Моноклональні антитіла, які розпізнають нову антигенну детермінанту на D-димері фібрину людини
Отримано гібридому, яка продукує моноклональні антитіла (монАТ) І-1D, що належать до ізотипу Ig G1, KD для них з D-димером становить 5,0·10^−10 моль/л. За результатами непрямого та конкурентного тІФА, монАТ І-1D добре реагують з D-димером, незначною мірою з D-фрагментом та не реагують з фібриногеном...
Saved in:
| Published in: | Доповіді НАН України |
|---|---|
| Date: | 2011 |
| Main Authors: | , , , , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Ukrainian |
| Published: |
Видавничий дім "Академперіодика" НАН України
2011
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/37547 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Моноклональні антитіла, які розпізнають нову антигенну детермінанту на D-димері фібрину людини / О.П. Костюченко, І.М. Колеснікова, Л.М. Литвинова, Т.А. Кошель, Н.Е. Луговська, Е.В. Луговськой, С.В. Комісаренко // Доп. НАН України. — 2011. — № 5. — С. 171-175. — Бібліогр.: 14 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859470967333453824 |
|---|---|
| author | Костюченко, О.П. Колеснікова, І.М. Литвинова, Л.М. Кошель, Т.А. Луговська, Н.Е. Луговськой, Е.В. Комісаренко, С.В. |
| author_facet | Костюченко, О.П. Колеснікова, І.М. Литвинова, Л.М. Кошель, Т.А. Луговська, Н.Е. Луговськой, Е.В. Комісаренко, С.В. |
| citation_txt | Моноклональні антитіла, які розпізнають нову антигенну детермінанту на D-димері фібрину людини / О.П. Костюченко, І.М. Колеснікова, Л.М. Литвинова, Т.А. Кошель, Н.Е. Луговська, Е.В. Луговськой, С.В. Комісаренко // Доп. НАН України. — 2011. — № 5. — С. 171-175. — Бібліогр.: 14 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Доповіді НАН України |
| description | Отримано гібридому, яка продукує моноклональні антитіла (монАТ) І-1D, що належать до ізотипу Ig G1, KD для них з D-димером становить 5,0·10^−10 моль/л. За результатами непрямого та конкурентного тІФА, монАТ І-1D добре реагують з D-димером, незначною мірою з D-фрагментом та не реагують з фібриногеном, фібрином desAABB і з E3-фрагментом фібриногену. Імуноблотаналізом з відновленим D-димером виявлено, що епітоп монАТ І-1D розташований на β-поліпептидному ланцюзі (Bβ 134-461). У конкурентному тІФА монАТ І-1D та отримані нами раніше монАТ ІІІ-3В не конкурують за місце зв'язування на молекулі D-димеру, тому їх можна застосовувати для кількісного визначення D-димеру в плазмі крові людини за допомогою бісайтового тІФА, латексного та імунохроматографічного методів.
The hybridoma which produces monoclonal antibodies (mAbs) to D-dimer has been obtained. These mAbs react specifically with human D-dimer without cross-reaction with fibrinogen, fibrin, D- and E3-fragments. Immunoblot analysis with D-dimer showed that epitopes for these mAbs were situated in the peptide constituent of D-dimer fragment Bβ 134-461. It has also been shown that the D-dimer specific mAbs obtained can be used in sandwich ELISA as a tag-mAbs biotinilated with catch-mABs III-3B for the quantification of a D-dimer, which is one of the most impotant molecular markers of the thrombotic state, in human blood plasma.
|
| first_indexed | 2025-11-24T09:41:40Z |
| format | Article |
| fulltext |
оповiдi
НАЦIОНАЛЬНОЇ
АКАДЕМIЇ НАУК
УКРАЇНИ
5 • 2011
БIОХIМIЯ
УДК 577.112:612.115
© 2011
О.П. Костюченко, I.М. Колеснiкова, Л. М. Литвинова,
Т.А. Кошель, Н. Е. Луговська,
член-кореспондент НАН України Е. В. Луговськой,
академiк НАН України С. В. Комiсаренко
Моноклональнi антитiла, якi розпiзнають нову
антигенну детермiнанту на D-димерi фiбрину людини
Отримано гiбридому, яка продукує моноклональнi антитiла (монАТ) I-1D, що нале-
жать до iзотипу IgG1, KD для них з D-димером становить 5,0 · 10
−10 моль/л. За
результатами непрямого та конкурентного тIФА, монАТ I-1D добре реагують з D-ди-
мером, незначною мiрою з D-фрагментом та не реагують з фiбриногеном, фiбрином
desAABB i з E3-фрагментом фiбриногену. Iмуноблотаналiзом з вiдновленим D-диме-
ром виявлено, що епiтоп монАТ I-1D розташований на β-полiпептидному ланцюзi (Bβ
134-461). У конкурентному тIФА монАТ I-1D та отриманi нами ранiше монАТ III-3В
не конкурують за мiсце зв’язування на молекулi D-димеру, тому їх можна застосовува-
ти для кiлькiсного визначення D-димеру в плазмi кровi людини за допомогою бiсайтового
тIФА, латексного та iмунохроматографiчного методiв.
