Імуноцитохімічне вивчення пероксидази у листках повітряно-водної та суходільної форм Sium latifolium L.
Проведено изучение активности и локализации пероксидазы (ЕС. 1.11.1.7) в листьях воздушно-водной и сухопутной форм Sium latifolium биохимическими и иммунноцитохимическим методами с использованием пероксидазы, конъюгированной с флуоресцеинизоционатом (ФИТС). Иммунноцитохимическое исследование проводи...
Saved in:
| Date: | 2006 |
|---|---|
| Main Author: | |
| Format: | Article |
| Language: | Ukrainian |
| Published: |
Інститут ботаніки ім. М. Г. Холодного НАН України
2006
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/3317 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Імуноцитохімічне вивчення пероксидази у листках повітряно-водної та суходільної форм Sium latifolium L. / О.М. Недуха // Укр. ботан. журн. — 2006. — Т. 63, № 2. — С. 262-271. — Бібліогр.: 19 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860200351129403392 |
|---|---|
| author | Недуха, О.М. |
| author_facet | Недуха, О.М. |
| citation_txt | Імуноцитохімічне вивчення пероксидази у листках повітряно-водної та суходільної форм Sium latifolium L. / О.М. Недуха // Укр. ботан. журн. — 2006. — Т. 63, № 2. — С. 262-271. — Бібліогр.: 19 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| description | Проведено изучение активности и локализации пероксидазы (ЕС. 1.11.1.7) в листьях воздушно-водной и сухопутной форм Sium latifolium биохимическими и иммунноцитохимическим методами с использованием пероксидазы, конъюгированной с флуоресцеинизоционатом (ФИТС). Иммунноцитохимическое исследование проводили на конфокальном лазерном сканирующем микроскопе LSM 5 PASCAL (Zeiss, Germany). Пероксидаза выявлена в клеточных оболочках эпидермиса и мезофилла, а также в хлоропластах мезофилла. Обнаружено, что умеренный водный дефицит влиял на увеличение активности пероксидазы, изменения в интенсивности флуоресценции комплекса ФИТС-пероксидаза в исследованных клетках, появление пероксидазы в вакуолях клеток мезофилла и увеличение количества клеток мезофилла, в которых выявлена пероксидаза.
The study of peroxydase (ЕС. 1.11.1.7) activity and localization in cells of epidermis and mesophyll in leaves of aerial-aquatic and terrestrial forms of Sium latifolium L. have been revealed using the immune cytochemical method and biochemical methods. Peroxydase conjugated with fluorescein isocyanate (FITC) was used in the experiments. The study was performed on a LSM 5 PASCAL (Zeiss, Germany) confocal-laser microscope. It is established that peroxydase is localized both in the walls of epidermis and mesophyll, and in mesophyll’s chloroplasts. A moderate water deficit provoked the increase of peroxidase activity, the changes of intensity of fluorescence of the FITC-peroxydase complex in the investigated cells, the presence of peroxydase in vacuoles of mesophyll cells, and the increase of the number of mesophyll cells, in walls of which peroxidase has been revealed.
|
| first_indexed | 2025-12-07T18:10:47Z |
| format | Article |
| fulltext |
ISSN 0372-4123. Ukr. Botan. Journ., 2006, vol. 63, ¹ 2262
Î.Ì. ÍÅÄÓÕÀ
²íñòèòóò áîòàí³êè ³ì. Ì.Ã. Õîëîäíîãî ÍÀÍ Óêðà¿íè
âóë. Òåðåùåíê³âñüêà, 2, Êè¿â, 01601, Óêðà¿íà
²ÌÓÍÎÖÈÒÎղ̲×ÍÅ ÂÈÂ×ÅÍÍß
ÏÅÐÎÊÑÈÄÀÇÈ Ó ËÈÑÒÊÀÕ
ÏβÒÐßÍÎ-ÂÎÄÍί ÒÀ ÑÓÕÎIJËÜÍί
ÔÎÐÌ SIUM LATIFOLIUM L.
Ê ë þ ÷ î â ³ ñ ë î â à: ïåðîêñèäàçà, ëèñòêè, Sium latifolium,
êîíôîêàëüíà ì³êðîñêîï³ÿ
³äîìî, ùî âîäíèé äåô³öèò çàëåæíî â³ä òðèâàëîñò³ 䳿 òà ð³âíÿ âîäíîãî ïî-
òåíö³àëó ñïðè÷èíþº çì³íè ëèñòê³â íà ð³çíèõ ð³âíÿõ îðãàí³çàö³¿: òêàíèííîìó,
êë³òèííîìó ³ ìîëåêóëÿðíîìó. Íàâ³òü ïîì³ðíèé âîäíèé äåô³öèò ïðèçâîäèòü äî
ïîÿâè êñåðîìîðôíèõ îçíàê, çá³ëüøåííÿ âì³ñòó öåëþëîçè â îáîëîíêàõ ìåçî-
ô³ëó òà åï³äåðì³ñó, óù³ëüíåííÿ âîñêîâîãî íàëüîòó íà àäàêñ³àëüíîìó åï³äåðì³ñ³
òà ñòàð³ííÿ êë³òèí ìåçîô³ëó [5, 8]. Íàñàìïåðåä ó õëîðîïëàñòàõ âèÿâëÿëèñÿ
çëèïàííÿ òèëàêî¿ä³â àáî æ ðîçðèõëåííÿ ãðàí, âòðàòà ðèáîñîì, çá³ëüøåííÿ âì³ñòó
íåíàñè÷åíèõ æèðíèõ êèñëîò, çíèæåííÿ øâèäêîñò³ åëåêòðîííîãî òðàíñïîðòó
â òèëàêî¿äàõ òà ðóéíóâàííÿ òèëàêî¿äíèõ ìåìáðàí ï³ä âïëèâîì â³ëüíèõ ðàäè-
êàë³â, ÿê³ ôîðìóþòüñÿ âíàñë³äîê áëîêóâàííÿ åëåêòðîííîãî òðàíñïîðòó, ùî
ñïðè÷èíþº ïðîòåîë³ç õëîðîïëàñò³â òà âòðàòó õëîðîô³ëó [8, 11, 17]. Òàê³ çì³íè,
íà íàø ïîãëÿä, îïîñåðåäêîâàí³ àêòèâàö³ºþ ïåðîêñèäàç.
Ðîñëèííà ïåðîêñèäàçà (ÊÔ. 1.11.1.7) — ïîë³ôóíêö³îíàëüíèé ôåðìåíò,
ïðåäñòàâëåíèé ÷èñëåííèìè ³çîôåðìåíòàìè, ÿê³, êàòàë³çóþ÷è îêèñëåííÿ ö³ëîãî
ðÿäó îðãàí³÷íèõ òà íåîðãàí³÷íèõ ðå÷îâèí, áåðóòü ó÷àñòü ó ïðîöåñàõ ðîñòó òà
ðîçâèòêó ðîñëèíè ÿê çà óìîâ íîðìàëüíîãî ìåòàáîë³çìó, òàê ³ îêèñíîãî ñòðå-
ñó [2, 6, 15]. Çîêðåìà, â äåòîêñèêàö³¿ ïåðåêèñó âîäíþ, óòâîðåíîãî ó ïðîöåñ³
äèñìóòàö³¿ ñóïåðîêñèäó êèñíþ [10, 11], ïîë³ìåðèçàö³¿ ìîíîë³ãíîë³â ³ ôîðìó-
âàíí³ êîâàëåíòíèõ çâ’ÿçê³â â îáîëîíêàõ [13, 16], îêèñëåíí³ ôåíîë³â âàêóî-
ëåé [18], ñèíòåç³ òà îêèñëåíí³ ³íäîë³ëîöòîâî¿ êèñëîòè, ðóéíóâàíí³ öèòîê³í³í³â,
à òàêîæ ó âçàºìî䳿 ô³òîãîðìîí³â [6, 7].
