Конструювання видоспецифічних праймерів для молекулярно-генетичної ідентифікації тешовірусів та ентеровірусів свиней A і B

Конструювання видоспецифічних праймерів для молекулярно-генетичної ідентифікації тешовірусів та ентеровірусів свиней A і B

Розроблено видоспецифічні праймери для встановлення таксономічного положення штамів вірусів видів Porcine Teschovirus, Porcine Enterovirus А, Porcine Enterovirus В. Проведено рекласифікацію 10 штамів ентеровірусів свиней, виділених на те- риторії У країни. Згідно міжнародної класифікації їх віднесе...

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:
Bibliographische Detailangaben
Veröffentlicht in:Сільськогосподарська мікробіологія
Datum:2009
Hauptverfasser: Головко, А.М., Дерев’янко, С.В., Бова, Т.О., Сорока, В.І., Кацимон, В.В.
Format: Artikel
Sprache:Ukrainian
Veröffentlicht: Інститут мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України 2009
Schlagworte:
Вірусологія
Online Zugang:https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/30340
Tags: Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Назва журналу:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Zitieren:Конструювання видоспецифічних праймерів для молекулярно-генетичної ідентифікації тешовірусів та ентеровірусів свиней A і B / А.М. Головко, С.В. Дерев’янко, Т.О. Бова, В.І. Сорока, В.В. Кацимон // Сільськогосподарська мікробіологія:: Міжвід. темат. наук. зб. — Чернігів, 2009. — Вип. 10. — С. 156-165. — Бібліогр.: 15 назв. — укр.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-30340
record_format dspace
spelling Головко, А.М.
Дерев’янко, С.В.
Бова, Т.О.
Сорока, В.І.
Кацимон, В.В.
2012-01-29T21:58:07Z
2012-01-29T21:58:07Z
2009
Конструювання видоспецифічних праймерів для молекулярно-генетичної ідентифікації тешовірусів та ентеровірусів свиней A і B / А.М. Головко, С.В. Дерев’янко, Т.О. Бова, В.І. Сорока, В.В. Кацимон // Сільськогосподарська мікробіологія:: Міжвід. темат. наук. зб. — Чернігів, 2009. — Вип. 10. — С. 156-165. — Бібліогр.: 15 назв. — укр.
1997-3004
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/30340
578.8:578.835.11/636.4
Розроблено видоспецифічні праймери для встановлення таксономічного положення штамів вірусів видів Porcine Teschovirus, Porcine Enterovirus А, Porcine Enterovirus В. Проведено рекласифікацію 10 штамів ентеровірусів свиней, виділених на те- риторії У країни. Згідно міжнародної класифікації їх віднесено до роду Тeschovirus виду Porcine Teschovirus. Проведені дослідження є підґрунтям для розробки вітчизняних діагностичних тест-систем на основі молекулярно-генетичних методів.
Сконструированы видоспецифические праймеры для определения таксономического положения штаммов видов Porcine Teschovirus, Porcine Enterovirus А, Porcine Enterovirus В. Проведена реклассификация 10 штаммов энтеровирусов свиней, выделенных на территории У краины. В соответствии с международной классификацией они отнесены к роду Тeschovirus виду Porcine Teschovirus. Проведенные исследования создают основу для разработки отечественных диагностических тест-систем на основе молекулярно-генетических методов.
The species-specific primers for identification of taxonomic positions of strains of Porcine Teschovirus, Porcine Enterovirus A and Porcine Enterovirus B kinds were developed. The reclassification of 10 strains of Porcine Enterovirus isolated in Ukraine was performed. In conformity to the international classification they were referred to the Тeschovirus genus of Porcine Teschovirus specie. Performed investigations had created a basis for elaboration of domestic moleculargenetic diagnostic test systems.
uk
Інститут мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України
Сільськогосподарська мікробіологія
Вірусологія
Конструювання видоспецифічних праймерів для молекулярно-генетичної ідентифікації тешовірусів та ентеровірусів свиней A і B
Конструирование видоспецифических праймеров для молекулярно-генетической идентификации тешовирусов и энтеровирусов свиней А и В
Construction of species-specific primers for molecular-genetic identification of porcine teschoviruses and eteroviruses A and B
Article
published earlier
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
title Конструювання видоспецифічних праймерів для молекулярно-генетичної ідентифікації тешовірусів та ентеровірусів свиней A і B
spellingShingle Конструювання видоспецифічних праймерів для молекулярно-генетичної ідентифікації тешовірусів та ентеровірусів свиней A і B
Головко, А.М.
