Оптимизация метода индукции регенерации in vitro инбредных линий и гибридов подсолнечника

Оптимизация метода индукции регенерации in vitro инбредных линий и гибридов подсолнечника

Описан метод индукции регенерации из сегмента 3-4-суточных проростков подсолнечника, включающего часть семядоли с гипокотилем. Реализация морфогенетического потенциала через прямой органогенез достигалась на модифицированной среде МС, содержащей БАП (1 мг/л), НУК (0.1 мг/л) и тиосульфат натрия (20 м...

Повний опис

Збережено в:
Бібліографічні деталі
Опубліковано в: :Физиология и биохимия культурных растений
Дата:2009
Автори: Михальская, С.И., Комисаренко, А.Г., Малина, А.Э., Сергеева, Л.Е., Тищенко, Е.Н.
Формат: Стаття
Мова:Russian
Опубліковано: Iнститут фізіології рослин і генетики НАН України 2009
Онлайн доступ:https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/30275
Теги: Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:Оптимизация метода индукции регенерации in vitro инбредных линий и гибридов подсолнечника / С.И. Михальская, А.Г. Комисаренко, А.Э. Малина, Л.Е. Сергеева, Е.Н. Тищенко // Физиология и биохимия культурных растений. — 2009. — Т. 41, № 3. — С. 255-262. — Бібліогр.: 26 назв. — рос.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-30275
record_format dspace
spelling Михальская, С.И.
Комисаренко, А.Г.
Малина, А.Э.
Сергеева, Л.Е.
Тищенко, Е.Н.
2012-01-27T20:09:41Z
2012-01-27T20:09:41Z
2009
Оптимизация метода индукции регенерации in vitro инбредных линий и гибридов подсолнечника / С.И. Михальская, А.Г. Комисаренко, А.Э. Малина, Л.Е. Сергеева, Е.Н. Тищенко // Физиология и биохимия культурных растений. — 2009. — Т. 41, № 3. — С. 255-262. — Бібліогр.: 26 назв. — рос.
0522-9310
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/30275
579.254.2
Описан метод индукции регенерации из сегмента 3-4-суточных проростков подсолнечника, включающего часть семядоли с гипокотилем. Реализация морфогенетического потенциала через прямой органогенез достигалась на модифицированной среде МС, содержащей БАП (1 мг/л), НУК (0.1 мг/л) и тиосульфат натрия (20 мг/л). Наличие последнего в зависимости от генотипа приводило к повышению частоты регенерации и множественному побегообразованию. Показана возможность дальнейшего увеличения индукции побегообразования варьированием углеводного состава, заменой сахарозы фруктозой. В результате частота регенерации 10 тестируемых инбредных линий и гибридов составила 30-98 %.
Описано метод індукції регенерації із сегмента 3-4-добових проростків соняшника, до якого входить частна сім'ядолі з гіпокотилем. Морфогенетичний потенціал прямим органогенезом реалізувався на модифікованому середовищі МС, що містило БАП (1 мг/л). НУК (0,1 мг/л) і тіосульфат натрію (20 мг/л). Наявність останнього залежно від генотипу зумовлювала підвищення частоти регенерації і численного пагоноутворення. Показано можливість подальшого збільшення індукції пагоноутворення варіюванням вуглеводного складу, заміною сахарози на фруктозу. В результаті частота регенерації 10 тестованих інбредних ліній і гібридів досягла 30-98 %.
The method of regeneration induction from segment of seedling 3—4-days after germination which consists of fragment of cotyledon with hypocotyl is described. Realization of morphogenetic potential by direct organogenesis was achieved on MS medium supplemented BAP (1 mg/l), NAA (0.1 mg/l), with thiosulfate Na (20 mg/l). Using thiosulfate Na, the genotype-dependent increase of number both shoots per explants plated and shoots per regenerating explants take place. Possibility of enhancement of regeneration induction by variation of carbohydrates, when sucrose replaced by fructose, was shown. As a result, the regeneration rate was varied 30—98 %.
ru
Iнститут фізіології рослин і генетики НАН України
Физиология и биохимия культурных растений
Оптимизация метода индукции регенерации in vitro инбредных линий и гибридов подсолнечника
Оптимізація методу індукції регенерації in vitro інбредних ліній та гібридів соняшника
Optimization of method for induction regeneration in vitro of inbred lines and hybrids of sunflower
Article
published earlier
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
title Оптимизация метода индукции регенерации in vitro инбредных линий и гибридов подсолнечника
spellingShingle Оптимизация метода индукции регенерации in vitro инбредных линий и гибридов подсолнечника
Михальская, С.И.
Комисаренко, А.Г.
Малина, А.Э.
Сергеева, Л.Е.
Тищенко, Е.Н.
title_short Оптимизация метода индукции регенерации in vitro инбредных линий и гибридов подсолнечника
title_full Оптимизация метода индукции регенерации in vitro инбредных линий и гибридов подсолнечника
title_fullStr Оптимизация метода индукции регенерации in vitro инбредных линий и гибридов подсолнечника
title_full_unstemmed Оптимизация метода индукции регенерации in vitro инбредных линий и гибридов подсолнечника
title_sort оптимизация метода индукции регенерации in vitro инбредных линий и гибридов подсолнечника
author Михальская, С.И.
Комисаренко, А.Г.
Малина, А.Э.
Сергеева, Л.Е.
Тищенко, Е.Н.
author_facet Михальская, С.И.
Комисаренко, А.Г.
Малина, А.Э.
Сергеева, Л.Е.
Тищенко, Е.Н.
publishDate 2009
language Russian
container_title Физиология и биохимия культурных растений
publisher Iнститут фізіології рослин і генетики НАН України
format Article
title_alt Оптимізація методу індукції регенерації in vitro інбредних ліній та гібридів соняшника
Optimization of method for induction regeneration in vitro of inbred lines and hybrids of sunflower
description Описан метод индукции регенерации из сегмента 3-4-суточных проростков подсолнечника, включающего часть семядоли с гипокотилем. Реализация морфогенетического потенциала через прямой органогенез достигалась на модифицированной среде МС, содержащей БАП (1 мг/л), НУК (0.1 мг/л) и тиосульфат натрия (20 мг/л). Наличие последнего в зависимости от генотипа приводило к повышению частоты регенерации и множественному побегообразованию. Показана возможность дальнейшего увеличения индукции побегообразования варьированием углеводного состава, заменой сахарозы фруктозой. В результате частота регенерации 10 тестируемых инбредных линий и гибридов составила 30-98 %. Описано метод індукції регенерації із сегмента 3-4-добових проростків соняшника, до якого входить частна сім'ядолі з гіпокотилем. Морфогенетичний потенціал прямим органогенезом реалізувався на модифікованому середовищі МС, що містило БАП (1 мг/л). НУК (0,1 мг/л) і тіосульфат натрію (20 мг/л). Наявність останнього залежно від генотипу зумовлювала підвищення частоти регенерації і численного пагоноутворення. Показано можливість подальшого збільшення індукції пагоноутворення варіюванням вуглеводного складу, заміною сахарози на фруктозу. В результаті частота регенерації 10 тестованих інбредних ліній і гібридів досягла 30-98 %. The method of regeneration induction from segment of seedling 3—4-days after germination which consists of fragment of cotyledon with hypocotyl is described. Realization of morphogenetic potential by direct organogenesis was achieved on MS medium supplemented BAP (1 mg/l), NAA (0.1 mg/l), with thiosulfate Na (20 mg/l). Using thiosulfate Na, the genotype-dependent increase of number both shoots per explants plated and shoots per regenerating explants take place. Possibility of enhancement of regeneration induction by variation of carbohydrates, when sucrose replaced by fructose, was shown. As a result, the regeneration rate was varied 30—98 %.
