Стволовые клетки из жировой ткани

Благодаря ряду уникальных свойств и, в частности, способности дифференцироваться в различные типы клеток соединительной ткани, мезенхимальные стволовые клетки (МСК) привлекают пристальное внимание исследователей. Эти свойства определяют перспективность применения МСК в биотехнологии и регенеративной...

Full description

Saved in:

Bibliographic Details
Published in:	Біотехнологія
Date:	2008
Main Authors:	Петренко, А.Ю., Иванов, Э.Н., Петренко, Ю.А.
Format:	Article
Language:	Russian
Published:	Інститут біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України 2008
Subjects:	Огляди
Online Access:	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/28151
Tags:	Add Tag No Tags, Be the first to tag this record!
Journal Title:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Cite this:	Стволовые клетки из жировой ткани / А.Ю. Петренко, Э.Н. Иванов, Ю.А. Петренко // Біотехнологія. — 2008. — Т. 1, № 4. — С. 39-48. — Бібліогр.: 30 назв. — рос.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

_version_	1860219878403735552
author	Петренко, А.Ю. Иванов, Э.Н. Петренко, Ю.А.
author_facet	Петренко, А.Ю. Иванов, Э.Н. Петренко, Ю.А.
citation_txt	Стволовые клетки из жировой ткани / А.Ю. Петренко, Э.Н. Иванов, Ю.А. Петренко // Біотехнологія. — 2008. — Т. 1, № 4. — С. 39-48. — Бібліогр.: 30 назв. — рос.
collection	DSpace DC
container_title	Біотехнологія
description	Благодаря ряду уникальных свойств и, в частности, способности дифференцироваться в различные типы клеток соединительной ткани, мезенхимальные стволовые клетки (МСК) привлекают пристальное внимание исследователей. Эти свойства определяют перспективность применения МСК в биотехнологии и регенеративной медицине. В настоящее время большинство работ посвящено изучению свойств МСК, выделенных из костного мозга взрослого человека. В строме жировой ткани также обнаружены популяции стромальных стволовых/прогениторных клеток с мультилинейным потенциалом дифференцировки. В обзоре обобщен опыт экспериментальных работ, посвященных выделению стромальных клеток из жировой ткани и выяснению их биологических свойств. Стромальные клетки жировой ткани обладают схожим с МСК костного мозга иммунофенотипом и способностью к мультилинейной дифференцировке. Вместе с тем описаны некоторые отличия МСК, изолированных из этих источников. Завдяки низці унікальних властивостей і, зокрема, здатності диференціюватися у різні типи клітин сполучної тканини мезенхімальні стовбурові клітини (МСК) привертають пильну увагу дослідників. Ці властивості визначають перспективність застосування МСК у біотехнології і регенеративній медицині. На цей час більшість робіт присвячено вивченню властивостей МСК, виділених із кісткового мозку дорослої людини. У стромі жирової тканини також виявлено популяцію стромальних стовбурових/прогеніторних клітин з мультилінійним потенціалом диференціювання. В огляді узагальнено досвід експериментальних робіт, присвячених виділенню стромальних клітин із жирової тканини і з’ясуванню їхніх біологічних властивостей. Стромальні клітини жирової тканини мають подібні до МСК кісткового мозку імунофенотип і здатність до мультилінійного диференціювання. Разом з тим описано деякі відмінності МСК, ізольованих із цих джерел. Due to ability to differentiation into different cells of connective tissue mesenchymal stem cells (MSC) are promising object for biotechnology and regenerative medicine. The most studies on human MSC have been carried out on cells isolated from adult bone marrow. In stromal fraction of adipose tissue the cell population with multilineage differentiation potential has been revealed. The aim of the review is to describe the current state of isolation method and properties of MSC from adipose tissue. Stromal cells from adipose tissue possess of similar to bone marrow derived MSC immunophenotype and capacity to multilineage differentiation. At once some peculiar properties of MSC isolated from these sources are discussed.
first_indexed	2025-12-07T18:18:05Z
format	Article
fulltext	Огляди 39 (СК), причем источником достаточно бога� тым — из 300 мл жира авторы получали от 10 до 20·106 клеток, названных ими «СК об� работанного липоаспирата» (processed lipo� aspirate, PLA). Метод этих авторов, схема� тически приведенный на рис. 1, заключался в обработке липоаспирата коллагеназой (фрагменты жировой ткани инкубировали при 37 °С в 0,075%�м растворе коллагеназы типа I в течение 30 мин). Центрифугирова� ние первичной суспензии приводило к ее раз� делению на две фракции. В верхнем светлом слое располагались адипоциты, а в осадке — клетки СВФ с примесью гемопоэтических клеток. Эритроциты удаляли с помощью ин� кубации в лизирующем растворе хлорида аммония, а другие гемопоэтические клетки, обладающие слабой адгезивной способно� стью, элиминировались при пассировании. Жировая ткань происходит из эмбрио� нальной мезенхимы. У взрослого человека в состав жировой ткани входят жировые клетки — адипоциты, а также клетки, со� ставляющие стромально�васкулярную фракцию (СВФ) жировой ткани: преадипо� циты, эндотелиальные и гладкомышечные клетки кровеносных сосудов, периваску� лярные фибробласты и поддерживающая волокнистая коллагеновая строма (рис. 1). В строме была обнаружена популяция ство� ловых/прогениторных клеток с мультили� нейным потенциалом дифференцировки, во многом сходных с мезенхимальными стволо� выми клетками (МСК), происходящими из костного мозга (КМ). Учитывая, что жировая ткань в значительных количествах (до 300 мл и более) может быть получена под мест� ной анестезией при сравнительно малобо� лезненной косметической липосакции, ли� поаспирации подкожного жира или путем эксцизии жировых отложений, эта ткань может явиться альтернативным костному мозгу источником МСК для трансплантации и тканевой инженерии. Выделение стромальных клеток из жировой ткани Zuk et al. [1, 2] впервые установили, что жировая