D-димер є молекулярним маркером деградацiї фiбрину, який формується при послiдовнiй
дiї трьох ензимiв: тромбiну, фактора ХIIIа та плазмiну. Тромбiн на першому етапi вiдщеп-
лює вiд фiбриногену фiбринопептиди А i В з утворенням фiбрину, який зв’язує фактор
XIII та плазмiноген, на подальшому — тромбiн активує фактор XIII з утворенням актив-
ної трансглютамiнази — фактора ХIIIа, який каталiзує формування ковалентних зв’язкiв
мiж D-доменами у полiмерному фiбринi. I нарештi, плазмiн розщеплює прошитий фiбрин iз
звiльненням продуктiв деградацiї фiбрину, зокрема D-димеру. D-димер може iснувати в про-
дуктах деградацiї фiбрину, якi походять з розчинного фiбрину, ранiше, нiж вiн утворить
тверду фазу, або пiсля того, як фiбринова сiтка буде деградована плазмiном [1]. Визна-
чення D-димеру використовується для ранньої дiагностики та монiторингу дисемiнованої
iнтраваскулярної коагуляцiї, тромбозу глибоких вен, емболiї легенiв, iнфаркту мiокарда
та iн. [2–5]. Вiдомо кiлька гiбридом, описаних в науковiй та патентнiй лiтературi, що проду-
кують моноклональнi антитiла (монАТ) до D-димеру, проте питання щодо удосконалення
та стандартизацiї тест-систем з їх використанням залишається невирiшеним [6, 7].
Метою дослiдження було отримання монАТ, що є специфiчними до D-димеру фiбри-
ну, якi б розпiзнавали iншу антигенну детермiнанту, нiж ранiше отриманi нами монАТ
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2011, №5 171
до D-димеру III-3В, i якi разом можна було б використати у бiсайтовому твердофазному
iмуноферментному аналiзi (тIФА) D-димеру в плазмi кровi [8].
Як антиген для отримання специфiчних монАТ був використаний D-димер у забуфер-
ному фiзiологiчному розчинi (ЗФР): 0,01 моль/л K+-фосфатний буфер з 0,14 моль/л NaCl,
pH 7,4 [9]. Мишам лiнiї BALB/c вводили в черевну порожнину 100 мкг D-димеру у виглядi
емульсiї перший раз з повним, а через три тижнi з неповним ад’ювантом Фрейнда. Че-
рез 10–14 дiб визначали титр специфiчних антитiл у сироватцi кровi iмунiзованих мишей
за допомогою тIФА. Через 4–6 тижнiв пiсля останньої iмунiзацiї i за 4 доби до проведен-
ня гiбридизацiї мишам вводили антиген у ЗФР. Для гiбридизацiї брали клiтини селезiнки
iмунiзованої мишi та клiтини мiєломи Х63-Аg8.653 (“Flow Laboratories”, Англiя). До осаду
сумiшi клiтин впродовж 1 хв додавали 1 мл 50% полiетиленглiколю з молекулярною масою
1450 Да (“Sigma”). Через 1 хв клiтини промивали поживним середовищем Хенкса методом
центрифугування при 1 тис. об/хв. Осад клiтин суспендували в селективному поживному
середовищi RPMI 1640, яке мiстило 10−4 моль/л гiпоксантину, 4·10−7 моль/л амiноптерину,
1,6 · 10−5 моль/л тимiдину (ГАТ), 20% ембрiональної сироватки великої рогатої худоби, та
розсiвали в 24-лунковi планшети. Через 10 дiб у лунках з клiтинами поживне середовище
з ГАТ замiнювали на поживне середовище з ГТ та проводили скринiнг гiбридом на наявнiсть
специфiчних антитiл, використовуючи тIФА. Як антигени в лунках планшета адсорбували
D-димер та фiбриноген. Позитивнi гiбридоми клонували методом кiнцевих розведень [10].
