Імуноферментне визначення змісту індолілоцтової кислоти в культуральній рідині мікроорганізмів
Отримано специфічну антисироватку до кон’югату β-індо-ліл-3-оцтової кислоти (ІОК) з бичачим сироватковим альбуміном, яку використано для визначення вмісту ІОК у культуральній рідині мікроорганізмів конкурентним методом ІФА із застосуванням антикролячих імуноглобулінів, мічених пероксидазою. Розробле...
Saved in:
| Published in: | Сільськогосподарська мікробіологія |
|---|---|
| Date: | 2009 |
| Main Authors: | , , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Ukrainian |
| Published: |
Інститут мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України
2009
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/27136 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Імуноферментне визначення змісту індолілоцтової кислоти в культуральній рідині мікроорганізмів / С.Б. Дімова, О.О. Дмитрук, О.Є. Мамчур, Л.П. Коломієць, В.В. Волкогон // Сільськогосподарська мікробіологія: Міжвід. темат. наук. зб. — Чернігів, 2009. — Вип. 9. — С. 179-187. — Бібліогр.: 12 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859860939134730240 |
|---|---|
| author | Дімова, С.Б. Дмитрук, О.О. Мамчур, О.Є. Коломієць, Л.П. Волкогон, В.В. |
| author_facet | Дімова, С.Б. Дмитрук, О.О. Мамчур, О.Є. Коломієць, Л.П. Волкогон, В.В. |
| citation_txt | Імуноферментне визначення змісту індолілоцтової кислоти в культуральній рідині мікроорганізмів / С.Б. Дімова, О.О. Дмитрук, О.Є. Мамчур, Л.П. Коломієць, В.В. Волкогон // Сільськогосподарська мікробіологія: Міжвід. темат. наук. зб. — Чернігів, 2009. — Вип. 9. — С. 179-187. — Бібліогр.: 12 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Сільськогосподарська мікробіологія |
| description | Отримано специфічну антисироватку до кон’югату β-індо-ліл-3-оцтової кислоти (ІОК) з бичачим сироватковим альбуміном, яку використано для визначення вмісту ІОК у культуральній рідині мікроорганізмів конкурентним методом ІФА із застосуванням антикролячих імуноглобулінів, мічених пероксидазою. Розроблена імуноферментна тест-система для кількісного визначення ІОК у культуральній рідині мікроорганізмів є зручною і надійною для проведення досліджень.
Получена специфическая антисыворотка к конъюгату β-индолил-3-уксусной кислоты (ИУК) с бычьим сывороточным альбумином, которая использована для определения содержания ИУК в культуральной жидкости микроорганизмов конкурентным методом ИФА с использованием антикроличьих иммуноглобулинов, меченных пероксидазой. Разработанная иммуноферментная тест-система для количественного определения ИУК в культуральной жидкости микроорганизмов является удобной и надёжной для проведения исследований.
The antiserum specific to the conjugate of β-indolil-3-acetic acid (IUK) with bovine serum albumin, was received and used for determination of IAA contents in cultural liquids of microorganisms by competitive method of the ELISE with the use of antirabbit immunoglobulins, marked by peroxidase. The elaborated immune-enzyme test-system for quantitative determination of IAA in cultural liquids of microorganisms is proved to be convenient and reliable for IAA analysis.
|
| first_indexed | 2025-12-07T15:46:19Z |
| format | Article |
| fulltext |
179
МЕТОДИ
�� 579.�22:57.�083.�3
ІМУНОФЕРМЕНТНЕ ВИЗНАЧЕННЯ ВМІСТУ
ІНДОЛІЛОЦТОВОЇ КИСЛОТИ В КУЛЬТУРАЛЬНІЙ
РІДИНІ МІКРООРГАНІЗМІВ
Дімова С�Б�, Дмитрук О�О�, Мамчур О�Є�,
Коломієць Л�П�, Волкогон В�В�
Інститут сільськогосподарської мікробіології УААН,
вул.� Шевченка, 97, м.� Чернігів, 14027, Україна
E-mail: rifam@ukrpost.�ua
Отримано специфічну антисироватку до кон’югату β-індо-
ліл-3-оцтової кислоти (ІОК) з бичачим сироватковим альбуміном,
яку використано для визначення вмісту ІОК у культуральній рідині
мікроорганізмів конкурентним методом ІФА із застосуванням
антикролячих імуноглобулінів, мічених пероксидазою. Розроблена
імуноферментна тест-система для кількісного визначення ІОК
у культуральній рідині мікроорганізмів є зручною і надійною для
проведення досліджень.