ткань человека является источни� ком мультипотентных стволовых клеток УДК 611.018.26.013 СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ ИЗ ЖИРОВОЙ ТКАНИСТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ ИЗ ЖИРОВОЙ ТКАНИ Ключевые слова: стволовые клетки, жировая ткань, иммунофенотип, дифференцировоч� ный потенциал, костный мозг. А. Ю. ПЕТРЕНКО, Э. Н. ИВАНОВ, Ю. А. ПЕТРЕНКО Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, Харьков E7mail: alexander_petrenko@cryo.org.ua Благодаря ряду уникальных свойств и, в частности, способности дифференцироваться в различные типы клеток соединительной ткани, мезенхимальные стволовые клетки (МСК) привлекают пристальное внимание исследователей. Эти свойства определяют перспективность применения МСК в биотехнологии и реге� неративной медицине. В настоящее время большинство работ посвящено изучению свойств МСК, выделенных из костного мозга взрослого человека. В строме жировой ткани также обнаружены популяции стромальных стволо� вых/прогениторных клеток с мультилинейным потенциалом дифференцировки. В обзоре обобщен опыт экспери� ментальных работ, посвященных выделению стромальных клеток из жировой ткани и выяснению их биологи� ческих свойств. Стромальные клетки жировой ткани обладают схожим с МСК костного мозга иммунофенотипом и способностью к мультилинейной дифференцировке. Вместе с тем описаны некоторые отличия МСК, изо� лированных из этих источников. Рис. 1. Схема выделения стромальных клеток из жировой ткани БІОТЕХНОЛОГІЯ, Т. 1, №4, 2008 40 CD34 и CD45. Однако при сравнении с МСК КМ, проведенном в работе [1], были выявле� ны отличия в двух маркерах: СКЖТ экспрессировали CD49d и не содержали CD106, в то время как МСК КМ, наоборот, экспрессировали CD106, но не CD49d. Пос� кольку CD106 являются лигандами рецеп� торов, участвующих в хоминге ГСК и их мо� билизации из костного мозга [9], отсутствие их опровергает принадлежность СКЖТ к клеткам гемопоэтической линии. У СКЖТ, полученных от 7 различных доноров, наиболее постоянными поверхно� стными белками, выявляемыми у 97% кле� ток, были HLA�ABC, CD29 (интегрин β1), CD49e (интегрин а5/VLA5), CD51 (интегрин aV) и CD90 (Thy�1). Более вариабильными были белки CD49b (интегрин а2/VLA�2), CD49d (интегрин а4/VLA�4), CD61 (интегрин β3), CD138 и CD140a. Остальные из 24 изу� ченных маркеров отсутствовали или выявля� лись только у небольшого числа клеток [4]. Относительно экспрессии на СКЖТ об� щепризнанного маркера ГСК и их ранних потомков CD34 существуют некоторые про� тиворечия. Авторы работ [10, 11] выявили популяцию CD34 в суспензии жировых кле� ток. Эти данные позволили предположить наличие общего предшественника у клеток с эндотелиальным и адипоцитарным фено� типом [11]. Гистологический анализ жиро� вой ткани, проведенный Трактуевым и др. [8], показал, что CD34�позитивные клетки равномерно распределены в ткани и распо� лагаются между адипоцитами. Однако в ис� следованиях других лабораторий [12, 13] его экспрессия проявлялась очень слабо или вообще не обнаруживалась. Это может быть обусловлено несколькими причинами: мо� дификациями метода выделения, видом ис� пользованных антител, условиями и време� нем культивирования. Исследования Cao et al. [12], в которых изучали эндотелиальную дифференцировку СКЖТ in vitro и in vivo, подтвердили нали� чие в этих клетках CD29, CD44, CD105, CD166 и Flk1 (один из рецепторов VEGF, яв� ляющийся самым ранним дифференцировоч� ным маркером эндотелия и клеток крови), но не кроветворных или эндотелиальных мар� керов (CD31, CD34, CD45, CD106 и CD184). При культивировании в среде, содержащей VEGF и bFGF, СКЖТ приобретали морфоло� гию эндотелиальных клеток, экспрессиро� вали CD34, PECAM, VE�кадгерин, eNOS и способствовали неоваскуляризации имму� нодефицитных мышей при транспланта� ции, сохраняя при этом экспрессию CD34 Результаты наших исследований [3] по� казали, что первичная культура адгезивных клеток жировой ткани состоит из морфоло� гически различающихся клеток, что связа� но с разнообразием исходного спектра кле� ток в составе СВФ. В ходе монослойного культивирования происходит постепенная очистка культур от слабоадгезивных кле� ток, и на 5�е сутки культивирования наблю� дается равномерный рост клеток по всей пове� рхности культурального пластика. К 10–12�м суткам культивирования адгезивные клет� ки СВФ жировой ткани формируют 70–80% конфлюэнтного монослоя. В ходе субкуль� тивирования время достижения указанного состояния монослоя составляет в среднем 3 суток на протяжении 5 пассажей. В про� цессе субкультивирования гетерогенность исходной суспензии постепенно снижается, и уже после 3–4 пассажей культура СКЖТ представлена популяцией преимущественно фибробластоподобных клеток. В ходе каж� дого пассажа количество клеток увеличива� ется в среднем в 2 раза, что согласуется с данными работы [1]. Описанный метод выделения применял� ся в том же или несколько измененном виде во всех последующих исследованиях СК жи� ровой ткани, но при этом часто изолирован� ные клетки получали новое название: адге� зивные клетки стромы из жира человека (human adipose�derived adherent stromal, hADAS) [4]; стромальные клетки, происхо� дящие из жира (adipose�derived stromal cells, ASCs) [5]; происходящие из жировой ткани СК взрослых (adipose derived adult stem cells, ADAS); мезенхимальные стволо� вые клетки, происходящие из жира (adipose tissue�derived mesenchymal stem cells, ATD� MSC) [6, 7], и др. Нам представляется, что термин «стромальные клетки жировой тка� ни» (СКЖТ), широко используемый как в иностранной, так и русскоязычной лите� ратуре [5, 8], вполне точно обозначит объект нашего внимания. Иммунофенотип стромальных клеток жировой ткани Иммунофенотипическая характеристи� ка СКЖТ взрослого человека, полученная различными авторами, приведена в табл. В целом, при анализе экспрессии поверхно� стных белков было установлено, что СКЖТ, исследованные после субкультивирования клеток