Частину клiтин заморожували за загальноприйнятим методом, а частину культивували для
нагромадження культуральної рiдини. МонАТ видiляли з культуральної рiдини методом
афiнної хроматографiї на сефарозi з iммобiлiзованим протеїном G (“Amersham”, Швецiя).
Зв’язанi з сорбентом монАТ елюювали 0,1 моль/л глiцин-НСl буфером, pH 3,0. Для запо-
бiгання процесу денатурацiї монАТ у кожну пробiрку додавали 1 моль/л розчин K2НРО4,
щоб зсунути pH до нейтрального. Наявнiсть бiлка у фракцiях визначали на спектрофото-
метрi CФ-26 при довжинi хвилi 280 нм. Дiалiз i концентрування розчину антитiл проводили
за допомогою ультрафiльтрацiї на концентраторi (“Amicon”, США). Клас та субклас монАТ
визначали за допомогою антисироваток до iзотипiв iмуноглобулiнiв мишi (“Sigma”, США).
Було отримано кiлька гiбридом, якi синтезували монАТ, що перехресно реагували
з фiбриногеном i D-димером, та одну гiбридому, яка продукувала специфiчнi монАТ до
D-димеру.
МонАТ є специфiчними до D-димеру I-1D, належать до iзотипу Ig G1. Визначено кон-
станту дисоцiацiї (KD) цих монАТ у реакцiї з D-димером за допомогою непрямого конкурен-
тного тIФА, як описано в роботах [11, 12]. KD для монАТ I-1D становить 5,0 ·10−10 моль/л.
Для попередньої локалiзацiї епiтопiв монАТ I-1D використовували бiлки та їх фрагмен-
ти: фiбриноген, фiбрин desAABB, D-димер фiбрину, D- й Е-фрагменти фiбриногену, що
отриманi в нашiй лабораторiї [13, 14]. Вказанi бiлки та фрагменти в концентрацiї 10 мкг/мл
адсорбували на полiстиролових планшетах впродовж 18 год при 4 ◦С в оптимальних умо-
вах для кожного антигену: для фiбриногену — 0,02 моль/л амонiй ацетатний буфер, pH 8,5;
для фiбрину цей самий буфер з додаванням сечовини до 3 моль/л, для D-димеру фiбрину,
D- й Е-фрагментiв фiбриногену — 0,02 моль/л бiкарбонатний буфер, pH 9,5. Пiсля вiдми-
вання бiлкiв, якi не адсорбувалися, в лунки планшета вносили очищенi монАТ. Зв’язанi
з антигеном монАТ виявляли за допомогою мiчених пероксидазою антитiл кроля до Ig G
мишi (“Sigma”, США). Результати тIФА для монАТ I-1D (рис. 1) свiдчать про те, що цi
атитiла добре реагують з D-димером, незначною мiрою з D-фрагментом та не реагують
з фiбриногеном, фiбрином desAABB i з Е3-фрагментом фiбриногену.
172 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2011, №5
Рис. 1. Зв’язування iммобiлiзованих на планшетi D-димеру (1 ), фiбриногену (2 ), фiбрину desAABB (3 ),
D- й Е3-фрагментiв (вiдповiдно 4 й 5 ) монАТ I-1D залежно вiд їх концентрацiї
Рис. 2. Iмуноблотаналiз з монАТ I-1D (1 ) та електрофореграма (10%-го ПААГ з 0,1%-м ДС-Na, кумасi
R-250) D-димеру, вiдновленого β-меркаптоетанолом (2 ), маркери молекулярної маси (3 )
За допомогою iмуноблотаналiзу з використанням D-димеру, вiдновленого β-меркапто-
етанолом, було показано, що монАТ I-1D реагують з трьох полiпептидних ланцюгiв D-ди-
меру лише з його β-ланцюгом. На рис. 2 наведено данi, якi свiдчать про появу неоанти-
генної детермiнанти на β-ланцюзi (Вβ134-461), яка утворюється при розщепленнi фiбрину
плазмiном.