�лючові слова: фітогормони, індолілоцтова кислота,
твердофазний імуноферментний аналіз.
На сьогодні вже не викликає сумніву той факт, що у
процесі формування мікробно-рослинних симбіозів та асоціацій
безпосередню участь приймають ауксини, зокрема, β-індоліл-
3-оцтова кислота, яка впливає як на ступінь прояву первинних
молекулярних сигналів між рослиною і мікроорганізмами [1], так і
на регулювання активності процесів симбіотичної та асоціативної
азотфіксації [2-6].� У зв’язку з тим, що дія фітогормонів на ріст і
розвиток рослин залежить від їх концентрації, актуальними є
дослідження з визначення оптимального навантаження цих речовин
на рослину і регулювання їх вмісту в мікробних препаратах, що,
у свою чергу, потребує розробки ефективних методів визначення
якісного та кількісного складу фітогормонів у культуральній рідині
мікроорганізмів-біоагентів препаратів.�
Традиційні методи визначення ІО� (біотестування та фізико-
хімічні) відзначаються трудоємністю та тривалістю проведення
аналізів.� Вимогам експрес-аналізу значною мірою відповідають
імуноферментні методи [7], які не потребують тривалого очищення
180
зразків перед аналізом, без чого неможливе, наприклад, будь-яке
фізико-хімічне дослідження.�
�ля визначення вмісту ІО� у рослинах розроблено методику
конкурентного твердофазового імуноферментного аналізу [8].�
Метою наших досліджень була розробка тест-системи на основі
твердофазного конкурентного ІФА для визначення кількісного
вмісту ІО� у культуральній рідині мікроорганізмів.�
Матеріали і методи. У роботі використано культуральну
рідину бактерій – представників видів Azospirillum brasilensebrasilense
(штами 410, Sp-7, �-1, �-5),Sp-7, �-1, �-5), Azospirillum lipoferum (штами 4014,
С-1), Bradyrhizobium japonicum (М-8, 634б) та Pseudomonas
sp. з �олекції корисних ґрунтових мікроорганізмів Інституту
сільськогосподарської мікробіології УААН.� Мікроорганізми
культивували на рідких поживних середовищах при температурі
28 °С протягом 72 годин.� �ля бактерій роду Azospirillum
використовували середовище, рекомендоване для азоспірил [9],],
для бульбочкових бактерій – люпинове середовище [10], для
псевдомонад – середовище Муромцева [11].�
Очищення культуральної рідини мікроорганізмів для
імуноферментного аналізу проводили перед тестуванням.�
Суспензію звільняли від бактеріальних клітин центрифугуванням
протягом 10 хв при 8 тис.� об.�/хв, використовували супернатант без
додаткового очищення.�
При проведенні досліджень готували стандартизовані
розчини ІО� з концентрацією від 1 до 32 мкг/мл.�
�ля кон’югації фітогормону з білком використовували
карбодіімідний метод, згідно якого зшиваючим агентом для отри-
мання кон’югату є похідна карбодііміду – дициклогексилкарбоді
імід.� �ля ковалентного зв’язування ІО� з бичачим сироватковим
альбуміном (БСА) або овальбуміном (ОА) 50 мг ІО� розчиняли
в 1 мл безводного діоксану, який завчасно обезводжували за ви-
користання металічного натрію [8].� �о розчиненої в діоксані ІО�
додавали 50 мг дициклогексилкарбодііміду, розчин перемішували
протягом 30 хвилин за кімнатної температури та центрифугували
при 8 тис.� об.�/хв протягом 10 хв.� Супернатант краплями, пере-
мішуючи, додавали до 10 мл 0,1 М боратного буфера рН 8,5, що
містив 100 мг БСА або ОА.� �ля кон’югації суміш залишали на ніч
при температурі +4 °С.� Отриманий препарат кон’югату очищували
від незв’язаної ІО� діалізом проти 0,1 М боратного буферу рН 8,5,
181
розливали порціями по 0,5 мл та зберігали в морозильній камері
при температурі -20 °С.� �онтроль якості отриманого кон’югату
здійснювали спектрофотометричним методом.�
Антисироватки до ІО� одержували шляхом імунізації
дослідних тварин (японських перепелів та кролів) кон’югатом
ІО�+БСА за рекомендованою [9] та розробленими схемами.� Через
