Особенности действия регуляторов роста на експрессию генов в клетках зародышей семян в раннем постэмбриогенезе

С помощью α-аманитина — специфического ингибитора синтеза мРНК и актиномицина D, блокирующего преимущественно синтез рРНК, показано, что до завершения лаг-фазы прорастания семян фасоли (18 ч) на фоне подавления синтеза мРНК и рРНК после их набухания (с 6 ч) включаются и активизируются во времени в к...

Full description

Saved in:

Bibliographic Details
Date:	2008
Main Authors:	Цыганкова, В.А., Мусатенко, Л.И., Галкина, Л.А., Галкин, А.П., Пономаренко, С.П., Сытник, К.М., Икин, Д.Е.
Format:	Article
Language:	Russian
Published:	Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України 2008
Subjects:	Експериментальні статті
Online Access:	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/4056
Tags:	Add Tag No Tags, Be the first to tag this record!
Journal Title:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Cite this:	Особенности действия регуляторов роста на експрессию генов в клетках зародышей семян в раннем постэмбриогенезе / В. А. Цыганкова, Л. И. Мусатенко, Л. А. Галкина, А. П. Галкин, С. П. Пономаренко, К. М. Сытник, Д. Е. Икин, // Біотехнологія. — 2008. — Т. 1, № 2. — С. 81-92. — Бібліогр.: 33 назв. — рос.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

_version_	1859792892795551744
author	Цыганкова, В.А. Мусатенко, Л.И. Галкина, Л.А. Галкин, А.П. Пономаренко, С.П. Сытник, К.М. Икин, Д.Е.
author_facet	Цыганкова, В.А. Мусатенко, Л.И. Галкина, Л.А. Галкин, А.П. Пономаренко, С.П. Сытник, К.М. Икин, Д.Е.
citation_txt	Особенности действия регуляторов роста на експрессию генов в клетках зародышей семян в раннем постэмбриогенезе / В. А. Цыганкова, Л. И. Мусатенко, Л. А. Галкина, А. П. Галкин, С. П. Пономаренко, К. М. Сытник, Д. Е. Икин, // Біотехнологія. — 2008. — Т. 1, № 2. — С. 81-92. — Бібліогр.: 33 назв. — рос.
collection	DSpace DC
description	С помощью α-аманитина — специфического ингибитора синтеза мРНК и актиномицина D, блокирующего преимущественно синтез рРНК, показано, что до завершения лаг-фазы прорастания семян фасоли (18 ч) на фоне подавления синтеза мРНК и рРНК после их набухания (с 6 ч) включаются и активизируются во времени в клетках зародышевой оси процессы биосинтеза белка. На основании этого сделан вывод о том, что в инициацию биосинтеза белков в самый ранний период постэмбриогенеза вовлекаются отложенные в запас в позднем эмбриогенезе транскрипты мРНК и рРНК, а перед проклевыванием корешка (после 18 ч) в биосинтез белка включаются и новосинтезированные мРНК и рРНК. С помощью афидиколина, избирательно подавляющего репликативный синтез ДНК, установлено, что возрастающие потребности в продуктах экспрессии генов (белках) на стартовых стадиях постэмбриогенеза обеспечиваются амплификацией и структурных, и рибосомных генов. Стимулирующее действие регуляторов роста растений связано не с дополнительным увеличением числа копий генов, а с активацией генов путем усиления функций промоторных и энхансерных регуляторных последовательностей генов через активацию трансфакторов белковой природы. Сформулирована концепция действия экзогенных регуляторов роста растений на генетическом уровне. За допомогою α-аманітину — специфічного інгібітору синтезу мРНК і АD, що блокує переважно синтез рРНК, показано, що до завершення лаг фази проростання насіння квасолі (18 год) на тлі пригнічення синтезу мРНК і рРНК, після їх набухання (із 6-ї год), включаються й активізуються у часі в клітинах зародкової осі процеси біосинтезу білка. На цій підставі нами зроблено висновок, що в ініціації біосинтезу білків у найраніший період постембріогенезу беруть участь відкладені в запас у пізньому ембріогенезі транскрипти мРНК і рРНК, а вже після 18-ї год у біосинтез білка включаються й новосинтезовані мРНК і рРНК. За допомогою афідиколіну, що вибірково пригнічує реплікативний синтез ДНК, встановлено, що зростаючі потреби в продуктах експресії генів (білках) на стартових стадіях постембріогенезу забезпечуються ампліфікацією і структурних, і рибосомних генів. Стимулювальна дія регуляторів росту рослин пов’язана не з додатковим збільшенням числа копій генів, а з активацією генів шляхом посилення функцій промоторних і енхансерних регуляторних послідовностей генів, через активацію трансфакторів білкової природи. Сформульовано концепцію щодо механізмів дії екзогенних регуляторів ростурослин на генетичному рівні. α-Amanitin (a specific inhibitor of mRNA synthesis) and Actinomycin D (that blocks primarily rRNA synthesis) were used to inhibit mRNA and rRNA synthesis in sprouting bean seeds. It was demonstrated that prior to completion of the bean seed germination lag phase (18 hours) with inhibited mRNA and rRNA synthesis following seed upswelling (after 6 hours),protein biosynthesis processes are triggered and their duration actively increases in embryonic axis cells. Based on the above, we came to the conclusion that during the earliest stage of postembryogenesis, mRNA and rRNA transcripts stocked during late embryogenesis are involved in the initiation of protein biosynthesis; and newly synthesized mRNA and rRNA are also involved in the biosynthesis before root emergence (after 18 hours). Aphidicolin that selectively suppresses DNA replication helped to determine that increasing needs in gene expression products (proteins) at early stages of postembryogenesis are satisfied by amplification of both structural and ribosomal genes. Stimulating effect of plant growth regulators is not related to additional amount of gene copies, but rather to gene activation through intensification of promoter and enhancer functions of gene regulatory sequences via activation of protein transfactors. The concept of exogenous plant growth regulators behavior at genetic level has been formulated.