Дерев’янко, С.В.
Бова, Т.О.
Сорока, В.І.
Кацимон, В.В.
Вірусологія
title_short Конструювання видоспецифічних праймерів для молекулярно-генетичної ідентифікації тешовірусів та ентеровірусів свиней A і B
title_full Конструювання видоспецифічних праймерів для молекулярно-генетичної ідентифікації тешовірусів та ентеровірусів свиней A і B
title_fullStr Конструювання видоспецифічних праймерів для молекулярно-генетичної ідентифікації тешовірусів та ентеровірусів свиней A і B
title_full_unstemmed Конструювання видоспецифічних праймерів для молекулярно-генетичної ідентифікації тешовірусів та ентеровірусів свиней A і B
title_sort конструювання видоспецифічних праймерів для молекулярно-генетичної ідентифікації тешовірусів та ентеровірусів свиней a і b
author Головко, А.М.
Дерев’янко, С.В.
Бова, Т.О.
Сорока, В.І.
Кацимон, В.В.
author_facet Головко, А.М.
Дерев’янко, С.В.
Бова, Т.О.
Сорока, В.І.
Кацимон, В.В.
topic Вірусологія
topic_facet Вірусологія
publishDate 2009
language Ukrainian
container_title Сільськогосподарська мікробіологія
publisher Інститут мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України
format Article
title_alt Конструирование видоспецифических праймеров для молекулярно-генетической идентификации тешовирусов и энтеровирусов свиней А и В
Construction of species-specific primers for molecular-genetic identification of porcine teschoviruses and eteroviruses A and B
description Розроблено видоспецифічні праймери для встановлення таксономічного положення штамів вірусів видів Porcine Teschovirus, Porcine Enterovirus А, Porcine Enterovirus В. Проведено рекласифікацію 10 штамів ентеровірусів свиней, виділених на те- риторії У країни. Згідно міжнародної класифікації їх віднесено до роду Тeschovirus виду Porcine Teschovirus. Проведені дослідження є підґрунтям для розробки вітчизняних діагностичних тест-систем на основі молекулярно-генетичних методів. Сконструированы видоспецифические праймеры для определения таксономического положения штаммов видов Porcine Teschovirus, Porcine Enterovirus А, Porcine Enterovirus В. Проведена реклассификация 10 штаммов энтеровирусов свиней, выделенных на территории У краины. В соответствии с международной классификацией они отнесены к роду Тeschovirus виду Porcine Teschovirus. Проведенные исследования создают основу для разработки отечественных диагностических тест-систем на основе молекулярно-генетических методов. The species-specific primers for identification of taxonomic positions of strains of Porcine Teschovirus, Porcine Enterovirus A and Porcine Enterovirus B kinds were developed. The reclassification of 10 strains of Porcine Enterovirus isolated in Ukraine was performed. In conformity to the international classification they were referred to the Тeschovirus genus of Porcine Teschovirus specie. Performed investigations had created a basis for elaboration of domestic moleculargenetic diagnostic test systems.
issn 1997-3004
url https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/30340
citation_txt Конструювання видоспецифічних праймерів для молекулярно-генетичної ідентифікації тешовірусів та ентеровірусів свиней A і B / А.М. Головко, С.В. Дерев’янко, Т.О. Бова, В.І. Сорока, В.В. Кацимон // Сільськогосподарська мікробіологія:: Міжвід. темат. наук. зб. — Чернігів, 2009. — Вип. 10. — С. 156-165. — Бібліогр.: 15 назв. — укр.