Для того щоб з’ясувати, чи збiгаються епiтопи дослiджуваних монАТ та ранiше на-
ми отриманих монАТ III-3В до D-димеру, був проведений конкурентний тIФА. У лунках
планшета з адсорбованим D-димером змiшували розчин вiдповiдних конкуруючих монАТ
з рiзною концентрацiєю (об’єм 50 мкл) та однакову кiлькiсть бiотинильованих монАТ III-3B
(об’єм 50 мкл). У контрольнi лунки вносили лише бiотинильованi антитiла в такiй самiй кон-
центрацiї. Мiченi бiотином антитiла, якi зв’язалися з D-димером, виявляли за допомогою
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2011, №5 173
Рис. 3. Конкуренцiя монАТ I-1D (1 ) й III-3В (2 ) з бiотинильованими монАТ III-3В за мiсце зв’язування на
D-димерi
Рис. 4. Залежнiсть зв’язування монАТ III-3В (“catcth”-AT), iммобiлiзовних на планшетi, вiд концентрацiї
D-димеру в розчинi та бiотинильованих монАТ I-1D (“tag”-АТ) у бiсайтовому тIФА
кон’югата стрептавiдин-пероксидаза (“Sigma”, США). Показано, що монАТ I-1D та III-3В
не конкурують за мiсце зв’язування на Вβ-ланцюзi D-димеру (рис. 3).
Оскiльки отриманi дослiджуванi монАТ є специфiчними до D-димеру, нами було вико-
ристано їх для розробки iмуноферментного методу кiлькiсного визначення D-димеру в пла-
змi кровi людини, який є одним з головних маркерiв активацiйного стану системи зсiдання
кровi та фiбринолiзу. З цiєю метою в лунки планшета з адсорбованими монАТ III-3В вноси-
ли рiзнi концентрацiї D-димеру (для побудови калiбрувального графiка) та зразки плазми
кровi людини, що розведенi в 10 разiв ЗФР, який мiстив 0,1%-й твiн-20, 5%-е знежирене сухе
молоко та 0,38%-й цитрат натрiю. Для виявлення D-димеру, який зв’язався з адсорбова-
ними монАТ III-3В (“catcth”-антитiла), використовували дослiджуванi монАТ I-1D, мiченi
бiотином (“tag”-антитiла). Мiтку виявляли при додаваннi кон’югата стрептавiдину з перо-
ксидазою (“Sigma”, США) та субстратного розчину перекису водню з o-фенiлендiамiном. Як
видно з рис. 4, при застосуваннi цiєї пари специфiчних монАТ можна кiлькiсно визначати
необхiднi концентрацiї D-димеру в плазмi кровi людини за допомогою бiсайтового тIФА.
Пару цих антитiл також можна використовувати для напiвкiлькiсних (але бiльш швидких)
iмунохроматографiчного та латексного методiв визначення D-димеру в плазмi кровi.
174 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2011, №5
1. Adams S. S., Key N. S., Greenberg C. S. D-dimer antigen: current concepts and future prospects // Blood. –
2009. – 113, No 13. – P. 2878–2887.
2. Ota S., Wada H., Nobori T. et al. Diagnosis of deep vein thrombosis by plasma-soluble fibrin or D-dimer //
Am. J. Hematol. – 2005. – 79. – P. 274–280.
3. Ieko M., Nakabayashi T., Tarumi T. et al. Soluble fibrin monomer degradation products as a potentially
useful marker for hypercoagulable states with accelerated fibrinolysis // Clin. Chim. Acta. – 2007. – 386. –
P. 38–45.
4. Shibata T., Magari Y., Mizumaga S. et al. Significance of urinary fibrin/fibrinogen degradation product
(FDP) D-dimer measured by highly sensitive ELISA method with a new monoclonal antibody (D-D E72)
in various renal diseases // Nippon Jinzo Gakkai Shi. – 1994. – 36, No 7. – P. 805–812.
5. Jennings I., Woods T.A., Kitchen D.P. et al. Laboratory D-dimer measurement: improved agreement
between methods through calibration // Thromb. Haemost. – 2007. – 98, No 5. – P. 1127–1135.
6. Hart R., Bate I., Dinh D. et al. The detection of D-dimer in plasma by enzyme immunoassay: improved
discrimination is obtained with a more specific signal antibody // Blood Coagul. Fibrinol. – 1994. – 5,
No 2. – P. 227–232.