СВФ, подобно МСК костного мозга, экспрессируют CD29, CD44, CD71, CD90, CD105/SH2 и SH3 и не экспрессируют CD31, Огляди 41 Характеристика субкультивированных СКЖТ человека Автор Фенотип Дифференцировка Факторы, индуцирующие дифферен\ цировку Gronthos et al. [10] Позитивны по: HLA�ABC, CD9, CD10, CD13, CD29, CD34, CD44, CD59, CD105, CD49e, CD54, CD55, CD166 Негативны по: HLA�DR, CD11a, CD11b, CD11c, CD14, CD18, CD31, CD45, CD50, CD56 In vitro: остеогенная, адипогенная Остеогенные: витамин D3, дексаметазон Адипогенные: инсулин, дексаметазон, 1�метил�3�изобутилксантин, BRL49653 Zuk et al. [1, 2] Позитивны по: CD13, CD29, CD44, CD49d, CD71, CD90, CD105, SH3, STRO�1 Негативны по: CD31, CD34, CD45, CD14, CD16, CD56, CD61, CD62E, CD104, CD106 In vitro: остеогенная, адипогенная, хондро� генная, миогенная, нейрогенная Остеогенные: витамин D3, аскорбат, β�глицерофосфат Хондрогенные: инсулин, TGF�β1, аскорбат Миогенные: сыворотка КРС и человека, гидрокор� тизон Нейрогенные: β�меркаптоэтанол Planat�Benard et al. [11] Позитивны по: CD34, CD13 Негативны по: CD31, CD14, CD144, CD45 In vitro и in vivo: эндотелиальная Спонтанно в метилцеллюлозной среде (Methocult MG3534) Brzoska et al. [14] Позитивны по: CD10, CD13, CD44, CD90 виментин Негативны по: CD31, CD34, CD45, vWF In vitro: эпителиальная Ретиноевая кислота Петренко и др. [3] Позитивны по: CD29, CD44, CD73, CD105 Негативны по: CD34, CD38, CD45 In vitro: остеогенная, адипогенная Остеогенные: аскорбат, β�глицерофосфат, дексаметазон, сыворотка Адипогенные: гидрокортизол, 1�метил�3�изобутил� ксантин, индометацин Cao et al. [12] Позитивны по: CD29, CD44, CD105, CD166, Flk1, HLA�ABC Негативны по: CD31, CD34, CD45, CD106, CD184 In vitro: остеогенная, адипогенная, іn vitro и in vivo: эндотелиальная Остеогенные: аскорбат, β�глицерофосфат, дексаметазон, сыворотка Адипогенные: гидрокортизол, 1�метил�3�изобутил� ксантин, индометацин Эндотелиальные: VEGF, b�FGF, ЭСТ Astori et al. [7] Позитивны по: CD13, CD29, CD44, CD73, CD90, CD105, CD166 Негативны по: CD34, CD38, CD45, CD133, CD31, CD271 In vitro: остеогенная, адипогенная, хондро� генная Остеогенные: аскорбат, β�глицерофосфат, дексаметазон Адипогенные: инсулин, дексаметазон, 1�метил� 3�изобутилксантин, индометацин Хондрогенные: TGF�β3, аскорбат, дексаметазон, пи� руват БІОТЕХНОЛОГІЯ, Т. 1, №4, 2008 42 генов в СКЖТ, полученных от трех доноров, установили, что 66% этих генов были тран� скрибированы во всех клетках, а 83% — об� наруживались по крайней мере в двух из трех популяций. Наиболее часто транскри� бированные гены: эндоглин, FGF 2, 6 и 7, FGF R3, нейропилин�1, остеонектин, фибро� нектин, VEGF�D, TNF�а и MMP2 (желатина� за А) были связаны с адгезией клеток, бел� ками матрикса, ростовыми факторами и рецепторами протеаз. Эти данные указы� вают на сходство генного профиля СКЖТ и МСК из стромы КМ. В то же время СКЖТ не экспрессировали ряд белков, которые счита� ются молекулярными маркерами ранних СК, такие как CD133, мембранный транс� портер ABCG2 и теломераза [4]. Дифференцировочный потенциал стромальных клеток жировой ткани Дифференцировка СКЖТ в мезодермаль\ ные линии СКЖТ способны к индуцированной диф� ференцировке in vitro в адипогенном, остео� генном, хондрогенном, эндотелиальном, миогенном, гепатическом, эпителиальном и нейрогенном направлениях. Поскольку до настоящего времени не существует надеж� ных методов определения in vitro функцио� нальных свойств хондроцитов, остеоцитов и миоцитов, дифференцировка СКЖТ в ади� погенном направлении имеет явное преиму� щество для изучения биологии развития со� единительной ткани, так как адипоциты обладают двумя уникальными свойствами: 1) запасают энергию в форме триглице� ридов, которые освобождаются при липоли� зисе в виде глицерола и свободных жирных кислот; человека. Эти результаты позволили авто� рам прийти к заключению, что полученные in vitro эндотелиальные клетки с описанны� ми свойствами, которым присуща экспрес� сия CD34, происходят из СКЖТ, а не из эн� дотелиальных клеток, содержащихся в исходном клеточном препарате. Однако проведенный недавно анализ им� мунофенотипа клеток СВФ и его изменение в ходе субкультивирования [7,15] позволя� ют усомниться в правильности выводов Cao et al. [12]. Эти исследования показали, что в первичной суспензии присутствуют клет� ки, экспрессирующие, главным образом, маркеры эндотелиальных (CD31, CD144, VEGFFr�2, фактор Виллебранта), стромаль� ных (CD13, CD29, CD44, CD63, CD73, CD90, CD166) и кроветворных (CD34, CD45, CD11, CD13, CD14) клеток. При культивировании в «стромальной» среде в течение по крайней мере четырех пассажей экспрессия эндоте� лиальных маркеров сохраняется на уровне первичной суспензии. Следовательно, после� дующее культивирование в среде с VEGF [12] может способствовать селективному размножению клеток эндотелиального фе� нотипа. Определенные успехи были достигнуты и в выяснении природы клеток, экспресси� рующих CD34�антиген. В первичной суспен� зии клеток СВФ были выявлены две популя� ции CD34�позитивных клеток, причем претенденты на гемопоэтические стволовые клетки и клетки�предшественники (CD34+, CD45+) составляли лишь около 2% клеток [7]. Для более полного понимания источни� ка гемопоэтических клеток в жировой ткани авторы исследовали колониеобразующую активность CD34+�клеток, изолированных с помощью магнитной сепарации. Было ус� тановлено, что содержание кроветворных колониеобразующих единиц (КОЕ) в свеже� выделенных клетках СВФ сравнимо с пери� ферической кровью. Эти результаты позво� ляют предполагать, что гемопоэтические CD34+�клетки попадают в жировую ткань из циркулирующей крови. При субкультиви� ровании в «стромальной» среде количество клеток, экспрессирующих CD34�антиген, снижается до порога чувствительности ме� тода или вообще исчезает. Маркеры, ассоциированные со стромаль� ными клетками (CD13, CD29, CD44, CD63, CD73, CD90, CD105), были слабо экспресси� рованы на свежевыделенных