work_keys_str_mv AT golovkoam konstruûvannâvidospecifíčnihpraimerívdlâmolekulârnogenetičnoíídentifíkacíítešovírusívtaenterovírusívsvineiaíb
AT derevânkosv konstruûvannâvidospecifíčnihpraimerívdlâmolekulârnogenetičnoíídentifíkacíítešovírusívtaenterovírusívsvineiaíb
AT bovato konstruûvannâvidospecifíčnihpraimerívdlâmolekulârnogenetičnoíídentifíkacíítešovírusívtaenterovírusívsvineiaíb
AT sorokaví konstruûvannâvidospecifíčnihpraimerívdlâmolekulârnogenetičnoíídentifíkacíítešovírusívtaenterovírusívsvineiaíb
AT kacimonvv konstruûvannâvidospecifíčnihpraimerívdlâmolekulârnogenetičnoíídentifíkacíítešovírusívtaenterovírusívsvineiaíb
AT golovkoam konstruirovanievidospecifičeskihpraimerovdlâmolekulârnogenetičeskoiidentifikaciitešovirusoviénterovirusovsvineiaiv
AT derevânkosv konstruirovanievidospecifičeskihpraimerovdlâmolekulârnogenetičeskoiidentifikaciitešovirusoviénterovirusovsvineiaiv
AT bovato konstruirovanievidospecifičeskihpraimerovdlâmolekulârnogenetičeskoiidentifikaciitešovirusoviénterovirusovsvineiaiv
AT sorokaví konstruirovanievidospecifičeskihpraimerovdlâmolekulârnogenetičeskoiidentifikaciitešovirusoviénterovirusovsvineiaiv
AT kacimonvv konstruirovanievidospecifičeskihpraimerovdlâmolekulârnogenetičeskoiidentifikaciitešovirusoviénterovirusovsvineiaiv
AT golovkoam constructionofspeciesspecificprimersformoleculargeneticidentificationofporcineteschovirusesandeterovirusesaandb
AT derevânkosv constructionofspeciesspecificprimersformoleculargeneticidentificationofporcineteschovirusesandeterovirusesaandb
AT bovato constructionofspeciesspecificprimersformoleculargeneticidentificationofporcineteschovirusesandeterovirusesaandb
AT sorokaví constructionofspeciesspecificprimersformoleculargeneticidentificationofporcineteschovirusesandeterovirusesaandb
AT kacimonvv constructionofspeciesspecificprimersformoleculargeneticidentificationofporcineteschovirusesandeterovirusesaandb
first_indexed 2025-11-26T04:09:58Z
last_indexed 2025-11-26T04:09:58Z
_version_ 1850611132368158720
fulltext 156 ВІРуСОЛОГІЯ УДК 578.8:578.835.11/636.4 КОНСТРУЮВАННЯ ВИДОСПЕЦИФІчНИХ ПРАЙМЕРІВ ДЛЯ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИчНОЇ ІДЕНТИФІКАЦІЇ ТЕШОВІРУСІВ ТА ЕНТЕРОВІРУСІВ СВИНЕЙ А І В 1Головко А.М., 2Дерев’янко С.В., 2Бова Т.О., 2Сорока В.І., 3Кацимон В.В. 1Українська академія аграрних наук, вул. Суворова, 9, м. Київ, 01010, Україна 2Інститут сільськогосподарської мікробіології УААН, вул. Шевченка, 97, м. Чернігів, 14027, Україна 3Державний науково-контрольний інститут біотехнології і штамів мікроорганізмів, вул. Донецька, 30, м. Київ, 03151, Україна E-mail: biopreparat@mail.ru Розроблено  видоспецифічні  праймери  для  встановлення  таксономічного  положення  штамів  вірусів  видів  Porcine  Teschovirus, Porcine Enterovirus А, Porcine Enterovirus В. Проведено  рекласифікацію 10 штамів ентеровірусів свиней, виділених на те- риторії україни. Згідно міжнародної класифікації їх віднесено до  роду Тeschovirus виду Porcine Teschovirus. Проведені дослідження є  підґрунтям для розробки вітчизняних діагностичних тест-систем  на основі молекулярно-генетичних методів. Ключові слова:  Porcine  Teschovirus,  Porcine  Enterovirus А,  Porcine  Enterovirus В,  штам,  праймери,  полімеразна  ланцюгова  реакція, рекласифікація. У 60-х роках ХХ століття встановлено основні морфологічні, бiологiчнi, фiзико-хiмiчнi та антигенні властивості ентеровiрусiв свиней, які лягли в основу їх міжнародної класифікації. В 1971 р. на основі результатів вивчення антигенних властивостей 72 європейських, американських та японських штамів ентеровірусів свиней, Dunne Н. et al. [1] розподілили їх на 8 серотипiв (ЕВС 1- 8), яку доповнили Knowles N. еt al. [2] 3-ма (ЕВС 9-11), J. Auerbach еt al. [3, 4] – 2-ма (ЕВС 12 і 13) новими серотипами. Крім того, Романенко В.