тиждень після останньої імунізації тварин тричі відбирали кров та
аналізували сироватку методом простої дифузії за Уденом [10].�
При проведенні конкурентного імуноферментного аналізу для
сенсибілізації полістиролових планшетів застосовували кон’югат
ІО�+ОА у робочому розведенні в 0,05 М карбонатному буфері
рН 9,5, який вносили у лунки по 0,1 мл, інкубували 16-18 годин
при 4 °С.� По закінченні етапу адсорбції, як і на всіх наступних
етапах, лунки планшетів тричі промивали фізіологічним розчи-
ном, що містив 0,05 % твіну-20.� �ля зменшення фонового рівня
реакції використовували блокування вільних сайтів (де не відбу-
лась адсорбція кон’югату ІО�+ОА) лунок полістиролового планше-
ту додаванням яєчного альбуміну: розчин білка (10 мг/мл) інкубу-
вали у лунках панелей по 0,1 мл протягом 60 хв при температурі
37 °С.�
Антисироватку окремо (у планшеті для титрування) інку-
бували з культуральною рідиною або стандартними розчинами
фітогормону: вносили по 0,05 мл імунної кролячої сироватки
(робоче розведення 1:100) і проби.� При цьому частина антитіл
зв’язувалася з ІО� зразка, у результаті чого кількість антитіл, здатних
імуносорбуватися на іммобілізованій на полістироловому планше-
ті ІО�, зменшувалася, що давало змогу підвищити достовірність
кількісного обліку результатів аналізу.� Після інкубації протягом
60 хв при 37 °С проби вносили по 0,05 мл у лунки полістиролового
планшету, сенсибілізовані кон’югатом ІО�+ОА та витримували
60 хв при 37 °С.�
Після промивання планшетів додавали мічені пероксидазою
хрону козячі антикролячі антитіла («Sigma», США).� Інкуба-
цію проводили за температури 37 оС протягом 60 хв.� Фер-
ментативну активність виявляли за допомогою субстрату (4 мг
ортофенілендіаміну розчиняли в 10 мл 0,06 М фосфатного буферу
рН 5,0 та додавали 0,05 мл 3 %-го розчину Н2О2), інкубували у
темряві.� Результати реакції реєстрували спектрофотометрично при
довжині хвилі 490 нм.�
182
Результати та їх обговорення. Оскільки ІО� є гаптеном,
тобто неповноцінним одновалентним антигеном, уведення його
в організм тварин не викликає імунної відповіді.� Імуногенних
властивостей гаптени набувають тільки після кон’югації з
високомолекулярними носіями.� Тому першочерговим завданням у
ході розробки методу ІФА для визначення вмісту ІО� у культуральній
рідині мікроорганізмів було одержання імуноспецифічних
реагентів – кон’югатів ІО� з овальбуміном і бичачим сироватковим
альбуміном.�
�он’югат ІО� з білком отримували ковалентним зв’язуван-
ням, яке відбувається, завдяки наявності карбоксильної групи у ІО�
та аміногрупи у білка.� �онцентрація білка у кон’югаті за даними
спектрофотометричного аналізу дорівнювала 2 мг/мл.�
Препарати ІО�+БСА в подальшому були використані для
імунізації дослідних тварин і отримання імунних антисироваток,
ІО�+ОА – для сенсибілізації планшетів при проведенні ТІФА.�
Імунізацію перепелів проводили без використання ад’юван-
тів за двома схемами.� �а першою внутрішньом’язово вводили по
0,2 мл кон’югату ІО�+БСА (концентрація білка становила 1 мг/мл)
з інтервалом між ін’єкціями один тиждень протягом трьох місяців.�
�а другою, скороченою схемою, імунізацію проводили протягом
двох тижнів: внутрішньом’язово вводили поступово зростаючу дозу
антигену від 0,5 до 0,8 мл з концентрацією білка 1 мг/мл (табл.� 1).�
Відбір крові при декапітації проводили через 7 днів після останньої
імунізації з використанням як антикоагуляційної речовини 5 %-
ного розчину цитрату натрію.�
Таблиця 1. Схема імунізації японських перепелів
�ні імунізації Об’єм антигену
(ІО�+БСА), мл
�онцентрація білка в антигені,
мг/мл
1-й 0,5 1
7-й 0,6 1
11-й 0,7 1
13-й 0,8 1
У дослідах, проведених з перепелами, встановлено
можливість використання для імунізації тварин при отриманні