7. Gaffney P. J. Fibrin degradation products. A review of structures found in vitro and in vivo // Ann. N.Y.
Acad. Sci. – 2001. – 936. – P. 594–610.
8. Lugovskoy E.V., Kolesnikova I.N., Gritsenko P.G. et al. A neoantigenic determinant in the D-dimer
fragment of fibrin // Thromb. Res. – 2002. – 107. – P. 151–156.
9. Marder V. J., Budzynski A. Z., Barlov G.H. Comparison of the physiochemical properties of fragment D
derivatives of fibrinogen and fragment DD of cross-linked fibrin // Biochim. Biophys. Acta. – 1976. – 427,
No 2. – P. 1–14.
10. Kohler G., Milstein C. Continnuous of fused cells secreting antibody of predefined specificity // Nature. –
1975. – 256. – P. 495–497.
11. Friquet B., Chaffote A. F., Djavadi-Ochaniance Z., Goldberg M.E. Measurement of the true affinity constant
in solution of antigen-antibody complexes by enzyme-linked immunosorbent assay // J. Immunol. Meth. –
1985. – 77, No 2. – P. 305–319.
12. Stevens F.G. Modification of an ELISA-based procedure for affinity determination: correction necessary
for use with bivalent antibody // Mol. Immunol. – 1987. – 24, No 10. – P. 1055–1060.
13. Belitser V.A., Varetskaja T.V., Malneva G.V. Fibrinogen-fibrin interaction // Biochem. Biophys. Acta. –
1968. – 154. – P. 367–380.
14. Medved L.V., Novochatni V.V., Privalov P. L. The preparation and investigation of the structure organi-
zation of the active and nonactive form of D fragment of fibrinogen molecule // Mol. Biol. – 1982. – 16. –
P. 1195–1202.
Надiйшло до редакцiї 21.10.2010Iнститут бiохiмiї iм. О.В. Палладiна
НАН України, Київ
E.P. Kostiuchenco, I.N. Kolesnikova, L.M. Litvinova, T. A. Koshel,
N. E. Lugovskaya, Corresponding Member of the NAS of Ukraine E. V. Lugovskoy,
Academician of the NAS of Ukraine S.V. Komisarenko
Monoclonal antibodies that recognize new neoantigenic determinant of
D-dimer of human fibrin
The hybridoma which produces monoclonal antibodies (mAbs) to D-dimer has been obtained. These
mAbs react specifically with human D-dimer without cross-reaction with fibrinogen, fibrin, D- and
E3-fragments. Immunoblot analysis with D-dimer showed that epitopes for these mAbs were situated
in the peptide constituent of D-dimer fragment Bβ 134-461. It has also been shown that the D-dimer
specific mAbs obtained can be used in sandwich ELISA as a tag-mAbs biotinilated with catch-mABs
III-3B for the quantification of a D-dimer, which is one of the most impotant molecular markers
of the thrombotic state, in human blood plasma.
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2011, №5 175
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-37547 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 1025-6415 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-11-24T09:41:40Z |
| publishDate | 2011 |
| publisher | Видавничий дім "Академперіодика" НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Костюченко, О.П. Колеснікова, І.М. Литвинова, Л.М. Кошель, Т.А. Луговська, Н.Е. Луговськой, Е.В. Комісаренко, С.В. 2012-10-17T14:23:00Z 2012-10-17T14:23:00Z 2011 Моноклональні антитіла, які розпізнають нову антигенну детермінанту на D-димері фібрину людини / О.П. Костюченко, І.М. Колеснікова, Л.М. Литвинова, Т.А. Кошель, Н.Е. Луговська, Е.В. Луговськой, С.В. Комісаренко // Доп. НАН України. — 2011. — № 5. — С. 171-175. — Бібліогр.: 14 назв. — укр. 1025-6415 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/37547 577.112:612.115 Отримано гібридому, яка продукує моноклональні антитіла (монАТ) І-1D, що належать до ізотипу Ig G1, KD для них з D-димером становить 5,0·10^−10 моль/л. За результатами непрямого та конкурентного тІФА, монАТ І-1D добре реагують з D-димером, незначною мірою з D-фрагментом та не реагують з фібриногеном, фібрином desAABB і з E3-фрагментом фібриногену. Імуноблотаналізом з відновленим D-димером виявлено, що