П. з спiвавт. [5] встановили 14 нових серотипів ЕВС, які поки що не увійшли до міжнародної класифікації. 157 Нами та іншими дослідниками виділено ентеровіруси свиней, які в реакції нейтралізації вірусу мають міжтипові антигенні властивості, що ускладнює встановлення їх таксономічного положення на рівні серотипу [6]. По мірі накопичення даних щодо генетичної структури вірусів на 11 Міжнародному конгресі з вірусології, який відбувся у 1999 році у Сіднеї, було прийнято ряд змін щодо таксономії і номенклатури пікорнавірусів [7]. Найбільш суттєвих змін зазнав рід Enterovirus, зокрема ентеровіруси свиней. На основі генетичних досліджень проведених Zell R. еt al., [8], Kaku Y. еt al. [9] та Doherty M. еt al. [10], Міжнародний комітет з таксономії рекласифікував ентеровіруси свиней на 3 види, які віднесено до 2 родів. Так, ЕВС 1-7, 11-13 серотипів та один новий серотип [8] віднесено до виду  Porcine  Teschovirus  (PТV), який на сьогодні налічує 11 серотипів і винесений в окремий рід Teschovirus. Назва роду походить від назви самої хвороби свиней (Тешенської хвороби), яку можуть викликати представники цього роду. Ентеровіруси свиней 8 серотипу рекласифіковано як Porcine  Еnterovirus  A   (PEV-A), а 9 та 10 – як Porcine Еnterovirus В (PEV-B), які віднесені до роду Enterovirus. Інститут сільськогосподарської мікробіології УААН має значний досвід щодо виділення та ідентифікації тешо- і енте- ровірусів свиней. Роботи за цим напрямом розпочались у 1961 р. За цей час співробітниками інституту ідентифіковано сотні монотипових і поліантигенних штамів, віднесено до відомих і нових серотипів [5, 11-13]. За серотиповою належністю 15,5 % виділених вірусів мають антигенні зв’язки з референтними штамами одного із серотипів ЕВС, 10,2 % – двох, 66,8 % – 3-18 серотипів, а 7,6 % не мають таких зв’язків із жодним з відомих серотипів ЕВС [11]. В Інституті створено колекцію тешо-, ентеровірусів свиней, яка налічує 92 штами, серед яких є еталонні, вакцинні, діагностичні, прототипні. Таким чином, у зв’язку зі змінами, внесеними Міжнарод- ним комітетом з таксономії вірусів, існує необхідність у проведенні молекулярно-генетичної рекласифікації штамів, виділених на території України, та впровадження у практику ветеринарної медицини діагностичних засобів, розроблених на основі генетичних методів. 158 Враховуючи вищенаведене, метою наших досліджень було розробити видоспецифічні праймери тешо- і ентеровірусів свиней для проведення молекулярно-генетичної рекласифікації ентеровірусів свиней та ідентифікації ізолятів вірусів. Матеріали і методи. В роботі використано 10 штамів (П 642, Б 652, Ч 2372, И 59, Р 501, Г 95, В 151, П 142, М 2323, Д 33) ентеровірусів свиней, що виділені на території України та зберігаються в колекції Інституту; еталонні штами тешо-, ентеровірусів свиней 14 серотипів, люб’язно надані професором Мальте Даубером з колекції Інституту вірусної діагностики ім. Ф. Леффлера Федерального центру вірусних хвороб тварин Німеччини (табл. 1). Штам