клетках СВФ жира и увеличивались от пассажа к пассажу, превышая 90% на пассаже 4 (P4) (рис. 2). При изучении представленности свыше 170 Рис. 2. Изменение иммунофенотипа СКЖТ в ходе субкультивирования (по данным Mitchel et al. [15]) Огляди 43 ренцировке остеобластов; RXR�ретиноид� ных рецепторов; VDR — рецепторов витамина D; PTHR — рецепторов паратгормона; осте� опонтина; остеонектина; CBFA�1 — фактора транскрипции, связывающего с промоторами ряд остеогенных генов, и коллагена типа І [1]. Авторы наблюдали также раннюю экспрес� сию остеокальцина, подавляемую экспози� цией с дексаметазоном. При исследовании СКЖТ была подтверждена чрезвычайно важная роль костного морфогенетического белка 2 (КМБ�2) в качестве остеоиндуктив� ного фактора. Клетки СКЖТ, инфицирован� ные аденовирусом, несущим сДНК КМБ�2, были способны сами образовывать КМБ�2. Хондрогенная дифференцировка СКЖТ в средах, содержащих TGF�β1, инсулин и ас� корбат, характеризуется образованием плот� ных узелков, проявляющих типичные чер� ты клеток, развивающихся в направлении хондрогенеза, а именно: накопление суль� фатированных протеогликанов и появление изоформы коллагена типа II и богатых лей� цином небольших протеогликанов декорина и бигликана; поздняя экспрессия коллагена типа X — маркера гипертрофических хонд� роцитов; экспрессия ряда факторов тран� скрипции, таких как myf6, myf5, myod1, миогенин, и структурных белков десмина и миозина [1]. Erickson et al. [17] продемон� стрировали, что СКЖТ человека могут обра� зовывать у иммунодефицитных мышей ха� рактерные молекулы хрящевого матрикса. Lin et al. [5], пометив СКЖТ зеленым флуо� ресцирующим белком (GFP), доказали, что они могут быть индуцированы к хондрогене� зу in vitro. Методами иммуноцитохимии, PCR�RT и Western blot в меченых диффе� ренцированных клетках были выявлены та� кие важные компоненты хрящевой ткани, как SOX9, коллаген типа I, коллаген типа II, аггрекан и коллаген типа X. При дли� тельном культивировании в монослое хонд� рогенные линии СКЖТ подвергались, подобно нормальным хондроцитам, феноти� пической модуляции, определяемой как де� дифференцировка. Исследования хондрогенной дифферен� цировки СКЖТ in vitro и in vivo предполага� ют перспективность их использования для восстановления дефектов хряща. Вслед� ствие слабой регенеративной способности хондроцитов поражения хрящевой ткани не поддаются спонтанному восстановлению и заживлению. В этих случаях трансплан� тация аутологичных СК или созданной на их основе биоинженерной конструкции может компенсировать дефект хрящевой ткани. 2) секретируют в кровь специфические для жира белки, в частности лептин и ади� понектин. Адипогенная дифференцировка СКЖТ обычно индуцируется внесением в среду изобутилметилксантина, дексаметазона, инсулина или индометацина. Ее эффектив� ность оценивается в культуре на основании появления клеток округлой формы, содер� жащих внутриклеточные липидные капли, которые окрашиваются красителем масля� ным красным О (Oil Red O). Кроме того, адипогенная индукция СКЖТ приводит к значительному увеличению активности глицеролфосфатдегидрогеназы — фермен� та, участвующего в синтезе триглицеридов, а также в экспрессии ряда генов и/или бел� ков, вовлекаемых в биосинтез и хранение липидов, в частности, PPAR γ2 (жироспеци� фический фактор транскрипции, функцио� нирующий в преадипоцитах), липопротеи� новая липаза (фермент, высвобождающий жирные кислоты из липопротеидов крови, активизирующийся во время липогенеза), аР2�белок (связан с накоплением липидов внутри зрелых адипоцитов), мРНК лептина и GLUT4 [1]. Dicker et al. [16] изучали функциональ� ные свойства адипоцитов человека, полу� ченных путем дифференцировки СКЖТ и МСК, выделенных из КМ. Оба типа клеток проявляли сходную липолитическую спо� собность при стимуляции катехоламинами, включая выраженный антилиполитический эффект, опосредованный через α2�адреноре� цепторы. Оба типа клеток с одинаковой скоростью секретировали специфические факторы жировых клеток — лептин и ади� понектин и сохраняли способность к диффе� ренцировке в течение, по крайней мере, 15 пассажей. Остеогенную дифференцировку индуци� руют при помещении СКЖТ в среду, содер� жащую аскорбат, β�глицерофосфат, декса� метазон или витамин D3. Через 2–4 недели культивирования дифференцировку оцени� вают по появлению активности щелочной фосфатазы (ЩФ) и кальцификации матрик� са, которую визуализируют окрашиванием ализариновым красным и по Ван Коссу. Ин� дукция клеток СКЖТ в «остеогенной» среде, содержащей витамин D3, приводит к разви� тию процессов, свидетельствующих об остео� генезе: раннему повышению активности ЩФ и минерализации матрикса; экспрес� сии большинства генов, подтверждающих остеогенную дифференцировку, а именно c7fos и msx2 — генов, участвующих в диффе� БІОТЕХНОЛОГІЯ, Т. 1, №4, 2008 44 (PECAM), CD34, CD144 (VE�кадгерин) и NO� синтазы эндотелиальных клеток (eNOS). Авторы показали, что при культивировании в этих условиях СКЖТ экспрессировали эн� дотелиальные маркеры. При этом ингиби� тор киназы PI3 LY294002 блокировал дифференцировку в эндотелиальном направ� лении. In vivo СКЖТ дифференцировались в эндотелиальные клетки под влиянием местных сигналов и способствовали неоан� гиогенезу у мышей с ишемией задних ко� нечностей. Эти результаты свидетельствуют о том, что СКЖТ могут быть потенциаль� ным источником эндотелиальных клеток для проведения клеточной противостено� кардиальной терапии. Способность СКЖТ дифференцировать� ся в миогенном направлении была установ� лена в пионерских работах Zuk et al. [1, 2] по выделению этих клеток. В качестве ин� дукторов миогенной дифференцировки ав� торы использовали гидрокортизон в сочета� нии с сывороткой (табл. 1). В работах [20, 21] выявлена спонтанная диффренцировка пер� вичной суспензии клеток СВФ в миогенном направлении. Причем, миогенная диффе� ренцировка увеличивалась при культивиро� вании в присутствии миобластов как в усло� виях, исключающих