Ïðè àäàïòàö³¿ ðîñëèí äî íåñïðèÿòëèâèõ ôàêòîð³â, çîêðåìà íèçüêèõ òåì-
ïåðàòóð òà êîðîòêî÷àñíîãî âîäíîãî äåô³öèòó, çá³ëüøóâàëàñÿ àêòèâí³ñòü îñíîâ-
íèõ ïåðîêñèäàç ó ïðîðîñòêàõ îçèìî¿ ïøåíèö³ òà ìåìáðàíí³é ôðàêö³¿, òà çìåí-
øóâàëàñü àêòèâí³ñòü êèñëèõ ïåðîêñèäàç ó öèòîïëàçìàòè÷í³é ôðàêö³¿ [6, 7]. Êð³ì
öüîãî, íåùîäàâíî âèÿâëåíî çì³íè ³çîôåðìåíòíîãî ñêëàäó ïåðîêñèäàçè ó
êîðåíÿõ ðîñëèí, ÿê³ ïåðåáóâàëè â óìîâàõ ïîì³ðíîãî âîäíîãî äåô³öèòó [4].
Ïðîòå ó÷àñòü ïåðîêñèäàç â àäàïòàö³¿ ïîâ³òðÿíî-âîäíèõ ðîñëèí äî ïîì³ðíîãî
âîäíîãî äåô³öèòó îñòàòî÷íî íå ç’ÿñîâàíà. Ðàí³øå ìè ïîêàçàëè, ùî ïîì³ðíèé
âîäíèé äåô³öèò ó ïðèðîäíèõ óìîâàõ ïðèçâîäèòü äî ïîÿâè êñåðîìîðôíèõ
îçíàê ëèñòêîâèõ ïëàñòèíîê ïîâ³òðÿíî-âîäíèõ ðîñëèí, à òàêîæ îçíàê ñòàð³-
© Î.Ì. ÍÅÄÓÕÀ, 2006
ISSN 0372-4123. Óêð. áîòàí. æóðí., 2006, ò. 63, ¹ 2 263
ííÿ êë³òèí [5]. Âðàõîâóþ÷è äàí³ ë³òåðàòóðè, ìè ïðèïóñêàºìî, ùî îäíèì ³ç
ìåõàí³çì³â ïîÿâè êñåðîìîðôíèõ îçíàê òà îçíàê ñòàð³ííÿ êë³òèí ìîæå áóòè
àêòèâàö³ÿ ïåðîêñèäàçè ³ ïîñèëåíèé ñèíòåç ë³ãí³íó, ÿêèé àêóìóëþºòüñÿ â
îáîëîíêàõ ñòàð³þ÷èõ êë³òèí [13, 15]. Ìè íàâîäèìî ðåçóëüòàòè á³îõ³ì³÷íîãî
âèâ÷åííÿ àêòèâíîñò³ ïåðîêñèäàç, âì³ñòó ë³ãí³íó òà ³ìóíîöèòîõ³ì³÷íîãî äîñ-
ë³äæåííÿ ëîêàë³çàö³¿ ïåðîêñèäàçè â ëèñòêîâèõ ïëàñòèíêàõ Sium latifolium L.
çà óìîâ âîäíîãî äåô³öèòó.
Ìàòåð³àë ³ ìåòîäè äîñë³äæåíü
Ëèñòêè ïîâ³òðÿíî-âîäíî¿ òà ñóõîä³ëüíî¿ ôîðì Sium latifolium L. çáèðàëè ó ôàç³
öâ³ò³ííÿ (÷åðâåíü). Îñîáèíè ïîâ³òðÿíî-âîäíî¿ ôîðìè çðîñòàëè ó âîä³ (ãëè-
áèíà ñòàíîâèëà 30—70 ñì) óçäîâæ áåðåãà ð. Ïñüîë (ì. Âåëèêà Áàãà÷êà Ïîë-
òàâñüêî¿ îáë.), ñóõîä³ëüíî¿ ôîðìè — ó ë³ñ³, íà â³ääàë³ äî 25 ì â³ä áåðåãà.
Îá’ºêòîì äîñë³äæåííÿ áóëè ïåðøà ïàðà ëèñòî÷ê³â ïåðøîãî ñêëàäíîãî ëèñò-
êà ïîâ³òðÿíî-âîäíèõ òà ïåðøîãî ëèñòêà ñóõîä³ëüíèõ ðîñëèí.
Äëÿ á³îõ³ì³÷íèõ àíàë³ç³â âèð³çàëè ñåðåäèííó ÷àñòèíó ëèñòî÷ê³â çàâøèð-
øêè äî 2 ñì, — â³ä êðàþ äî öåíòðàëüíî¿ æèëêè òðüîõ ðîñëèí ïîâ³òðÿíî-âîäíî¿
òà òðüîõ ëèñòê³â ñóõîä³ëüíî¿ ôîðì; öåíòðàëüíó æèëêó ëèñòê³â íå äîñë³äæó-
âàëè. Àêòèâí³ñòü ãâàÿêîë- òà àñêîðáàòïåðîêñèäàçè â åêñòðàêòàõ ç³ ñâ³æèõ
ëèñòê³â âèçíà÷àëè çà ìåòîäîì Í.Ï. ßðîø òà ñï³âàâò. [9] ó ïðèñóòíîñò³ åêçî-
ãåííèõ ñóáñòðàò³â îêèñëåííÿ (ãâàÿêîëó ÷è àñêîðá³íîâî¿ êèñëîòè, â³äïîâ³ä-
íî). ʳëüê³ñòü ïðîäóêò³â ðåàêö³¿ âèçíà÷àëè çà îïòè÷íîþ ù³ëüí³ñòþ: ïðè
470 íì — äëÿ ãâàÿêîëó, ïðè 265 íì — äëÿ àñêîðá³íîâî¿ êèñëîòè. ˳ãí³í ³ç
ëèñòê³â S. latifolium åêñòðàãóâàëè çã³äíî ç ïðîòîêîëîì [3].
Ëîêàë³çàö³þ ïåðîêñèäàçè âèÿâëÿëè çà äîïîìîãîþ ³ìóíîöèòîõ³ì³÷íîãî
ìåòîäó çà ïðîòîêîëîì [19]. Ó ïîëüîâèõ óìîâàõ ñìóæå÷êè ëèñòî÷ê³â øèðè-
íîþ 1—2 ³ äîâæèíîþ äî 10—12 ìì â³ä êðàþ ëèñòî÷êà äî ñåðåäíüî¿ æèëêè
ô³êñóâàëè ó ðîç÷èí³ 3,7 %-ãî ïàðàôîðìàëüäåã³äó íà ôîñôàòíî-ñîëüîâîìó
áóôåð³, ïðîìèâàëè áóôåðîì ïðîòÿãîì 10—15 ãîä ïðè + 4 îÑ. Ïîäàëüø³ ïðî-
öåäóðè çä³éñíþâàëè â ëàáîðàòîð³¿. Ìàòåð³àë ³íêóáóâàëè ó áëîêóþ÷îìó áóôåð³
äëÿ áëîêóâàííÿ íåñïåöèô³÷íîãî çâ’ÿçóâàííÿ. ϳñëÿ öüîãî ñìóæêè ëèñòî÷ê³â
îáðîáëÿëè â ðîç÷èí³ ïåðâèííèõ ìîíîêëîíàëüíèõ àíòèò³ë (10 µã/ìë), ïðîìè-
âàëè òà ³íêóáóâàëè ó ðîç÷èí³ âòîðèííèõ àíòèò³ë (25 µã/ìë), ïðèêð³ïëåíèõ äî
ìîëåêóëè ïåðîêñèäàçè (õðîíó), êîí’þãîâàíî¿ ³ç ôëóîðåñöå¿í³çîö³îíàòîì
(Ô²ÒÑ-ïåðîêñèäàçà). Ïðîìèòèé ìàòåð³àë âì³ùóâàëè ó ãë³öåðèí. Ó êîíò-
ðîëüíîìó âàð³àíò³ çàì³ñòü âòîðèííèõ àíòèò³ë, êîí’þãîâàíèõ ³ç Ô²ÒÑ, áðàëè
áóôåð. Ôëóîðåñöåíö³þ Ô²ÒÑ-ïåðîêñèäàçè ïðè öüîìó íå âèÿâëåíî.