антисироватки до синтезованого антигену (кон’югату ІО�+БСА)
разової дози введення антигену 0,8-1,0 мл за концентрації білка
183
1 мг/мл у боратному буферному розчині рН 8,5.�
При отриманні антисироваток з використанням кролів засто-
сували іншу схему імунізації: тваринам внутрішньом’язово вво-
дили 1 мл кон’югату ІО�+БСА (концентрація білка в препаратах
1-2 мг/мл) у суміші з 0,5 мл повного ад’юванта Фрейнда («Sigma»,
США); повторні ін’єкції антигену у тій же дозі, змішаного з 0,5 мл
неповного ад’юванта Фрейнда («Sigma», США), здійснювали з
інтервалом 2 тижні протягом трьох місяців (табл.� 2).� Відбір крові
кролів проводили через 7-10-12 днів після останньої імунізації.�
Таблиця 2. Схема імунізації кролів
�ні імунізації Об’єм антигену
(ІО�+БСА), мл
�онцентрація білка в антигені,
мг/мл
1-й 1 1
14-й, 28-й, 42-й, 56-й,
70-й, 84-й 1 1-2
При визначенні специфічності методом простої лінійної
імунодифузії за Уденом отримана антисироватка до ІО� утворювала
лінію преципітації лише з гомологічним антигеном (ІО�+БСА).�
Методику проведення ІФА відпрацьовували, використову-
ючи розчини ІО� з відомою концентрацією.� �астосували конкурент-
ний варіант ТІФА: кон’югат ІО�+ОА адсорбували на твердій фазі
– оптично прозорому полістиролі.�
Сенсибілізацію полістиролових плат покривним кон’югатом
ІО�+ОА здійснювали розчином кон’югату в дистильованій воді у
співвідношенні 1:10 за використання 2 %-го розчину глутарового
альдегіду.� При застосуванні глутаральдегіду значно підвищується
ефективність зв’язування білків з платою за рахунок ковалентних
зв’язків, порівняно зі звичайною адсорбцією, яка відбувається за
рахунок слабких електростатичних взаємодій [12].� Інкубацію плат
проводили протягом 2-х годин за температури 18-22 оС, після чого
плати тричі промивали дистильованою водою.�
Окрім того, використання глутарового альдегіду як
«зшиваючого» агента дає можливість повторного використання
планшетів без проведення їх сенсибілізації покривним кон’югатом.�
�ля повторного використання планшетів після проведення аналізу
лунки заповнювали стоп-розчином 0,05 М гліцин – H�l рН 2,8 на
20 хвилин та ретельно промивали.� В наших дослідах одну плату
184
повторно використовували для аналізу культуральної рідини
мікроорганізмів на вміст ІО� до трьох разів.�
�астосований нами варіант ТІФА базується на конкуренції за
антитіла між гормоном, кон’югованим з білком, який сорбований на
полістиролі, і вільним ІО� стандартного розчину або аналізованого
зразка.� �ількість антитіл, сорбованих на полістиролі, визначали за
допомогою козячих антитіл проти імуноглобулінів кроля, мічених
пероксидазою хрону, які, приєднуючись до утворених на твердій
фазі імунних комплексів, сприяють їх виявленню в результаті
реакції ферменту з субстратом.� Після досягнення оптимального
рівня забарвлення через 20 хвилин ферментативну реакцію
зупиняли, використовуючи стоп-розчин 0,05 М гліцин – H�l рН 2,8,
що виявився ефективнішим за 4н розчин сірчаної кислоти.�
�а візуальної оцінки результатів позитивна реакція чітко
відрізняється інтенсивністю забарвлення розчину від незначної
фонової реакції в контрольних лунках (сенсибілізованих ОА).�
Інтенсивність забарвлення вимірювали на спектрофотометрі при
довжині хвилі 490 нм, що дозволяло отримати числові значення
оптичної густини, за якими можна вирахувати вміст ІО� у
досліджуваних зразках.�
�а результатами проведеного аналізу будували графіки
залежності оптичної густини зразка від вмісту ІО� у розчинах з
відомою концентрацією (рис.� 1).� �рива залежності хромофорної
відповіді від логарифму концентрації ІО� мала відрізок, у якому
розташована ефективна зона реакції за концентрації стандартного
розчину ІО� від 1 до 16 мкг/мл.�
Рис. 1. Залежність оптичної густини зразка
від концентрації стандартних розчинів ІОК
490, , .