контакт клеток, так и при их совместном культивировании [21]. После сокультивирования и транспланта� ции в ишемически поврежденные мышцы иммунодефицитных мышей клетки СВФ встраивались в мышечные волокна и экс� прессировали дистрофин. После культивирования в течение 6 не� дель (3 пассажа) в специфичной для гладких мышц среде в присутствии гепарина клетки СВФ экспрессировали миогенные маркеры – α�актин (ASMA), кальпонин, кальдесмон, SM22, тяжелую цепь миозина (myosin heavy chain, MHC) и смустелин [22]. Следует под� черкнуть, что наличие вышеперечисленных маркеров было подтверждено параллельно генетическими и иммунофенотипическими методами. Более того, авторам удалось по� казать функцию дифференцированных мышечных клеток: их последовательное сокращение под действием стимулятора холинэргических рецепторов карбохола и последующую релаксацию добавкой кон� курентного антагониста мускариновых холинэргических рецепторов атропина. Причем на фармацевтические препараты (карбохол и атропин) отвечали только окон� чательно дифференцированные в миогенном направлении клетки, но не их коммитиро� ванные предшественники. В настоящее время как исходный материал для биоинженерии хряща используются клеточные популяции надкостницы или КМ, содержащие СК, которые могут быть индуцированы к хондрогенезу. Однако по� лучение СК из этих источников не обеспечи� вает большого выхода клеток, а методы их выделения трудоемки и болезненны для па� циентов. Напротив, хондрогенная индукция СКЖТ в среде, содержащей трансформиру� ющий фактор роста (TGF�β1), обеспечивает высокий темп пролиферации хондроцитов и синтез внеклеточного матрикса. Короткое время жизни ростовых факторов может быть препятствием для пролиферации хонд� роцитов in vivo. К тому же прямое введение TGF�β1 в организм пациента небезопасно из� за возможности развития воспаления, обра� зования остеофитов, фиброза и эрозии хря� ща. Можно предположить, что сохранение необходимой концентрации TGF�β1 будет обеспечено применением СКЖТ, генетичес� ки модифицированных к образованию необ� ходимой концентрации TGF�β1. С другой стороны, более реальным для практической медицины подходом является направленная индукция хондрогенной дифференцировки СКЖТ в культуре с последующей транс� плантацией в зону повреждения. Однако прежде всего необходимо ответить на вопрос: могут ли клетки, полученные из жировой ткани, выполнять функцию хряща in vivo. Nathan et al. [6] на основании биомеха� нических и морфологических исследований показали, что в регенерации остеохондраль� ных дефектов мыщелка бедра кролика СКЖТ проявили себя лучше, чем МСК, вы� деленные из надкостницы. Сравнительное изучение способности СК, выделенных из КМ, надкостницы и жировой ткани, коррек� тировать частичную задержку роста кости у кроликов было проведено в работе James et al. [18]. Авторы отмечают, что все иссле� дованные клеточные препараты демонстри� ровали хондрогенный и остеогенный потен� циал дифференцировки in vitro. Вместе с тем, в системе in vivo лучшую коррекцию роста кости обеспечивали препараты из КМ и над� костницы. Исследователи из Кореи, срав� нившие потенциал остеогенеза и хондроге� неза у СКЖТ и МСК КМ, также отдали предпочтение последним [19]. Для эндотелиальной дифференцировки in vitro СКЖТ вносили в лунки планшета с матригелем в среду, содержащую VEGF, b� FGF и сыворотку [12]. Эндотелиальный фе� нотип устанавливали по экспрессии эндоте� лиальных маркеров, включающих CD31 Огляди 45 ные эндодермального зародышевого листка [24]. Авторы провели двухэтапную гепати� ческую дифференцировку СКЖТ после пред� варительного культивирования в безсыворо� точной среде. На первом этапе клетки 7 дней культивировали в присутствии HGF, bFGF и никотинамида, а на втором — в среду вно� сили онкостатин М, дексаметазон, инсулин, трансферин, селен и альбумин. В ходе куль� тивирования клетки изменяли фиброблас� топодобную морфологию на полигональную, что сопровождалось снижением экспрессии маркера стволовых клеток Thy�1. В течение 21 дня культивирования СКЖТ вырабаты� вали специфические для печени транскрип� ционные факторы (C/EBPβ и HNF4α) и экспрессировали маркеры гепатоцитов (аль� бумин и цитохром Р�450). Сравнение стромальных клеток жировой ткани и костного мозга Решающим подтверждением наличия в жировой ткани стволовых клеток явилось получение из единичных СКЖТ клонов, об� ладающих мультилинейным потенциалом дифференцировки [1]. Многие исследовате� ли отмечают большое сходство популяций СКЖТ и МСК КМ. В связи с этим был даже поставлен вопрос, не являются ли СКЖТ по� пуляцией МСК, которая попадает в жиро� вую ткань из периферической крови. Однако такое предположение кажется сомнитель� ным, поскольку число МСК в строме КМ незначительно (примерно 1 МСК на 105 кле� ток) [24, 25] и, очевидно, еще ниже в пери� ферической крови. Вряд ли такой низкий уровень может обеспечить относительно вы� сокие уровни дифференцировки, наблюдае� мые в работе со СКЖТ. В то же время иссле� дования [7, 26] показали, что содержание МСК во фракции адгезивных клеток, извле� ченных из жировой ткани, в 10–1000 раз выше, чем в соответствующей фракции КМ. Помимо этого существуют некоторые отли� чия популяций СКЖТ и МСК: во�первых, при культивировании МСК необходим скри� нинг сыворотки, тогда как для экспансии и дифференциации СКЖТ он не обязателен; во�вторых, МСК не подвергались хондроген� ной или липогенной дифференцировке в тех условиях, которые были выдержаны в рабо� те со СКЖТ [1]. В последнее время появились работы, в которых проведены прямые сравнитель� ные исследования свойств МСК, изолиро� ванных из жировой ткани и костного мозга. Noel et al. [27] в системах in vitro и in vivo Чрезвычайно важным на наш взгляд ре� зультатом этой работы явилась попытка авторов выяснить вопрос: является ли раз� витие мышечных клеток результатом селек� ции определенного типа клеток СВФ или дифференцировки СКЖТ? Для решения этого вопроса был