Ïðåïàðàòè âèâ÷àëè ó êîíôîêàëüíîìó ëàçåðíîìó ì³êðîñêîï³
LSM 5 PASCAL (Zeiss, ͳìå÷÷èíà). Êîìïëåêñ Ô²ÒÑ-ïåðîêñèäàçà â³äçíà÷àâñÿ
çåëåíîþ ôëóîðåñöåíö³ºþ ïðè äîâæèí³ õâèë³ çáóäæåííÿ 494 íì, à åì³ñ³¿ —
516 íì; âèêîðèñòîâóâàëè îá’ºêòèâè õ10 òà õ20. Äàí³ ç ðîçïîä³ëó ïåðîêñèäà-
çè ó êë³òèíàõ, à òàêîæ âèì³ðþâàííÿ ³íòåíñèâíîñò³ ôëóîðåñöåíö³¿ êîìïëåêñó
Ô²ÒÑ-ïåðîêñèäàçà îòðèìàíî çà äîïîìîãîþ ïðîãðàìíîãî çàáåçïå÷åííÿ
ISSN 0372-4123. Ukr. Botan. Journ., 2006, vol. 63, ¹ 2264
PASCAL. Çã³äíî ç ö³ºþ ïðîãðàìîþ ³íòåíñèâí³ñòü ôëóîðåñöåíö³¿ êîìïëåêñó
Ô²ÒÑ-ïåðîêñèäàçà ïðÿìî êîðåëþâàëà ç â³äíîñíèì âì³ñòîì ôåðìåíòó, áî
ìåòîä ³ìóíîöèòîõ³ì³¿ ³ç çàñòîñóâàííÿì çâ’ÿçàíîãî ôåðìåíòó äຠìîæëèâ³ñòü
âèÿâëÿòè ì³í³ìàëüíó ê³ëüê³ñòü àíòèãåíó (ïåðîêñèäàçè), ÿêèé çâ’ÿçóâàâñÿ ç
àíòèò³ëàìè [1]. ²íòåíñèâí³ñòü ôëóîðåñöåíö³¿ ïåðîêñèäàçè â àíòèêë³íàëüíèõ
îáîëîíêàõ åï³äåðì³ñó, à òàêîæ îáîëîíêàõ ìåçîô³ëó, øèðèíà ÿêèõ ñòàíîâèëà
0,4—0,5 ìêì, âèçíà÷àëè çà âåëè÷èíîþ ³íòåíñèâíîñò³, ÿêà ïðèïàäàëà íà êðîê
âèì³ðó çàâøèðøêè 0,4—0,5 ìêì, ïðîñêàíîâàíîãî íà â³äïîâ³äí³é êë³òèíí³é
îáîëîíö³ çà ïðîãðàìîþ PASCAL. Äëÿ âñòàíîâëåííÿ íàÿâíîñò³ àâòîôëóîðåñ-
öåíö³¿ õëîðîô³ëó, ïàðàëåëüíî ç âèÿâëåííÿì Ô²ÒÑ-ïåðîêñèäàçè, ìè âèêîðè-
ñòàëè äðóãèé êàíàë ëàçåðíîãî ì³êðîñêîïà ç äîâæèíîþ õâèë³ çáóäæåííÿ 440 íì,
à åì³ñ³¿ — 660 íì. Ó âèáîðö³ ç 450—500 êë³òèí ï³äðàõîâóâàëè ê³ëüê³ñòü êë³òèí
ìåçîô³ëó, îáîëîíêè ÿêèõ ì³ñòèëè ïåðîêñèäàçó. Îäåðæàí³ äàí³ îáðîáëÿëè
ñòàòèñòè÷íî çà ïðîãðàìîþ Á²Î-8. Äëÿ öèòîõ³ì³÷íèõ ³ á³îõ³ì³÷íèõ äîñë³äæåíü
âèêîðèñòàíî õ³ì³÷í³ ðåàãåíòè ô³ðì Sigma òà Fluka.
Ðåçóëüòàòè äîñë³äæåíü òà ¿õ îáãîâîðåííÿ
1. Ïîâ³òðÿíî-âîäíà ôîðìà. Âîëîã³ñòü ´ðóíòó ñòàíîâèëà 71,8 ± 3,4 %, ñîíÿ÷íà
îñâ³òëåí³ñòü íàä âåðõíüîþ ïîâåðõíåþ ïåðøèõ ëèñòê³â — 1500—1570 µmol
êâàíò³â/ì2 ñåê-1.
Âñòàíîâëåíî, ùî â ïåðøèõ ëèñòî÷êàõ ïåðøîãî ñêëàäíîãî ëèñòêà àê-
òèâí³ñòü àñêîðáàòïåðîêñèäàçè áóëà ìàéæå ó 5 ðàç³â âèùîþ çà àêòèâí³ñòü
ãâàÿêîëïåðîêñèäàçè (òàáë. 1).
Âì³ñò ë³ãí³íó äîñë³äæóâàíèõ ëèñòê³â äîñÿãàâ 85,5 ± 7,8 ìã/ã ñóõî¿ âàãè.
Ëàçåðíî-êîíôîêàëüíà ì³êðîñêîï³ÿ ëèñòî÷ê³â âåõó ïîêàçàëà, ùî êîìïëåêñ
Ô²ÒC-ïåðîêñèäàçà ôëóîðåñö³þâàâ çåëåíèì êîëüîðîì ³ ì³ñòèâñÿ ó çîâí³øí³õ
é àíòèêë³íàëüíèõ îáîëîíêàõ êë³òèí âåðõíüî¿ òà íèæíüî¿ åï³äåðìè, îáîëîí-
êàõ çàìèêàþ÷èõ êë³òèí ïðîäèõ³â, ïàë³ñàäíî¿ òà ãóá÷àñòî¿ ïàðåíõ³ì (ðèñ. 1, à,
á; ðèñ 2, à). Ó çîâí³øí³õ îáîëîíêàõ âåðõíüî¿ åï³äåðìè ôëóîðåñöåíö³ÿ êîì-
ïëåêñó Ô²ÒÑ-ïåðîêñèäàçà íå áóëà ñóö³ëüíîþ (ðèñ. 1, à), à ñïîñòåð³ãàëàñÿ
íà íåâåëèêèõ ä³ëÿíêàõ äî 0,5—0,7 ìêì àáî æ ìàëà êðàïêîïîä³áíèé âèãëÿä.
Òàáëèöÿ 1. Âïëèâ ïîì³ðíîãî âîäíîãî äåô³öèòó íà àêòèâí³ñòü ïåðîêñèäàçè
òà âì³ñò ë³ãí³íó â ëèñòêàõ Sium latifolium
Ïàðàìåòð
Åêîòèï
âîäíèé ñóõîä³ëüíèé
Àêòèâí³ñòü ãâàÿêîëïåðîêñèäàçè,
îä/ã ñèðî¿ ìàñè õâ-1 3,989 ± 0,366 5,781± 0,347*
Àêòèâí³ñòü àñêîðáàòïåðîêñèäàçè,
îä/ã ñèðî¿ ìàñè õâ-1 20,318 ± 2,718 38,974± 4,028*
Âì³ñò ë³ãí³íó, ìã/ã ñóõî¿ ìàñè 85,50 ± 7,84 157,0 ± 10,88*
Ïðèì³òêà: òóò ³ â òàáë. 2 *Ð ≤ 0,05.