first_indexed	2025-12-02T12:09:58Z
format	Article
fulltext	Експериментальні статті 81 времени синтез РНК. Имеются также сведе� ния об активации в раннем постэмбриогене� зе в зародышах растений синтеза не только РНК, но и белков, и ДНК [3]. Примерно в те же годы другими автора� ми на семенах различных растений было ус� тановлено, что в ранний предростовой пост� эмбриональный период биосинтезу мРНК предшествует биосинтез белка, причем его скорость и спектр синтезированных белков находятся в прямой зависимости от гидрата� ционных способностей зародышей (оводнен� ности семян) и продолжительности жизни резервных мРНК. В этих работах был сделан вывод об участии в инициации белкового синтеза предобразованных (отложенных в запас в позднем эмбриогенезе) мРНК. Воп� рос о соотносительной роли резервных и но� восинтезированных рРНК в инициации био� синтеза белка в раннем постэмбриогенезе по сравнению с мРНК менее изучен. Приведенные кратко данные подробно рассмотрены в со� держательной монографии Н. В. Обручевой Широкое применение в биотехнологии растений физиологически активных соеди� нений требует изучения механизмов их дей� ствия с целью эффективного использования без нанесения ущерба организму растений и окружающей среде. В своих исследованиях мы акцентируем внимание на изучении влияния регуляторов роста на генетические процессы в клетках зародышей семян, поскольку важно знать, в каком направлении под влиянием физио� логически активных соединений пойдет раз� витие организма растений (ускоренном нор� мальном или же с отклонениями) начиная с раннего этапа его онтогенеза (постэмбрио� генеза). В наших работах [1, 2] было установлено, что уже на начальной стадии постэмбриоге� неза, в первые сутки прорастания семян фа� соли (т. е. в начале темновой фазы — фазы набухания и выхода семян из состояния фи� зиологического покоя) в клетках зародыше� вой оси запускается и быстро возрастает во УДК 631.811.98 ОСОБЕННОСТИ ДЕЙСТВИЯ РЕГУЛЯТОРОВ РОСТАОСОБЕННОСТИ ДЕЙСТВИЯ РЕГУЛЯТОРОВ РОСТА НА ЭКСПРЕССИЮ ГЕНОВ НА ЭКСПРЕССИЮ ГЕНОВ В КЛЕТКАХ ЗАРОДЫШЕЙ СЕМЯН В КЛЕТКАХ ЗАРОДЫШЕЙ СЕМЯН В РАННЕМ ПОСТЭМБРИОГЕНЕЗЕВ РАННЕМ ПОСТЭМБРИОГЕНЕЗЕ В. А. Цыганкова1 1Институт биоорганической химии и нефтехимии НАН Украины, Киев Л. И. Мусатенко2 Е)mail: sponom @ukr.net Л. А. Галкина1 А. П. Галкин1 2Институт ботаники им. Н. Г.Холодного НАН Украины, Киев С. П. Пономаренко1 К. М. Сытник2 Д. Е. Икин3 3Тихоокеанская северо�западная лаборатория, США E)mail: david.eakin @pnl.gov Ключевые слова: зародышевая ось, синтез РНК, амплификация генов, регуляторы роста. С помощью α�аманитина — специфического ингибитора синтеза мРНК и актиномицина D, блокирующего преимущественно синтез рРНК, показано, что до завершения лаг�фазы прорастания семян фасоли (18 ч) на фо� не подавления синтеза мРНК и рРНК после их набухания (с 6 ч) включаются и активизируются во времени в клетках зародышевой оси процессы биосинтеза белка. На основании этого сделан вывод о том, что в инициа� цию биосинтеза белков в самый ранний период постэмбриогенеза вовлекаются отложенные в запас в позднем эмбриогенезе транскрипты мРНК и рРНК, а перед проклевыванием корешка (после 18 ч) в биосинтез белка включаются и новосинтезированные мРНК и рРНК. С помощью афидиколина, избирательно подавляющего репликативный синтез ДНК, установлено, что воз� растающие потребности в продуктах экспрессии генов (белках) на стартовых стадиях постэмбриогенеза обеспе� чиваются амплификацией и структурных, и рибосомных генов. Стимулирующее действие регуляторов роста растений связано не с дополнительным увеличением числа копий генов, а с активацией генов путем усиления функций промоторных и энхансерных регуляторных последовательностей генов через активацию трансфакто� ров белковой природы. Сформулирована концепция действия экзогенных регуляторов роста растений на генетическом уровне. БІОТЕХНОЛОГІЯ, Т. 1, №2, 2008 82 3. Афидиколин (АФ) фирмы Fluka (Швей� цария), избирательно выключающий ката� лизируемый ДНК�полимеразой α�реплика� тивный синтез ДНК, но не затрагивающий процесса амплификации ДНК [16;17]. Простерилизованные раствором КМnО4 семена фасоли проращивали на водных растворах 0,02%�го α�Ам либо 0,028%�го АD (опыты), а контроль — на дистиллирован� ной воде. При изучении синтезов РНК и бел� ков в среды также добавляли соответственно 3Н�уридин и С14�лейцин (фирмы «Изотоп», Россия). В серии опытов по гибридизации ДНК�РНК в среду вносили Na2H33PO4 (фир� мы Amersham, Великобритания) с высокой удельной активностью (370 МВq/ml). С целью увеличения проницаемости мембран клеток для проникновения в них указанных инги� биторов в средах для инкубации присутство� вал также 0,5%�й диметилсульфоксид. Каждый опыт проведен в трех повторениях. После инкубации отпрепарированные от семядолей зародышевые оси использовали для выделения из них препаратов цитоплаз� матической РНК, суммарных белков и ядер� ной ДНК. Разделение цитоплазматической РНК на поли�А+РНК (т.е. мРНК) и поли� А–РНК (т.