Разработка и применение современных лабораторных методов в эпидемиологическом мониторинге, диагностики и лечении энтеровирусных инфекций
У роботі проведена порівняльна оцінка специфічності й чутливості тест-системи ПЛР, зі специфічним праймером до ДНК 207 п.н. 5'-нетрансльованої області генома энтеровируса для всіх типів ентеровірусів (крім вірусу поліомієліту) у порівнянні із класичним культуральним методом. А також...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Таврический медико-биологический вестник |
|---|---|
| Дата: | 2009 |
| Автори: | , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Кримський науковий центр НАН України і МОН України
2009
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/25361 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Разработка и применение современных лабораторных методов в эпидемиологическом мониторинге, диагностики и лечении энтеровирусных инфекций / А.С. Прилуцкий, С.В. Бабенко, А.Г. Колесникова, С.О. Чернуцкий // Таврический медико-биологический вестник. — 2009. — Т. 12, № 3 (47). — С. 63-68. — Бібліогр.: 13 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-25361 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Прилуцкий, А.С. Бабенко, С.В. Колесникова, А.Г. Чернуцкий, С.О. 2011-08-04T12:32:39Z 2011-08-04T12:32:39Z 2009 Разработка и применение современных лабораторных методов в эпидемиологическом мониторинге, диагностики и лечении энтеровирусных инфекций / А.С. Прилуцкий, С.В. Бабенко, А.Г. Колесникова, С.О. Чернуцкий // Таврический медико-биологический вестник. — 2009. — Т. 12, № 3 (47). — С. 63-68. — Бібліогр.: 13 назв. — рос. 2070-8092 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/25361 616.988.23-036.2-07-08-071 У роботі проведена порівняльна оцінка специфічності й чутливості тест-системи ПЛР, зі специфічним праймером до ДНК 207 п.н. 5'-нетрансльованої області генома энтеровируса для всіх типів ентеровірусів (крім вірусу поліомієліту) у порівнянні із класичним культуральним методом. А також методологічний підхід спільного використання вищеописаної реакції ПЦР із визначенням антитіл класу Іg до вірусів Коксаки й ЕСНО у системі ІФА діагностики, розробленої авторами, і спектр застосування розробленого комплекс. In work the estimation of specificity and sensitivity of test system PTSR, with specific primers to DNA 207 n.n is spent comparative. 5 '-not broadcast areas генома an enterovirus for all types of enteroviruses (except a poliomyelitis virus) in comparison with classical the virology a method. And also the methodological approach of sharing of above described reaction PCR with definition of antibodies of a class ІgG to viruses Cocsaki and ЕСНО in system IFA of diagnostics developed by authors, and a spectrum of application of the developed complex. ru Кримський науковий центр НАН України і МОН України Таврический медико-биологический вестник Оригинальные статьи Разработка и применение современных лабораторных методов в эпидемиологическом мониторинге, диагностики и лечении энтеровирусных инфекций Розробка й застосування сучасних лабораторних методів при епідеміологічном моніторинзі, діагностиці і лікуванні ентеровірусних инфекцій Working out and application of modern laboratory methods at epidemiological monitoring, diagnostics and treatment enteroviruses of the infection Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Разработка и применение современных лабораторных методов в эпидемиологическом мониторинге, диагностики и лечении энтеровирусных инфекций |
| spellingShingle |
Разработка и применение современных лабораторных методов в эпидемиологическом мониторинге, диагностики и лечении энтеровирусных инфекций Прилуцкий, А.С. Бабенко, С.В. Колесникова, А.Г. Чернуцкий, С.О. Оригинальные статьи |
| title_short |
Разработка и применение современных лабораторных методов в эпидемиологическом мониторинге, диагностики и лечении энтеровирусных инфекций |
| title_full |
Разработка и применение современных лабораторных методов в эпидемиологическом мониторинге, диагностики и лечении энтеровирусных инфекций |
| title_fullStr |
Разработка и применение современных лабораторных методов в эпидемиологическом мониторинге, диагностики и лечении энтеровирусных инфекций |
| title_full_unstemmed |
Разработка и применение современных лабораторных методов в эпидемиологическом мониторинге, диагностики и лечении энтеровирусных инфекций |