ISSN 0372-4123. Óêð. áîòàí. æóðí., 2006, ò. 63, ¹ 2 265
Ðèñ. 1. Ôðàãìåíòè êë³òèí åï³äåðì³ñó òà ìåçîô³ëó Sium latifolium âîäíî¿ ôîðìè. Ëîêàë³çà-
ö³ÿ êîìïëåêñó Ô²ÒÑ-ïåðîêñèäàçà (ñòð³ëêè) ï³ñëÿ ³ìóíîöèòîõ³ì³÷íî¿ ðåàêö³¿ ó êë³òèíàõ:
à, â — âåðõíüî¿ åï³äåðìè, á, ã — ìåçîô³ëó; â, ã — ã³ñòîãðàìè ðîçïîä³ëó ³íòåíñèâíîñò³ ôëó-
îðåñöåíö³¿ Ô²ÒÑ-ïåðîêñèäàçè (âåðõíÿ êðèâà ë³í³ÿ çà íîìåðîì 1) òà àâòîôëóîðåñöåíö³¿
õëîðîô³ëó (íèæíÿ êðèâà ë³í³ÿ 2). Ïîçíà÷åííÿ îñåé íà ã³ñòîãðàì³: ïî âåðòèêàë³ — ³íòåí-
ñèâí³ñòü ôëóîðåñöåíö³¿ ó ï³êñåëÿõ; ïî ãîðèçîíòàë³ — ïðîñêàíîâàíà â³äñòàíü, ìêì. Ìàñ-
øòàá — 50 ìêì
Fig. 1. The fragments of epidermal and mesophyll cells of Sium latifolium air-aquatic form are
on figure 1. The localization of FITC-peroxidase complex (arrows) after the immunocytochemical
reaction in the cells: à, â — adaxial epidermis, á, ã — mesophyll; â, ã — histogram of fluorescent
intensity of FITC-peroxidase (upper curved line N 1) and of autofluorescence of chlorophyll
(lower line N 2). Àxle designation: Ordinate — Fluorescence intensity, pixels; Abscissa — Distance
(µm), which was scanned on figure â and ã. The scale — 50 µm
à á
â
ã
ISSN 0372-4123. Ukr. Botan. Journ., 2006, vol. 63, ¹ 2266
Ðèñ. 2. Ôðàãìåíòè êë³òèí åï³äåðì³ñó òà ìåçîô³ëó âîäíî¿ ³ ñóõîä³ëüíî¿ ôîðì S. latifolium.
Ëîêàë³çàö³ÿ êîìïëåêñó Ô²ÒÑ-ïåðîêñèäàçà (ñòð³ëêè) ï³ñëÿ ³ìóíîöèòîõ³ì³÷íî¿ ðåàêö³¿ ó
êë³òèíàõ: à, ã — íèæíÿ åï³äåðìà; á — âåðõíÿ åï³äåðìà; â — ìåçîô³ë; à — åï³äåðì³ñ ïîâ³òðÿ-
íî-âîäíî¿ ôîðìè; á, â, ã — åï³äåðì³ñ òà ìåçîô³ë ñóõîä³ëüíî¿ ôîðìè; á — òðèâèì³ðíèé âèãëÿä
(3D òîïîãðàô³ÿ) àäàêñ³àëüíîãî åï³äåðì³ñó ç ïåðîêñèäàçîþ (îäåðæàíî ³ç 12-ñåð³éíèõ ôî-
òîãðàô³é åï³äåðì³ñó, ïðîñêàíîâàíèõ ³ç êðîêîì 1,2 ìêì óãëèá êë³òèíè). Ìàñøòàá — 50 ìêì
Fig. 2. The fragments of epidermal and mesophyll cells of S. latifolium air-aquatic and terrestrial
form. The localization of FITC-peroxidase complex (arrows) after the immunocytochemical
reaction in the cells: à, ã — abaxial epidermis, á — adaxial epidermis and â — mesophyll. a —
epidermis of the leaf of S. latifolium air-aquatic form; á, â, ã — epidermis and mesophyll of the
leaves of S. latifolium terrestrial form. On fig á is presented 3D topography of adaxial surface
received from 12 serial scanning micrographs (by the using of the step of 1,2 µm deep into of the
cell). The scale — 50 µm
Íåð³âíîì³ðí³ñòü ôëóîðåñöåíö³¿ â³äçíà÷åíî â îáîëîíêàõ é ³íøèõ êë³òèí: â îä-
íèõ — ³íòåíñèâíå ñâ³÷åííÿ ïåâíèõ ä³ëÿíîê, â ³íøèõ — çíèæåíå. гâí³ ³íòåí-
ñèâíîñò³ ôëóîðåñöåíö³¿ êîìïëåêñó Ô²ÒÑ-ïåðîêñèäàçà ïðåäñòàâëåí³ â òàáë. 2
³ íà ðèñ. 1, â (ã³ñòîãðàìà). Çã³äíî ç îòðèìàíèìè äàíèìè ³íòåíñèâí³ñòü ôëóî-
ðåñöåíö³¿ â³äð³çíÿëàñü ó ð³çíèõ îáîëîíêàõ âåðõíüî¿ åï³äåðìè: íà çîâí³øí³é
ïîâåðõí³ îáîëîíêè âîíà ñòàíîâèëà 59,01 ± 2,11 ï³êñåëåé (â³äíîñíèõ îäèíèöü);
à á
ãâ
ISSN 0372-4123. Óêð. áîòàí. æóðí., 2006, ò. 63, ¹ 2 267
íà àíòèêë³íàëüíèõ îáîëîíêàõ áóëà ìàéæå âòðè÷³ âèùîþ (òàáë. 2; ðèñ. 1, â —
ã³ñòîãðàìà).
 îáîëîíêàõ ìåçîô³ëó ëîêàë³çàö³ÿ ïåðîêñèäàçè çàô³êñîâàíà íå ïî âñüî-
ìó ïåðèìåòðó, à ëèøå â îêðåìèõ ä³ëÿíêàõ òà/àáî ó ì³æêë³òèííèêàõ (ðèñ. 1,
á, ïîäâ³éí³ ñòð³ëêè). Çàãàëîì âîíà âèÿâëåíà â 7,5 ± 0,2 % êë³òèí ìåçîô³ëó.
²íòåíñèâí³ñòü ôëóîðåñöåíö³¿ Ô²ÒÑ-ïåðîêñèäàçè â îáîëîíêàõ ìåçîô³ëó áóëà
ìàéæå ó 5 ðàç³â âèùîþ, í³æ â àíòèêë³íàëüíèõ îáîëîíêàõ âåðõíüî¿ åï³äåðìè
(òàáë. 2; ðèñ. 1, ã — ã³ñòîãðàìà).  îáîëîíêàõ íèæíüî¿ åï³äåðìè ôëóîðåñö³þ-
âàëè ëèøå îêðåì³ ä³ëÿíêè (ðîçì³ðîì áëèçüêî 0,5 ìêì), ù³ëüí³ñòü ôëóîðåñö³þ-
þ÷èõ ä³ëÿíîê áóëà ãåòåðîãåííîþ: ó äåÿêèõ êë³òèí âîíè ðîçì³ùóâàëèñÿ ðèõ-
ëî, â ³íøèõ — ãðóïóâàëèñÿ ó ñòð³÷êîïîä³áí³ ñòðóêòóðè, ñïðÿìîâàí³ ïàðàëåëüíî
àíòèêë³íàëüíèì îáîëîíêàì (ðèñ. 2, à). Ôëóîðåñöåíö³ÿ ïåðîêñèäàçè òàêîæ
âèÿâëåíà â îáîëîíêàõ çàìèêàþ÷èõ êë³òèí ïðîäèõ³â. ²íòåíñèâí³ñòü ôëóîðåñ-
öåíö³¿ êîìïëåêñó Ô²ÒÑ-ïåðîêñèäàçà ó çîâí³øí³õ îáîëîíêàõ îñíîâíèõ åï³-
äåðìàëüíèõ êë³òèí íèæíüî¿ åï³äåðìè òà çàìèêàþ÷èõ êë³òèí áóëà äîñòîâ³ðíî
âèùîþ, í³æ âåðõíüî¿ åï³äåðìè (òàáë. 2).
Êðàïêîïîä³áíà ôëóîðåñöåíö³ÿ êîìïëåêñó Ô²ÒÑ-ïåðîêñèäàçà âèÿâëåíà
òàêîæ ó õëîðîïëàñòàõ ìåçîô³ëó (ðèñ. 1, á, îäèíàðíà ñòð³ëêà). ²íòåíñèâí³ñòü
ôëóîðåñöåíö³¿ ïåðîêñèäàçè ó õëîðîïëàñòàõ ïàë³ñàäíî¿ ïàðåíõ³ìè áóëà ãåòå-
ðîãåííà. Òîìó ìè óìîâíî ðîçä³ëèëè õëîðîïëàñòè íà äâà òèïè: â îäíèõ ïëà-
ñòèäàõ âîíà äîñèòü âèñîêà ³ ñòàíîâèëà 2000—3800 ï³êñåëåé (òàáë. 2; ðèñ. 1,
ã — ã³ñòîãðàìà), â ³íøèõ — 1000—2000 ï³êñåëåé. ²íòåíñèâí³ñòü ëþì³íåñöåíö³¿
ïåðîêñèäàçè ó õëîðîïëàñòàõ ãóá÷àñòî¿ ïàðåíõ³ìè çàô³êñîâàíà íèæ÷îþ, í³æ ó
õëîðîïëàñòàõ ïàë³ñàäè (òàáë. 2). ²íòåíñèâí³ñòü àâòîôëóîðåñöåíö³¿ õëîðîô³ëó
â êë³òèíàõ ïàë³ñàäè êîëèâàëàñü â³ä 2000 äî 4000 ï³êñåëåé.