ЗКСМ вірусу парагрипу-3, штам К вірусу класичної чуми свиней, штам ВК-1 вірусу діареї великої рогатої худоби, штам ВС-1 вірусу трансмісивного гастроентериту свиней – з колекції Державного науково-контрольного інституту біотехнології та штамів мікроорганізмів. Підтримання та накопичення вірусів, визначення їх інфекційної активності проводили в культурі клітин нирки ембріону свині (СНЕВ). Таблиця 1. Еталонні штами тешо-, ентеровірусів свиней Рід Вид Серотип Назва штаму Teschovirus Porcine Teschovirus PTV-1 Teschen 199 PTV-2 O 3b PTV-3 O 2b PTV-4 PS 36 PTV-5 F 26 PTV-6 PS 37 PTV-7 F 43 PTV-8 UKG 173/74 PTV-9 VIR 2899/84 PTV-10 VIR 460/88 PTV-11 Dresden Enterovirus Porcine Enterovirus А PEV-8 V 13 Porcine Enterovirus В PEV-9 UKG 410/73 PEV-10 LP 54 Підбір гомологічних ділянок геному для конструювання видоспецифічних праймерів проводили за допомогою комп’ютерної 159 програми Vector NTI за використання бази даних GenBank, EMBL (Європейська молекулярно-біологічна бібліотека) [14], DDBJ (Японська база даних нуклеотидних послідовностей) [15]. Для ефективного використання в полімеразній ланцюговій реакції (ПЛР) розроблені олігонуклеотидні праймери повинні відповідати певним вимогам: − мати високу специфічність для зв'язування зі строго визначеними ділянками геному; − мати схожу температуру відпалу й константу зв'язування; − не створювати жорстких вторинних структур. Синтез праймерів здійснювали в науково-виробничому підприємстві «ЛІТЕХ» (Росія, м. Москва). Рибонуклеїнову кислоту (РНК) тешовірусів і ентеровірусів свиней виділяли з досліджуваних проб за використання набору «РНК-сорб-В» (Центральний науково-дослідний інститут епіде- міології, м. Москва), в основі якого лежить метод сорбції на си- лікагелі. З виділеної РНК отримували кДНК за допомогою реакції зворотної транскрипції (ЗТ). ПЛР проводили на чотирьохканальному ампліфікаторі «Терцик» НВФ «ДНК-Технологія» (Росія, м. Москва), по Saiki R. еt al. Реакційна суміш об’ємом 25 мкл вміщувала: 67 ммоль трис-HCl (pH 8,8), 16,6 mM (NH4)2SO4, 2,0 ммоль MgCl2, 0,01 % твін-20, по 100 мкмоль дАТФ, дГТФ, дТТФ, дЦТФ, 2 нмоль кожного з специфічних праймерів, 2 од. Taq-полімерази, 5 мкл зразків виділеної ДНК. Для попередження випаровування у кожний зразок поверх реакційної суміші нашаровували по 30 мкл мінеральної олії. Ампліфікацію (помноження) специфічних ділянок кДНК інфекційних агентів проводили за програмами, представленими в табл. 2. Детекцію продуктів реакції проводили за допомогою електрофорезу у 1,5 % агарозному гелі, забарвленому бромідом етидію з використанням трис-боратного буфера при градіенті напруги 10 В/см. Результати оцінювали при перегляді гелю після електрофорезу на трансілюмінаторі під УФ-світлом за наявністю (або відсутністю) червоно-помаранчевих фрагментів ДНК певного розміру. Специфічність ампліфікованого фрагмента ДНК визначали за його розміром відносно фрагментів стандартних маркерів. Для визначення специфічності сконструйованих праймерів використовували вірусовмісну суспензію культури клітин з титром тешо- і ентеровірусів свиней 5,0-8,5 lg ТЦД50/см3, 160 вірусовмісні суспензії головного та спинного мозку з титром 2,0-5,5 lg ТЦД50/см3, віруси інших таксономічних груп (вірус парагрипу-3, вірус класичної чуми свиней, вірус діареї великої рогатої худоби, вірус трансмісивного гастроентериту свиней), суспензії культури клітин СНЕВ, спинного і головного мозку, селезінки, легень свиней. Таблиця 2. Температурні і часові параметри ампліфікації специфічної ділянки кДНК № циклу Температура ампліфікації, °С Час, хв. Кількість циклівтешовіруси свиней ентеровіруси свиней А ентеровіруси свиней В 1 95 95 95 5 1 2 94 94 94 1 558 58 60 1 74 74 74 1 3 94 94 94 0,5 3558 58 60 0,5 73 73 73 0,5 4 72 72 72 5 1 5 зберігання Результати та їх обговорення.  