issn 0522-9310
url https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/30275
citation_txt Оптимизация метода индукции регенерации in vitro инбредных линий и гибридов подсолнечника / С.И. Михальская, А.Г. Комисаренко, А.Э. Малина, Л.Е. Сергеева, Е.Н. Тищенко // Физиология и биохимия культурных растений. — 2009. — Т. 41, № 3. — С. 255-262. — Бібліогр.: 26 назв. — рос.
work_keys_str_mv AT mihalʹskaâsi optimizaciâmetodaindukciiregeneraciiinvitroinbrednyhliniiigibridovpodsolnečnika
AT komisarenkoag optimizaciâmetodaindukciiregeneraciiinvitroinbrednyhliniiigibridovpodsolnečnika
AT malinaaé optimizaciâmetodaindukciiregeneraciiinvitroinbrednyhliniiigibridovpodsolnečnika
AT sergeevale optimizaciâmetodaindukciiregeneraciiinvitroinbrednyhliniiigibridovpodsolnečnika
AT tiŝenkoen optimizaciâmetodaindukciiregeneraciiinvitroinbrednyhliniiigibridovpodsolnečnika
AT mihalʹskaâsi optimízacíâmetoduíndukcííregeneracííinvitroínbrednihlíníitagíbridívsonâšnika
AT komisarenkoag optimízacíâmetoduíndukcííregeneracííinvitroínbrednihlíníitagíbridívsonâšnika
AT malinaaé optimízacíâmetoduíndukcííregeneracííinvitroínbrednihlíníitagíbridívsonâšnika
AT sergeevale optimízacíâmetoduíndukcííregeneracííinvitroínbrednihlíníitagíbridívsonâšnika
AT tiŝenkoen optimízacíâmetoduíndukcííregeneracííinvitroínbrednihlíníitagíbridívsonâšnika
AT mihalʹskaâsi optimizationofmethodforinductionregenerationinvitroofinbredlinesandhybridsofsunflower
AT komisarenkoag optimizationofmethodforinductionregenerationinvitroofinbredlinesandhybridsofsunflower
AT malinaaé optimizationofmethodforinductionregenerationinvitroofinbredlinesandhybridsofsunflower
AT sergeevale optimizationofmethodforinductionregenerationinvitroofinbredlinesandhybridsofsunflower
AT tiŝenkoen optimizationofmethodforinductionregenerationinvitroofinbredlinesandhybridsofsunflower
first_indexed 2025-11-25T13:39:39Z
last_indexed 2025-11-25T13:39:39Z
_version_ 1850515872699908096
fulltext ÓÄÊ 579.254.2 ÎÏÒÈÌÈÇÀÖÈß ÌÅÒÎÄÀ ÈÍÄÓÊÖÈÈ ÐÅÃÅÍÅÐÀÖÈÈ IN VITRO ÈÍÁÐÅÄÍÛÕ ËÈÍÈÉ È ÃÈÁÐÈÄΠÏÎÄÑÎËÍÅ×ÍÈÊÀ Ñ.È. ÌÈÕÀËÜÑÊÀß, À.Ã. ÊÎÌÈÑÀÐÅÍÊÎ, À.Ý. ÌÀËÈÍÀ, Ë.Å. ÑÅÐÃÅÅÂÀ, Å.Í. ÒÈÙÅÍÊÎ Èíñòèòóò ôèçèîëîãèè ðàñòåíèé è ãåíåòèêè Íàöèîíàëüíîé àêàäåìèè íàóê Óêðàèíû 03022 Êèåâ, óë. Âàñèëüêîâñêàÿ, 31/17 Îïèñàí ìåòîä èíäóêöèè ðåãåíåðàöèè èç ñåãìåíòà 3—4-ñóòî÷íûõ ïðîðîñòêîâ ïîäñîëíå÷íèêà, âêëþ÷àþùåãî ÷àñòü ñåìÿäîëè ñ ãèïîêîòèëåì. Ðåàëèçàöèÿ ìîð- ôîãåíåòè÷åñêîãî ïîòåíöèàëà ÷åðåç ïðÿìîé îðãàíîãåíåç äîñòèãàëàñü íà ìîäèôè- öèðîâàííîé ñðåäå ÌÑ, ñîäåðæàùåé ÁÀÏ (1 ìã/ë), ÍÓÊ (0,1 ìã/ë) è òèîñóëüôàò íàòðèÿ (20 ìã/ë). Íàëè÷èå ïîñëåäíåãî â çàâèñèìîñòè îò ãåíîòèïà ïðèâîäèëî ê ïîâûøåíèþ ÷àñòîòû ðåãåíåðàöèè è ìíîæåñòâåííîìó ïîáåãîîáðàçîâàíèþ. Ïî- êàçàíà âîçìîæíîñòü äàëüíåéøåãî óâåëè÷åíèÿ èíäóêöèè ïîáåãîîáðàçîâàíèÿ âàðüèðîâàíèåì óãëåâîäíîãî ñîñòàâà, çàìåíîé ñàõàðîçû ôðóêòîçîé.  ðåçóëüòàòå ÷àñòîòà ðåãåíåðàöèè 10 òåñòèðóåìûõ èíáðåäíûõ ëèíèé è ãèáðèäîâ ñîñòàâèëà 30—98 %. Êëþ÷åâûå ñëîâà: Helianthus annuus L., êóëüòóðà in vitro, ïðÿìîé îðãàíîãåíåç, òèî- ñóëüôàò íàòðèÿ. Ïîäñîëíå÷íèê îäíîëåòíèé (Helianthus annuus L.) — âòîðàÿ ïîñëå ñîè îñ- íîâíàÿ ìàñëè÷íàÿ êóëüòóðà â ìèðå, ãëàâíûìè ïðîèçâîäèòåëÿìè êîòîðîé ÿâëÿþòñÿ Ðîññèÿ, Óêðàèíà, Àðãåíòèíà, Êèòàé, Ðóìûíèÿ, Ôðàíöèÿ. Îí ïðèíàäëåæèò ê ñåìåéñòâó Asteraceae Dumort. Ýòî äèïëîèäíîå ðàñòåíèå (2 n = 34), âíóòðèâèäîâîå ñîäåðæàíèå ÄÍÊ â êëåòêàõ êîòîðîãî êîëåáëåò- ñÿ â ïðåäåëàõ 6—10 ïã [1, 21]. Äëÿ óëó÷øåíèÿ ýòîé êóëüòóðû ìåòîäàìè ãåíåòè÷åñêîé èíæåíåðèè çà ïîñëåäíèå äåñÿòèëåòèÿ äëÿ íåêîòîðûõ ãåíî- òèïîâ ïðåäëîæåíû óäà÷íûå ïðîòîêîëû