130
132
134
136
138
140
142
144
146
148
150
152
154
156
158
160
0 1 2 3 4 5 6 7 8 91011121314151617181920212223242526272829303132333435
, /
185
Вміст ІО� досліджуваного зразка культуральної рідини
мікроорганізмів визначали по стандартній кривій, порівнюючи
значення ОГ досліджуваного зразка з ОГ стандартного позитивного
зразка відомих концентрацій.� Слід зазначити, що краще прово-
дити аналіз досліджуваного зразка в декількох розведеннях і
використовувати для розрахунку вмісту фітогормону те значення
ОГ, яке найближче до середини лінійного відрізка стандартної
кривої.�
Проведений імуноферментний аналіз культуральної рідини
досліджуваних бактерій показав різну здатність мікроорганізмів
до продукування ІО� (табл.� 3).�
Таблиця 3. Вміст індолілоцтової кислоти в культуральній
рідині мікроорганізмів
Бактерії ІО�, мкг/мл
Azospirillum brasilense 410 2,5
A. brasilense Sp-7 4,0
A. brasilense �-1 6,0
A. brasilense �-5 10,0
Azospirillum lipoferum 4014 9,5
A. lipoferum �-1 7,5
Pseudomonas sp. <1
Bradyrhizobium japonicum М-8 1,7
B. japonicum 634 б 5,5
Таким чином, нами отримано специфічні антисироватки
до індолілоцтової кислоти та розроблено конкурентний варіант
твердофазного імуноферментного аналізу, який дозволяє визначати
вміст фітогормону в культуральній рідині мікроорганізмів.�
�астосування розроблених методичних підходів експрес-
визначення ІО� дозволить значно оперативніше проводити відбір
мікроорганізмів за здатністю продукувати ауксини та розширити
дослідження з оптимізації вмісту фітогормонів у мікробних
препаратах.�
1.� �auer P.� Role of plant hormones and carbon/nitrogen metabolismRole of plant hormones and carbon/nitrogen metabolism
in controlling nodule initiation on alfalfa roots /�auer P.�, �oba De La�auer P.�, �oba De La
Pena T.�, Frugier F.� et.� al.� //Nitrogen Fixation: Fundamentals and Application//Nitrogen Fixation: Fundamentals and Application
/Ed.� I.�A.� Tichonovich et.� al.� – Dordrecht/�oston/London: Kluwer Academic
Publ.�, 1995.� – P.� 443-448.�
186
2.� Тагиев В.��.� Влияние гетероауксина на активность и вирулент- Тагиев В.��.� Влияние гетероауксина на активность и вирулент-Тагиев В.��.� Влияние гетероауксина на активность и вирулент-
ность клубеньковых бактерий люцерны /Тагиев В.��.� //Изв.� АН СССР, сер.�
биол.� – 1965.� – № 2.� – С.� 291-292.�
3.� Чайлахян М.�Х.� Влияние гиббереллинов и гетероауксина на рост Чайлахян М.�Х.� Влияние гиббереллинов и гетероауксина на ростЧайлахян М.�Х.� Влияние гиббереллинов и гетероауксина на рост
бобовых растений и образование клубеньков /Чайлахян М.�Х.�, Мегре-
бян А.�А.�, �арапетян Н.�А.�, �аладжян Н.�Л.� //Изв.� АН Арм.� ССР.� – 1967.�
– Т.� �IV.� – С.� 25.�
4.� Волкогон В.�В.� Влияние фитогормонов и их синтетических Волкогон В.�В.� Влияние фитогормонов и их синтетическихВолкогон В.�В.� Влияние фитогормонов и их синтетических
аналогов на активность ассоциативной азотфиксации /Волкогон В.�В.�,
�ульнев П.�Г.�, �овтун Е.�П.� и др.� //Микробиол.� – 1996.� – Т.� 65, № 6.� – С.� 850-
854.�
5.� Мальцева Н.�Н.� Изучение ассоциативной азотфиксации у райгра- Мальцева Н.�Н.� Изучение ассоциативной азотфиксации у райгра-Мальцева Н.�Н.� Изучение ассоциативной азотфиксации у райгра-
