Стерилізація експлантів ріпаку озимого для введення в культуру in vitro
Наведено результати досліджень з підбору речовини-стерилізатора для проведення ефективної стерилізації стеблових сегментів ріпаку озимого при введенні їх у культуру in vitro....
Gespeichert in:
| Datum: | 2010 |
|---|---|
| Hauptverfasser: | , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Ukrainian |
| Veröffentlicht: |
Національний дендрологічний парк "Софіївка" НАН України
2010
|
| Schriftenreihe: | Автохтонні та інтродуковані рослини |
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/30335 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Стерилізація експлантів ріпаку озимого для введення в культуру in vitro / А.Д. Черненко, М.В. Небиков // Автохтонні та інтродуковані рослини: Зб. наук. пр. — НДП “Софіївка” НАН України, 2010. — Вип 6. — С. 117-120. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-30335 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-303352025-02-09T20:37:32Z Стерилізація експлантів ріпаку озимого для введення в культуру in vitro Стерилизация эксплантов рапса озимого для введения в культуру in vitro Sterilisation of winter oilseed rape explants for initiation in vitro culture Черненко, А.Д. Небиков, М.В. Короткі повідомлення Наведено результати досліджень з підбору речовини-стерилізатора для проведення ефективної стерилізації стеблових сегментів ріпаку озимого при введенні їх у культуру in vitro. Установлено, что наиболее эффективным стерилизатором при введении озимого рапса сорта Чёрный вэлэтэнь в культуру in vitro является 0,1 % дихлорид ртути, который, при экспозиции 5 мин., дает возможность получить наивысший показатель жизнеспособности при наилучшей, для данной экспозиции, эффективности стерилизации. In the researches it is established that the most effective sterilizer for initiation in vitro culture of winter oilseed rape of variety Chornyj veleten is 0.1 % mercury dichloride with 5 min. exposition. This sterilizer makes it possible to get the highest viability index with the best sterilization efficiency for this exposition. 2010 Article Стерилізація експлантів ріпаку озимого для введення в культуру in vitro / А.Д. Черненко, М.В. Небиков // Автохтонні та інтродуковані рослини: Зб. наук. пр. — НДП “Софіївка” НАН України, 2010. — Вип 6. — С. 117-120. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. 2220-1114 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/30335 631.527 : 633.85 : 581.165 uk Автохтонні та інтродуковані рослини application/pdf Національний дендрологічний парк "Софіївка" НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Ukrainian |
| topic |
Короткі повідомлення Короткі повідомлення |
| spellingShingle |
Короткі повідомлення Короткі повідомлення Черненко, А.Д. Небиков, М.В. Стерилізація експлантів ріпаку озимого для введення в культуру in vitro Автохтонні та інтродуковані рослини |
| description |
Наведено результати досліджень з підбору речовини-стерилізатора для проведення ефективної стерилізації стеблових сегментів ріпаку озимого при введенні їх у культуру in vitro. |
| format |
Article |
| author |
Черненко, А.Д. Небиков, М.В. |
| author_facet |
Черненко, А.Д. Небиков, М.В. |
| author_sort |
Черненко, А.Д. |
| title |
Стерилізація експлантів ріпаку озимого для введення в культуру in vitro |
| title_short |
Стерилізація експлантів ріпаку озимого для введення в культуру in vitro |
| title_full |
Стерилізація експлантів ріпаку озимого для введення в культуру in vitro |
| title_fullStr |
Стерилізація експлантів ріпаку озимого для введення в культуру in vitro |
| title_full_unstemmed |
Стерилізація експлантів ріпаку озимого для введення в культуру in vitro |
| title_sort |
стерилізація експлантів ріпаку озимого для введення в культуру in vitro |
| publisher |
Національний дендрологічний парк "Софіївка" НАН України |
| publishDate |
2010 |
| topic_facet |
Короткі повідомлення |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/30335 |
| citation_txt |
Стерилізація експлантів ріпаку озимого для введення в культуру in vitro / А.Д. Черненко, М.В. Небиков // Автохтонні та інтродуковані рослини: Зб. наук. пр. — НДП “Софіївка” НАН України, 2010. — Вип 6. — С. 117-120. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. |
| series |
Автохтонні та інтродуковані рослини |
| work_keys_str_mv |
AT černenkoad sterilízacíâeksplantívrípakuozimogodlâvvedennâvkulʹturuinvitro AT nebikovmv sterilízacíâeksplantívrípakuozimogodlâvvedennâvkulʹturuinvitro AT černenkoad sterilizaciâéksplantovrapsaozimogodlâvvedeniâvkulʹturuinvitro AT nebikovmv sterilizaciâéksplantovrapsaozimogodlâvvedeniâvkulʹturuinvitro AT černenkoad sterilisationofwinteroilseedrapeexplantsforinitiationinvitroculture AT nebikovmv sterilisationofwinteroilseedrapeexplantsforinitiationinvitroculture |
| first_indexed |
2025-11-30T13:52:55Z |
| last_indexed |
2025-11-30T13:52:55Z |
| _version_ |
1850223653388550144 |
| fulltext |
ISSN 2220-1114. Автохтонні та інтродуковані рослини. Випуск 6. 2010 117
УДК 631.527 : 633.85 : 581.165
Черненко А. Д. 1, 2, Небиков М. В. 1
1 Національний дендропарк «Софіївка» НАНУ
2 Уманський національний університет садівництва
СТЕРИЛІЗАЦІЯ ЕКСПЛАНТІВ РІПАКУ ОЗИМОГО ДЛЯ ВВЕДЕННЯ В
КУЛЬТУРУ IN VITRO
Наведено результати досліджень з підбору речовини-стерилізатора для проведення ефективної стерилізації
стеблових сегментів ріпаку озимого при введенні їх у культуру in vitro.
