn5 можна отримати канаміцинрезистентні мутанти зі зміненими симбіотичними властивостями, а саме, бульбочкоутворенням, азотфіксувальною активністю і ефективніс- тю симбіозу.� Рис. 2. Динаміка загальної азотфіксувальної активності кореневих бульбочок сої, інокульованої Tn5-мутантами B. japonicum 646 0 10 20 30 40 50 60 70 634 646 21-2 9-1 17-2 35-2 107 113 118 , , ( 2 4/( · )) 3 37 Ефективність симбіотичних систем, створених за участю рослин сої і відібраних у вегетаційних дослідах Tn5-мутантів, яким за попередніми даними притаманна висока азотфіксувальна активність, була перевірена в умовах польового досліду на сірому лісовому і темно-сірому опідзоленому ґрунтах.� При цьому встановлено (табл.� 2), що інокуляція трьома досліджуваними Tn5- мутантами бульбочкових бактерій сої (21-2, 17- 2, 9-1) сприяла достовірному збільшенню маси насіння на 15–23 % у порівнянні з інокуляцією виробничим штамом 634б.� Вони виявилися вірулентними та активними мікросимбіонтами рослин сої.� Отримані дані свідчать, що за комплексом симбіотичних ознак кращими серед перспективних Tn5-мутантів є 21-2 і 17-2.� Таблиця 2. Урожайність насіння сої, інокульованої Tn5-мутантами B. japonicum (польові досліди) Варіанти досліду Урожайність, ц/га + до позитивного контролю (штам 634б) I II III середнє ц/га % Без інокуляції 15,9 17,6 15,8 16,4 – 4,2 – 20,4 Штам 634б 21,5 22,2 18,2 20,6 – – 646 20,8 22,7 19,3 20,9 + 0,3 + 1,4 Tn5-мутант 9-1 24,8 26,4 19,8 23,6 + 3,0 + 14,7 17-2 26,4 28,2 20,0 24,9 + 4,3 + 20,9 21-2 26,3 28,1 21,9 25,4 + 4,8 + 23,3 НІР0,05 2,1 2,2 2,0 Примітка: І – 2006 р.�, �иївська обл.�, ІІ – 2006 р.�, Черкаська обл.�, ІІІ – 2007 р.�, Черкаська обл.� Отже, у результаті досліджень показано, що транспозоновий мутагенез є ефективним методом одержання нових штамів бульбочкових бактерій.� Встановлено, що інокуляція рослин сої активними Tn5-мутантами B. japonicum підвищує ефективність функціонування симбіотичних систем і сприяє збільшенню їх продуктивності.� Після додаткових перевірок конкурентоспроможності і техно- логічності отримані транспозонові мутанти ризобій можуть бути рекомендовані як біологічна основа бактеріальних добрив для сої.� 38 1.� �оросинский Л.�М.� �лубеньковые бактерии и нитрагин /Л.�М.� �оросинский.� – Л.�: Наука, 1970.� – 191 с.� 2.� �оспехов Б.�А.� Методика полевого опыта /Б.�А.� �оспехов.� – М.�: Агропромиздат, 1985.� – 351 с.� 3.� �оць С.�Я.� Особенности взаимодействия растений и азот- фиксирующих микроорганизмов /[С.�Я.� �оць, С.��.� Береговенко, Е.�В.� �и- риченко, Н.�Н.� Мельникова].� – �.�: Наук.� думка, 2007.� – 315 с.� 4.� �урчак О.�Н.� Плазмида pSym 1-32 Rhizobium leguminosarum bv. viciae, контролирующая азотфиксирующую активность, эффективность симбиоза, конкурентоспособность и кислотоустойчивость /О.�Н.� �урчак, Н.�А.� Проворов, Б.�В.� Симаров //Генетика.� – 2001.� – Т.� 37, № 9.� – С.� 1225- 1232.� 5.� Новикова Н.�И.� Транспозоновый мутагенез у штамма СХМ1- 105 Rhizobium meliloti /Н.�И.� Новикова, Л.�А.� Шарыпова, Б.�В.� Симаров // Молекулярная генетика, микробиол.� и вирусол.� – 1986.� – № 8.� – С.� 32-36.� 6.� Генетические основы селекции клубеньковых бактерий /[Б.�В.� Симаров, А.�А.� Аронштам, Н.�И.� Новикова и др.�].� – Л.�: Агропромиздат, 1990.� – 192 с.� 7.� Шарыпова Л.�А.� Мутагенная активность плазмидных векторов- “самоубийц”, содержащих Tn5, у клубеньковых бактерий люцерны /Л.