е. в основном рРНК) проводили со� ответственно описанному ранее способу [11]. Выделенные препараты ДНК из зародыше� вых осей сухих семян (контроль) и из семян через разные сроки их проращивания (опыт) предварительно денатурировали, фиксиро� вали на нитроцеллюлозных фильтрах и под� вергали гибридизации (дот�блоттингу) с на� сыщающими в растворе концентрациями 33Р�РНК (гибридизационными зондами мРНК и рРНК), как описано в руководствах [18,19]. Радиоактивность проб определяли по [1,2]. Результаты и обсуждение На рис. 1 представлена увеличенная в раз� мере зародышевая ось семени фасоли, в кото� рой различают (сверху вниз) первичные лист, эпикотиль, гипокотиль (стебель) и ко� рень. Согласно нашим исследованиям, пре� обладающую часть зародышевой оси состав� ляет гипокотиль (3,5–4,0 мм), размер корневой меристемы с корневым чехликом — 1,5 мм. Формирование проростка при про� растании длится около трех суток. Период набухания семени — около 6 ч (для изолиро� ванной из семени оси около 1 ч),что связано с интенсивностью поглощения воды: больше всего ее поглощает гипокотиль (53%), мень� ше — семядоли (46%), первичные листья [4]. Структуре и физиологической роли за� пасных мРНК посвящена также книга М. А. Айт� хожина и Б. К. Искакова [5]. Однако неизученным остался вопрос: происходит ли наблюдаемое, резко нараста� ющее во времени, увеличение синтезов мРНК и рРНК в ранний период постэмбриогенеза вследствие усиления активности генов или же за счет увеличения числа их копий путем амплификации? Основанием для постанов� ки такого вопроса служат данные об обнару� жении синтеза ДНК в зародышах растений в раннем постэмбриогенезе [3], амплифика� ции структурных и рибосомных генов в раз� ных эукариотических организмах на ран� них этапах их развития [6–10], а также тот факт, что по крайней мере в первые сутки прорастания семян фасоли рост зародыше� вой оси осуществляется не за счет клеточного деления (т.е. увеличения числа клеток, свя� занного с репликацией ДНК), а вследствие растяжения клеток (удлинения) ее гипоко� тиля, при котором репликативный синтез ДНК не происходит [1, 2, 11]. Основываясь на результатах наших ис� следований и данных литературы, в настоя� щей работе мы поставили цель провести комплекс исследований соотносительной роли предсуществующих и новосинтезиро� ванных мРНК и рРНК в процессах биосин� теза белка на ранних этапах постэмбриоге� неза, а также механизмов увеличения во времени уровня экспрессии генов в процессе роста и развития зародышей и, используя ана� логичные методические подходы, попытаться определить, каким образом регуляторы роста действуют на генетическом уровне, ускоряя рост и развитие зародышевого организма. Материалы и методы В опытах использовали семена спарже� вой фасоли сорта Белозерная, анатомо�мор� фологическая и физиолого�биохимическая характеристики роста и развития зародыше� вой оси которых нами были подробно изучены [6]. В качестве «инструментов» для изучения поставленных вопросов в работе применяли: 1. α�Аманитин (α�Ам) фирмы Sigma Aldrich (США), избирательно выключающий экстраядрышковый синтез РНК (т.е. синтез мРНК) [12,13, 14]; 2. Актиномицин D (АD) фирмы Sigma Aldrich (США), выключающий при малых кон� центрациях преимущественно синтез РНК в ядрышках (т.е. синтез рРНК), но не инги� бирующий синтез и выход в цитоплазму мРНК [15]; Експериментальні статті 83 рез 48 ч. Установлена определенная после� довательность инициации ростовых процес� сов, отражающая особенности развития отдельных органов зародышевой оси: гипо� котиль, зародышевый корень, лист. Приведенные результаты послужили ос� новой для осмысливания полученных нами данных по синтезу РНК, белков и ДНК. Из рис. 2, А явствует, что практически до 12 ч после начала прорастания семян фасо� ли в клетках зародышевой оси не происхо� дит синтез мРНК, который начинается толь� ко с 18 ч и непрерывно нарастает вплоть до 36 ч инкубации (рис. 2, А, кривая 1). α�Ам вызывает практически полное подавление синтеза мРНК на протяжении всего периода инкубации семян растений (рис. 2, А, кри� вая 2), что вполне согласуется с данными других авторов о полном подавлении синте� за мРНК α�Ам и в клетках других организ� мов [12, 13]. В то же время нами обнаружено частичное, видимо неспецифическое, инги� бирование синтеза мРНК АD (рис. 2, А, кри� вая 3), хотя по данным литературы [15] он избирательно ингибирует только синтез рРНК и не затрагивает (при используемой нами его концентрации) синтеза и перехода в цитоплазму мРНК. Все�таки, очевидно, АD обладает меньшей избирательной специ� фичностью по сравнению с α�Ам как ингиби� тор синтеза какого�либо одного класса РНК. Подобная картина временной кинетики синтеза мРНК получена нами при изучении синтеза рРНК (рис. 2, Б): до 12 ч отсутствие синтеза, включение синтеза к 18 ч и даль� нейший резко возрастающий подъем синте� за до 36 ч инкубации семян (рис. 2, Б, кри� вая 1). По чувствительности синтеза рРНК к ингибиторам α�Ам и АD наблюдается про� тивоположная картина по сравнению с мРНК: слабое, очевидно также неспецифическое, ингибирование α�Ам мРНК (рис. 2 Б, кри� вая 2) и почти полное ингибирование АD синтеза рРНК (рис. 2, Б, кривая 3). В свете полученных нами данных по син� тезу мРНК и рРНК весьма информативным представляется сопоставление этих данных с данными по синтезу белка (рис. 2, В). Уже с 6 ч в клетках зародышевой оси начинается синтез белка и через каждые 6 ч (12 ч, 18 ч и т. д.) уровень биосинтеза белка возрастает примерно вдвое (рис. 2, В, кривая 1), притом, что фактически только с 18 ч начинается синтез как мРНК, так и рРНК. Интересно и то, что до этого времени практически не наблю� дается влияние на синтез белка ни α�Ам, ни АD (рис. 2, В, кривые 2 и 3), т. е. синтез бел� ка в этот промежуток времени происходит, (47%) и зародышевый корень (39%). Даль� нейшие 12–13 ч (лаг�фаза) масса и длина за� родыша почти не изменяются. Следующий период характеризуется увеличением раз� меров и массы зародыша и завершается проклевыванием семени (выход корешка за пределы семенной оболочки). Но если первый этап, когда поступление воды происходит по физическим законам, свойствен как жи� вым, так и нежизнеспособным семенам, то третья фаза присуща только живым и связана с общим возрастанием метаболизма семени. Следует подчеркнуть, что проклевыва� ние семени (24 ч) происходит вследствие растяжения клеток гипокотиля, которое на� чинается в его базальной части — у корня и постепенно перемещается к семядольному узлу. При этом клетки не растягиваются сразу до их окончательной длины, а наблю� дается несколько периодов наиболее энер� гичного роста. Спецификой роста гипокотиля является ограниченный, заканчивающийся