èíäóêöèè ðåãåíåðàöèè in vitro [4, 6, 12, 15—18, 22]. Âìåñòå ñ òåì ðåàëèçàöèè ìîðôîãåíåòè÷åñêîãî ïîòåí- öèàëà ìíîãèõ ñåëüñêîõîçÿéñòâåííî-öåííûõ ëèíèé è ãèáðèäîâ H. annuus ñâîéñòâåííà íèçêàÿ ýôôåêòèâíîñòü è âàðèàáåëüíîñòü, à òàêæå çàòðóäíå- íà ãåíåòè÷åñêàÿ òðàíñôîðìàöèÿ. Ðåãåíåðàöèÿ in vitro H. annuus ìîæåò îñóùåñòâëÿòüñÿ ïðÿìûì èëè íåïðÿìûì îðãàíîãåíåçîì ëèáî ñîìàòè÷åñêèì ýìáðèîãåíåçîì [2—4, 7, 9—11, 13, 15, 21, 24, 25]. Ïðè ýòîì ðåàëèçàöèÿ ìîðôîãåíåòè÷åñêîãî ïî- òåíöèàëà çàâèñèò îò òèïà ýêñïëàíòàòà, à òàêæå ãåíîòèïà, óñëîâèé êóëü- òèâèðîâàíèÿ è èõ âçàèìîäåéñòâèÿ. Èìåþòñÿ ñâåäåíèÿ î ãåíîòèïè÷åñêîé çàâèñèìîñòè ïîêàçàòåëåé — êîëè÷åñòâî ïîáåãîâ íà îáùåå êîëè÷åñòâî ýêñïëàíòàòîâ (Ð/Ý) è íà ðåãåíåðèðóþùèé ýêñïëàíòàò (Ð/ÐÝ) [9]. Ïðè èäåíòèôèêàöèè ãåíåòè÷åñêèõ ôàêòîðîâ, êîíòðîëèðóþùèõ îðãàíîãåíåç ïîäñîëíå÷íèêà ïî Ð/Ý è Ð/ÐÝ, óñòàíîâëåíî 13 QTLs. Íàëè÷èåì êàê îá- ùèõ, òàê è ñïåöèôè÷íûõ ãåíîâ QTL ìîæíî îáúÿñíèòü ðàçëè÷èÿ ïî êàæ- äîìó èç àíàëèçèðóåìûõ ïîêàçàòåëåé îðãàíîãåíåçà (Ð/Ý è Ð/ÐÝ) ñðåäè ÔÈÇÈÎËÎÃÈß È ÁÈÎÕÈÌÈß ÊÓËÜÒ. ÐÀÑÒÅÍÈÉ. 2009. Ò. 41. ¹ 3 255 © Ñ.È. ÌÈÕÀËÜÑÊÀß, À.Ã. ÊÎÌÈÑÀÐÅÍÊÎ, À.Ý. ÌÀËÈÍÀ, Ë.Å. ÑÅÐÃÅÅÂÀ, Å.Í. ÒÈÙÅÍÊÎ, 2009 îòäåëüíûõ ãåíîòèïîâ [14]. Íà èíäóêöèþ ðåãåíåðàöèè âëèÿþò ðåãóëÿòî- ðû ðîñòà, îñîáåííî öèòîêèíèíû [11, 14].  ðÿäå ñëó÷àåâ èíòåíñèôèêà- öèè ïîáåãîîáðàçîâàíèÿ ñïîñîáñòâóþò îðãàíè÷åñêèå è íåîðãàíè÷åñêèå êîìïîíåíòû, â ÷àñòíîñòè àìèíîêèñëîòû [26], ãèäðîëèçàò êàçåèíà è KNO3 [21]. Äëÿ ïîâûøåíèÿ ìîðôîãåíåòè÷åñêîãî ïîòåíöèàëà êóëüòóðíî- ãî ïîäñîëíå÷íèêà ïîìèìî îïòèìèçàöèè ñîñòàâà ïèòàòåëüíûõ ñðåä ïðåä- ëàãàþòñÿ äîïîëíèòåëüíûå ìåòîäè÷åñêèå ïðèåìû.  ÷àñòíîñòè, äëÿ íåêî- òîðûõ ãåíîòèïîâ ïðèåìëåìî ïðåäêóëüòèâèðîâàíèå ýêñïëàíòàòîâ â æèäêîé êóëüòóðàëüíîé ñðåäå ñ ïîñëåäóþùèì ïåðåíîñîì íà òâåðäóþ àãà- ðèçîâàííóþ ñðåäó [15]. Öåëü äàííîãî èññëåäîâàíèÿ — îïòèìèçèðîâàòü ìåòîä ðåãåíåðàöèè in vitro èç ñåãìåíòîâ ïðîðîñòêîâ èíáðåäíûõ ëèíèé è ãèáðèäîâ êóëüòóð- íîãî ïîäñîëíå÷íèêà. Ìåòîäèêà Îáúåêòîì èññëåäîâàíèÿ ñëóæèëè èíáðåäíûå ëèíèè 96À/3, 16À/3, 70À/3 è ãèáðèäû Çëûâà, Çãîäà, Îäåññêèé 504, Îäåññêèé 123, Óðñóñ, Çàêëûê (ñåëåêöèè Îäåññêîãî ñåëåêöèîííî-ãåíåòè÷åñêîãî èíñòèòóòà ÓÀÀÍ), ãè- áðèä Õàðüêîâñêèé (ñåëåêöèè Èíñòèòóòà ðàñòåíèåâîäñòâà èì. Â.ß. Þðü- åâà ÓÀÀÍ, Õàðüêîâ), ñîðò Ëèäåð (ñåëåêöèè ÂÍÈÈ ìàñëè÷íûõ êóëüòóð, Êðàñíîäàð, Ðîññèÿ) ïîäñîëíå÷íèêà. Çðåëûå ÿäðà ñåìÿíîê ñòåðèëèçîâàëè ïîñëåäîâàòåëüíî 96 %-ì ýòàíî- ëîì (2 ìèí) è 15 %-ì ðàñòâîðîì õëîðàìèíà (30—40 ìèí), çàòåì òðåõ- êðàòíî ïðîìûâàëè àâòîêëàâèðîâàííîé äèñòèëëèðîâàííîé âîäîé è âûñà- æèâàëè íà àãàðèçîâàííóþ ïèòàòåëüíóþ ñðåäó ÌÑ [20]. Êóëüòèâèðîâàëè 3—4 ñóò ïðè òåìïåðàòóðå 25—26 °Ñ, 16-÷àñîâîì ôîòîïåðèîäå è îñâåùåí- íîñòè 3—4 êëê. 3—4-ñóòî÷íûå ïðîðîñòêè äåëèëè ïîïîëàì âäîëü çàðîäûøåâîé îñè, óäàëÿëè êîðåøîê è àïèêàëüíóþ ìåðèñòåìó ñ ïðèìîðäèÿìè ëèñòüåâ.  êà÷åñòâå ïåðâè÷íîãî ýêñïëàíòàòà èñïîëüçîâàëè ñåãìåíò ïðîðîñòêà, ñî- ñòîÿùèé èç ïîëîâèíû íèæíåé ÷àñòè ñåìÿäîëè ñ ðàñùåïëåííîé âåðõíåé ÷àñòüþ ãèïîêîòèëÿ ðàçìåðîì 1—2 ìì. Äëÿ èíäóêöèè ðåãåíåðàöèè in vitro ýêñïëàíòàòû (ïî 20 øòóê íà ÷àøêó Ïåòðè) âûñàæèâàëè íà ìîäèôèöèðî- âàííóþ íàìè ïèòàòåëüíóþ ñðåäó ÌÑ, ñîäåðæàùóþ ÍÓÊ è ÁÀÏ â ñîîòíîøåíèè 1:10, 8 ã/ë àãàðà (ÌÑÌ), è ñðåäó ÌÑÌ, äîïîëíåííóþ 20 ìã/ë òèîñóëüôàòà íàòðèÿ (ÌÑÌÒ).  