У результаті аналізу геномів ентеро- і тешовірусів свиней за використання програми «Align X (Vector NTI Suite)» і баз даних GenBank, EMBL, DDBJ було підібрано консервативні ділянки геномів, придатні для розробки видоспецифічних праймерів. Так, для тешовірусів свиней розроблені праймери мали наступні послідовності: Sense Primer: TeschoF51 5’-CCAGCAGCCTCTGTTCAGAAAG Antisense Primer: TeschoR51 5’-GC(A/G)TACTTGTATGAGGCCCATC Вони фланкують ділянку молекули РНК довжиною 650 нуклеотидних залишків, починаючи з 5271 по 5908 нуклеотид (AF296096). Їх ідентичність для всіх тешовірусів свиней за результатами аналізу даних банку генів становила 100 % (95,5 %). Для ідентифікації ентеровірусів свиней А були отримані наступні праймери, які фланкують ділянку геному вірусу з 3141 по 3598 нуклеотиди (AF406813), довжиною 458 нуклеотидних залишка: 161 Sense Primer: Pev8F6 5’-TGCCAAACTAAGAACGCCACTG Antisense Primer: Pev8R6 5’-TCACCTTCTGCCATCCACAATC Їх ідентичність для штамів ентеровірусів свиней А становила 100 %. Для ідентифікації ентеровірусів свиней В були синтезовані наступні праймери: Sense Primer: Pev9F1 5’-GGATTGCGGTCAAGCACTTCTGTT Antisense Primer: Pev9R1 5’-CGTGGTTAGGATTAGCCGCATTC Вони були підібрані до ділянки геному ентеровірусів свиней В у межах 187 – 513 нуклеотидів (AF363453), розмір ПЛР-фрагмен- ту – 327 нуклеотидних залишка. Ідентичність ініціюючого прай- мера становила 100 % (95,8 %), а термінуючого праймера – 100 %. Для визначення специфічності праймерів проведено молекулярно-генетичні дослідження еталонних штамів тешовірусів та ентеровірусів свиней А і B, штамів ентеровірусів свиней, виділених на території України, вірусів інших таксономічних груп, зразки культури клітин СНЕВ, органів і тканин свиней у полімеразній ланцюговій реакції (табл. 3). Встановлено, що праймери, отримані до ділянки РНК тешовірусів свиней, були специфічними як до РНК еталонних штамів тешовірусів, так і до РНК усіх тестованих штамів енте- ровірусів свиней, виділених на території України. Праймери, одер- жані до ділянки РНК ентеровірусів свиней А, взаємодіяли лише з РНК штаму V13, а праймери, сконструйовані для ідентифікації ентеровірусів свиней В – з штамами UKG 410/73 та LP54. Жодна з досліджуваних пар праймерів не вступала у взаємодію з РНК вірусів інших таксономічних груп. Продуктів ампліфікації з культурою клітин СНЕВ та суспензіями органів свиней також не спостерігали. Отже, встановлена висока специфічність одержаних праймерів, підтверджена їх видоспецифічність. Встановлено таксономічне положення 10 штамів ентеровірусів свиней, виділених на території України, які на підставі проведених досліджень рекласифіковано як Porcine  Teschovirus згідно з міжнародною класифікацією. Отримані дослідження відкривають перспективи розробки діагностичних тест-систем на основі молекулярно-генетичних ме- тодів з використанням розроблених олігонуклеотидних праймерів. 