к 8�м сут после замачивания рост, обеспечи� вающий выполнение основной функции — выноса семядолей со стеблевой почечкой из почвы. В корневой меристеме первые митозы об� наруживаются, как правило, в уже проклю� нувшихся семенах, т. е. рост корня начина� ется спустя примерно сутки (через 25–28 ч) после замачивания практически одновре� менной инициацией деления и растяжения. В первые 24 ч длина клеток и их количество в ряду не изменяются, а размеры зон (мерис� тема — 0,5 мм и растяжение — 1 мм) и соот� ветственно размер корня (около 1,5 мм), свойственные сухому семени, остаются пос� тоянными. Через 32 ч длина зон меристемы и растяжения увеличивается вдвое. Зона зрелых клеток формируется примерно через 36 ч и составляет 0,8 мм. К 44� и 72�му ч про� растания стабилизируется размер соответ� ственно зон меристемы (1,4 мм) и растяже� ния (5 мм). В стеблевой меристеме клетки начинают делиться лишь через 36–40 ч, а в листе — че� Рис. 1. Строение зародышевой оси семян фасоли: а — первичный лист, б — эпико� тиль, в — первичный стебель (гипокотиль); г — зародыше� вый корень БІОТЕХНОЛОГІЯ, Т. 1, №2, 2008 84 Таким образом, данные наших исследо� ваний четко показали, что в ранний пере� ходный период от состояния покоя к актив� ному росту и развитию при прорастании семени для инициации ростовых процессов используются отложенные в запас в позднем эмбриогенезе специфические продукты экс� прессии генов (транскрипты в виде мРНК и рРНК), необходимые для экстренной на� работки какого�то количества специфичес� ких белков, без которых невозможно было бы дальнейшее развитие (приведение в дей� ствие) в клетках генетической программы роста и развития зародышевого организма. Синтез и отложение в запас в клетках за� родышевой оси этих транскриптов при вхождении семян в состояние физиологи� ческого покоя в эмбриогенезе осуществляют� ся, очевидно, с целью обеспечения началь� ных этапов генетического контроля выхода зародышей из «спящего» в физиологически вероятно, на предсуществующих, запасен� ных мРНК и рРНК). Этот вывод согласуется и с данными о том, что существуют коротко� живущие и долгоживущие мРНК, период полужизни которых исчисляется от нес� кольких минут до нескольких часов и даже суток [7, 14, 20–22]. Судя по замедлению дальнейшего подъе� ма после 18 ч биосинтеза белка по отноше� нию к контролю под влиянием α�Ам и АD, можно констатировать, что по крайней мере с 24 ч и далее в синтезе белка участвуют уже и новосинтезированные мРНК и рРНК, син� тез которых подавляется соответственно α�Ам и АD. Следует также отметить, что длитель� ное торможение биосинтеза белка, опосредо� ванное угнетением синтезов мРНК и рРНК, приводит к аномалиям в росте и развитии зародышевой оси, что проявляется в замед� лении роста гипокотиля примерно в 4 раза. Рис. 2. Кинетика включения 3Н+уридина в поли+А+РНК (А), поли+А+РНК (Б) и 14С+лейцина в белки (В) клеток зародышевой оси семян фасоли: 1 — контроль; 2 — в присутствии α�АМ; 3 — в присутствии АD; дот�блоттинг (Г) препаратов 33Р�поли�А+РНК (столбик 1) и 33Р�поли�А�РНК (столбик 2), полученных из зародышевой оси через 24 ч после начала прорастания семян фасоли, с препаратами ДНК, выделенными из зародышевых осей соответственно из сухих семян (контроль) и через 6; 12; 18; 24; 30 и 36 ч после начала прорастания семян (опыт) имп/мин/мг РНК · 10–3 имп/мин/мг РНК · 10–4 имп/мин/мг белка · 10–3 имп/мин/20 мг РНК · 10–3 А Б ГВ 2 3 1 2 1 3 3 2 1 1 1 11 1 1 1 2 22 2 2 2 2 Експериментальні статті 85 уровня экспрессии генов в зародышах расте� ний в ранний постэмбриональный период. По мере быстрого истощения резервов (отло� женных в запас траскриптов узкого назначе� ния — для запуска первоначального синтеза белков) включаются генетически запрог� раммированные механизмы последующей быстрой наработки нового или дополнитель� ного массива продуктов экспрессии генов. К числу таких механизмов относят усиле� ние активности генов и увеличение числа их копий (амплификацию). Как показано [7–10], последний механизм часто используется в период развития зародышей многих эука� риотических организмов. По аналогии с этим мы предположили, что на начальном этапе развития зародыше� вой оси фасоли, когда еще не включены реп� ликативные процессы, относящиеся к про� цессам увеличения численности клеток и направляемые на создание дифференци� рованных и специализированных клеток и органов, возможно, используется меха� низм амплификации генов для экстренной наработки продуктов экспрессии генов. К тому же на начальном этапе постэмбрио� генеза рост зародышевой оси, как уже отме� чалось, происходит не за счет увеличения числа клеток, а вследствие растяжения кле� ток гипокотиля [1,2]. Для проверки этого предположения мы использовали афидико� лин, который выключает репликативный синтез (если таковой имеется) и не влияет на процесс амплификации генов [16,17]. Рис. 2, Г свидетельствует о резком воз� растании во времени в геномной ДНК после� довательностей, гибридизирующих с 33Р�гиб� ридизационными зондами мРНК и, особенно, с рРНК (столбики 1, 2). Афидиколин, по крайней мере до 30 ч, не снижает увеличе� ния генетического материала, гибридизую� щегося с продуктами транскрипции (во всех случаях для гибридизационного анализа ис� пользовали 33Р�транскрипты, выделенные из зародышевой оси на 24�й ч прорастания семян). И только спустя 30 ч после начала прорастания семян, судя по диаграмме, включаются механизмы репликации ДНК, ингибируемые афидиколином. В противопо� ложность этому, ДНК, полученная из исход� ных сухих семян (как видно из рис. 2, Г) содержит относительно меньше копий пос� ледовательностей, гибридизующихся с 33Р� РНК�зондами. Эти опыты четко показали, что в зароды� шах растений, как и в других эукариотичес� ких зародышах, на начальных этапах развития используются механизмы амплификации активное состояние и