êà÷åñòâå èñòî÷íèêà óãëåâîäà â ñðåäàõ ÌÑÌ è ÌÑÌÒ èñïîëüçîâàëè 30 ã/ë ñàõàðîçû. Äëÿ ãèáðèäîâ Îäåññêèé 504 è Õàðüêîâñêèé ñàõàðîçó çàìåíÿëè ôðóêòîçîé (30 ã/ë). Äî àâòîêëàâèðîâàíèÿ ðÍ ïèòàòåëüíîé ñðåäû ñîñòàâëÿë 5,7—5,8. Êóëüòèâè- ðîâàíèå ïðîâîäèëè ïðè óñëîâèÿõ, óêàçàííûõ âûøå. Óêîðåíåíèå îñóùå- ñòâëÿëè íà ÌÑÌ-ñðåäå áåç ôèòîãîðìîíîâ. Ïðåäêóëüòèâèðîâàíèå ýêñïëàíòàòîâ â æèäêîé ïèòàòåëüíîé ñðåäå îñóùåñòâëÿëè â ÌÑÌ-ñðåäå, âàðüèðóÿ êîíöåíòðàöèè ÍÓÊ, ÁÀÏ è KNO3, ïðè íåïðåðûâíîì âñòðÿõèâàíèè íà ðîòàöèîííîì øåéêåðå â òå÷å- íèå 2—10 ñóò. Ïîñëå ýòîãî ýêñïëàíòàòû ïåðåíîñèëè íà òâåðäóþ ïèòà- òåëüíóþ ñðåäó àíàëîãè÷íîãî ñîñòàâà è êóëüòèâèðîâàëè ïðè âûøåóêàçàí- íûõ óñëîâèÿõ. ×àñòîòó ïîáåãîîáðàçîâàíèÿ èññëåäóåìûõ ãåíîòèïîâ îöåíèâàëè êàê îòíîøåíèå ÷èñëà ðåãåíåðàíòîâ ê îáùåìó ÷èñëó ýêñïëàíòàòîâ. Äëÿ êàæ- äîãî ãåíîòèïà ó÷èòûâàëè ðåçóëüòàòû 6—10 ïîâòîðíîñòåé îïûòà. Ïðè ñòà- 256 Ñ.È. ÌÈÕÀËÜÑÊÀß, À.Ã. ÊÎÌÈÑÀÐÅÍÊÎ, À.Ý. ÌÀËÈÍÀ è äð. Ôèçèîëîãèÿ è áèîõèìèÿ êóëüò. ðàñòåíèé. 2009. Ò. 41. ¹ 3 òèñòè÷åñêîé îáðàáîòêå ðåçóëüòàòîâ ñðàâíèòåëüíîãî èññëåäîâàíèÿ ïðèìå- íÿëè êðèòåðèé Ñòüþäåíòà. Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèå Òèï ýêñïëàíòàòà. Îäíèìè èç âàæíûõ ôàêòîðîâ, îïðåäåëÿþùèõ ýôôåê- òèâíîñòü èíäóêöèè ðåãåíåðàöèè in vitro êóëüòóðíûõ ðàñòåíèé, â òîì ÷èñ- ëå è ïîäñîëíå÷íèêà, ÿâëÿþòñÿ ïðèðîäà ýêñïëàíòàòà, à òàêæå ñòàäèÿ ðàçâèòèÿ ðàñòåíèÿ, èç êîòîðîãî îí âû÷ëåíÿåòñÿ. Ñðåäè èçó÷åííûõ íàìè ýêñïëàíòàòîâ (ðàçëè÷íûå ñåãìåíòû ïðîðîñòêà, âêëþ÷àÿ ãèïîêîòèëü, ñå- ìÿäîëè, âåðõóøêè ïîáåãà, ÷àñòè ðàçâèâàþùèõñÿ ëèñòüåâ, ÷åðåøêîâ è ñå- ìÿäîëåé çðåëûõ ñåìÿíîê) îðãàíîãåíåç in vitro äëÿ âñåõ òåñòèðóåìûõ ãå- íîòèïîâ íàäåæíî è âîñïðîèçâîäèìî îñóùåñòâëÿëñÿ ïðè èñïîëüçîâàíèè ñåãìåíòà ïðîðîñòêà, ñîñòîÿùåãî èç íèæíåé ÷àñòè ñåìÿäîëè ñîâìåñòíî ñ âåðõíåé ÷àñòüþ ãèïîêîòèëÿ. Ïðè ýòîì ìàêñèìàëüíàÿ ÷àñòîòà ðåãåíåðà- öèè íàáëþäàëàñü ó ýêñïëàíòàòîâ, ïîëó÷åííûõ èç 3—4-ñóòî÷íûõ ïðîðî- ñòêîâ ïîäñîëíå÷íèêà. Ó ýêñïëàíòàòîâ 7—8-ñóòî÷íûõ ïðîðîñòêîâ ðåãåíå- ðàöèîííàÿ ñïîñîáíîñòü ñóùåñòâåííî óìåíüøàëàñü. Ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî ïðè èñïîëüçîâàíèè äðóãèõ ïåðå÷èñëåííûõ âûøå ýêñïëàíòàòîâ â çà- âèñèìîñòè îò ãåíîòèïà òàêæå îñóùåñòâëÿëñÿ îðãàíîãåíåç, îäíàêî â åäè- íè÷íûõ ñëó÷àÿõ. Ìîðôîãåíåòè÷åñêèé ïîòåíöèàë ðåàëèçîâûâàëñÿ ïðåèìóùåñòâåííî â îáëàñòè ñîåäèíåíèÿ ñåìÿäîëåé ñ ãèïîêîòèëåì ÷åðåç ïðÿìîé îðãàíîãåíåç (ðèñ. 1). Ïîÿâëåíèå ïåðâûõ ïîáåãîâ áûëî ÷åòêî ðàçëè÷èìî óæå íà 6—7-å ñóòêè êóëüòèâèðîâàíèÿ íà ñðåäàõ äëÿ èíäóêöèè ðåãåíåðàöèè ÌÑÌ è ÌÑÌÒ. Ðàííèé îðãàíîãåíåç è îòñóòñòâèå ïðîìåæóòî÷íîé ñòàäèè êàëëþ- 257 ÎÏÒÈÌÈÇÀÖÈß ÌÅÒÎÄÀ ÈÍÄÓÊÖÈÈ ÐÅÃÅÍÅÐÀÖÈÈ Ôèçèîëîãèÿ è áèîõèìèÿ êóëüò. ðàñòåíèé. 2009. Ò. 41. ¹ 3 Ðèñ. 1. Èíäóêöèÿ ðåãåíåðàöèè ïîäñîëíå÷íèêà ñîãåíåçà, êîòîðûé ïîâûøàåò âåðîÿòíîñòü ñîìàêëîíàëüíîé èçìåí÷èâîñ- òè, æåëàòåëüíû ïðè ðàçðàáîòêå ìåòîäîâ ãåíåòè÷åñêîé òðàíñôîðìàöèè. Îòìåòèì, ÷òî ðåãåíåðàöèÿ ÷åðåç ïðÿìîé îðãàíîãåíåç áûëà õàðàêòåð- íà äëÿ ðÿäà ãåíîòèïîâ ïîäñîëíå÷íèêà, ãäå â êà÷åñòâå ýêñïëàíòàòîâ èñ- ïîëüçîâàíû ñåãìåíòû ñåìÿäîëè [15], ïîëîâèíû ñåìÿäîëè 2-ñóòî÷íûõ ïðîðîñòêîâ [9], ãèïîêîòèëü ñ ïåðâè÷íûì êîðåøêîì íåçðåëûõ çàðîäûøåé [18], ìåðèñòåìà ïîáåãà è ïðèìîðäèè ëèñòüåâ 2-ñóòî÷íûõ ïðîðîñòêîâ [10], íåçðåëûå çàðîäûøè [24], ïîëîâèíû ñåìÿäîëè ñ ðàñùåïëåííîé çà- ðîäûøåâîé îñüþ èëè öåëàÿ ñåìÿäîëÿ ñ ïîëîâèíîé çàðîäûøåâîé îñè 6- ìèëëèìåòðîâûõ íåçðåëûõ çàðîäûøåé [5]. Èíòåðåñíî, ÷òî äëÿ ïîñëåäíèõ ýêñïëàíòàòîâ íàáëþäàëîñü óíèêàëüíîå ñîáûòèå: â çàâèñèìîñòè îò êîí- öåíòðàöèè ñàõàðîçû ðåãåíåðàöèÿ îñóùåñòâëÿëàñü èç îäíîé è òîé æå îã- ðàíè÷åííîé çîíû ãèïîêîòèëÿ ÷åðåç ïðÿìîé îðãàíîãåíåç èëè ñîìàòè÷åñ- êèì ýìáðèîãåíåçîì. Îá îðãàíîãåíåçå èç êàëëþñíûõ êóëüòóð ñîîáùàëîñü, â ÷àñòíîñòè, ïðè èñïîëüçîâàíèè â êà÷åñòâå ýêñïëàíòàòîâ ñåìÿäîëåé [8], ñåãìåíòîâ ãèïîêîòèëÿ [2, 12, 21], íåçðåëûõ çàðîäûøåé íà ñòàäèè ãëîáó- ëû è òîðïåäû [11]. Êðîìå òîãî, ïðÿìîé èëè íåïðÿìîé îðãàíîãåíåç èç îä- íîãî è òîãî æå ýêñïëàíòàòà