| title_sort |
разработка и применение современных лабораторных методов в эпидемиологическом мониторинге, диагностики и лечении энтеровирусных инфекций |
| author |
Прилуцкий, А.С. Бабенко, С.В. Колесникова, А.Г. Чернуцкий, С.О. |
| author_facet |
Прилуцкий, А.С. Бабенко, С.В. Колесникова, А.Г. Чернуцкий, С.О. |
| topic |
Оригинальные статьи |
| topic_facet |
Оригинальные статьи |
| publishDate |
2009 |
| language |
Russian |
| container_title |
Таврический медико-биологический вестник |
| publisher |
Кримський науковий центр НАН України і МОН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Розробка й застосування сучасних лабораторних методів при епідеміологічном моніторинзі, діагностиці і лікуванні ентеровірусних инфекцій Working out and application of modern laboratory methods at epidemiological monitoring, diagnostics and treatment enteroviruses of the infection |
| description |
У роботі проведена порівняльна оцінка специфічності й чутливості тест-системи
ПЛР, зі специфічним праймером до ДНК 207 п.н. 5'-нетрансльованої області генома
энтеровируса для всіх типів ентеровірусів (крім вірусу поліомієліту) у порівнянні із
класичним культуральним методом. А також методологічний підхід спільного
використання вищеописаної реакції ПЦР із визначенням антитіл класу Іg до вірусів
Коксаки й ЕСНО у системі ІФА діагностики, розробленої авторами, і спектр
застосування розробленого комплекс.
In work the estimation of specificity and sensitivity of test system PTSR, with specific
primers to DNA 207 n.n is spent comparative. 5 '-not broadcast areas генома an
enterovirus for all types of enteroviruses (except a poliomyelitis virus) in comparison
with classical the virology a method. And also the methodological approach of sharing
of above described reaction PCR with definition of antibodies of a class ІgG to viruses
Cocsaki and ЕСНО in system IFA of diagnostics developed by authors, and a spectrum
of application of the developed complex.
|
| issn |
2070-8092 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/25361 |
| citation_txt |
Разработка и применение современных лабораторных методов в эпидемиологическом мониторинге, диагностики и лечении энтеровирусных инфекций / А.С. Прилуцкий, С.В. Бабенко, А.Г. Колесникова, С.О. Чернуцкий // Таврический медико-биологический вестник. — 2009. — Т. 12, № 3 (47). — С. 63-68. — Бібліогр.: 13 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT priluckiias razrabotkaiprimeneniesovremennyhlaboratornyhmetodovvépidemiologičeskommonitoringediagnostikiilečeniiénterovirusnyhinfekcii AT babenkosv razrabotkaiprimeneniesovremennyhlaboratornyhmetodovvépidemiologičeskommonitoringediagnostikiilečeniiénterovirusnyhinfekcii AT kolesnikovaag razrabotkaiprimeneniesovremennyhlaboratornyhmetodovvépidemiologičeskommonitoringediagnostikiilečeniiénterovirusnyhinfekcii AT černuckiiso razrabotkaiprimeneniesovremennyhlaboratornyhmetodovvépidemiologičeskommonitoringediagnostikiilečeniiénterovirusnyhinfekcii AT priluckiias rozrobkaizastosuvannâsučasnihlaboratornihmetodívpriepídemíologíčnommonítorinzídíagnosticíílíkuvanníenterovírusnihinfekcíi AT babenkosv rozrobkaizastosuvannâsučasnihlaboratornihmetodívpriepídemíologíčnommonítorinzídíagnosticíílíkuvanníenterovírusnihinfekcíi AT kolesnikovaag rozrobkaizastosuvannâsučasnihlaboratornihmetodívpriepídemíologíčnommonítorinzídíagnosticíílíkuvanníenterovírusnihinfekcíi AT černuckiiso rozrobkaizastosuvannâsučasnihlaboratornihmetodívpriepídemíologíčnommonítorinzídíagnosticíílíkuvanníenterovírusnihinfekcíi AT priluckiias workingoutandapplicationofmodernlaboratorymethodsatepidemiologicalmonitoringdiagnosticsandtreatmententerovirusesoftheinfection AT babenkosv workingoutandapplicationofmodernlaboratorymethodsatepidemiologicalmonitoringdiagnosticsandtreatmententerovirusesoftheinfection AT kolesnikovaag workingoutandapplicationofmodernlaboratorymethodsatepidemiologicalmonitoringdiagnosticsandtreatmententerovirusesoftheinfection AT černuckiiso workingoutandapplicationofmodernlaboratorymethodsatepidemiologicalmonitoringdiagnosticsandtreatmententerovirusesoftheinfection |
| first_indexed |
2025-11-26T00:09:30Z |
| last_indexed |
2025-11-26T00:09:30Z |
| _version_ |
1850593791783731200 |
| fulltext |
63
О Р И Г И Н А Л Ь Н Ы Е С Т А Т Ь И
УДК 616.988.23-036.2-07-08-071.