2. Ñóõîä³ëüíà ôîðìà S. latifolium. Çà óìîâ ïîì³ðíîãî âîäíîãî äåô³öèòó
âîëîã³ñòü ´ðóíòó, íà ÿêîìó ðîñëè îñîáèíè ñóõîä³ëüíî¿ ôîðìè âåõó, çíèæóâà-
ëàñÿ íà 38,1 ± 2,3 % ïîð³âíÿíî ç åêîòèïîì âîäíèõ ðîñëèí. Ñîíÿ÷íà îñâ³ò-
ëåí³ñòü âåðõíüîãî áîêó ïåðøèõ ëèñòê³â º íèæ÷îþ, í³æ ó ïîâ³òðÿíî-âîäíèõ
ðîñëèí, ³ ñòàíîâèòü 290 µmol êâàíò³â/ì2 ñåê-1.
Àêòèâí³ñòü ãâàÿêîëïåðîêñèäàçè ó ëèñòêîâèõ ïëàñòèíêàõ áóëà âèùîþ ó
1,5 ðàçà, àñêîðáàòïåðîêñèäàçè — âäâ³÷³ ïîð³âíÿíî ç àêòèâí³ñòþ ïåðîêñèäàçè
ó ëèñòêàõ ïîâ³òðÿíî-âîäíèõ ðîñëèí. Òàêîæ óäâ³÷³ âèùèì, í³æ ó ëèñòêàõ ïî-
â³òðÿíî-âîäíèõ ðîñëèí, º âì³ñò ë³ãí³íó (òàáë. 1).
Âèâ÷åííÿ ëîêàë³çàö³¿ ïåðîêñèäàçè ó êë³òèíàõ ëèñòê³â ñóõîä³ëüíîãî åêî-
òèïó âåõó ïîêàçàëî ñï³ëüí³ òà â³äì³íí³ îñîáëèâîñò³ ùîäî ëèñòê³â âîäíîãî
åêîòèïó. Ñï³ëüíîþ ðèñîþ º ëîêàë³çàö³ÿ ôåðìåíòó â îáîëîíêàõ ³ õëîðîïëàñ-
òàõ åï³äåðìè òà ìåçîô³ëó (ðèñ. 2, á-ã). ³äì³ííîñò³ ïîëÿãàëè ó çì³í³ ³íòåí-
ñèâíîñò³ ôëóîðåñöåíö³¿ êîìïëåêñó Ô²ÒÑ-ïåðîêñèäàçè ó êë³òèíàõ; íàÿâíîñò³
ïåðîêñèäàçè ó âàêóîëÿõ êë³òèí ìåçîô³ëó; çá³ëüøåíí³ ê³ëüêîñò³ êë³òèí ìåçî-
ô³ëó, â îáîëîíêàõ ÿêèõ âèÿâëåíî ïåðîêñèäàçó.
Çîêðåìà, â³äçíà÷åíî òðèêðàòíå çá³ëüøåííÿ ³íòåíñèâíîñò³ ôëóîðåñöåíö³¿
ó çîâí³øí³é îáîëîíö³ êë³òèí âåðõíüî¿ åï³äåðìè, äâîêðàòíå — â àíòèêë³íàëü-
ISSN 0372-4123. Ukr. Botan. Journ., 2006, vol. 63, ¹ 2268
íèõ îáîëîíêàõ íèæíüî¿ åï³äåðìè, à òàêîæ çíèæåííÿ ìàéæå íà ïîðÿäîê ó
õëîðîïëàñòàõ ïàë³ñàäè (òàáë. 2). Ó âàêóîëÿõ êë³òèí ïàë³ñàäè òà ãóá÷àñòîãî
ìåçîô³ëó ñïîñòåð³ãàëàñÿ ôëóîðåñöåíö³ÿ ïåðîêñèäàçè (ðèñ. 2, â), õî÷à ³íòåí-
ñèâí³ñòü ôëóîðåñöåíö³¿ êîìïëåêñó Ô²ÒÑ-ïåðîêñèäàçè áóëà ñëàáêîþ (òàáë. 2).
Êð³ì òîãî, óòðè÷³ çá³ëüøèëàñÿ ê³ëüê³ñòü êë³òèí ìåçîô³ëó (23,9 ± 2,1 %), â
îáîëîíêàõ ÿêèõ âèÿâëåíà ïåðîêñèäàçà.
Ó êë³òèíàõ ìåçîô³ëó ÿê ïàë³ñàäè, òàê ³ ãóá÷àñòîãî ìåçîô³ëó ³íòåíñèâí³ñòü
àâòîôëóîðåñöåíö³¿ õëîðîô³ëó º íèæ÷îþ, í³æ ó ðîñëèí âîäíîãî åêîòèïó (80—
200 ï³êñåëåé). Îñòàííº, ìîæëèâî, ïîâ’ÿçàíå ç³ çíèæåííÿì âì³ñòó õëîðîô³ë³â
ó ëèñòêàõ çà óìîâ âîäíîãî äåô³öèòó [5].
Òàêèì ÷èíîì, ï³ä âïëèâîì ïîì³ðíîãî âîäíîãî äåô³öèòó â ëèñòêàõ
S. latifolium ó ôàç³ öâ³ò³ííÿ çíà÷íî âèùîþ º àêòèâí³ñòü ãâàÿêîëïåðîêñèäàçè
òà àñêîðáàòïåðîêñèäàçè, ð³âåíü ÿêî¿ çàëåæèòü â³ä ê³ëüêîñò³ á³ëêà, âì³ñòó ñóá-
ñòðàò³â òà åêñïðåñ³¿ â³äïîâ³äíèõ ãåí³â [1]. Ö³ ïèòàííÿ ïîêè º â³äêðèòèìè ³
ïîòðåáóþòü ïîäàëüøîãî äîñë³äæåííÿ.