ìîæåò äîñòèãàòüñÿ èçìåíåíèåì ñîñòàâà ôè- òîãîðìîíîâ [15]. ×òî êàñàåòñÿ âîçðàñòà ýêñïëàíòàòà, òî åãî îïòèìóì, ïî äàííûì ðàçíûõ àâòîðîâ, âàðüèðóåò îò 2-ñóòî÷íûõ [10] äî 11-ñóòî÷íûõ ïðîðîñòêîâ [21]. Ìàêñèìàëüíîå êîëè÷åñòâî ìîðôîãåíåòè÷åñêèõ ñîáûòèé äëÿ òåñòèðóåìûõ íàìè ëèíèé è ãèáðèäîâ ñâîéñòâåííî ýêñïëàíòàòàì, ïî- ëó÷åííûì îò 3—4-ñóòî÷íûõ ïðîðîñòêîâ, íà ÷òî óêàçûâàëè òàêæå Êíèò- òåð è ñîàâò. [16] äëÿ ïðîàíàëèçèðîâàííûõ èìè ãåíîòèïîâ. Ïèòàòåëüíûå ñðåäû. Äëÿ ðåàëèçàöèè ìîðôîãåíåòè÷åñêîãî ïîòåíöèà- ëà ýêñïëàíòàòîâ òåñòèðóåìûõ ãåíîòèïîâ ïîäñîëíå÷íèêà èñïîëüçîâàëè îðèãèíàëüíûå ñðåäû ÌÑ, Ãàìáîðãà, Íè÷à è èõ ìîäèôèêàöèè, â êîòîðûõ èçìåíÿëè êîëè÷åñòâåííûé è êà÷åñòâåííûé ñîñòàâû ðåãóëÿòîðîâ ðîñòà, îðãàíè÷åñêèõ è íåîðãàíè÷åñêèõ äîáàâîê. ×òî êàñàåòñÿ ïåðâîé, òî íàèáî- ëåå ýôôåêòèâíîé îêàçàëàñü êîìáèíàöèÿ ÍÓÊ è ÁÀÏ â ñîîòíîøåíèè 1:10. Äëÿ ðåãåíåðàöèè îïòèìàëüíîé îêàçàëàñü ìîäèôèöèðîâàííàÿ íàìè ïèòàòåëüíàÿ ñðåäà ÌÑ (ÌÑÌÒ), îäíèì èç âàæíûõ êîìïîíåíòîâ êîòî- ðîé áûë òèîñóëüôàò íàòðèÿ êîíöåíòðàöèåé 20 ìã/ë. Îí ïîâûøàë èí- äóêöèþ ïîáåãîîáðàçîâàíèÿ, îñîáåííî äëÿ ãåíîòèïîâ ñ íèçêèì ìîðôîãå- íåòè÷åñêèì ïîòåíöèàëîì.  ÷àñòíîñòè, äëÿ èíáðåäíûõ ëèíèé ïîäñîëíå÷íèêà 96À/3, 70À/3 è 16À/3 ÷àñòîòà ðåãåíåðàöèè íà ñðåäå ÌÑÌ áåç òèîñóëüôàòà íàòðèÿ ñî- ñòàâëÿëà ñîîòâåòñòâåííî 31,3 ± 2,0, 20,2 ± 4,6 è 13,9 ± 2,0 %, òîãäà êàê ââåäåíèå ýòîãî íåîðãàíè÷åñêîãî êîìïîíåíòà ïðèâîäèëî ê ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíîìó ïîâûøåíèþ ýôôåêòèâíîñòè ðåãåíåðàöèè ïðèáëèçèòåëüíî â 1,3; 1,6; 2,4 ðàçà è ÷àñòîòà ðåãåíåðàöèè ëèíèé 96À/3, 70À/3, 16À/3 äî- ñòèãàëà ñîîòâåòñòâåííî 41,5 ± 2,3, 31,7 ± 1,7, 32,9 ± 4,0 %. Ðàçëè÷íîå âëèÿíèå òèîñóëüôàòà íàòðèÿ íà ðåàëèçàöèþ ìîðôîãåíåòè÷åñêîãî ïîòåí- öèàëà ëèíèé 96À/3, 70À/3, 16À/3 è ãèáðèäîâ ïîäñîëíå÷íèêà ñâèäåòåëü- ñòâóåò î ãåíîòèïè÷åñêîé çàâèñèìîñòè èíäóêöèè ïîáåãîîáðàçîâàíèÿ ïîä- ñîëíå÷íèêà îò ýòîãî êîìïîíåíòà ïèòàòåëüíîé ñðåäû. Ïðè êóëüòèâèðîâàíèè íà ñðåäàõ ÌÑÌ è ÌÑÌÒ èíäóêöèÿ ðåãåíå- ðàöèè ìîãëà îñóùåñòâëÿòüñÿ è ïóòåì ìíîæåñòâåííîãî ïîáåãîîáðàçîâà- íèÿ. Îäíàêî, åñëè íà ïèòàòåëüíîé ñðåäå ñ òèîñóëüôàòîì íàòðèÿ äëÿ âñåõ ãåíîòèïîâ áûëî õàðàêòåðíî íàëè÷èå íå ìåíåå 2 ïîáåãîâ íà ðåãåíåðèðó- þùèé ýêñïëàíòàò, òî íà ÌÑÌ ýòîò ïîêàçàòåëü äëÿ íåêîòîðûõ ãåíîòèïîâ (èíáðåäíûå ëèíèè 96À/3, 16À/3, 70À/3) ñîñòàâëÿë ïðåèìóùåñòâåííî 1. 258 Ñ.È. ÌÈÕÀËÜÑÊÀß, À.Ã. ÊÎÌÈÑÀÐÅÍÊÎ, À.Ý. ÌÀËÈÍÀ è äð. Ôèçèîëîãèÿ è áèîõèìèÿ êóëüò. ðàñòåíèé. 2009. Ò. 41. ¹ 3 Ïîÿâëåíèå 4—5 ðåãåíåðàíòîâ áûëî ðåäêèì ñîáûòèåì. Òåì íå ìåíåå íà îòäåëüíûõ ýêñïëàíòàòàõ, â ÷àñòíîñòè ãèáðèäîâ Çëûâà è Õàðüêîâñêèé, ìîãëî îáðàçîâûâàòüñÿ áîëåå 5 ïîáåãîâ (ñì. ðèñ. 1). Ïîëó÷åííûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò î ãåíîòèïè÷åñêèõ ðàçëè÷èÿõ ìíîæåñòâåííîãî ïîáåãîîá- ðàçîâàíèÿ ïîäñîëíå÷íèêà â çàâèñèìîñòè îò ìîäèôèêàöèè ïèòàòåëüíîé ñðåäû. ×àñòîòó ïîáåãîîáðàçîâàíèÿ in vitro èíáðåäíûõ ëèíèé, ñîðòîâ è ãèá- ðèäîâ H. annuus íà ïèòàòåëüíîé ñðåäå ÌÑÌÒ èëëþñòðèðóþò òàêèå äàí- íûå: Ïîìèìî òèîñóëüôàòà íà- òðèÿ â îòäåëüíûõ ñëó÷àÿõ ýô- ôåêòèâíûì äëÿ ïîâûøåíèÿ ÷àñòîòû ðåãåíåðàöèè áûëî âà- ðüèðîâàíèå óãëåâîäíîãî ñîñòà- âà.  ÷àñòíîñòè, íà ÌÑÌÒ- ñðåäå, ñîäåðæàùåé âìåñòî ñàõàðîçû ôðóêòîçó, ýòîò ïîêà- çàòåëü äëÿ ãèáðèäîâ Îäåññêèé 504 è Õàðüêîâñêèé óâåëè÷è- âàëñÿ ïðèáëèçèòåëüíî â 5,1 è 1,9 ðàçà (ðèñ. 2, à), à äëÿ ãèá- ðèäà Çëûâà, íàîáîðîò, ïî÷òè â 2 ðàçà óìåíüøàëñÿ (ñì. ðèñ. 2, á). Âûñîêèé ìîðôîãåíåòè÷åñ- êèé ïîòåíöèàë äëÿ ãèáðèäîâ Îäåññêèé 504 è Õàðüêîâñêèé íàáëþäàëñÿ è ïðè èñïîëüçîâà- íèè ãëþêîçû (ñì. ðèñ. 2, à), îäíàêî íàëè÷èå ýòîãî óãëåâîäà ïðèâîäèëî ê ïîâûøåíèþ ÷àñ- òîòû ïðåæäåâðåìåííîãî öâå- òåíèÿ. Òåì íå ìåíåå ñðåäè èñïîëüçîâàííûõ óãëåâîäîâ (ñà- õàðîçà, ãëþêîçà, ôðóêòîçà, ìàëüòîçà) äëÿ áîëüøèíñòâà òå- 259 ÎÏÒÈÌÈÇÀÖÈß ÌÅÒÎÄÀ ÈÍÄÓÊÖÈÈ ÐÅÃÅÍÅÐÀÖÈÈ Ôèçèîëîãèÿ è áèîõèìèÿ êóëüò. ðàñòåíèé. 