�А.� Шарыпова, О.�П.� Онищук, Н.�И.� Новикова //Генетика.� – 1987.� – Т.� 23, № 12.� – С.� 2104-2111.� 8.� Guilhaber M.�R.� Transposon mutagenesis of Xylella fastidiosa by electroporation of Tn5 synaptic complexes /M.�R.� Guilhaber, L.�M.� Hoffman, D.�A.� Mills, B.�C.� Kirkpatrick //Molec.� Plant Microb.� Interact.� – 2001.� – Vol.� 14, № 6.� – P.� 701-706.� 9.� Hardy R.�W.�F.� The acetylene-ethylene assay for N2-fixation: laborato- ty and field evaluation /R.�W.�F.� Hardy, R.�D.� Holsten, E.�K.� Jackson, R.�C.� Burns //Plant Physiol.� – 1968.� – Vol.� 43, N 8.� – P.� 1187-1207.� 10.� Laemmly U.�K.� Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of Bacteriofage T4 /U.�K.� Laemmly //Nature.� – 1970.� – Vol.� 227.� – P.� 680-685.� 11.� Pobigaylo N.� Construction of a largе signature-tagged mini-Tn5 transposon library and its application to mutagenesis of Sinorhizobium meli- loti /N.� Pobigaylo, D.� Wetter, S.� Szymczak et al.� //Appl.� Environ.� Microbiol.� – 2006.� – Vol.� 72, № 6.� – P.� 4329-4337.� 12.� Simon R.� A broad host range mobilization system for in vivo genetic engineering: transpozon mutagenesis in gram-negative bacteria /R.� Simon, U.� Priefer, A.� Puhler //Bioteсhnol.� – 1983.� – Vol.� 1, № 11.� – Р.� 784-791.� 39 ПЕРСПЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ TN5- МУТАНТОВ РИЗОБИЙ ПРИ ИЗГОТОВЛЕНИИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ УДОБРЕНИЙ Коць С.Я., Маличенко С.М., Маменко П.Н., Дрозденко Г.Н. Институт физиологии растений и генетики НАН Украины, г.� �иев При помощи штамма Escherichia coli S17-1 со встроенной в него плазмидой pSUP2021::Tn5 осуществлен транспозоновый мутагенез штаммов 646, 614а и 71т Bradyrhizobium japonicum. Наивысшая частота образования канамицинрезистентных мутантов составляла 10-6 (B. japonicum 646). Из 1500 полученных мутантов отобраны лучшие по признакам “вирулентность”, “азотфиксирующая активность” и “эффективность симбиоза”. Несмотря на неодинаковые симбиотические характеристики отобранных мутантов, существенных различий в их белковом составе не виявлено. Сделан вывод о возможности получения медленнорастущих ризобий с помощью транспозонового мутагенеза. �лючевые слова: транспозоновый мутагенез ризобий, соя, симбиоз, азотфиксация. PERSPECTIVE USE OF TN5-MUTANTS OF RHIZOBIA IN PREPARATION OF BACTERIAL FERTILIZERS Kots S.Ya., Malychenko S.M., Mamenko P.M., Drozdenko G.M. Institute of Plant Physiology and Genetics, NAS of Ukraine, Kyiv By using strain of Escherichia coli with build-in plasmid pSUP2021::Tn5 the transposon mutagenesis of Bradyrhizobium japonicum (strains 646, 614a and 71t) was performed. The highest formation frequency of kanamycinresistant mutants was 10-6 (B. japonicum 646). Among the 1500 mutants obtained, the best were selected by the “virulence”, “nitrogen fixation activity” and “symbiosis efficiency” criteria. In spite of different symbiotic characteristics of the selected Tn-5 mutants no considerable differences in their protein composition were determined. The authors made conclusion on the possibility of use of transposon mutagenesis in order to obtain the new forms of slowgrowing bacteria. Key words: transposon mutagenesis of rhizobia, soybean, symbiosis, nitrogen fixation.

Перспективність використання Tn5-мутантівризобій при виготовленні бактеріальних добрив

Institution

Similar Items