поступательного раз� вертывания независимой уже от генетических факторов материнского организма автоном� ной генетической программы постэмбрио� нального роста и развития зародышей с пос� тепенным формированием из них растений со специализированными высокодифферен� цированными клетками, органами и тканями. С помощью α�Ам исследован также соот� носительный вклад пула запасенных и ново� синтезированных мРНК в прорастание се� мян Arabidopsis и соответственно в процессы роста и развития зародышей этих растений [14]. Показано, что даже при избыточных дозах α�Ам происходит выход корешка на� ружу из семени, но дальнейшие рост и раз� витие зародышей прекращаются. Сделан вывод о том, что для дальнейшего развития зародыша необходима транскрипция мРНК de novo. Однако, прорастание семян полно� стью блокируется при подавлении биосинте� за белка ингибитором трансляции цикло� гексимидом, что доказывает, по мнению авторов, участие пула запасенных мРНК в белковом синтезе прорастающих семян и в реализации процесса выхода корешка наружу из семени. Полученные в этих ис� следованиях данные позволили авторам сде� лать следующие обобщения: – в регуляции скорости прорастания принимают участие регуляторные факторы, синтез которых de novo подавляется α�Ам; – наблюдаемое 15�кратное снижение чувствительности к гибберелловой кислоте прорастающих семян под влиянием α�Ам свидетельствует о приоритетной роли этого фитогормона в процессах прорастания; – наряду с запасенными белками в заро� дышах в эмбриогенезе необходимы синтез de novo некоторых ферментов, вовлекаемых в мобилизацию резервов, возобновление ме� таболической активности после физиологи� ческого покоя и обеспечение адаптивных ре� акций зародышей к стрессовым факторам (например, к водному стрессу); – прорастание семян запускается с помо� щью генетической программы, заложенной при созревании, составляющими которой являются как использование в процессах инициации прорастания отложенных в за� пас при созревании мРНК и белков, так и последовательная активация генов синте� за de novo аналогичных и других белков, обес� печивающих процесс прорастания семян растений. При этом все еще малоизученными оста� ются механизмы инициации экспрессии ге� нов и наблюдаемое быстрое возрастание БІОТЕХНОЛОГІЯ, Т. 1, №2, 2008 86 В контексте перечисленных общих нап� равлений определения регуляторных свойств соединений первостепенным является изу� чение следующих вопросов: – Действуют ли экзогенные регуляторы роста (природные либо синтетические), а так� же другие химические соединения непосре� дственно на функции генов или же через ка� ких�то посредников? – Каким образом синтетические хими� ческие соединения, с совершенно несвойст� венной для фитогормонов структурой (напри� мер, триамелон [25]), действуют порой так же, как и природные соединения (по интег� ральным конечным результатам)? – Почему во многих случаях синтетичес� кие соединения оказывают выраженный физиологический эффект при значительно более низких концентрациях (некоторые да� же при концентрации 10–12 М), чем природ� ные соединения (от 10–5 до 10–8 М)? В поисках ответов на эти вопросы мы со� чли целесообразным ниже представить не� которые литературные и наши данные, касающиеся этих проблем , а также сложив� шиеся в науке представления о принципах формирования в клетках растений ответных реакций на различные воздействия и их ме� ханизмах. Несомненно, к числу фактов, связанных с выяснением указанных вопросов, можно отнести обнаружение в клетках растений резкого увеличения концентрации эндоген� ного пула фитогормонов и изменения соот� ношения фитогормонов под влиянием экзо� генных регуляторов роста (природных или синтетических) [26]. С этими данными интерферируют и ре� зультаты наших исследований, показываю� щие, что: – присутствие в среде регуляторов роста является мощным импульсом развития у рас� тений вегетативных органов (рис. 4, А, Б, В), что можно объяснить индуцированием структурных и еще в большем масштабе ри� босомальных генов для интенсивной нара� ботки конечных продуктов экспрессии ге� нов (белков). В проведенной работе нам также удалось показать, что стимуляторы роста растений (в частности, ивин или зеастимулин) уско� ряют ростовые процессы не дополнитель� ным увеличением числа копий генов в заро� дышах растений (данные не приводятся), а их активацией (таблица). Стимуляторы роста способствуют максимальному раскры� тию генетического потенциала клеток рас� тений [23]. Это происходит, видимо, посред� ством усиления активности промоторных и энхансерных (усиливающих уровень и ско� рость транскрипции) последовательностей ДНК за счет ускорения формирования в промо� торах растений инициаторных транскрип� ционных комплексов (рис. 3) из элементов регуляторных областей генов, РНК�полиме� разы и трансфакторов белковой природы. Такие комплексы состоят из более чем 70 белков (поэтому их называют транскрипто� сомой по аналогии с рибосомой) [24]. Таким образом, регуляторы роста расте� ний не затрагивают базовые генетические процессы (амплификацию генов), а, уско� ряя процессы экспрессии генов, сокращают сроки их протекания. Несмотря на достигнутые успехи в ис� пользовании регуляторов роста в растение� водстве, строгие научно обоснованные нор� мативы или «рецепты» применения их не предложены из�за ограниченности знаний о механизмах их действия (влиянии каждо� го из соединений на метаболизм клеток на протяжении всего периода онтогенеза расте� ний, особенностях действия соединения в зависимости от его концентрации и усло� вий выращивания, влияния регуляторов на наследственные свойства растений и др.). Рис. 3. Схематическое изображение инициаторного транскрипционного комплекса [24] Включение 3Н+уридина в суммарную РНК ци+ топлазмы клеток зародышевой оси в динамике прорастания семян фасоли без (контроль) и со стимулятором