2009. Ò. 41. ¹ 3 Ãåíîòèï ×àñòîòà ïîáåãîîáðàçîâàíèÿ, % Îäåññêèé 504 (98,2 ± 3,5), 19,2 ± 2,3 Çëûâà 94,3 ± 2,3 Õàðüêîâñêèé (86,1 ± 4,2), 45,2 ± 2,3 Çóáð 72,5 ± 2,8 Óðñóñ 67,8 ± 2,8 Çàêëûê 48,0 ± 2,3 Çãîäà 47,3 ± 2,3 96À/3 41,5 ± 2,3 16À/3 32,9 ± 4,0 70À/3 31,7 ± 1,7 Ï ð è ì å ÷ à í è å .  ñêîáêàõ óêàçàíà ÷àñòîòà ðåãåíåðàöèè íà ÌÑÌÒ-ñðåäå, â êîòîðîé ñàõàðîçà çàìåíåíà ôðóêòîçîé. Ðèñ. 2. Âëèÿíèå ñîäåðæàíèÿ óãëåâîäîâ â ïèòà- òåëüíîé ñðåäå íà ðåàëèçàöèþ ìîðôîãåíåòè÷åñ- êîãî ïîòåíöèàëà ïîäñîëíå÷íèêà ñòèðóåìûõ íàìè ãåíîòèïîâ ïðîöåññ ðåãåíåðàöèè ìàêñèìàëüíî ðåàëèçî- âûâàëñÿ ïðè íàëè÷èè ñàõàðîçû, à ìàëüòîçà, íàîáîðîò, âî âñåõ ñëó÷àÿõ îêàçûâàëà èíãèáèðóþùåå äåéñòâèå. Ñêðèíèíã 10 ëèíèé è ãèáðèäîâ íà ðåãåíåðàöèþ in vitro H. annuus ïî ïðåäëîæåííîìó íàìè ïðîòîêîëó ïîêàçàë çíà÷èòåëüíîå âàðüèðîâàíèå ìîðôîãåíåòè÷åñêîãî ïîòåíöèàëà (îò ~ 30 äî 98 %). Íåñìîòðÿ íà ãåíîòè- ïè÷åñêóþ çàâèñèìîñòü, ïðåäëîæåííûé ïðîòîêîë ÿâëÿåòñÿ ïåðñïåêòèâ- íûì äëÿ ãåíåòè÷åñêîé òðàíñôîðìàöèè êóëüòèâèðóåìûõ ãåíîòèïîâ. Ïðåäêóëüòèâèðîâàíèå ýêñïëàíòàòîâ â æèäêîé ïèòàòåëüíîé ñðåäå. ×ðåéáè è ñîàâò. [8] ïðåäëîæèëè äâóõñòóïåí÷àòóþ ñèñòåìó ðåãåíåðàöèè ïîäñîëíå÷íèêà, íà ïåðâîì ýòàïå êîòîðîé ýêñïëàíòàòû (ñåìÿäîëè) ïðåä- âàðèòåëüíî èíêóáèðîâàëè â æèäêîé ïèòàòåëüíîé ñðåäå ñ ïîñëåäóþùèì ïåðåíîñîì èõ íà àãàðèçîâàííóþ ñðåäó, â ðåçóëüòàòå ÷åãî ïîâûøàëàñü ÷à- ñòîòà ïîáåãîîáðàçîâàíèÿ. Ìû ïðîàíàëèçèðîâàëè ýôôåêòèâíîñòü òàêîãî ïðèåìà äëÿ èñïîëüçóåìîãî íàìè ýêñïëàíòàòà íà ïèòàòåëüíîé ñðåäå ÌÑÌ, âàðüèðóÿ êîíöåíòðàöèè ÍÓÊ, ÁÀÏ, ÊNO3 è äëèòåëüíîñòü êóëü- òèâèðîâàíèÿ. Îòìå÷åíû ñóùåñòâåííûå èçìåíåíèÿ ýêñïëàíòàòîâ: îíè ïðèîáðåòàëè ÿðêî-çåëåíóþ îêðàñêó è ïî÷òè 3-êðàòíî óâåëè÷èâàëèñü â ðàçìåðå. ×àñòîòà ðåãåíåðàöèè çàâèñåëà îò ãåíîòèïà, êîìáèíàöèè ôèòî- ãîðìîíîâ è ÊNO3, à òàêæå äëèòåëüíîñòè êóëüòèâèðîâàíèÿ â æèäêîé ñðå- äå. Îïòèìàëüíîé äëÿ èññëåäóåìûõ ãåíîòèïîâ îêàçàëàñü ÌÑÌ-ñðåäà, â êîòîðîé ñîäåðæàíèå ÍÓÊ è ÊNO3 áûëî ïîâûøåíî ñîîòâåòñòâåííî äî 1 ìã/ë è 6,9 ã/ë, à äëèòåëüíîñòü ïðåäêóëüòèâèðîâàíèÿ ñîñòàâëÿëà 7— 10 ñóò. Òàê, äëÿ ñîðòà Ëèäåð, ãèáðèäà Îäåññêèé 123, ëèíèé 789 è 6913 ÷àñòîòà ïîáåãîîáðàçîâàíèÿ ïðèáëèçèòåëüíî ðàâíÿëàñü ñîîòâåòñòâåííî 30; 5; 78 è 46 %.  êîíòðîëüíûõ ýêñïåðèìåíòàõ, â êîòîðûõ òå æå ýêñ- ïëàíòàòû êóëüòèâèðîâàëè íà àãàðèçîâàííîé ñðåäå òàêîãî æå ñîñòàâà, ÷à- ñòîòà ðåãåíåðàöèè áûëà ïî÷òè â 3 ðàçà ìåíüøåé. Ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî ýòîò ïîäõîä íå âñåãäà äàåò ïîëîæèòåëüíûé ðåçóëüòàò [10]. Òàêèì îáðàçîì, äëÿ ïîâûøåíèÿ èíäóêöèè ïîáåãîîáðàçîâàíèÿ èç ýêñïëàíòàòà — ñåãìåíòà ñåìÿäîëè ñ ÷àñòüþ ãèïîêîòèëÿ ïðîðîñòêîâ ëè- íèé è ãèáðèäîâ ïîäñîëíå÷íèêà ïîêàçàíà ýôôåêòèâíîñòü ïðèìåíåíèÿ òèîñóëüôàòà íàòðèÿ â ìîäèôèöèðîâàííîé íàìè ïèòàòåëüíîé ñðåäå ÌÑ. Íàðÿäó ñ ýòèì äëÿ íåêîòîðûõ ãåíîòèïîâ öåëåñîîáðàçíî âàðüèðîâàíèå óã- ëåâîäíîãî ñîñòàâà ñ çàìåíîé ñàõàðîçû ôðóêòîçîé. Ïðåäëîæåííûé ñïîñîá ðåãåíåðàöèè ÷åðåç ïðÿìîé îðãàíîãåíåç ìîæåò áûòü èñïîëüçîâàí ïðè ðàç- ðàáîòêå ñèñòåìû ìåòîäîâ ãåíåòè÷åñêîé òðàíñôîðìàöèè. 1. Àíèñèìîâà È.Í. Ãåíîìíûé àíàëèç ðîäà Helianthus L. // Ãåíåòèêà. — 1984. — 20, ¹ 12. — Ñ. 1925—1933. 2. Çåçóëü Ò.Ã., Ãîðáàòåíêî Ý.Â., Ðàëäóãèíà Ã.Í. Ðåãåíåðàöèÿ in vitro ðàñòåíèé ïîäñîëíå÷- íèêà (Helianthus annuus L.) ÷åðåç ñîìàòè÷åñêèé ýìáðèîãåíåç // Òàì æå. — 1995. — 31, ¹ 2. — Ñ. 228—233. 