162 Таблиця 3. Специфічність сконструйованих праймерів Зразок Праймери до PTV PEV-A PEV-B PTV-1 Teshen 199 + – – PTV-2 03b + – – PTV-3 02b + – – PTV-4 PS36 + – – PTV-5 F26 + – – PTV-6 PS37 + – – PTV-7 F43 + – – PTV-8 UKG 173/74 + – – PTV-9 VIR 2899/84 + – – PTV-10 VIR461/88 + – – PTV-11 Dresden + – – PEV-A V13 – + – PEV-B UKG 410/73 – – + PEV-B LP54 – – + EBC П 642 + – – EBC Б 652 + – – EBC И 59 + – – EBC Г 95 + – – ЕВС В 151 + – – EBC П 142 + – – EBC Р 501 + – – EBC Ч 2372 + – – Суспензія головного мозку EBC Ч 2372 + – – Суспензія головного мозку EBC М 2323 + – – Суспензія спинного мозку ЕВС Д 33 + – – Вірус парагрипу-3 штам ЗКСМ – – – Вірус класичної чуми свиней штам К – – – Вірус діареї великої рогатої худоби штам ВК-1 – – – Вірус трансмісивного гастроентериту свиней штам ВС-1 – – – Головний мозок – – – Спинний мозок – – – Легені – – – Селезінка – – – Культура клітин СНЕВ – – – 163 Таким чином, створено видоспецифічні праймери для проведення молекулярно-генетичної ідентифікації Porcine  Teschovirus, Porcine Enterovirus А, Porcine Enterovirus В у зворотній транскриптазній полімеразній ланцюговій реакції. Рекласифіковано 10 штамів ентеровірусів свиней, виділених в Україні. За результатами молекулярно-генетичних досліджень їх віднесено до роду Тeschovirus  виду Porcine  Teschovirus згідно з міжнародною класифікацією. 1. Dunne H.W. Classification of North American porcine Enteroviruses: a comparison with Europian and Japanese strains /Dunne H.W., Wang T.J., Ammermann E.H. //Infect. Immunol. – 1971. – Vol. 4, № 5. – P. 619-631. 2. Knowless N.J. Classification of porcine enteroviruses by antigenic analysis and cytopathic effects in tissue culture: desciption of 3 new serotypes /Knowless N.J., Buckley L.S., Pereira H.G. //Arch. Virol. – 1979. – Vol. 62, № 3. – P. 201-208. 3. Grouping of porcine enteroviruses by indirect immunofluorescence and description of two new serotypes /Auerbach J., Prager D., Neuhaus S. [et al.] //J. vet. Med. Ser. B. – 1994. – Vol. 41, № 4. – P. 277-282. 4. Auerbach J. Serologische Klassifizierung porziner Enterovirus Feldisolate aus Schweinen mit zentralnervosen Storungen mittels Neutralisationstest und indirekter Immunfluoreszenz und Beschreibung von zwei neuen Serotypen (PEV12 und PEV13) /Auerbach J. //Fachbereich Veterinar medizin, Justus-Liebig-Universitat. – Giessen, 1993. – P. 12. 5. Классификация энтеровирусов свиней /Романенко В.Ф., Прусс О. Г., Бабич Н.В. [и др.] //Вiсник аграрної науки. – 1993. – № 1. – С. 94-101. 6. Дерев’янко С.В. Рекомбiнацiя i її значення в еволюцiї ентеровiрусiв свиней /Дерев’янко С.В., Полевiк О.I., Сорока В.I. //Мат. наук.-практич. конф. молодих вчених аграрiїв Чернiгiвщини [«Наукове обгрунтування сталого розвитку агроекологiчних систем Чернiгiвщини в ринкових умовах i обмеженого ресурсного забезпечення»]. – Чернiгiв : ІСГМ, 1999. – С. 32-35. 7. Picornaviridae /King A.M.Q., Brown F., Christian [et al.] //Virus Taxonomy. Seventh Report of the International Committee for the Taxonomy of Viruses /eds Van Regenmortel M.H.V., Fauquet C.M., Bishop D.H.L. et al. – New-York ; San Diego : Academic Press, 2000. – P. 657-673. 8. Porcine Teschovirus comprise at least eleven distinct serotypes: molecular and evolutionary aspects /Zell R., Dauber M., Krumbolz A. [et al.] //J. Virol. – 2001. – Vol. 75, № 4. – P. 1620-1631. 9. Kaku Y. Genetic reclassification of porcine enteroviruses /Kaku Y., Sarai A., Murakami Y. //J. Gen. Virol. – 2001. – Vol. 82. – P. 417-424. 