роста ивином (имп/мин/мгРНК) Время, ч Контроль Опыт (ивин) 6 230 ± 1,8 260 ± 2,4 12 350 ± 2,6 480 ± 4,2 18 1 500 ± 7,4 2 200 ± 8,6 24 3 500 ±12,3 7 200 ± 15,4 30 8 150 ± 16,4 18 300 ± 18,9 36 16 400 ± 20,6 39 380 ± 26,1 Експериментальні статті 87 нетических процессов можно с успехом ис� пользовать вместо одного или даже двух фито� гормонов какое�либо одно отобранное в про� цессе скрининга химическое соединение [28]. В предлагаемой ниже концепции приве� денные наши и литературные данные в це� почке механизма действия регуляторов роста растений мы рассматриваем как определяю� щие. В краткой форме суть этой концепции сводится к следующему: регулятор(ы) роста растений активирует(ют) трансфакторный(ые) белок(ки) по принципу аллостерического эффекта (проявлению сродства структуры экзогенными регуляторами синтеза фито� гормонов, контролирующих эти процессы; – действие синтетических регуляторов на рост гипокотиля у декапитированных (т.е. лишенных верхушечной части) зароды� шевых осей семян растения отсутствует [27]; – стимулирующего действия регулято� ров роста на одноклеточные организмы (бак� терии, дрожжи), где регуляция роста иная, чем у растений, нами не обнаружено; – в работах с культурами клеток и тка� ней растений in vitro в питательных средах для индуцирования тех или иных морфоге� Б В баба А вба Рис. 4. Влияние (А) зеастимулина на рост проростков кукурузы: контроль, вода (а); зеастимулин — 10–8М (б); 10–10М (в); (Б) потейтина на рост растений+регенерантов картофеля на средах: с кинетином (контроль, а) и с потейтином вместо кинетина (опыт, б); (В) радостима 10–10М (а) и индолилуксусной кислоты 10–10 М (в) на укоренение черешков листа фасоли БІОТЕХНОЛОГІЯ, Т. 1, №2, 2008 88 тивность генов синтеза структурных и функциональных белков. Вследствие ак� тивации одного из генов синтезa какого�ли� бо фитогормона происходит по цепочке включение и других генов синтеза этого же фитогормона, а затем параллельно (синх� ронно) генов синтеза и иных фитогормонов, совместно образующих баланс фитогормо� нов, которые запускают каскад структур� ных генов, формирующих ответные реак� ции/процессы на то или иное воздействие [26]. Причем такой баланс фитогормонов яв� ляется кратковременным. Однако продол� жительное присутствие в окружающей сре� де активатора генов синтеза фитогормонов (регулятора роста) может стабилизировать их баланс, в результате чего фитогормоны будут продолжать действовать в том же сос� таве под влиянием регулятора роста (подтве� рждением этого является обнаруженное на� ми резкое замедление «старения» каллусов при их пассировании и длительном культи� вировании на средах с синтетическими регу� ляторами). Длительная задержка в смене баланса (ансамбля) фитогормонов стимуля� тором роста может привести к ускоренному увеличению размера растения (из�за избы� точного синтеза структурных элементов клетки, обеспечивающих быстрый рост ве� гетативных органов) и запаздыванию или подавлению включения генов синтеза спе� цифических (специализированных) белков, участвующих в закладке и формировании генеративных органов растения. Учитывая то, что могут образовываться и смешанные пулы фитогормонов в ответ не на один, а на два или несколько сигналов (например, на температуру и регулятор рос� та), весьма сложно определить истинный пул фитогормонов на то или иное воздействие. К этому следует добавить, что трудно также определить, какой из фитогормонов подвер� гается деструкции: находившийся до фор� мирования пула в ответ на сигнал или же после реализации сигнала. Известно, что все внешние воздействия либо сигналы (свет, темнота, тепло, холод, затопление, засуха, химические вещества, включая и регуляторы роста, засоление почв, загрязнение ионами тяжелых метал� лов и др.) воспринимаются вначале рецепто� рами или эффекторами клеток, и что систе� ма рецепторов располагается как внутри их, так и на поверхности мембран. Рецепторы представляют собой сложные комплексы, содержащие многомерные белки. Очевидно, что узнавание рецепторами химических структур может быть специфичным, отчас� регулятора роста к структуре или части структуры активного центра белковой моле� кулы трансфактора). В результате измене� ния пространственной структуры (а возможно и опосредованной каталитическим действием регулятора роста ферментативной модифи� кации трансфактора) происходит активация трансфактора(ов), что приводит к ускорению формирования инициаторного транскрип� ционного комплекса в регуляторной части (промоторе) гена(ов) синтеза фитогормо� на(ов) и далее по цепочке активации генов синтеза и других фитогормонов, образую� щих специфический на действие регулятора баланс фитогормонов. В свою очередь, этот комплекс фитогормонов включает или акти� вирует гены синтеза структурных или функ� циональных белков либо одновременно тех и других в случае стимуляции регулято� ром(ами) сбалансированного роста и разви� тия организма растений. В пользу описанной последовательности приведенных механизмов реализации сиг� налов регулятора(ов) роста свидетельствуют следующие факты: – у растений именно фитогормоны явля� ются посредниками между сигналами внеш� ней (или внутриклеточной) среды и генами в формировании клетками соответствую� щих ответных реакций; – факты увеличения концентрации и из� менения баланса эндогенного комплекса фи� тогормонов под влиянием экзогенных регу� ляторов приведены нами выше; – механизм опосредованной (через спе� цифические трансфакторы белковой природы) регуляции экспрессии генов фитогормона� ми четко доказан в работах многих авторов [29, 30]. В данном случае структура фито� гормонов и структура трансфакторов в пол� ной мере подходят друг другу как «ключ к замку»; – по аналогии с приведенными аргумен� тами логично предположить, что сигналы регуляторов роста, как и другие внешние или внутриклеточные сигналы