3. Alibert G., Aslane-Chanabe C., Burrus M. Sunflower tissue and cell cultures and their use in biotechnology // Plant Physiol. Biochem. — 1994. — 32. — P. 31—44. 4. Albert B., Lucas O., Gall V.L., Albert G. Pectolytic enzyme treatment of sunflower explants prior to wounding and cocultivation with Agrobacterium tumefaciens enhances efficiency of transient -glucuronidase expression // Physiol. Plant. — 1999. — 106. — P. 232—237. 5. Bronner R., Jeannin G., Hahne G. Early cellular events during organogenesis and somatic embryogenesis induced on immature zygotic embryos of sunflower (Helianthus annuus) // Can. J. Bot. — 1994. — 72, N 2. — P. 239—248. 6. Burrus M., Molinier J., Himber C. et al. Agrobacterium-mediated transformation of sunflower (Helianthus annuus L.) shoot apices: Transformation patterns // Mol. Breed. — 1996. — 2, N 4. — P. 329—338. 260 Ñ.È. ÌÈÕÀËÜÑÊÀß, À.Ã. ÊÎÌÈÑÀÐÅÍÊÎ, À.Ý. ÌÀËÈÍÀ è äð. Ôèçèîëîãèÿ è áèîõèìèÿ êóëüò. ðàñòåíèé. 2009. Ò. 41. ¹ 3 7. Carola M., Trabase T., Sunseri F. High frequency of plant regeneration in sunflower from cotyledon via somatic embryogenesis // Plant Cell Rep. — 1997. — 16. — P. 295—298. 8. Chraibi B.M., Latche A., Roustan J.P., Fallot J. Enhancement of shoot regeneration potential by liquid medium culture from mature cotyledons in sunflower (Helianthus annuus L.) // Ibid. — 1992. — 10. — P. 613—620. 9. Deglene L., Lesignes P., Alibert G., Saffari A. Genetic control of organogenesis in cotyledons of sunflower (Helianthus annuus) // Plant Cell, Tissue, Organ Cult. — 1997. — 48. — P. 127— 130. 10. Dong-Ho Shin D.-H., Kim J.S., Yang J. et al. A shoot regeneration protocol effective on diverse genotypes of sunflower (Helianthus annuus L.) // In vitro Cell. Dev. Biol. Plant. — 2000. — 36. — P. 273—278. 11. Espinasse A., Lay C. Shoot regeneration of callus derived from globular to torpedo embryos from 59 sunflower genotypes // Crop. Sci. — 1989. — 29. — P. 201—205. 12. Everett N.P., Robenson K.E.P., Mascarenhas D. Genetic engineering of sunflower (Helianthus annuus L.) // Biotechnology. — 1987. — 5, N 11. — P. 1201—1204. 13. Finer D.B. Direct somatic embryogenesis and plant regeneration from immature embryos of hybrid sunflower (Helianthus annuus L.) on high sucrose-containing medium // Plant Cell Rep. — 1987. — 6. — P. 372—374. 14. Flores Berrious E., Gentzbittel L., Kayyal H. et al. AFLP mapping of QTLs for in vitro organo- genesis traits using recombinant inbred lines in sunflower (Helianthus annuus L.) // Theor. Appl. Genet. — 2000. — 101. — P. 1299—1306. 15. Greco B., Tanzarella O.A., Carrozzo G., Blanco A. Callus induction and shoot regeneration in sunflower (Helianthus annuus L.) // Plant Sci. Lett. — 1984. — 36. — P. 73—77. 16. Hewezi T., Perrault A., Alibert G., Kallerhoff J. Dehydrating immature embryo split apices and rehydrating with Agrobacterium tumerfaciens: A new methods for genetically transforming recal- citrant sunflower // Plant Mol. Biol. Rep. — 2002. — 20, N 4. — P. 335—345. 17. Knittel N., Hahne G., Lenee P. Transformation of sunflower (Helianthus annuus L.): A reliable protocol // Plant Cell Rep. — 1994. — 14. — P. 81—86. 18. Lucas O., Kallerhoff J., Alibert G. Production of stable transgenic sunflower (Helianthus annu- us L.) from wounded immature embryos by particle bombardment and co-cultivation with Agrobacterium tumefaciens // Mol. Breed. — 2000. — 6. — P. 479—487. 19. Muller A., Iser M., Hess D. Stable transformation of sunflower (Helianthus annuus L.), using a non-meristematic regeneration protocol and green fluorescent protein as a vital marker // Trang. Res. — 2001. — 10. — P. 435—444. 