© Коллектив авторов, 2009.
РАЗРАБОТКА И ПРИМЕНЕНИЕ СОВРЕМЕННЫХ
ЛАБОРАТОРНЫХ МЕТОДОВ В ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОМ
МОНИТОРИНГЕ, ДИАГНОСТИКИ И ЛЕЧЕНИИ
ЭНТЕРОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ
А. С. Прилуцкий, С. В. Бабенко, А. Г. Колесникова, С. О. Чернуцкий
Кафедра клинической иммунологии, аллергологии и эндокринологии (зав. – проф. А. С. Прилуцкий) Донецкого
национального медицинского университета им. М. Горького, г. Донецк.
WORKING OUT AND APPLICATION OF MODERN LABORATORY METHODS AT EPIDEMIOLOGICAL
MONITORING, DIAGNOSTICS AND TREATMENT ENTEROVIRUSES OF THE INFECTION
A. S. Prilutsky, S. V. Babenko, A. G. Kolesnikovа, S. O. Chernutsky
SUMMARY
In work the estimation of specificity and sensitivity of test system PTSR, with specific primers to DNA 207
n.n is spent comparative. 5 '-not broadcast areas генома an enterovirus for all types of enteroviruses (except
a poliomyelitis virus) in comparison with classical the virology a method. And also the methodological approach
of sharing of above described reaction PCR with definition of antibodies of a class ІgG to viruses Cocsaki and
ЕСНО in system IFA of diagnostics developed by authors, and a spectrum of application of the developed
complex.
РОЗРОБКА Й ЗАСТОСУВАННЯ СУЧАСНИХ ЛАБОРАТОРНИХ МЕТОДІВ ПРИ ЕПІДЕМІОЛОГІЧНОМ
МОНІТОРИНЗІ, ДІАГНОСТИЦІ І ЛІКУВАННІ ЕНТЕРОВІРУСНИХ ИНФЕКЦІЙ
О. С. Прилуцький, С. В. Бабенко, Г. Г. Колеснікова, С. О. Чернуцький
РЕЗЮМЕ
У роботі проведена порівняльна оцінка специфічності й чутливості тест-системи ПЛР, зі
специфічним праймером до ДНК 207 п.н. 5'-нетрансльованої області генома энтеровируса для всіх
типів ентеровірусів (крім вірусу поліомієліту) у порівнянні із класичним культуральним методом. А
також методологічний підхід спільного використання вищеописаної реакції ПЦР із визначенням антитіл
класу Іg до вірусів Коксаки й ЕСНО у системі ІФА діагностики, розробленої авторами, і спектр
застосування розробленого комплекс.
Ключевые слова: лабораторная диагностика, энтеровирусная инфекция, полимеразная цепная
реакция, иммуноферментный анализ.