²ìóíîöèòîõ³ì³÷íèé àíàë³ç ëèñòê³â S. latifolium çàñâ³ä÷èâ, ùî, íåçàëåæíî
â³ä åêîòèïó, ïåðîêñèäàçà ì³ñòèëàñÿ â êë³òèííèõ îáîëîíêàõ òà õëîðîïëàñòàõ
ìåçîô³ëó. Ìè íå âèêëþ÷àºìî, ùî âîíà º òàêîæ ó ïåðîêñèñîìàõ, ÿê³ ÷åðåç
ìàëèé ðîçì³ð (0,2—0,4 ìêì) íåìîæëèâî ³äåíòèô³êóâàòè ó ñâ³òëîâîìó ëàçåð-
íîêîíôîêàëüíîìó ì³êðîñêîï³. Àíàëîã³÷íà ïðèñóòí³ñòü ïåðîêñèäàçè â îáî-
ëîíêàõ åï³äåðì³ñó ³ ìåçîô³ëó, à òàêîæ ó õëîðîïëàñòàõ ìåçîô³ëó ëèñòê³â âåõó
âèÿâëåíà â îáîëîíêàõ êë³òèí ïàðåíõ³ìè, ñóáåï³äåðì³ñó òà êñèëåìè ïðîâ³äíèõ
Òàáëèöÿ 2. ²íòåíñèâí³ñòü ôëóîðåñöåíö³¿ Ô²ÒÑ-ïåðîêñèäàçè ó êë³òèíàõ ð³çíèõ òêàíèí
ëèñòê³â ïîâ³òðÿíî-âîäíî¿ òà ñóõîä³ëüíî¿ ôîðì S. latifolium ó ôàç³ öâ³ò³ííÿ (ï³êñåë³)
Êë³òèíè ð³çíèõ òêàíèí, Åêîòèï
¿õ îðãàíåëè
âîäíèé ñóõîä³ëüíèé
Âåðõíÿ åï³äåðìà
çîâí³øíÿ îáîëîíêà îñíîâíèõ êë³òèí åï³äåðì³ñó 53 ± 2 157 ± 8*
àíòèêë³íàëüíà îáîëîíêà 142 ± 4 65 ± 3*
Ïàë³ñàäíèé ìåçîô³ë
îáîëîíêà 637 ± 42 124 ± 17*
õëîðîïëàñò 1-ãî òèïó 2054 ± 42 240 ± 13*
õëîðîïëàñò 2-ãî òèïó 1602 ± 77
âàêóîëü íå âèÿâëåíî 68 ± 6
Ãóá÷àñòèé ìåçîô³ë
îáîëîíêà 1411 ± 106 965 ± 89*
õëîðîïëàñò 1507 ± 109 1862 ± 172
âàêóîëü íå âèÿâëåíî 51 ± 3
Íèæíÿ åï³äåðìà
çîâí³øíÿ îáîëîíêà îñíîâíèõ êë³òèí åï³äåðì³ñó 2893 ± 148 2761 ± 100
àíòèêë³íàëüíà îáîëîíêà 999 ± 29 1965 ± 205*
îáîëîíêà çàìèêàþ÷èõ êë³òèí ïðîäèõ³â 2428 ± 142 2420 ± 101
ISSN 0372-4123. Óêð. áîòàí. æóðí., 2006, ò. 63, ¹ 2 269
ïó÷ê³â ëóá’ÿíèõ âîëîêîí Stipa tenacissima [14] òà õëîðîïëàñòàõ ìåçîô³ëó ëèñòê³â
Spinacia oleracia [10, 11]. ³äîìî, ùî ïåðîêñèäàçà õëîðîïëàñò³â â³ä³ãðຠâàæ-
ëèâó ðîëü â îêñèãåíàçí³é ðåàêö³¿, ó ïðîöåñ³ ÿêî¿ êèñåíü â³äíîâëþºòüñÿ äî Í2Î
åëåêòðîíàìè çà ôîòîñèíòåòè÷íèì åëåêòðîí-òðàíñïîðòíèì øëÿõîì ç íàñòóï-
íèì ïåðåòâîðåííÿì Í2Î2 íà Í2Î çà àñêîðáàòïåðîêñèäàçíèì øëÿõîì [10, 15].
Îêð³ì òîãî, âñòàíîâëåíà ö³ëà ðîäèíà ³çîôåðìåíò³â àñêîðáàòïåðîêñèäàçè,
ëîêàë³çîâàíèõ ó ñòðîì³ òà/àáî òèëàêî¿äàõ ñòðîìè [15]. Âðàõîâóþ÷è ö³ äàí³ ³
ðåçóëüòàòè íàøèõ åêñïåðèìåíò³â ùîäî ëîêàë³çàö³¿ òà ³íòåíñèâíîñò³ ôëóîðåñ-
öåíö³¿ êîìïëåêñó Ô²ÒÑ-ïåðîêñèäàçè, ìîæíà çðîáèòè äâà ïðèïóùåííÿ: ïå-
ðîêñèäàçà õëîðîïëàñò³â áåðå àêòèâíó ó÷àñòü ó ôóíêö³îíóâàíí³ ìåçîô³ëó íå-
çàëåæíî â³ä âîäíîãî ñòàòóñó âåõó; âì³ñò ïåðîêñèäàçè â îêðåìèõ õëîðîïëàñ-
òàõ ëèñòê³â ñóõîä³ëüíîãî åêîòîïó âåõó º íèæ÷èì ïîð³âíÿíî ç õëîðîïëàñòàìè
ëèñòê³â âîäíèõ ðîñëèí.
Ìè âñòàíîâèëè ï³äâèùåííÿ ³íòåíñèâíîñò³ ôëóîðåñöåíö³¿ Ô²ÒÑ-ïåðîê-
ñèäàçè ó çîâí³øí³õ îáîëîíêàõ îñíîâíèõ êë³òèí åï³äåðì³ñó âåðõíüî¿ åï³äåð-
ìè ³ â àíòèêë³íàëüíèõ îáîëîíêàõ íèæíüî¿ åï³äåðìè ï³ä âïëèâîì ïîì³ðíîãî
âîäíîãî äåô³öèòó, à òàêîæ çá³ëüøåííÿ ê³ëüêîñò³ êë³òèí ìåçîô³ëó, îáîëîíêè
ÿêèõ ì³ñòèëè ïåðîêñèäàçó. Îêð³ì öüîãî, ìè âèÿâèëè ïåðîêñèäàçó íå ïî âñüîìó
ïåðèìåòðó îáîëîíêè êë³òèí ìåçîô³ëó, à ëèøå ó ì³æêë³òèííèêàõ òà/àáî ó
«êóòî÷êàõ» îáîëîíîê — àíàëîã³÷íî òàêîìó ó êë³òèíàõ ìåçîô³ëó äåÿêèõ ðîñ-
ëèí [14]. ³äîìî, ùî ôóíêö³îíóâàííÿ ïåðîêñèäàçè îáîëîíîê êë³òèí, ÿê³ çà-
ê³í÷èëè ð³ñò ðîçòÿãîì, ïîâ’ÿçàíå ÿê ç ñèíòåçîì ë³ãí³íó øëÿõîì îêèñëåííÿ
ìîíîë³ãíîë³â [15, 16], òàê ³ ç³ çì³öíåííÿì îáîëîíêè çà ðàõóíîê ôîðìóâàííÿ
ñòàá³ë³çóþ÷èõ ïîïåðå÷íèõ çâ’ÿçê³â ì³æ ïîë³ñàõàðèäàìè òà á³ëêàìè [13]. Çâà-
æàþ÷è íà öå òà ðåçóëüòàòè á³îõ³ì³÷íîãî àíàë³çó âì³ñòó ë³ãí³íó ó ëèñòêàõ ñó-
õîä³ëüíî¿ ôîðìè âåõó, ìîæíà ïðèïóñòèòè, ùî îäí³ºþ ç ïðè÷èí çá³ëüøåííÿ
âì³ñòó ïåðîêñèäàçè â îáîëîíêàõ êë³òèí áóëî ïîñèëåííÿ ñèíòåçó â íèõ ë³ãí³íó
çà ïîì³ðíîãî âîäíîãî äåô³öèòó.
Ëîêàë³çàö³þ ïåðîêñèäàçè ó âàêóîëÿõ êë³òèí ìåçîô³ëó ëèñòê³â âåõó çà óìîâ
ïîì³ðíîãî âîäíîãî äåô³öèòó ìîæíà ïîÿñíèòè òèì, ùî ó ïðîöåñ³ îíòîãåíåçó
ðîñëèíè âàêóîë³ êë³òèí àêóìóëþþòü ôåíîëè, â îêèñëåíí³ ÿêèõ áåðå ó÷àñòü ïå-
ðîêñèäàçà [7, 12]. Íåùîäàâíî âñòàíîâëåíî, ùî ïðè çíåâîäíåíí³ Ramonda serbica
âì³ñò ôåíîë³â ó ëèñòêàõ çá³ëüøóºòüñÿ é çì³íþºòüñÿ àêòèâí³ñòü ôåíîëïåðîêñè-
äàçè [18]. À.Ì. Ñèëàºâà [9] òà ².Ì. Ñàâè÷ [6] âêàçóþòü íà îçíàêè ïðèñêîðåíî¿
ðóéíàö³¿ êë³òèí ìåçîô³ëó ëèñòê³â êóëüòóðíèõ òà äèêîðîñëèõ ðîñëèí çà 䳿 âîä-
íîãî äåô³öèòó. Î÷åâèäíî, â óìîâàõ ïîì³ðíîãî ïðèðîäíîãî âîäíîãî äåô³öèòó
ïðèñêîðåíå ñòàð³ííÿ ëèñòê³â ïîâ³òðÿíî-âîäíèõ ðîñëèí ñóïðîâîäæóºòüñÿ àêóìó-
ëÿö³ºþ ó âàêóîëÿõ ôåíîë³â, â îêèñëåíí³ ÿêèõ áåðå ó÷àñòü ïåðîêñèäàçà.