Вступ
Ріпак як олійна культура набув значного поширен-
ня протягом останніх років. Зокрема у державах Єв-
росоюзу площі, на яких вирощується ріпак, зросли
з 461955 у 2000 році до 8533251 га у 2008 році. В
Україні ці показники відповідно становили 156700 та
1379600 га [12]. Проте врожайність ріпаку в нашій
державі все ще нижча, ніж у країнах ЄС.
Використання у сільськогосподарському вироб-
ництві гібридів F1 дає змогу значно підвищувати
врожайність ріпаку за рахунок явища гетерози-
су [10]. Однак селекція ріпаку озимого на гетерозис
в Україні лише починається [6].
Ріпак — факультативний самозапилювач, сту-
пінь перехресного запилення якого залежно від
умов навколишнього середовища становить від
15 до 45 % [14]. Тому для забезпечення 100 % гі-
бридності насіння важливо мати ефективний спосіб
запобігання самозапиленню. До відкриття явища
чоловічої стерильності цієї мети досягали ручною
кастрацією квіток рослин материнської форми
на придатних для цього культурах, зокрема куку-
рудзі. Однак це значно підвищувало собівартість
насіння, навіть кукурудзи. Щодо ріпаку, то через
особливості цвітіння і будови квіток ручна кастра-
ція може бути використана у цієї рослини тільки з
селекційною метою. Відкриття цитоплазматичної
чоловічої стерильності значно здешевило процес
виробництва насіння, оскільки у гібридизації брав
участь стерильний материнський компонент, що
виключало необхідність кастрації [8].
Гензалежна чоловіча стерильність ріпаку контр-
олюється взаємодією генів с, які локалізовані
у мітохондріях цитоплазми S та рецесивних ядерних
генів rf у гомозиготному стані [7, 11].
Гени, що контролюють прояв гензалежної чо-
ловічої стерильності ріпаку можна отримувати з
природних популяцій ріпаку та деяких родичів цієї
культури, а також індукувати цю ознаку за допо-
могою мутагенів [15].
Стерильні аналоги материнських ліній гетеро-
зисних гібридів створюють багаторазовим бекро-
суванням материнської лінії зі стерильною формою,
а батьківські форми (відновлювачі фертильності) —
багаторазовим бекросуванням форми-відновлювача
фертильності з батьківською формою [2].
Привабливість технології мікроклонального роз-
множення для гетерозисної селекції ріпаку полягає
у можливості вегетативного розмноження мате-
ринських чоловічо-стерильних ліній, і зокрема, що
особливо цінно, на етапі створювання закріплю-
вачів стерильності, коли іншими способами отри-
мати достатню кількість насіння стерильних форм
неможливо.
Стерилізація є ключовим етапом культури in vitro,
від якості якої залежить успіх подальшого куль-
тивування, що зумовлює актуальність виконаних
досліджень.
Матеріали та методи
Дослідження виконували у лабораторії мікрокло-
нального розмноження відділу фізіології, генетики,
селекції та біотехнології рослин Національного ден-
дропарку «Софіївка» НАН України.
За експланти для введення в культуру in vitro
використовували стеблові сегменти ріпаку озимого
118 ISSN 2220-1114. Автохтонні та інтродуковані рослини. Випуск 6. 2010
сорту Чорний велетень, завдовжки 1–1,5 см, з дво-
ма сім’ядольними листками, отримані з пророщено-
го насіння.