Несмотря на длительную историю изучения эн-
теровирусных инфекций (ЭВИ), многие ключевые
вопросы эпидемиологии и биологии ЭВИ остаются
невыясненными. Практически не установлены мас-
штабы циркуляции ЭВИ в популяции, структура и
частота бессимптомных форм инфекции [1, 7]. Так-
же неясно, какие причины приводят к формирова-
нию эпидемических штаммов и возникновению
вспышек ЭВИ - молекулярные основы изменения
вирулентности штаммов ЭВИ [4, 5]. Санитарно-про-
тивоэпидемические (профилактические) меры при
локализации и купировании очагов носят, преиму-
щественно, режимно-ограничительный характер. При
этом одной из основных мер, направленных на раз-
рыв путей передачи инфекции, является временное
приостановление деятельности учреждений или пред-
приятий, которое влечет за собой, ущерб социально-
экономического характера[1-3]. Нельзя не принимать
во внимание рост числа респираторных и острых
кишечных заболеваний, этиологически связанных с
энтеровирусами, равно как и точку зрения некото-
рых исследователей о возможном увеличении эпи-
демического потенциала ЭВИ в будущем, связанно-
го с изменением тактики иммунизации против поли-
омиелита в развитых странах мира [1, 7, 8]
Таким образом, для ответа на эти вопросы необ-
ходима подробная эпидемиологическая и вирусоло-
гическая информация о циркулирующих в стране
ЭВИ и вызываемых ими заболеваниях [1, 3, 12]. По-
лучение такой информации возможно только при
полноценном функционировании системы эпидеми-
ологического надзора за неполиомиелитными энтеро-
вирусными инфекциями, что невозможно без исполь-
зования современных методов диагностиким [5, 9].
В настоящее время согласно рекомендациям
ВООЗ для выделения энтеровирусов используют 2
линии перевиваемых клеточных культур – RD (Кле-
ток рабдосаркомы человека) и HEp-2 (клеток эпидер-
мальной карциномы человека). Обе линии клеточ-
ных культур являются высокочувствительными к по-
лиовирусу. Обычно полиовирус, а так же вирус Кок-
саки В хорошо размножается в клетках HEp-2; поли-
овирусы и большинство вирусов ЕСНО, а так же не-
которые штаммы вирусов Коксаки А в RD. ВООЗ
рекомендует использовать в вирусологических лабо-
раториях для идентификации энтеровирусов кроме
64
ТАВРИЧЕСКИЙ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ ВЕСТНИК2009, том 12, № 3 (47)
классического вирусологического метода, метод по-
лимеразой цепной реакции [4, 9, 10, 11]. В случаи
позитивной реакции в последнем методе, для окон-
чательной идентификации полученных вирусов не-
обходимо проведение исследования на клеточных
культурах. Вместе с тем, методология использования
полимеразной цепной реакции (ПЦР) для диагности-
ки энтеровирусной инфекции, а также определение
энтеровирусов в окружающей среде пока не приоб-
рела широкое распространение [5, 8, 9, 11].
Цель нашей работы - разработать, провести срав-
нительную оценку специфичности и чувствительно-
сти тест-системы ПЦР, со специфическим прайме-
ром к ДНК 207 п.н. 5’-нетранслируемой области ге-
нома энтеровируса для всех типов энтеровирусов
(кроме вируса полиомиелита) в сравнении с класси-
ческим культуральным методом [6, 7]. А также мето-
дологический подход совместного использования
вышеописанной реакции ПЦР с определением анти-
тел класса ІgG к вирусам Коксаки и ЕСНО в системе
ИФА диагностики, разработанной авторами, и спектр
применения разработанного комплекса[13].
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Нами были обследованы 1274 больных (взрос-
лых и детей) находящихся в инфекционном отделе-
нии больницы №1 г. Донецка с подозрением на ЭВИ,
а также очаги по месту их жительства. Были взяты 73
пробы питьевой воды, 152 пробы воды открытых во-
доемов и 146 проб сточных вод. Все исследования
проводились при помощи классического культураль-
ного метода, разработанной тест-системы ПЦР и
определения антител класса ІgG Коксаки и ЕСНО в
системе ИФА. Статистическая обработка получен-
ных в результате исследований осуществлялось при
помощи компьютерного вариационного, корреляци-
онного, регрессивного анализа. Анализировались
средние значения, их ошибки, среднеквадратичные
отклонения, коэффициенты корреляции.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Опираясь на рекомендации ВООЗ и проводя ис-
следования крови, ликвора, фекалий, а также смы-
вов из объектов внешней среды и проб воды (питье-
вой, сточных вод и открытых водоемов), вначале мы
поставили перед собой задачу провести сравнитель-
ную характеристику полученной нами диагностичес-
кой тест-системы ПЦР и классического вирусологи-
ческого метода на культурах клеток, а затем опреде-
лить ее возможную область применения [1-4].