проведен клональный анализ первичной суспензии СВФ. Конеч� ным итогом работы было выделение и тести� рование колоний, клетки которых были способны дифференцироваться как в адипо� генном и остеогенном, так и в миогенном направлениях. Дифференцировка СКЖТ в эктодер\ мальных направлениях В связи с тем, что жировая ткань, подобно строме КМ, является производным мезодер� мы, дифференцировка СКЖТ в мезодер� мальные линии вполне закономерна, однако выявлена также возможность дифференци� ровки этих клеток в эктодермальные линии, в частности в эпителиальные и нейрогенные клетки. Brzoska et al. [14] показали, что все трансретиноевые кислоты могут индуциро� вать СКЖТ к экспрессии цитокератина 18 — маркера эпителиальных клеток. Нейрогенную дифференцировку обычно устанавливают на основании появления клеток характерной морфологии, положи� тельно окрашивающихся на β�тубулин нейро� волокон. Zuk et al. [1] оценивали нейроген� ную дифференцировку СКЖТ по экспрессии нестина – белка промежуточных филамен� тов, представленного на высоком уровне в НСК. Учитывая, что позитивное мечение нестином проявляют также миогенные, эн� дотелиальные и печеночные клетки, авторы работы [1] подтверждали нейрональную дифференцировку СКЖТ экспрессией двух специфических для нейральных клеток бел� ков: NSE (нейронспецифическая энолаза) и NeuN (нейрональный белок ядер). Safford et al. [23] также сообщили, что СКЖТ мыши в определенных условиях способны диффе� ренцироваться по нейрогенному пути с обра� зованием типичных нейрональных и глиаль� ных клеток. Романов и др. [20], заменившие сыворотку телят в среде культивирования СКЖТ на сыворотку пуповинной крови че� ловека, наблюдали появление в клетках спонтанной (без предшествующей нейро� нальной индукции) экспрессии β�тубулина. Дифференцировка СКЖТ в гепатоциты Недавно появились результаты, свиде� тельствующие о возможности СКЖТ диффе� ренцироваться в гепатоциты — производ� БІОТЕХНОЛОГІЯ, Т. 1, №4, 2008 46 клиническими наблюдениями. В частности, СКЖТ были успешно применены для лече� ния ректовагинальной фистулы у пациент� ки с болезнью Крона [30]. Следует отметить, что роль СКЖТ в орга� низме не полностью ясна. Не известно, нахо� дятся ли они в дормантном состоянии с са� мых ранних стадий дифференцировки или пролиферируют в замедленном ритме, заме� щая дегенерирующие или с нарушенной функцией клетки. Таким образом, изначально гетероген� ная стромально�васкулярная фракция жи� ровой ткани содержит популяцию стромаль� ных клеток, характеризующихся высокими адгезивными свойствами, фенотипом, харак� терным для МСК, и способностью к мульти� линейной дифференцировке. Относитель� ная простота и низкая травматичность процедуры получения жировой ткани, воз� можность выделения из нее значительного количества стволовых/прогениторных кле� ток, способных к селективному размноже� нию в недифференцированном состоянии с последующей дифференцировкой в клетки различных тканей, позволяют рассматри� вать СКЖТ в качестве перспективного объ� екта для аутологических трансплантаций. Работа выполнена в рамках програм\ мы «Новітні медико\біологічні проблеми та навколишнє середовище людини». показали, что СКЖТ и МСК КМ проявляют одинаковую способность к дифференциров� ке в остеогенном и хондрогенном направле� ниях. Эти результаты не полностью согласу� ются с работами [28,29]. Так, Bochev et al. [28], исследуя СКЖТ и МСК КМ в одинако� вых условиях in vitro, установили, что они демонстрируют практически идентичные морфологические, иммунофенотипические, колониеобразующие свойства и способность к дифференцировке в адипогенном направ� лении. Однако СКЖТ проявляли меньший потенциал к дифференцировке в остеогенном направлении, чем МСК КМ [28]. Сходные данные о меньшем остеогенном потенциале СКЖТ были получены и в работе [29]. При этом остеогенный потенциал стромальных клеток костного мозга стимулировался ме� латонином, а жировой ткани — подавлялся. Обсуждая перспективу клинического применения СКЖТ, целесообразно привес� ти результаты исследования [28], в котором установлено, что СКЖТ в значительно боль� шей степени, чем МСК КМ, проявляют им� муномодулирующий эффект (ингибируют продукцию иммуноглобулинов и подавляют функцию В�лимфоцитов). Приведенные данные по сравнительному изучению стро� мальных клеток жировой ткани и костного мозга показывают, что СКЖТ можно рас� сматривать в качестве полноценной альтер� нативы МСК КМ для клинического приме� нения. Это заключение подтверждается 1. Zuk P. A., Zhu M., Ashjian P. et al. Human adi� pose tissue is a source of multipotent stem cells // Mol. Biol. Cell. — 2002. — V. 13. — P. 4279–4295. 2. Zuk P. A., Zhu M., Mizuno H. et al. Multili� neage cells from human adipose tissue: impli� cations for cell�based therapies // Tissue Eng. — 2001. — V. 7. — P. 211–218. 3. Петренко А. Ю., Петренко Ю. А., Скоробога7 това Н. Г. и др. Стромальные клетки�пред� шественники жировой ткани: выделение, фенотипические и дифференцировочные свойства при монослойном культивирова� нии // Журн. АМН України. — 2008. — Т. 14, №2. — С. 354–365. 4. Katz A. J., Tholpady A., Tholpady S. S. et al. Cell surface and transcriptional characteriza� tion of human adipose�derived adherent stro� mal cells // Stem cells. — 2005. — V. 23. — P. 412�423. 5. Lin Y., Tian W., Chen X. et al. Expression of exogenous or endogenous green fluorescent protein in adipose tissue�derived stromal cells during chondrogenic differentiation// Mol. Cell Biochem. — 2005. — V. 277. — P. 181–190. 6. Nathan S., Das De S., Thambyah A. et al. Cell� based therapy in the repair of osteochondral defects: a novel use for adipose tissue // Tissue Eng. — 2003. — V. 9 . — P. 733–744. 7. Astori G., Vignati F., Bardelli S. et al. «In vitro» and multicolor phenotypic characterization of cell subpopulations identified in fresh human adipose tissue stromal vascular fraction and in the derived mesenchymal stem cells // J. Transpl. Med. — 2007. — V. 5, N1. — P. 55. 