опосредуют свое действие через регуляторную систему фитогормонов. Далее мы попытаемся дать более подроб� ное обоснование некоторых положений сформулированной нами концепции. Как уже отмечалось, у растений существует двойственный контроль их роста и разви� тия: генетический контроль и фитогормо� нальная регуляция, тесно взаимодействую� щие между собой. Гены программируют синтез фитогормонов, а фитогормоны по принципу обратных связей регулируют ак� Експериментальні статті 89 Эти ранние (возможно примитивные) гены, очевидно, содержат относительно прос� тые регуляторные последовательности и не� большой круг «обслуживающих» их транс� факторов (т. е. вероятно у этих генов короткие промоторные и энхансерные последователь� ности, а может, отсутствуют энхансеры), ко� торые воспринимают ограниченное количест� во регуляторных сигналов и экспрессируют ограниченное количество ранних, видимо в основном регуляторных, белков, которые обеспечивают выключение ранних генов и включение средних генов уже с более слож� ной разветвленной системой регуляции. Таким образом, каждый период роста и развития растений характеризуется вклю� чением генов со все более сложными облас� тями регуляции и соответственно взаимо� действующих со все большим количеством трансфакторов, обеспечивающих регуляцию самих генов, межгенные взаимодействия, процессы дифференциации и специализа� ции клеток, межклеточные и межорганные взаимодействия. К тому же все гены и их ре� гуляторные последовательности отличают� ся первичной и пространственной структу� рой. Ясно, что отобранный при скрининге и случайно оказавшийся «подходящим» ре� гулятор роста на первом этапе развития вряд ли может оказаться таким же эффективным на последующих этапах онтогенеза (за иск� лючением, очевидно, регуляции генов син� теза каких�то общих для всех этапов развития структурных белков). Вероятно, идеальным было бы проводить дробный скрининг хими� ческих соединений через короткие интерва� лы в процессе роста и развития. Известно, что именно такой подход используется в ра� ботах с культурами клеток и тканей расте� ний in vitro. В этих работах для индуциро� вания тех или иных морфогенетических процессов экспланты растений последова� тельно переносят с одной среды на другую с измененным составом стимуляторов мор� фогенеза (природных или синтетических) [31]. С рассмотренных позиций можно объяс� нить и обнаруженную нами разную сорто� вую чувствительность сельскохозяйственных растений к регуляторам роста. Причиной этого, видимо, является микрогетероген� ность по генам в семействах «многосемей� ственных» генов у сортов растений (т.е. небольшие различия в нуклеотидных после� довательностях и их регуляторных облас� тях) и, соответственно, в структуре транс� факторов, обеспечивающих функции генов, проявляющих и не проявляющих сродство к регулятору роста. ти специфичным или неспецифичным (т. е. вследствие образования случайных связей между химическим соединением и какой�то частью многомерной структуры рецептора). Другая возможность действия регуляторов — формирование комплекса между ними и ак� тивной частью молекул белка — трансфак� тора, минуя рецептор, благодаря случайно проявленному сродству (аллостерическому эффекту) какой�то части структуры транс� фактора и регулятора роста (структура ДНК инертна для взаимодействия с регулятором роста), в результате чего меняется простран� ственная организация трансфактора, что, вероятно, и приводит к его/их активации и соответственно ускорению формирования инициаторных транскрипционных комп� лексов в промоторах генов синтеза фитогор� монов. По нашему мнению, все поступаю� щие извне сигналы клеток опосредуют свое действие именно через изменение пула (т.е. синтеза) соответствующих фитогормонов, а полученный биологический эффект дости� гается уже посредством включения либо выключения или же активации фитогормо� нами структурных генов, кодирующих функ� циональные белки, отвечающие за тот или иной процесс либо ответ в клетках (напри� мер, за ускорение роста и развития растений). Само по себе попавшее в клетку чужерод� ное химическое соединение вряд ли сможет найти вслепую специфические точки прило� жения для формирования специфического ответа, являющегося продуктом цепи после� довательных реакций, программируемых не одним, а многими генами. Специфическое последовательное включение одних генов и выключение других «под силу» только фи� тогормонам, которые узнают регулируемые ими гены «в лицо» и знают, когда и в какой после� довательности их запускать, а какие выклю� чать (схема опосредованной через фитогормо� ны регуляции активности генов в зародышах растений представлена нами ранее [27]). Другой аспект этой проблемы заключает� ся в том, что отобранный в процессе скри� нинга для определенного периода развития химический регулятор, в отличие от фитогор� монов, вряд ли будет обладать такой же актив� ностью на другом этапе развития. Действи� тельно, как мы уже отмечали, инициация ростового процесса происходит за счет отло� женных в запас мРНК и рРНК и последую� щего включения ограниченного количества ранних генов синтеза подобных классов РНК и синтеза на них ранних белков, участ� вующих в запуске и развертывании генетичес� кой программы роста и развития растений. БІОТЕХНОЛОГІЯ, Т. 1, №2, 2008 90 6. Мусатенко Л. И. Рост и метаболизм заро� дышевых органов растений: Автореф. дис. ... докт. биол. наук. — К., 1985. — 52 с. 7. Кафиани К. А., Костомарова А. А. Инфор� мационные макромолекулы в раннем разви� тии животных. — М.: Наука, 1978. — 336 с. 8. Stark G. R. Gene amplification. // Ann. Rev. Biochem. — 1984. — V. 53. — P. 447–491. 9. Гилберт С. Биология развития. — М.: Мир, 1994. — T. 2. — 236 с. 10. Сингер М., Берг П. Гены и геномы. — М.: Мир, 1998. — T. 2. — 392 с. 11. Tsygankova V. A., Zayets V. N., Galkina L. A. et al. An unusual minor protein appearing in embryonic axis cells of haricot bean seeds following germination process stimulated by 6�methylthiouracils // Biopolimeri i Klet� ka. — 1998. — V. 14, N5. — P. 438–448. 