Таблица 1
Сравнительная характеристика эффективности разработанных препаратов для выявления
возбудителей ЭВ в сравнении с классическим клеточным методом (ПЦР)
Культуральний метод ПЦР
№,
п.п
Объект
исследований Количество
проб
Процент
выявления, %
Количество
проб
Процент
совпадения, %
1
Больные с разными
диагнозами 163 100 159 97,5 ±1,22
2 Вода питьевая 73 100 65 89,0 ±2,45
3
Вода открытых
водоёмов 152 100 113 74,3 ±3,42
4 Сточные воды 146 100 116 79,5 ±3,16
5
Пробы из очагов
ЭВИ 152 100 141 85,4 ±1,37
Анализируя полученные результаты, следует от-
метить, что наибольший процент совпадений поло-
жительных реакций мы наблюдаем в реакции ПЦР
при обследовании людей, что составило 97,5±1,22%,
несколько ниже процент совпадений при обследова-
нии объектов внешней среды - от 74,3±3,42% до
85,4±1,37%. Все полученные результаты явились до-
стоверными, что характеризует апробируемую тест-
систему как достаточно точную. Следовательно, она
может быть предложена как отечественный аналог.
Спектр применения разработанной тест - систе-
мы ПЦР:
1. В соответствии со статьей 40 Закона Украины
«Об обеспечении санитарного и эпидемического
благополучия населения» (4004-12), с целью научно-
методического обеспечения государственного сани-
тарно-эпидемиологического надзора, а также руко-
водствуясь методическими указаниями о «Вирусо-
логическом мониторинге в системе эпидемиологи-
ческого надзора за энтеровирусными инфекциями и
путях его усовершенствования»[1,2], где предлагает-
ся проводить вирусологический мониторинг энте-
ровирусных инфекций, включающий в себя обсле-
дование инфекционных больных с клиническими
проявлениями, при которых не исключена роль эн-
теровирусов, как этиологического фактора, нами с
1997 года - года взрывного резкого подъема ЭВИ в
Донецкой области и по Украине - проводится обсле-
дование методом ПЦР и параллельно классическим
вирусологическим методом больных (взрослых и
детей) с различными заболеваниями вирусной этио-
логии при подозрении на ЭВИ[5,6]. Полученные ре-
65
О Р И Г И Н А Л Ь Н Ы Е С Т А Т Ь И
зультаты позволяли лечащим врачам в более корот-
кие сроки подтвердить или отвергнуть диагноз ЭВИ
и, как результат, назначить правильное этиотропное
лечение, а санитарным врачам в домашних очагах
проводить комплекс противоэпидемических мероп-
риятий [6,13]. При анализе сравнительных результа-
тов полученных после проведения классического
вирусологического исследования и ПЦР мы должны
отметить, что процент совпадений составил
108,9±2,52 до 79.2±2,26 в зависимости от исходного
диагноза (таблица 2).
Методы обследования
Диагноз
Количество
проб Культуральный ПЦР
Процент
совпадения, %
ОРВИ 799 62 56 90,3±1,05
ОКИ 152 45 49 108,9±2,52
С. Менингит 323 56 54 79,2±2,26
Всего проб 1274 163 159 97,5 ±0,43
Таблица 2
Выявление ЭВИ в крови, ликворе больных (ОРВИ, ОКИ, С. менингитом) при помощи ПЦР и
культурального метода
Проведенные исследования показали, что для
диагностики энтеровирусной инфекции у больных с
подозрением на энтеровирусную природу заболе-
вания определение энтеровирусов с применением
ПЦР в плазме крови и ликворе необходимо прово-
дить по возможности в первый-второй день заболе-
вания. Это обусловлено тем, что эффективность де-
текции РНК возбудителя в плазме крови прогрессив-
но снижается в зависимости от дня заболевания. Био-
логическим материалом для ПЦР могут быть: кровь,
моча, слюна, ликвор, мазок из ротоглотки, мокрота,
плевральный выпот, биопсийный материал, синови-
альная жидкость, материал от женщин – соскоб (ма-
зок), материал от мужчин - соскоб (мазок), сок про-
статы [4, 5].
2. Вирусологический мониторинг в системе эпи-
демиологического надзора за энтеровирусными ин-
фекциями предлагает проводить наблюдения по эпи-
демиологическим показаниям за контактными и
больными в очаге ЭВИ. Нами с 1997 по 2007 год про-
водилось обследования при помощи ПЦР на нали-
чие ЭВИ в домашних очагах.