са пастбищного /Мальцева Н.�Н.�, Волкогон В.�В.�, Гусев О.�В.�, �ульнев П.�Г.�
//Мікробіол.� журн.� – 2001.� – Т.� 63, № 5.� – С.� 74-76.�
6.� Сальник В.�П.� Вплив інокуляції і регулятора росту триман-1 на Сальник В.�П.� Вплив інокуляції і регулятора росту триман-1 наСальник В.�П.� Вплив інокуляції і регулятора росту триман-1 на
активність азотфіксації, розвиток та формування симбіозу люцерни з
бульбочковими бактеріями /Сальник В.�П.�, Волкогон В.�В.�, Мальцева Н.�М.�,
Мамчур О.�Е.� //Физиол.� и биохим.� культурн.� раст.� – 2001.� – № 6.� – С.� 529-
534.�
7.� Иммуноферментный анализ регуляторов роста растений: Иммуноферментный анализ регуляторов роста растений:Иммуноферментный анализ регуляторов роста растений:
применение в физиологии растений и �кологии /Уфа: БНЦ УрО АН СССР,
1990.� – 164 с.�
8.� �удоярова Г.�Р.� Иммуноферментное определение содержания ин- �удоярова Г.�Р.� Иммуноферментное определение содержания ин-�удоярова Г.�Р.� Иммуноферментное определение содержания ин-
долилуксусной кислоты в семенах кукурузы с использованием меченых
антител /Г.�Р.� �удоярова, С.�Ю.� Веселов, М.�И.� Еркеев и др.� //Физиол.� раст.�
– 1986.� – Т.� 33, Вып.� 6.� – С.� 1221-1227.�
9.� Пат.� 1806123 СССР, М�И С 05 F 11/08, С12 N1/20.� Штамм Пат.� 1806123 СССР, М�И С 05 F 11/08, С12 N1/20.� ШтаммПат.� 1806123 СССР, М�И С 05 F 11/08, С12 N1/20.� Штамм
бактерій Azospirillum brasilense для производства удобрений под райграс
пастбищный и кострец безостый /В.�В.� Волкогон, Н.�Н.� Мальцева,
Л.�И.� Онищенко и др.� – № 4916559/13; заявл.� 05.�03.�91; опубл.� 30.�03.�93,
Бюл.� № 12.�
10.� Тильба В.�А.� Аборигенная популяция ризобий сои основной Тильба В.�А.� Аборигенная популяция ризобий сои основнойТильба В.�А.� Аборигенная популяция ризобий сои основной
соесеющей зоны России: автореф.� дис.� .�.�.� д-ра биол.� наук /В.�А.� Тильба.�
– Владивосток, 1998.� – 46 с.�
11.� Муромцев Г.�С.� Методы изучения растворения фосфатов каль- Муромцев Г.�С.� Методы изучения растворения фосфатов каль-Муромцев Г.�С.� Методы изучения растворения фосфатов каль-
ция микроорганизмами /Г.�С.� Муромцев //Микробиол.� – 1957.� – Т.� 26,
Вып.� 2.� – С.� 172-178.�
12.� Ehlers U.� �inding of viruses from crude plant extracts to Ehlers U.� �inding of viruses from crude plant extracts toEhlers U.� �inding of viruses from crude plant extracts to
glutaraldehyde-treated plants for indirect ELISE /U.� Ehlers, H.�L.� Paul.� –
J.� Virol.� �eth.� – 1984.� – Vol.� 8, N 3.� – P.� 217-224.�
187
ИММУНОФЕРМЕНТНОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
СОДЕРЖАНИЯ ИНДОЛИЛУКСУСНОЙ
КИСЛОТЫ В КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ
МИКРООРГАНИЗМОВ
Димова С�Б�, Дмитрук О�А�, Мамчур А�Е�,
Коломиец Л�П�, Волкогон В�В�
Институт сельскохозяйственной микробиологии УААН,
г.� Чернигов
Получена специфическая антисыворотка к конъюгату β-
индолил-3-уксусной кислоты (ИУК) с бычьим сывороточным
альбумином, которая использована для определения содержания
ИУК в культуральной жидкости микроорганизмов конкурентным
методом ИФА с использованием антикроличьих иммуноглобулинов,
меченных пероксидазой. Разработанная иммуноферментная тест-