20. Murashighe T., Skoog F.A. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tis- sue cultures // Physiol. Plant. — 1962. — 15. — P. 473—497. 21. Paterson K.E., Everett N.P. Regeneration of Helianthus annuus inbred plants from callus // Plant Sci. — 1985. — 42. — P. 125—132. 22. Price H.J., Jonston J.S. Influence of light on content of Helianthus annuus Linnaeus // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. — 1996. — 93. — P. 11264—11267. 23. Rousselin P., Molinier J., Himber C. et al. Modification of sunflower oil quality by seed-spe- cific expression of heterogonous Delta 9-stearoyl-(acyl carrier protein) desaturase gene // Plant Breed. — 2002. — 121, N 2. — P. 108—116. 24. Sujatha M., Prabakaram A.J. High frequency of embryogenesis in immature zygotic embryos of sunflower // Plant Cell, Tissue, Organ Cult. — 2001. — 65. — P. 23—29. 25. Wilcox McCann A., Cooley G., Van Dreser J. A system for routine plantlet regeneration of sun- flower (Helianthus annuus L.) from immature embryos derived callus // Ibid. — 1988. — 14. — P. 103—110. 26. Witrzens B., Scofcroft W.R., Downes R.W., Larkin P.J. Tissue culture and plant regeneration from sunflower (Helianthus annuus) and interspecific hybrids (H. tuberosus × H. annuus) // Ibid. — 13. — P. 61—76. Ïîëó÷åíî 22.01.2009 ÎÏÒÈÌIÇÀÖIß ÌÅÒÎÄÓ IÍÄÓÊÖI¯ ÐÅÃÅÍÅÐÀÖI¯ IN VITRO IÍÁÐÅÄÍÈÕ ËIÍIÉ ÒÀ ÃIÁÐÈÄI ÑÎÍßØÍÈÊÀ Ñ.I. Ìèõàëüñüêà, À.Ã. Êîì³ñàðåíêî, À.Å. Ìàëèíà, Ë.ª. Ñåð㺺âà, Î.Ì. Òèùåíêî Iíñòèòóò ô³ç³îëî㳿 ðîñëèí ³ ãåíåòèêè Íàö³îíàëüíî¿ àêàäå쳿 íàóê Óêðà¿íè, Êè¿â Îïèñàíî ìåòîä ³íäóêö³¿ ðåãåíåðàö³¿ ³ç ñåãìåíòà 3—4-äîáîâèõ ïðîðîñòê³â ñîíÿøíèêà, äî ÿêîãî âõîäèòü ÷àñòèíà ñ³ì’ÿäîë³ ç ã³ïîêîòèëåì. Ìîðôîãåíåòè÷íèé ïîòåíö³àë ïðÿìèì îðãà- 261 ÎÏÒÈÌÈÇÀÖÈß ÌÅÒÎÄÀ ÈÍÄÓÊÖÈÈ ÐÅÃÅÍÅÐÀÖÈÈ Ôèçèîëîãèÿ è áèîõèìèÿ êóëüò. ðàñòåíèé. 2009. Ò. 41. ¹ 3 íîãåíåçîì ðåàë³çóâàâñÿ íà ìîäèô³êîâàíîìó ñåðåäîâèù³ ÌÑ, ùî ì³ñòèëî ÁÀÏ (1 ìã/ë), ÍÓÊ (0,1 ìã/ë) ³ ò³îñóëüôàò íàòð³þ (20 ìã/ë). Íàÿâí³ñòü îñòàííüîãî çàëåæíî â³ä ãåíîòèïó çóìîâëþâàëà ï³äâèùåííÿ ÷àñòîòè ðåãåíåðàö³¿ ³ ÷èñëåííîãî ïàãîíîóòâîðåííÿ. Ïîêàçàíî ìîæëèâ³ñòü ïîäàëüøîãî çá³ëüøåííÿ ³íäóêö³¿ ïàãîíîóòâîðåííÿ âàð³þâàííÿì âóãëåâîäíîãî ñêëàäó, çàì³íîþ ñàõàðîçè íà ôðóêòîçó.  ðåçóëüòàò³ ÷àñòîòà ðåãåíåðàö³¿ 10 òåñòîâàíèõ ³í- áðåäíèõ ë³í³é ³ ã³áðèä³â äîñÿãëà 30—98 %. OPTIMIZATION OF METHOD FOR INDUCTION REGENERATION IN VITRO OF INBRED LINES AND HYBRIDS OF SUNFLOWER S.I. Mykhalska, A.G. Komisarenko, A.E. Malina, L.E. Sergeeva, E.N. Tishchenko Institute of Plant Physiology and Genetics, National Academy of Sciences of Ukraine 31/17 Vasylkivska St., Kyiv, 03022, Ukraine The method of regeneration induction from segment of seedling 3—4-days after germination which consists of fragment of cotyledon with hypocotyl is described. Realization of morphogenetic poten- tial by direct organogenesis was achieved on MS medium supplemented BAP (1 mg/l), NAA (0.1 mg/l), with thiosulfate Na (20 mg/l). Using thiosulfate Na, the genotype-dependent increase of number both shoots per explants plated and shoots per regenerating explants take place. Possibility of enhancement of regeneration induction by variation of carbohydrates, when sucrose replaced by fructose, was shown. As a result, the regeneration rate was varied 30—98 %. Key words: Helianthus annuus L., culture in vitro, direct organogenesis, thiosulfate Na. 262 Ñ.È. ÌÈÕÀËÜÑÊÀß, À.Ã. ÊÎÌÈÑÀÐÅÍÊÎ, À.Ý. ÌÀËÈÍÀ è äð. Ôèçèîëîãèÿ è áèîõèìèÿ êóëüò. ðàñòåíèé. 2009. Ò. 41. ¹ 3

Схожі ресурси