Проведение лабораторных исследований в до-
машних очагах позволило нам выявить инфициро-
ванных общавшихся, которые впоследствии были
классифицированы или как заразоносители, или как
больные легкой стертой атипичной формы [2-4]. По-
лучение положительных результатов при обследова-
нии предметов обихода и остатков пищи позволило
нам предположить ориентировочные факторы и
механизм передачи. А регистрируемый высокий
процент совпадений от 107±1,88% до 82,6±3,50% по-
зволяет нам рекомендовать метод ПЦР для проведе-
ния эпидемиологического обследования в домашних
очагах.
3. В системе эпидемиологического надзора за
энтеровирусными инфекциями необходимо прово-
дить исследования проб воды разного вида пользо-
вания с ведущей ролью среди них сточной воды. При
исследовании сточной воды преимущество должно
предоставляться канализационным коллекторам, ко-
торые обслуживают большие группы населения.
Математически рассчитанная оптимальная группа
составляет 100-300 тыс. населения, которые обслу-
живается одной канализационной системой и разре-
шает с высокой вероятностью выделить энтеровиру-
сы при наличии одиночных случаев энтеровирусных
инфекций. Нами за период с 1997 по 2007 года прово-
дилось обследование методом ПЦР и классическим
культуральным методом питьевой воды, воды откры-
тых водоемов и сточных вод. Анализируя получен-
ные результаты необходимо отметить, что метод ПЦР
может быть использован для мониторинга ЭВИ во
внешней среде, так как сравнивая полученные ре-
зультаты за 10 лет с кривыми заболеваемости эпиде-
миологического анализа, мы получили одинаковую
периодичность. Более того, полученные результаты
обсемененности объектов внешней среды могут
быть использованы для прогнозирования подъема
заболеваемости. В наших исследованиях, как в годы
подъемов, так и в годы спадов наибольшая концент-
рация ЭВ в питьевой воде регистрировалась за ме-
сяц до подъема заболеваемости среди людей (рис.1).
Установлена прямая корреляционная связь меж-
ду подъемом заболеваемости ЭВИ и обсемененнос-
тью вод открытых водоемов и сточных вод, что мо-
жет быть использовано для наблюдения за заболева-
емостью в данном населенном пункте (рис. 2).
На основании вышеизложенного, можно заклю-
чить: метод ПЦР может быть использован как для
диагностики, так и для мониторинга ЭВИ, тем более
что он имеет ряд преимуществ, таких как высокая
специфичность, обусловленная нуклеотидною пос-
ледовательностью праймеров; высокая чувствитель-
ность метода (10-1000 клеток в пробе); значительная
скорость получения результата исследования (до 4-6
часов, т.е. на протяжении рабочего дня); возмож-
ность диагностики не только острых (манифестных)
форм заболевания, но и латентных; для ПЦР иссле-
дования пригоден любой материал (тампоны с маз-
66
ТАВРИЧЕСКИЙ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ ВЕСТНИК2009, том 12, № 3 (47)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
ян
ва
рь
ф
ев
ра
ль
мар
т
ап
ре
ль
май
ию
нь
ию
ль
ав
гу
ст
се
нт
яб
рь
ок
тя
бр
ь
но
яб
рь
де
ка
бр
ь
Месяцы
%
в
ы
де
ле
ни
я
ЭВ
И
заболеваемость ЭВИ сточные воды воды открытых водоемов
Рис. 1. Частота выделения ЭВ из питьевой воды в сравнении с заболеваемостью ЭВИ.
0
5
10
15
20
25
30
ян
ва
рь
ф
ев
ра
ль
мар
т
ап
ре
ль
май
ию
нь
ию
ль
ав
гу
ст
се
нт
яб
рь
ок
тя
бр
ь
но
яб
рь
де
ка
бр
ь
Месяцы
%
в
ы
д
ел
ен
и
я
Э
В
И
заболеваемость ЭВИ Выделение из воды ЭВИ
Рис.2. Частота выделения ЭВ из вод открытых водоемов и сточных вод в сравнении с
заболеваемостью ЭВИ.