система для количественного определения ИУК в культуральной
жидкости микроорганизмов является удобной и надёжной для
проведения исследований.
�лючевые слова: фитогормоны, индолилуксусная кислота,
иммуноферментный анализ.
IMMUNE-ENZYME DETERMINATION OF
INDOLILACETIC ACID IN CULTURAL LIQUIDS
OF MICROORGANISMS
Dimova S�B�, Dmitruk O�A�, Mamchur A�E�,
Kolomiets L�P�, Volkogon V�V�
Institute of Agricultural �icrobiology UAAS, �hernihiv
The antiserum specific to the conjugate of β-indolil-3-acetic acid
(IUK) with bovine serum albumin, was received and used for determination
of IAA contents in cultural liquids of microorganisms by competitive
method of the ELISE with the use of antirabbit immunoglobulins,
marked by peroxidase. The elaborated immune-enzyme test-system for
quantitative determination of IAA in cultural liquids of microorganisms
is proved to be convenient and reliable for IAA analysis.
Key words: phytohormones, indolilacetic acid, ELISE.
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-27136 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 1997-3004 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-12-07T15:46:19Z |
| publishDate | 2009 |
| publisher | Інститут мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Дімова, С.Б. Дмитрук, О.О. Мамчур, О.Є. Коломієць, Л.П. Волкогон, В.В. 2011-09-27T19:36:16Z 2011-09-27T19:36:16Z 2009 Імуноферментне визначення змісту індолілоцтової кислоти в культуральній рідині мікроорганізмів / С.Б. Дімова, О.О. Дмитрук, О.Є. Мамчур, Л.П. Коломієць, В.В. Волкогон // Сільськогосподарська мікробіологія: Міжвід. темат. наук. зб. — Чернігів, 2009. — Вип. 9. — С. 179-187. — Бібліогр.: 12 назв. — укр. 1997-3004 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/27136 579.22:57.083.3 Отримано специфічну антисироватку до кон’югату β-індо-ліл-3-оцтової кислоти (ІОК) з бичачим сироватковим альбуміном, яку використано для визначення вмісту ІОК у культуральній рідині мікроорганізмів конкурентним методом ІФА із застосуванням антикролячих імуноглобулінів, мічених пероксидазою. Розроблена імуноферментна тест-система для кількісного визначення ІОК у культуральній рідині мікроорганізмів є зручною і надійною для проведення досліджень. Получена специфическая антисыворотка к конъюгату β-индолил-3-уксусной кислоты (ИУК) с бычьим сывороточным альбумином, которая использована для определения содержания ИУК в культуральной жидкости микроорганизмов конкурентным методом ИФА с использованием антикроличьих иммуноглобулинов, меченных пероксидазой. Разработанная иммуноферментная тест-система для количественного определения ИУК в культуральной жидкости микроорганизмов является удобной и надёжной для проведения исследований. The antiserum specific to the conjugate of β-indolil-3-acetic acid (IUK) with bovine serum albumin, was received and used for determination of IAA contents in cultural liquids of microorganisms by competitive method of the ELISE with the use of antirabbit immunoglobulins, marked by peroxidase. The elaborated immune-enzyme test-system for quantitative determination of IAA in cultural liquids of microorganisms is proved to be convenient and reliable for IAA analysis. uk Інститут мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України Сільськогосподарська мікробіологія Методи Імуноферментне визначення змісту індолілоцтової кислоти в культуральній рідині мікроорганізмів Иммуноферментное определение содержания индолилуксусной кислоті в культуральной жидкости микроорганизмов Immune-enzyme determination of indolilacetic acid in cultural liquids of microorganisms Article published earlier |