8. Трактуев Д. О., Парфенова Е. В., Ткачук В. А., Марч К. Л. Стромальные клетки жировой ткани — пластический тип клеток, облада� ющих высоким терапевтическим потенциа� лом // Цитология. — 2006. —Т. 48, № 2. — С. 83–93. 9. Kronenwentt R., Martin S., Haas R. The role of cytokines and adhesion molecules for mobilization of peripheral blood stem cells // Stem Cells. — 2000. — V. 18. — P. 320–330. ЛИТЕРАТУРА Огляди 47 и жировой ткани человека // Клеточные технологии в биологии и медицине. — 2006. — Т. 4. — С. 206–211. 21. Di Rocco G., Iachininoto M.G., Tritarelli A. et al. Myogenic potential of adipose�tissue� derived cells // J. Cell Sci. — 2006. — V. 119, N14. — P. 2945–2952. 22. Rodri’guez L.V., Alfonso Z., Zhang R. et al. Clonogenic multipotent stem cells in human adipose tissue differentiate into functional smooth muscle cells // PNAS. — 2006. — V. 103, N32. — P. 12167–12172. 23. Safford K. M., Safford S. D., Gimble J. M. et al. Characterization of neuronal/glial differentiation of murine adipose�derived adult stromal cells // Exp. Neurol. — 2004. — V. 187. — P. 319–328. 24. Talens7Visconti R., Bonora A., Jover R. et al. Hepatogenic differentiation of human mes� enchymal stem cells from adipose tissue in comparison with bone marrow mesenchymal stem cells // World J. Gastroenterol. — 2006. — V. 12, N36. — P. 5834–5845. 25. Bruder S. P., Jaiswal N., Ricalton N. S. et al. Mesenchymal stem cells in osteobiology and applied bone regeneration // Clin. Orthop. Rel. Res. — 1998. — V. 355. — P. 247–256. 26. Mosley T. A., Zhu M., Hedrick M. H. Adipose� Derived Stem and Progenitor Cells as Fillers in Plastic and Reconstructive Surgery // Plast. Reconstr. Surg. — 2006. — V. 118, N3. — P. 121–128. 27. Noel D., Caton D., Roche S. et al. Cell specific differences between human adipose�derived and mesenchymal�stromal cells despite simi� lar differentiation potentials // Exp. Cell Res. — 2008. — V. 314, N7. — P. 1575–1584. 28. Bochev I., Elmadjian G., Kyurkchiev D. et al. Mesenchymal stem cells from human bone marrow or adipose tissue differently modu� late mitogen�stimulated B�cell immunoglob� ulin production in vitro // Cell Biol. Int. — 2008. — V. 32, N4. — P. 384–393. 29. Zaminy A., Ragerdi Kashani I., Barbarestani M. et al. Osteogenic differentiation of rat mes� enchymal stem cells from adipose tissue in comparison with bone marrow mesenchymal stem cells: melatonin as a differentiation factor // Iran Biomed. J. — 2008. — V. 12, N3. — P. 133–141. 30. Garcia7Olmo D., Garcia7Arranz M., Garcia L. G., et al. Autologous stem cell transplantation for treatment of rectovaginal fistula in peri� anal Crohn’s disease: a new cell�based therapy // Int. J. Colorectal Dis. — 2003. — V. 18. — P. 451–454. 10. Gronthos S., Franklin D. M., Leddy H. A. et al. Surface protein characterization of human adipose tissue�derived stromal cells// J. Cell. Physiol. — 2001. — V. 189. — P. 54–63. 11. Planat7Benard V., Silvestre J. S., Cousin B. et al. Plasticity of human adipose lineage cells toward endothelial cells: physiological and therapeutic perspectives// Circulation. — 2004. — V. 109. — P. 656–663. 12. Cao Y., Sun Z, Liao L. et al. Human adipose tissue�derived stem cells differentiate into endothelial cells in vitro and improve postna� tal neovascularization in vivo // Biochem. Bio� phys. Res. Commun. — 2005. — V. 332. — P. 370–379. 13. Fraser J.K., Wulur I., Alfonso Z., Hed7 rick M. H. Fat tissue: an underappreciated source of stem cells for biotechnology // Trends in Biotechnology. — 2006. — V. 24, N4. — P. 150–154. 14. Brzoska M., Geiger H., Gauer S. et al. Epithe� lial differentiation of human adipose tissue� derived adult stem cells// Biochem. Bio� phys. Res. Commun. — 2005. — V. 330. — P. 142–150. 15. Mitchel J. B., McIntoch K., Zvonic S. et al. Immunophenotype of Human Adipose�Deri� ved Cells: Temporal Changes in Stromal�Asso� ciated and Stem Cell–Associated Markers// Stem Cells. — 2006. — V.24. — P. 376–385. 16. Dicker A., Le Blanc K., Gaby A. et al. Functio� nal studies of mesenchymal stem cells deri� ved from adult human adipose tissue // Exp. Cell Research. — 2005. — V. 308. — P. 283–290. 17. Erickson G. R., Gimble J. M., Franklin D. M. et al. Chondrogenic potential of adipose tis� sue�derived stromal cells in vitro and in vivo // Biochem. Biophys. Res. Commun. — 2002. — V. 290. — P. 763–769. 18. James H.P., Li Li, Yee7Hong T. et al. Comparative Study of the Ability of Mesen� chymal Stem Cells Derived from Bone Mar� row, Periosteum, and Adipose Tissue in Treatment of Partial Growth Arrest in Rabbit // Tissue Eng. — 2005. — V. 11, N5/6. — P. 904–912. 19. Gun I., Shin Y. W., Lee K. B. Do adipose tis� sue�derived mesenchymal stem cells have the same osteogenic and chondrogenic potential as bone marrow�derived cells // Osteoart� hritis and Cartilage. — 2005. — V.13. — P. 845–853. 20. Романов Ю. А., Даревская А. Н., Кабаева Н. В., Антонова О. А. Выбор оптимальных усло� вий культивирования мезенхимальных клеток�предшественников костного мозга БІОТЕХНОЛОГІЯ, Т. 1, №4, 2008 48 STEM CELLS OF ADIPOSE TISSUE О. Yu. Petrenko, E. М. Ivanov, Yu. О. Petrenko Institute for problems of cryobiology and cryomedicine of National Academy of Scienses of Ukraine, Kharkiv E7mail: payua@yahoo.com Due to ability to differentiation into differ� ent cells of connective tissue mesenchymal stem cells (MSC) are promising object for biotechnolo� gy and regenerative medicine. The most studies on human MSC have been carried out on cells iso� lated from adult bone marrow. In stromal frac� tion of adipose tissue the cell population with multilineage differentiation potential has been revealed. The aim of the review is to describe the current state of isolation method and properties of MSC from adipose tissue. Stromal cells from adipose tissue possess of similar to bone marrow derived MSC immunophenotype and