Âèñíîâêè
1. Âíàñë³äîê ïîì³ðíîãî âîäíîãî äåô³öèòó ï³äâèùóâàëàñÿ àêòèâí³ñòü ãâàÿêîë-
òà àñêîðáàòïåðîêñèäàçè, ïåðîêñèäàçà ç’ÿâëÿëàñÿ ó âàêóîëÿõ êë³òèí ìåçîô³ëó
ëèñòê³â S. latifolium.
ISSN 0372-4123. Ukr. Botan. Journ., 2006, vol. 63, ¹ 2270
2. ²ìóíîöèòîõ³ì³÷íèì ìåòîäîì íà ð³âí³ ñâ³òëîâî¿ ì³êðîñêîﳿ ïåðîêñèäàçà
âèÿâëåíà ó êë³òèííèõ îáîëîíêàõ åï³äåðì³ñó òà ìåçîô³ëó, à òàêîæ ó õëîðîï-
ëàñòàõ íåçàëåæíî â³ä âîäíîãî ñòàòóñó S. latifolium.
Àâòîð âèñëîâëþº ùèðó ïîäÿêó ÷ë.-êîð. ÍÀÍÓ ª.Ë. Êîðäþì çà êðèòè÷í³
çàóâàæåííÿ òà ö³íí³ ïîðàäè ïðè îáãîâîðåíí³ ðåçóëüòàò³â åêñïåðèìåíò³â.
1. Àëüáåðòñ Á., Áðåé Ä., Ëüþèñ Äæ. È äð. Ìîëåêóëÿðíàÿ áèîëîãèÿ êëåòêè. Òîì. 1. — Ì.:
Ìèð, 1994. — 515 ñ.
2. Àíäðååâà Â.À. Ôåðìåíò ïåðîêñèäàçà. — Ì.: Íàóêà, 1988. — 128 ñ.
3. Àðàñèìîâè÷ Â.Â., Åðìàêîâ À.È. Îïðåäåëåíèå ïîëèñàõàðèäîâ è ëèãíèíà // Ìåòîäû áèî-
õèì. èññëåä. ðàñò., èçä 3-å / Ïîä ðåä. À.È. Åðìàêîâà. — Ë.: Àãðîïðîìèçäàò, 1987. —
Ñ. 143—172.
4. Êîçåêî Ë.Å., Êîðäþì Å.Ë., Ãëàçêî Â.È. Èñïîëüçîâàíèå ìîëåêóëÿðíî-ãåíåòè÷åñêèõ ìàð-
êåðîâ äëÿ ñðàâíèòåëüíîé õàðàêòåðèñòèêè ñóõîäîëüíîãî è âîçäóøíî-âîäíîãî ýêîòèïîâ
Sium latifolium L. // Äîêë. ÀÍ Óêðàèíû. — 2003. — ¹ 1. — Ñ. 188—191.
5. Êîðäþì Å.Ë., Ñûòíèê Ê.Ì., Áàðàíåíêî Â.Â. è äð. Êëåòî÷íûå ìåõàíèçìû àäàïòàöèè ðà-
ñòåíèé ê íåáëàãîïðèÿòíûì âîçäåéñòâèÿì ýêîëîãè÷åñêèõ ôàêòîðîâ â åñòåñòâåííûõ óñ-
ëîâèÿõ. — Êèåâ: Íàóê. äóìêà, 2003. — 273 ñ.
6. Ñàâè÷ È.Ì. Ïåðîêñèäàçû — ñòðåññîâûå áåëêè ðàñòåíèé // Óñïåõè ñîâð. áèîë. — 1989. —
107, âûï. 3. — Ñ. 406—417.
7. Ñàäâàêàñîâà Ã.Ã., Êóíàåâà Ð.Ì. Íåêîòîðûå ôèçèêî-õèìè÷åñêèå è ôèçèîëîãè÷åñêèå ñâîé-
ñòâà ïåðîêñèäàçû ðàñòåíèé // Ôèçèîë. è áèîõèì. ðàñò. — 1987. — 19, ¹ 2. — Ñ. 107—119.
8. Ñèëàåâà À.Ì. Ñòðóêòóðà õëîðîïëàñòîâ è ôàêòîðû ñðåäû. — Êèåâ: Íàóê. äóìêà, 1978. —
202 ñ.
9. ßðîø Í.Ï., Åðìàêîâ À.È., Àðàñèìîâè÷ Â.Â. Îïðåäåëåíèå àêòèâíîñòè ôåðìåíòîâ // Ìå-
òîäû áèîõèì. èññëåä. ðàñò., èçä 3-å. / Ïîä ðåä. À.È. Åðìàêîâà. — Ë.: Àãðîïðîìèçäàò,
1987. — Ñ. 41—86.
10. Asada K. The water-water cycle in chloroplasts: scavenging of active oxygens and dissipation of
excess photons. // Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. — 1992. — 50. — P. 601—639.
11. Asada K., Takahasho M. Production and scavenging of active oxygen in photosynthesis //
Photoinhibition Eds. Kyle D., Osmond C., and Arntzen C. — Amsterdam: Elsevier Science
Publ., 1987. — P. 227—287.
12. Croteau R., Kutchan T.M., Lewis N.G. Natural Products (Secondary metabolites) // Biochem.
and Mol. Biol. of Plants / Eds. Buchanan B., Gruissem W., and Jones W.R. — 2000. —
P. 1250—1300.
13. Fry S.C. Feruloylated pectins from the primary cell wall: their structure and possible
functions // Planta. — 1983. — 157, N 2. — P. 111—123.
14. Harche Ì. Localization structurale et ultrastructurale d’activites peroxydasiques dans les parois
du mesophylle et des fibres en cours de lignification chez l’alfa (Stipa tenacissima) // Can. J.
Bot. — 1984. — 62, N 12. — Ð. 2644—2649.
15. Hiraga S., Sasaki K., Ito H. et al. A large family of class III plant peroxydases // Plant Cell
Physiol. — 2001. — 42, N 5. — Ð. 462—468.
16. Li Y., Kajita S., Kawai S., Katayama Y., Morohashi N. Down-regulation of an anionic
peroxidase in transgenic aspen and its effect on lignin characteristics // J. Plant Res. — 2003. —
116, N 3. — P. 175—182.
17. Monk L.S., Fagerstedl K.V., Crawford R.M. Superoxide dismutase as an anaerobic polypeptide.
A key factor in recovery from oxygen deprivation in Iris pseudacorus? // Plant Physiol. —
1987. — 85. — P. 1016—1020.
18. Sgherri C., Stevanonic B., Navari-Izzo F. Role of phenolics in the antioxydative status of the
resurrection plant Ramonda serbica during dehydration and rehydration // Physiol.
Plantarum. — 2004. — 122, N 4. — P. 478—485.
ISSN 0372-4123. Óêð. áîòàí. æóðí., 2006, ò. 63, ¹ 2 271
19. Wymer C.L., Beven A.F., Boundonck K., Lloyd C.W. Confocal microscopy of plant cells //
Methods in Molecular Biology. Confocal Microscopy / Ed. Paddock S.W. — Totowa, New
Jersey: Humana Press, 1999. — Vol. 122. — P. 103—129.
Ðåêîìåíäóº äî äðóêó Íàä³éøëà 08.06.2005
Ë.². Ìóñàòåíêî
Å.Ì. Íåäóõà
Èíñòèòóò áîòàíèêè èì. Í.Ã. Õîëîäíîãî
ÍÀÍ Óêðàèíû, ã. Êèåâ
ÈÌÌÓÍÍÎÖÈÒÎÕÈÌÈ×ÅÑÊÎÅ ÈÇÓ×ÅÍÈÅ
ÏÅÐÎÊÑÈÄÀÇÛ Â ËÈÑÒÜßÕ ÂÎÇÄÓØÍÎ-ÂÎÄÍÎÉ
È ÑÓÕÎÄÎËÜÍÎÉ ÔÎÐÌ SIUM LATIFOLIUM L.