епітоп монАТ І-1D розташований на β-поліпептидному ланцюзі (Bβ 134-461). У конкурентному тІФА монАТ І-1D та отримані нами раніше монАТ ІІІ-3В не конкурують за місце зв'язування на молекулі D-димеру, тому їх можна застосовувати для кількісного визначення D-димеру в плазмі крові людини за допомогою бісайтового тІФА, латексного та імунохроматографічного методів. The hybridoma which produces monoclonal antibodies (mAbs) to D-dimer has been obtained. These mAbs react specifically with human D-dimer without cross-reaction with fibrinogen, fibrin, D- and E3-fragments. Immunoblot analysis with D-dimer showed that epitopes for these mAbs were situated in the peptide constituent of D-dimer fragment Bβ 134-461. It has also been shown that the D-dimer specific mAbs obtained can be used in sandwich ELISA as a tag-mAbs biotinilated with catch-mABs III-3B for the quantification of a D-dimer, which is one of the most impotant molecular markers of the thrombotic state, in human blood plasma. uk Видавничий дім "Академперіодика" НАН України Доповіді НАН України Біохімія Моноклональні антитіла, які розпізнають нову антигенну детермінанту на D-димері фібрину людини Monoclonal antibodies that recognize new neoantigenic determinant of D-dimer of human fibrin Article published earlier |
| spellingShingle | Моноклональні антитіла, які розпізнають нову антигенну детермінанту на D-димері фібрину людини Костюченко, О.П. Колеснікова, І.М. Литвинова, Л.М. Кошель, Т.А. Луговська, Н.Е. Луговськой, Е.В. Комісаренко, С.В. Біохімія |
| title | Моноклональні антитіла, які розпізнають нову антигенну детермінанту на D-димері фібрину людини |
| title_alt | Monoclonal antibodies that recognize new neoantigenic determinant of D-dimer of human fibrin |
| title_full | Моноклональні антитіла, які розпізнають нову антигенну детермінанту на D-димері фібрину людини |
| title_fullStr | Моноклональні антитіла, які розпізнають нову антигенну детермінанту на D-димері фібрину людини |
| title_full_unstemmed | Моноклональні антитіла, які розпізнають нову антигенну детермінанту на D-димері фібрину людини |
| title_short | Моноклональні антитіла, які розпізнають нову антигенну детермінанту на D-димері фібрину людини |
| title_sort | моноклональні антитіла, які розпізнають нову антигенну детермінанту на d-димері фібрину людини |
| topic | Біохімія |
| topic_facet | Біохімія |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/37547 |
| work_keys_str_mv | AT kostûčenkoop monoklonalʹníantitílaâkírozpíznaûtʹnovuantigennudetermínantunaddimerífíbrinulûdini AT kolesníkovaím monoklonalʹníantitílaâkírozpíznaûtʹnovuantigennudetermínantunaddimerífíbrinulûdini AT litvinovalm monoklonalʹníantitílaâkírozpíznaûtʹnovuantigennudetermínantunaddimerífíbrinulûdini AT košelʹta monoklonalʹníantitílaâkírozpíznaûtʹnovuantigennudetermínantunaddimerífíbrinulûdini AT lugovsʹkane monoklonalʹníantitílaâkírozpíznaûtʹnovuantigennudetermínantunaddimerífíbrinulûdini AT lugovsʹkoiev monoklonalʹníantitílaâkírozpíznaûtʹnovuantigennudetermínantunaddimerífíbrinulûdini AT komísarenkosv monoklonalʹníantitílaâkírozpíznaûtʹnovuantigennudetermínantunaddimerífíbrinulûdini AT kostûčenkoop monoclonalantibodiesthatrecognizenewneoantigenicdeterminantofddimerofhumanfibrin AT kolesníkovaím monoclonalantibodiesthatrecognizenewneoantigenicdeterminantofddimerofhumanfibrin AT litvinovalm monoclonalantibodiesthatrecognizenewneoantigenicdeterminantofddimerofhumanfibrin AT košelʹta monoclonalantibodiesthatrecognizenewneoantigenicdeterminantofddimerofhumanfibrin AT lugovsʹkane monoclonalantibodiesthatrecognizenewneoantigenicdeterminantofddimerofhumanfibrin AT lugovsʹkoiev monoclonalantibodiesthatrecognizenewneoantigenicdeterminantofddimerofhumanfibrin AT komísarenkosv monoclonalantibodiesthatrecognizenewneoantigenicdeterminantofddimerofhumanfibrin |