capacity to multilineage differentiation. At once some pecu� liar properties of MSC isolated from these sources are discussed. Key words: stem cells, adipose tissue, immunopheno� type, differentiation potential, bone marrow. СТОВБУРОВІ КЛІТИНИ ІЗ ЖИРОВОЇ ТКАНИНИ О. Ю. Петренко, Е. М. Іванов, Ю. О. Петренко Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України, Харків E7mail: payua@yahoo.com Завдяки низці унікальних властивостей і, зокрема, здатності диференціюватися у різні типи клітин сполучної тканини мезенхімальні стовбурові клітини (МСК) привертають пильну увагу дослідників. Ці властивості визначають перспективність застосування МСК у біотех� нології і регенеративній медицині. На цей час більшість робіт присвячено вивченню власти� востей МСК, виділених із кісткового мозку до� рослої людини. У стромі жирової тканини та� кож виявлено популяцію стромальних стовбурових/прогеніторних клітин з мульти� лінійним потенціалом диференціювання. В огляді узагальнено досвід експерименталь� них робіт, присвячених виділенню стромаль� них клітин із жирової тканини і з’ясуванню їхніх біологічних властивостей. Стромальні клітини жирової тканини мають подібні до МСК кісткового мозку імунофенотип і здат� ність до мультилінійного диференціювання. Разом з тим описано деякі відмінності МСК, ізольованих із цих джерел. Ключові слова: стовбурові клітини, жирова ткани� на, імунофенотип, диференціювальний потенціал, кістковий мозок.
id	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-28151
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
issn	1995-5537
language	Russian
last_indexed	2025-12-07T18:18:05Z
publishDate	2008
publisher	Інститут біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України
record_format	dspace
spelling	Петренко, А.Ю. Иванов, Э.Н. Петренко, Ю.А. 2011-10-29T22:02:17Z 2011-10-29T22:02:17Z 2008 Стволовые клетки из жировой ткани / А.Ю. Петренко, Э.Н. Иванов, Ю.А. Петренко // Біотехнологія. — 2008. — Т. 1, № 4. — С. 39-48. — Бібліогр.: 30 назв. — рос. 1995-5537 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/28151 611.018.26.013 Благодаря ряду уникальных свойств и, в частности, способности дифференцироваться в различные типы клеток соединительной ткани, мезенхимальные стволовые клетки (МСК) привлекают пристальное внимание исследователей. Эти свойства определяют перспективность применения МСК в биотехнологии и регенеративной медицине. В настоящее время большинство работ посвящено изучению свойств МСК, выделенных из костного мозга взрослого человека. В строме жировой ткани также обнаружены популяции стромальных стволовых/прогениторных клеток с мультилинейным потенциалом дифференцировки. В обзоре обобщен опыт экспериментальных работ, посвященных выделению стромальных клеток из жировой ткани и выяснению их биологических свойств. Стромальные клетки жировой ткани обладают схожим с МСК костного мозга иммунофенотипом и способностью к мультилинейной дифференцировке. Вместе с тем описаны некоторые отличия МСК, изолированных из этих источников. Завдяки низці унікальних властивостей і, зокрема, здатності диференціюватися у різні типи клітин сполучної тканини мезенхімальні стовбурові клітини (МСК) привертають пильну увагу дослідників. Ці властивості визначають перспективність застосування МСК у біотехнології і регенеративній медицині. На цей час більшість робіт присвячено вивченню властивостей МСК, виділених із кісткового мозку дорослої людини. У стромі жирової тканини також виявлено популяцію стромальних стовбурових/прогеніторних клітин з мультилінійним потенціалом диференціювання. В огляді узагальнено досвід експериментальних робіт, присвячених виділенню стромальних клітин із жирової тканини і з’ясуванню їхніх біологічних властивостей. Стромальні клітини жирової тканини мають подібні до МСК кісткового мозку імунофенотип і здатність до мультилінійного диференціювання. Разом з тим описано деякі відмінності МСК, ізольованих із цих джерел. Due to ability to differentiation into different cells of connective tissue mesenchymal stem cells (MSC) are promising object for biotechnology and regenerative medicine. The most studies on human MSC have been carried out on cells isolated from adult bone marrow. In stromal fraction of adipose tissue the cell population with multilineage differentiation potential has been revealed. The aim of the review is to describe the current state of isolation method and properties of MSC from adipose tissue. Stromal cells from adipose tissue possess of similar to bone marrow derived MSC immunophenotype and capacity to multilineage differentiation. At once some peculiar properties of MSC isolated from these sources are discussed. ru Інститут біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України Біотехнологія Огляди Стволовые клетки из жировой ткани Стовбурові клітини із жирової тканини Stem cells of adipose tissue Article published earlier
spellingShingle	Стволовые клетки из жировой ткани Петренко, А.Ю. Иванов, Э.Н. Петренко, Ю.А. Огляди
title	Стволовые клетки из жировой ткани
title_alt	Стовбурові клітини із жирової тканини Stem cells of adipose tissue
title_full	Стволовые клетки из жировой ткани
title_fullStr	Стволовые клетки из жировой ткани
title_full_unstemmed	Стволовые клетки из жировой ткани
title_short	Стволовые клетки из жировой ткани
title_sort	стволовые клетки из жировой ткани
topic	Огляди
topic_facet	Огляди
url	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/28151
work_keys_str_mv	AT petrenkoaû stvolovyekletkiizžirovoitkani AT ivanovén stvolovyekletkiizžirovoitkani AT petrenkoûa stvolovyekletkiizžirovoitkani AT petrenkoaû stovburovíklítiniízžirovoítkanini AT ivanovén stovburovíklítiniízžirovoítkanini AT petrenkoûa stovburovíklítiniízžirovoítkanini AT petrenkoaû stemcellsofadiposetissue AT ivanovén stemcellsofadiposetissue AT petrenkoûa stemcellsofadiposetissue

Стволовые клетки из жировой ткани

Institution

Similar Items