Вивчали ефективність стерилізації водни-
ми розчинами хімічних сполук: 1 % нітрат срібла
(AgNO3), 0,1 % дихлорид ртуті (HgCl2), 2,5 %
гіпохлорид натрію (NaClO) [5, 9]. З метою покра-
щення ефективності стерилізуючих реагентів до роз-
чину кожного з них додавали емульгатор «Твін 80».
Після обробки стерилізуючими реагентами експлан-
ти тричі промивали дистильованою водою протягом
10–15 хв. [9] та висаджували на безгормональне
живильне середовище Мурасіге і Скуга (МС) [13].
Ефективність стерилізації оцінювали на 8 добу
після введення у культуру in vitro визначаючи спів-
відношення стерильних експлантів до їх загальної
кількості.
Життєздатність експлантів визначали на 14 добу
після введення в культуру як співвідношення сте-
рильних-життєздатних експлантів до їх загальної
кількості.
Живильні середовища, матеріали, інструменти та
посуд готували згідно загальноприйнятих методик
[1, 3, 4].
Експланти ріпаку озимого in vitro культивували
за температури 25±1 °С, 16-годинному фотоперіоді,
освітленості від 3000 лк та відносній вологості по-
вітря 70 %.
Результати досліджень та їх обговорення
Результати випробування різних стерилізаторів
та експозицій стерилізації при введенні в культуру
in vitro експлантів ріпаку озимого показали, що най-
більш ефективним стерилізатором виявився дихло-
рид ртуті (табл. 1).
1. Ефективність стерилізації та життєздатність стеблових сегментів ріпаку озимого сорту Чорний велетень
залежно від речовини-стерилізатора та експозиції
Його застосування забезпечило вихід стерильних
експлантів від 71,43 % (за 5-хвилинної експозиції)
до 88,57 % (за 15-хвилинної експозиціїї). При цьо-
му кількість експлантів, що залишились життєздат-
ними і почали розвиватися, найбільшою була у ва-
ріанті з експозицією стерилізації 5 хв. — 68,57 %,
дещо меншою у варіанті з експозицією 10 хв. —
65,72 % і ще меншою (51,43 %) за 15-хвилинної
експозиції. Показники ефективності стерилізації
мікроживців ріпаку озимого із застосуванням ні-
трату срібла були досить високими, хоча і поступа-
лися варіантам із застосуванням сулеми на 14,29 %,
2,86 % та 5,71 % відповідно. Однак кількість жит-
тєздатних експлантів після стерилізації нітратом
срібла становила лише 25,71–37,14 %. Найменш
ефективним стерилізатором виявився гіпохлорид
натрію (NaOCl). Його застосування при експо-
зиції 10–15 хвилин забезпечило отримання лише
34,17–42,86 % стерильних експлантів, а при екс-
позиції 5 хвилин всі експланти виявились інфікова-
ними. У той же час у кращому варіанті стерилізації
гіпохлоридом натрію з 15-хвилинною експозицією
кількість стерильних-життєздатних експлантів була
найменшою у досліді — 17,14 %.
Висновок
Встановлено, що для стерилізації стеблових сег-
ментів ріпаку озимого сорту Чорний велетень при
Стерилізатор Експозиція, хв Ефективність стерилізації, % Життєздатність, %
Гіпохлорид натрію
(NaOCl)
5 0 0
10 34,17 34,29
15 42,86 17,14
Дихлорид ртуті
(HgCl2)
5 71,43 68,57
10 77,14 65,72
15 88,57 51,43
Нітрат срібла
(AgNO3)
5 57,14 37,14
10 74,28 34,29
15 82,86 25,71
ISSN 2220-1114. Автохтонні та інтродуковані рослини. Випуск 6. 2010 119
введенні в культуру in vitro найефективнішим сте-
рилізатором був водний розчин дихлориду ртуті
у концентрації 1,0 % за експозиції 5 хв. з додаван-
ням емульгатора «Твин-80».
Перелік посилань
1. Биотехнология растений: культура клеток / Пер. с
англ. В. И. Негрука; С предисл. Р. Р. Бутенко. —
М.: Агропромиздат, 1989. — 280 с.
2. Гуляєв Г. В., Гужов Ю. Л. Селекция и семеноводство
полевых культур / Г. В. Гуляєв, Ю.Л Гужов. — М.:
Агропромиздат, 1987. — 447 с.
3. Калинин Ф. Л. Методы культуры тканей в физио-
логии и биотехнологии растений. Калинин Ф. Л.,
Сарнацкая В. В., Полищук В. Е. — К.: Наук. думка,
1980. — 487 с.
4. Кунах Ф. А. Біотехнологія лікарських рослин. Гене-
тичні та фізіолого-біохімічні основи. — К.: Логос,
2005. — 730 с.