10. Sequence analysis of a porcine enterovirus serotype 1 isolate: 164 relationships with other picornaviruses /Doherty M., Todd D., McFerran N., Hoey E.M. //J. Gen. Vir. – 1999. – Vol. 80. – P. 1929-1941. 11. Сорока В.І. Характеристика ентеровірусів, виділених від свиней /Сорока В.І., Полевік О.І., Дерев’янко С.В. //Ветеринарна медицина: міжвідом. темат. наук. зб. – Харків, 2003. – Вип. 82. – С. 531-535. 12. Дерев’янко С.В. Класифікація ентеровірусів свиней: сучасний стан та проблеми /Дерев’янко С.В., Сорока В.І. //Ветеринарна медицина: міжвідом. темат. наук. зб. – Харків, 2002. – Вип. 80. – С. 195-200. 13. Визначення таксономічного положення штамів тешо-, ентеровірусів свиней, виділених на території України /Дерев’янко С.В., Сорока В.І., Бокун А.О., Бова Т.О. //ХІІ з’їзд товариства мікробіологів України ім. С.М. Виноградського: тези доп. (м. Ужгород, 25-30 травня 2009 р.). – Ужгород: Патент, 2009. – С. 423. 14. European Molecular Biology Laboratory. – Режим доступу: http://www.embl.org/ 15. DNA Data Bank of Japan (DDBJ). – Режим доступу: http://www.ddbj.nig.ac.jp/ КОНСТРУИРОВАНИЕ ВИДОСПЕЦИФИчЕСКИХ ПРАЙМЕРОВ ДЛЯ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИчЕСКОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ ТЕШОВИРУСОВ И ЭНТЕРОВИРУСОВ СВИНЕЙ А И В 1Головко А.Н., 2Деревянко С.В., 2Бова Т.А., 2Сорока В.И., 3Кацимон В.В. 1Украинская академия аграрных наук, г. Киев 2Институт сельскохозяйственной микробиологии УААН, г. Чернигов 3Государственный научно-контрольный институт биотехнологии и штаммов микроорганизмов, г. Киев Сконструированы  видоспецифические  праймеры  для  определения таксономического положения штаммов видов Porcine  Teschovirus, Porcine Enterovirus А, Porcine Enterovirus В. Проведена  реклассификация 10 штаммов энтеровирусов свиней, выделенных  на  территории  украины.  В  соответствии  с  международной  классификацией  они  отнесены  к  роду  Тeschovirus  виду  Porcine  Teschovirus.  Проведенные  исследования  создают  основу  для  разработки  отечественных  диагностических  тест-систем  на  основе молекулярно-генетических методов. Ключевые слова: Porcine Teschovirus, Porcine Enterovirus А,  Porcine  Enterovirus  В,  штамм,  праймеры,  полимеразная  цепная  реакция, реклассификация. 165 CONSTRUCTION OF SPECIES-SPECIFIC PRIMERS FOR MOLECULAR-GENETIC IDENTIFICATION OF PORCINE TESCHOVIRUSES AND ETEROVIRUSES A AND B 1Golovko A.N., 2Derevyanko S.V., 2Bova T.O., 2Soroka V.I., 3Katsymon V.V. 1Ukrainian Academy of Agrarian Sciences, Kyiv 2Institute of Agricultural Microbiology, UAAS, Chernihiv 3State Scientifically-Control Institute of Biotechnology and Strains Speeches of Microorganisms, Kyiv The  species-specific  primers  for  identification  of  taxonomic  positions of strains of Porcine Teschovirus, Porcine Enterovirus A and  Porcine  Enterovirus  B  kinds  were  developed.  The  reclassification  of  10 strains of Porcine Enterovirus  isolated in Ukraine was performed.  In  conformity  to  the  international  classification  they  were  referred  to  the  Тeschovirus  genus  of  Porcine  Teschovirus  specie.  Performed  investigations had created a basis for elaboration of domestic molecular- genetic diagnostic test systems. Key words:  Porcine  Teschovirus,  Porcine  Enterovirus  A,  Porcine  Enterovirus  B,  strains,  primer,  polymeraze  chain  reaction,  reclassification.

Ähnliche Einträge