| spellingShingle | Імуноферментне визначення змісту індолілоцтової кислоти в культуральній рідині мікроорганізмів Дімова, С.Б. Дмитрук, О.О. Мамчур, О.Є. Коломієць, Л.П. Волкогон, В.В. Методи |
| title | Імуноферментне визначення змісту індолілоцтової кислоти в культуральній рідині мікроорганізмів |
| title_alt | Иммуноферментное определение содержания индолилуксусной кислоті в культуральной жидкости микроорганизмов Immune-enzyme determination of indolilacetic acid in cultural liquids of microorganisms |
| title_full | Імуноферментне визначення змісту індолілоцтової кислоти в культуральній рідині мікроорганізмів |
| title_fullStr | Імуноферментне визначення змісту індолілоцтової кислоти в культуральній рідині мікроорганізмів |
| title_full_unstemmed | Імуноферментне визначення змісту індолілоцтової кислоти в культуральній рідині мікроорганізмів |
| title_short | Імуноферментне визначення змісту індолілоцтової кислоти в культуральній рідині мікроорганізмів |
| title_sort | імуноферментне визначення змісту індолілоцтової кислоти в культуральній рідині мікроорганізмів |
| topic | Методи |
| topic_facet | Методи |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/27136 |
| work_keys_str_mv | AT dímovasb ímunofermentneviznačennâzmístuíndolíloctovoíkislotivkulʹturalʹníirídinímíkroorganízmív AT dmitrukoo ímunofermentneviznačennâzmístuíndolíloctovoíkislotivkulʹturalʹníirídinímíkroorganízmív AT mamčuroê ímunofermentneviznačennâzmístuíndolíloctovoíkislotivkulʹturalʹníirídinímíkroorganízmív AT kolomíêcʹlp ímunofermentneviznačennâzmístuíndolíloctovoíkislotivkulʹturalʹníirídinímíkroorganízmív AT volkogonvv ímunofermentneviznačennâzmístuíndolíloctovoíkislotivkulʹturalʹníirídinímíkroorganízmív AT dímovasb immunofermentnoeopredeleniesoderžaniâindoliluksusnoikislotívkulʹturalʹnoižidkostimikroorganizmov AT dmitrukoo immunofermentnoeopredeleniesoderžaniâindoliluksusnoikislotívkulʹturalʹnoižidkostimikroorganizmov AT mamčuroê immunofermentnoeopredeleniesoderžaniâindoliluksusnoikislotívkulʹturalʹnoižidkostimikroorganizmov AT kolomíêcʹlp immunofermentnoeopredeleniesoderžaniâindoliluksusnoikislotívkulʹturalʹnoižidkostimikroorganizmov AT volkogonvv immunofermentnoeopredeleniesoderžaniâindoliluksusnoikislotívkulʹturalʹnoižidkostimikroorganizmov AT dímovasb immuneenzymedeterminationofindolilaceticacidinculturalliquidsofmicroorganisms AT dmitrukoo immuneenzymedeterminationofindolilaceticacidinculturalliquidsofmicroorganisms AT mamčuroê immuneenzymedeterminationofindolilaceticacidinculturalliquidsofmicroorganisms AT kolomíêcʹlp immuneenzymedeterminationofindolilaceticacidinculturalliquidsofmicroorganisms AT volkogonvv immuneenzymedeterminationofindolilaceticacidinculturalliquidsofmicroorganisms |