ками, кровь, моча и т.п.), выделение чистой культу-
ры не обязательно; обследуемый материал может
быть продезинфицирован химическими или терми-
ческими методами в момент отбора, что позволяет
исключить возможность инфицирования персонала
в ходе проведения ПЦР; простота выполнения и воз-
можность автоматизации; ПЦР на сегодняшний день
может считаться одним из самых распространенных
методов клинической микробиологии, так как явля-
ется наиболее качественным, простейшим, эконо-
мичным, довольно чувствительным, специфическим
и воспроизводимым методом[7,8].
Характеризуя работу тест-системы ИФА для оп-
ределения ІgG при проверке на наличие перекрест-
ного реагирования с антигенами вирусов полиоми-
елита 1 и 2 типов определено отсутствие разности
уровня антител в группах привитых и не привитых,
детей с низкими и высокими титрами антител к виру-
сов полиомиелита, лиц с низкими и высокими уров-
нями антител к полиомиелиту, который свидетель-
ствует о ее специфичности [9,10].
При сравнении эффективности разработанной
тест – системы с классическим вирусологическим
методом, следует отметить, что процент совпадения
составляет 79,8±3,14%. Согласно иммунологическим
канонам наибольшая концентрация ІgG, в среднем,
приходится на третью неделю заболевания, что реги-
стрировалось в наших контрольных исследованиях
(таблица 3).
Полученные результаты говорят о чувствительно-
сти реактива и возможности его использования для
установления стадии заболевания, возможностей пер-
систенции вирусов или формирования носительства.
Для эпидемиологов данная тест-система представля-
ет интерес при установлении источников инфекции в
расшифровке крупных вспышек или эпидемий, а так-
же наличие легких стертых форм (таблица 4).
Установлено, что наличие антител класса ІgG к
антигенам вирусов Коксаки и ЕСНО регистрируется
с разной частотой у лиц в зависимости от возраста.
Учитывая, что диагностический уровень оптической
плотности, который определяет наличие антител клас-
67
О Р И Г И Н А Л Ь Н Ы Е С Т А Т Ь И
Таблица 3
Сравнительная характеристика эффективности разработанных препаратов для выявления ІgG к ЭВ
в сравнении с классическим клеточным методом (ИФА)
Культуральний метод ИФА
Процент выявления, В зависимости от
срока заболевания№,п.п
Объект
исследований
Количест-
во проб
Процент
выявле-
ния
Количест-
во проб 1 неделя, %
2
неделя,
%
3 и более
недель, %
Итого,
%
1
Больные с
разными
диагнозами 163 100 130 13,3±4,2 26,1±3,3 39,4±3,16
79,8
±3,14
МЕТОД
Диагноз
Количество
проб Культуральный ИФА
Процент
совпадений,%
С. Менингит 799 62 49 79,0±1,44
ОКИ 152 45 37 70.3±3,70
ОРВИ 323 56 42 75,0±2,41
Всего проб 1274 163 128 77,0±1,18
Таблица 4
Выявление специфического IgG методом ИФА по сравнению с классическим вирусологическим
методом при различных заболеваниях ОВИ
са ІgG к энтеровирусам есть > 0,300 единиц, по раз-
ности проценту детей до 3 лет и взрослых можно при-
близительно оценить, что в год энтеровирусами до-
полнительно инфицируется от 1 до 1,5% неинфици-
рованного населения [13]. Учитывая частоту регист-
рации интеркурентных инфекций и удельный вес
регистрации РНК вирусов Коксаки и ЕСНО среди
всего контингента, процент лиц, которые перенесли
инфекцию за год, существенным образом выше.
Вместе с тем, это не противоречит полученным ре-
зультатам, так как они характеризуют прирост в се-
ронегативной части населения. Полученные резуль-
таты разрешают рекомендовать комбинированное
использование результатов ПЦР и определение ІgG
антител к антигенам вирусов Коксаки и ЕСНО при
подозрении на ЭВИ для ее диагностики (рис.3) [13].
Типирование вируса культуральным методом
или специфическими праймерами
Продолжение наблюдения. Повторное
обследование на наличие антител через 1,2,3
недели
1 этап (в первые дни заболевания)
1. Определение РНК вируса в крови, ликворе.