Ïðîâåäåíî èçó÷åíèå àêòèâíîñòè è ëîêàëèçàöèè ïåðîêñèäàçû (ÅÑ. 1.11.1.7) â ëèñòüÿõ
âîçäóøíî-âîäíîé è ñóõîïóòíîé ôîðì Sium latifolium áèîõèìè÷åñêèìè è èììóííîöèòîõè-
ìè÷åñêèì ìåòîäàìè ñ èñïîëüçîâàíèåì ïåðîêñèäàçû, êîíúþãèðîâàííîé ñ ôëóîðåñöåèí-
èçîöèîíàòîì (ÔÈÒÑ). Èììóííîöèòîõèìè÷åñêîå èññëåäîâàíèå ïðîâîäèëè íà êîíôîêàëü-
íîì ëàçåðíîì ñêàíèðóþùåì ìèêðîñêîïå LSM 5 PASCAL (Zeiss, Germany). Ïåðîêñèäàçà
âûÿâëåíà â êëåòî÷íûõ îáîëî÷êàõ ýïèäåðìèñà è ìåçîôèëëà, à òàêæå â õëîðîïëàñòàõ ìåçî-
ôèëëà. Îáíàðóæåíî, ÷òî óìåðåííûé âîäíûé äåôèöèò âëèÿë íà óâåëè÷åíèå àêòèâíîñòè
ïåðîêñèäàçû, èçìåíåíèÿ â èíòåíñèâíîñòè ôëóîðåñöåíöèè êîìïëåêñà ÔÈÒÑ-ïåðîêñè-
äàçà â èññëåäîâàííûõ êëåòêàõ, ïîÿâëåíèå ïåðîêñèäàçû â âàêóîëÿõ êëåòîê ìåçîôèëëà è
óâåëè÷åíèå êîëè÷åñòâà êëåòîê ìåçîôèëëà, â êîòîðûõ âûÿâëåíà ïåðîêñèäàçà.
Ê ë þ ÷ å â û å ñ ë î â à: ïåðîêñèäàçà, ëèñòêè, Sium latifolium, êîíôîêàëüíàÿ ìèêðîñêîïèÿ
O.M. Nedukha
M.G. Kholodny Instituty of Botany,
National Academy of Sciences, Kyiv
AN IMMUNE CYTOCHEMICAL STUDY
OF PEROXYDASE IN LEAVES OF AERIAL-AQUATIC AND
TERRESTRIAL FORMS OF SIUM LATIFOLIUM L.
The study of peroxydase (ÅÑ. 1.11.1.7) activity and localization in cells of epidermis and mesophyll
in leaves of aerial-aquatic and terrestrial forms of Sium latifolium L. have been revealed using the
immune cytochemical method and biochemical methods. Peroxydase conjugated with fluorescein
isocyanate (FITC) was used in the experiments. The study was performed on a LSM 5 PASCAL
(Zeiss, Germany) confocal-laser microscope. It is established that peroxydase is localized both
in the walls of epidermis and mesophyll, and in mesophyll’s chloroplasts. A moderate water
deficit provoked the increase of peroxidase activity, the changes of intensity of fluorescence of
the FITC-peroxydase complex in the investigated cells, the presence of peroxydase in vacuoles
of mesophyll cells, and the increase of the number of mesophyll cells, in walls of which peroxidase
has been revealed.
K e y w o r d s: peroxydase, leaves, Sium latifolium, confocal-laser microscope
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-3317 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0372-4123 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-12-07T18:10:47Z |
| publishDate | 2006 |
| publisher | Інститут ботаніки ім. М. Г. Холодного НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Недуха, О.М. 2009-07-06T15:20:49Z 2009-07-06T15:20:49Z 2006 Імуноцитохімічне вивчення пероксидази у листках повітряно-водної та суходільної форм Sium latifolium L. / О.М. Недуха // Укр. ботан. журн. — 2006. — Т. 63, № 2. — С. 262-271. — Бібліогр.: 19 назв. — укр. 0372-4123 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/3317 Проведено изучение активности и локализации пероксидазы (ЕС. 1.11.1.7) в листьях воздушно-водной и сухопутной форм Sium latifolium биохимическими и иммунноцитохимическим методами с использованием пероксидазы, конъюгированной с флуоресцеинизоционатом (ФИТС). Иммунноцитохимическое исследование проводили на конфокальном лазерном сканирующем микроскопе LSM 5 PASCAL (Zeiss, Germany). Пероксидаза выявлена в клеточных оболочках эпидермиса и мезофилла, а также в хлоропластах мезофилла. Обнаружено, что умеренный водный дефицит влиял на увеличение активности пероксидазы, изменения в интенсивности флуоресценции комплекса ФИТС-пероксидаза в исследованных клетках, появление пероксидазы в вакуолях клеток мезофилла и увеличение количества клеток мезофилла, в которых выявлена пероксидаза. The study of peroxydase (ЕС. 1.11.1.7) activity and localization in cells of epidermis and mesophyll in leaves of aerial-aquatic and terrestrial forms of Sium latifolium L. have been revealed using the immune cytochemical method and biochemical methods. Peroxydase conjugated with fluorescein isocyanate (FITC) was used in the experiments. The study was performed on a LSM 5 PASCAL (Zeiss, Germany) confocal-laser microscope. It is established that peroxydase is localized both in the walls of epidermis and mesophyll, and in mesophyll’s chloroplasts. A moderate water deficit provoked the increase of peroxidase activity, the changes of intensity of fluorescence of the FITC-peroxydase complex in the investigated cells, the presence of peroxydase in vacuoles of mesophyll cells, and the increase of the number of mesophyll cells, in walls of which peroxidase has been revealed. uk Інститут ботаніки ім. М. Г. Холодного НАН України Фізіологія, біохімія та клітинна біологія Імуноцитохімічне вивчення пероксидази у листках повітряно-водної та суходільної форм Sium latifolium L. Иммунноцитохимическое изучение пероксидазы в листьях воздушно-водной и суходольной форм Sium latifolium L. An immune cytochemical study of peroxydase in leaves of aerial-aquatic and terrestrial forms of Sium latifolium L. Article published earlier |
| spellingShingle | Імуноцитохімічне вивчення пероксидази у листках повітряно-водної та суходільної форм Sium latifolium L. Недуха, О.М. Фізіологія, біохімія та клітинна біологія |
| title | Імуноцитохімічне вивчення пероксидази у листках повітряно-водної та суходільної форм Sium latifolium L. |
| title_alt | Иммунноцитохимическое изучение пероксидазы в листьях воздушно-водной и суходольной форм Sium latifolium L. An immune cytochemical study of peroxydase in leaves of aerial-aquatic and terrestrial forms of Sium latifolium L. |
| title_full | Імуноцитохімічне вивчення пероксидази у листках повітряно-водної та суходільної форм Sium latifolium L. |
| title_fullStr | Імуноцитохімічне вивчення пероксидази у листках повітряно-водної та суходільної форм Sium latifolium L. |
| title_full_unstemmed | Імуноцитохімічне вивчення пероксидази у листках повітряно-водної та суходільної форм Sium latifolium L. |
| title_short | Імуноцитохімічне вивчення пероксидази у листках повітряно-водної та суходільної форм Sium latifolium L. |
| title_sort | імуноцитохімічне вивчення пероксидази у листках повітряно-водної та суходільної форм sium latifolium l. |
| topic | Фізіологія, біохімія та клітинна біологія |
| topic_facet | Фізіологія, біохімія та клітинна біологія |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/3317 |
| work_keys_str_mv | AT neduhaom ímunocitohímíčnevivčennâperoksidaziulistkahpovítrânovodnoítasuhodílʹnoíformsiumlatifoliuml AT neduhaom immunnocitohimičeskoeizučenieperoksidazyvlistʹâhvozdušnovodnoiisuhodolʹnoiformsiumlatifoliuml AT neduhaom animmunecytochemicalstudyofperoxydaseinleavesofaerialaquaticandterrestrialformsofsiumlatifoliuml |