5. Опалко О. А., Небиков М. В., Колдар Л. А. Вдо-
сконалення методики стерилізації мікроживців
Malus niedzwetzkiana Dieck для культури in vi-
tro / О. А. Опалко, М. В. Небиков, Л. А. Кол-
дар // Старовинні парки і ботанічні сади — на-
укові центри збереження біорізноманіття та
охорони історико-культурної спадщини: Матер.
Міжнар. наук. конф., присвяченої 210-річчю
«Софіївки» (25–28 вересня 2006 р.). — Умань,
2006. — С. 419–422.
6. Парий Ф. Н. Гетерозисные гибриды озимого рапса
уманской селекции / Парий Ф. Н., Опалко А. И.,
Черненко А. Д. // Инновационные технологии — в
практику сельского хозяйства: материалы Всероссий-
ской научно-практической конференции, посвящён-
ной 65-летию агрономического факультета: Сборник
научных трудов. — Киров: Вятская ГСХА, 2009. —
С. 62–67.
7. Ріпак: Ботанічна характеристика. Біологічні особли-
вості. Селекція і насінництво. Технологія вирощуван-
ня. Використання / [В. Д. Гайдаш, М. М. Климчук,
М. М. Макар, та ін.]; упоряд. М. М. Макар. — Іва-
но-Франківськ: Сіверсія, 1998. — 223 с.
8. Селекція і насінництво сільськогосподарських рос-
лин / [М. Я. Молоцький, С. П. Васильківський,
В. І. Князюк, В. А. Власенко.] — К.: Вища освіта,
2006. –463 с.
9. Сержук О. П. Вдосконалення методики стерилізації
мікроживців представників роду Crataegus L. для
культури in vitro / О. П. Сержук // Зб. наук. праць
УДАУ. — 2008. — С. 148–152.
10. Черненко А. Д. Напрями та перспективи селекції
ріпаку / А. Д. Черненко. // Матеріали всеукраїн-
ської конференції молодих учених. — Умань, 2010. —
Ч. 1. — C. 28.
11. Черненко А. Д. Новий тип цитоплазматичної чоло-
вічої стерильності / Черненко А. Д. // Матеріали
всеукраїнської конференції молодих учених. Сіль-
ськогосподарські, біологічні та технічні науки. —
Умань, 2010. — Ч. 1. — C. 122.
12. FAOSTAT // Food and agriculture organiza-
tion of the united nations. — Режим доступу
http://faostat.fao.org/site/567/DesktopDefault.
aspx?PageID=567#ancor
13. Murashige T. A revised medium for rapid growth and
bioassay with tobacco tissue cultures / Murashige T.,
Skoog F // Physosol. Plant. — 1962. — Vol. 15. —
P. 473–497.
14. Rakousky S. Transgenic plant products and their intro-
duction into the environment and crop protection sys-
tems, a risk assessment // Genomics for biosafety in
plant biotechnology / edited by Jan-Peter Nap, Atanas
Atanassov, Willem J. Stiekema. — Amsterdam: IOS
Press, 2004. — Р. 173–184.
15. Snowdon R. Oilseed Rape / R. Snowdon, W. Luhs,
W. Fried // Genome mapping and molecular breed-
ing in plant. Oilseeds. — Berlin; Heidelberg: Springer,
2007. — P. 55–114.
120 ISSN 2220-1114. Автохтонні та інтродуковані рослини. Випуск 6. 2010
СТЕРИЛИЗАЦИЯ ЭКСПЛАНТОВ
РАПСА ОЗИМОГО ДЛЯ ВВЕДЕНИЯ В
КУЛЬТУРУ IN VITRO
Небиков М. В. 1, Черненко А. Д. 1, 2
1 Национальный дендрологический парк «Софиевка» НАН
Украины
2 Уманський национальный университет садоводства
Установлено, что наиболее эффективным стерилизатором
при введении озимого рапса сорта Чёрный вэлэтэнь в культуру
in vitro является 0,1 % дихлорид ртути, который, при экспози-
ции 5 мин., дает возможность получить наивысший показатель
жизнеспособности при наилучшей, для данной экспозиции,
эффективности стерилизации.
STERILISATION OF WINTER OIL-
SEED RAPE EXPLANTS FOR INITIA-
TION IN VITRO CULTURE
Nebikov M. V. 1, Chernenko A. D. 1, 2
1 National dendrological park “Sofiyivka” of NAS of Ukraine
2 Uman national university of horticulture
In the researches it is established that the most effective sterilizer
for initiation in vitro culture of winter oilseed rape of variety Chornyj
veleten is 0.1 % mercury dichloride with 5 min. exposition. This
sterilizer makes it possible to get the highest viability index with the
best sterilization efficiency for this exposition.
|