2. Определение антител к вирусам Коксаки и ЕСНО
РНК+ АТ- РНК+ АТ+ РНК- АТ-
Диагноз подтверждено
Типирование вируса культуральным методом
или специфическими праймерами
АТ- АТ+
Диагноз не подтверждено
Диагноз подтверждено
Типирование вируса культуральным
методом или специфическими
праймерами
Рис. 3. Схема диагностики ЭВИ в больных с подозрением на энтеровирусную этиологию
заболевания
68
ТАВРИЧЕСКИЙ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ ВЕСТНИК2009, том 12, № 3 (47)
ВЫВОДЫ
Использование предложенного комплекса тестов
позволяет:
1. Оперативно, в течение 12-24 часов, диагнос-
тировать или подтвердить энтеровирусную природу
заболевания.
2. Определить наличие эпидемически опасных
лиц, которые выделяют вирус во внешнюю среду;
вирусовыделяющих с бессимптомной или атипич-
ной формой инфекции.
3. Проведение эпидемиологического мониторин-
га ЭВИ.
ЛИТЕРАТУРА
1. Иммунология: Практикум. – Киев.- «Высшая
школа».- 1989.-296с.
2. Бабенко С.В., Колесникова А.Г., Ектова Л.И.,
Прилуцкий А.С., Чернуцкий С.О. «Эпидемиологичес-
кие особенности распространения энтеровирусных
инфекций в промышленных регионах» //Универси-
тетская клиника.-2008.- том 4 №1.-С. 95-99
3. Колесникова А.Г., Бабенко С.В., Микрюкова
Н.Г., Прилуцкий А.С., Чернуцкий С.О. «Удельный вес
водного фактора в распространении серозного ме-
нингита в донецком регионе» // Университетская кли-
ника.-2008.- том 4 №1.-С. 100-106.
4. Сизяшин Л.П. Андреев И.И. Справочник по
клинической иммунологии // М.: Феникс.-2005.-445с.
5. Мухарська Л.М., Хайтович О.Б., Методичні
вказівки «Застосування полімеразної ланцюгової
реакції для виявлення збудників інфекційних захво-
рювань людини» // Київ .-2003.-19-56
6. Прилуцкий А. С., Бабенко С. В., Ектова Л. И., и
др. Выделение энтеровирусов из объектов окружа-
ющей среды и у больных, имеющих различную па-
тологию // Актуальні проблеми акушерства і гінеко-
логії, клінічної імунології та медичної генетики:
Збірник наукових праць.- Київ- Луганськ, вип. 5.-
2001.- С. 357- 362.
7. Прилуцький О. С., Бабенко С. В., Майлян Е. А.
та ін. Циркуляція ентеровірусів та захворюванність
окремими формами ентеровірусної інфекції серед
дітей Донецького регіону // Українська міжвідомча
збірка.- Товариство «Знання».- Київ, Т. 28.- 2001.- С.
120- 127.
8. Byington C. L., Taggart E. W., Carroll K. C., et al.
A polymerase chain reaction- based epidemiologic
investigation of the incidence of nonpolio enteroviral
infections in febrile and afebrile infants 90 days and
younger // Pediatrics.- 1999.- Mar.- № 103 (3).- E. 27.
9. Glimaker M., Lindquist L. Enterovirus diagnosis
is important, but should be used cautiously //
Lakartidningen.- 1999.- Aug. 25.- № 96 (34).- P. 3516-
3519.
10.Hadziyannis E., Cornish N., Starkey C. et al.
Amplicor enterovirus polymerase chain reaction in
patient with aseptic meningitis: a sensitive test limited
by amplification inhibitors // Arch. Pathol. Lab. Med.-
1999.- Oct.- № 123 (10).- P. 882- 884.
11.Ramers C., Billman G., Hartin M. et al. Impact of
diagnostic cerebrospinal fluid enterovirus polymerase
chain reaction test on patient management // Jama.- 2000.-
May. 24- 31.- № 283 (20).- P. 2680- 2685.
12.DIAREA.RU – портал о диарее [Электронный
ресурс]: Режим доступа к ресурсу.: http://
www.diarea.ru/modules.php?name=News&file=
article&sid=5469.
13.Прилуцький О. С., Бабенко С. В., Майлян Е. А.
та ін. Методичні рекомендації. Імунологічна діагнос-
тика активності, поширеності ентеровірусної інфекції
// Київ 2007 – С. 1-27.
|