12. Blair G. R, Dommasch M. Nuclear DNA� dependent RNA polymerases of Ehrlich ascites tumor cells: two discrete α�amanitin sensitive forms. Biochem. Biophys. Res. Com� muns. — 1972. — V. 49, N 4. — P. 877–883. 13. Hastie N. D., Mahy B. W. J. Effects of α� amanitin in vivo on RNA polymerase activi� ty of cultured chick embryo fibroblast cell nuclei: resistance of ribosome RNA synthe� sis to the drug. // FEBS Lett. — 1973. — V. 32, N 1. — P. 95–99. 14. Rajjou L., Gallardo K., Debeaujon I, et al. The Effect of α�Amanitin on the Arabidopsis Seed Proteome Highlights the Distinct Roles of Stored and Neosynthesized mRNAs dur� ing Germination // Plant Physiology. — 2004. — V. 134, N3. — P. 1598–1613. 15. Perry R. P. and Kelley D. E. Inhibition of RNA synthesis by actinomycin D. Characte� ristic dose�response of different RNA species. // J.Cell.Physiol. — 1970. — V. 76, N 2. — P. 127–140. 16. Sala F., Parisi B., Burroni D. et al. Speсific and reversible in the alpha�like DNA poly� merase in plant cells. — FEBS Lett. — 1980. — V. 117 (1). — P. 93–98. 17. Arabshahi L., Brown N., Khan N., Wight G. Inhibition of DNA polymerase alpha by aphidicolin // Nucleic Acids Res. — 1998. — V. 16 (11). — P. 5107–5113. 18. Сингер М., Берг П. Гены и геномы. — М.: Мир, 1998. — T. 1. — 375 с. 19. Маниатис Т., Фриг Э., Сэмбрук Дж. Мето� ды генетической инженерии. Молекулярное клонирование. — М.: Мир,1984. — 480 с. 20. Гайцхоки В. С. Информационные РНК клеток животных. — M.: Медицина, 1980. — 200 с. 21. Газарян К. Г., Тарантул В. З. Геном эукари� от. — М.: Изд�во Моск. ун�та, 1983. — 272 с. 22. Тейлор Д., Грин Н., Стаут У. Биология. — Мир, 2002. — Т. 3. — 451 с. 23. Кухарь В. П., Карабанов Ю. В., Павленко А. Д. и др. Новый регулятор роста — Ивин // С высокой избирательностью действия регуляторов роста на активность генов мож� но связать и зависимость биологического эффекта от концентрации физиологически активных соединений [32, 33]. Превышение их концентрации (передозировка) может привести к несвоевременному (одновремен� ному) включению средних или поздних генов, неспецифическому угнетению регулятора� ми функции окружающих генов, оказавших� ся мишенями негативного влияния на них регуляторов роста (ингибирования в этих генах энхансерных и активации сайленсер� ных последовательностей ДНК — ингибито� ров транскрипции), нарушению межклеточ� ных и органных взаимодействий, что может явиться причиной несбалансированного роста и развития зародышевого организма и далее формирования фенотипа растения, который определяется преобладанием работа� ющих генов с позитивным ответом над нега� тивным, либо наоборот, на действие регулятора роста. Опыт показывает, что использование композиций регуляторов роста обеспечивает сбалансированное развитие растения. Полученные данные и представления ав� торов о механизмах действия, а также опи� санные закономерности имеют важное зна� чение для биотехнологии, в частности, для активации «нужных» и выключения «не� нужных» генов при синтезе необходимых физиологически активных соединений. 1. Сытник К. М., Мусатенко Л. И., Пушка) рев В. М. и др. Исследование синтеза РНК в органах зародышевой оси прорастающих семян фасоли // Укр. ботан. журн. — 1982. — Т. 39, №3. — С. 104–111. 2. Мусатенко Л. И., Галкин А. П., Пушкарев В. М., Сытник К. М. Изучение начальных стадий экспрессии генома в первичных ор� ганах зародышевой оси в течение созрева� ния и прорастания семян фасоли// Геном растений: структура и экспрессия.– Уфа: Башкирское Отделение АН СССР, 1983. — С. 154–161. 3. Heyn A. N. J. Molecular basis of auxin�regu� lated extension growth and role of dextranase // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. — 1981. — V. 78, N11. — P. 6608–6612. 4. Obroucheva N. V. Seed Germination: A Guide to the Early Stages. — Backhuys Publishers: Leiden, 1999. — 158 p. 5. Айтхожин М. А., Искаков Б. К. Информосо� мы растений.– Алма�Ата: Наука, 1982. — C. 41–48. ЛИТЕРАТУРАЛИТЕРАТУРА Експериментальні статті 91 29. Кулаева О. Н., Прокопцева О. С. Новейшие достижения в изучении механизма дейст� вия фитогормонов. // Биохимия. — 2004. — Т. 69, №3. — С. 293–310. 30. Галкин А. П., Лешина Л. Г., Медведева Т. В. и др. Регуляторные области промоторов ге� нов растений и белки — регуляторы про� моторной активности // Биополимеры и клетка. — 2004. — Т. 20, №5. — С. 363–379. 31. Сидоров В. А., Пивень Н. М., Глеба Ю. Ю., Сытник К. М. Соматическая гибридиза� ция семейства пасленовых. — К.: Наук. думка, 1985. — 130 с. 32. Ашмарин И. П., Лелекова Т. В., Санжие) ва Л. Ц. Об эффективности ультрамалых доз и концентраций биологически активных соединений // Известия Росс. АН. Серия биол. — 1992. — № 4. — С. 531–536. 33. Пономаренко С. П. Изучение регулятор� ных механизмов клетки — путь к управле� нию качеством продукции в растениевод� стве // Зб. наук. праць Уманського держ. агр. ун�ту. Спец. випуск: Біол. науки та проблеми рослинництва. — Умань, 2003. — С. 15–19. Физиологически активные соединения. — 1986. — №18. — С. 3–14. 24. Potenza C., Aleman L., Sengupta)Goplan C. Invited Review: Targeting transgene expres� sion in research, agricultural, and environ� mental applications: promoters used in plant transformation // In Vitro Cell. Dev. Biol. — 2004. — Plant 40. — Р. 1–22. 25. Galkina L. A., Tsygankova V. A., Synytsa A. D. Triamelon — a new effective inductor of organogenesis in plant tissue culture in vitro // Журн. орг. фарм. хімії. — 2006. — Т. 4, вип.2 (14). — С. 78 — 80. 26. Курапов П. Б. Гормональный баланс расте� ний. Методы его изучения и регулирования: Дис. ... докт. биол. наук. — М., 1996. — 275 с. 27. Tsygankova V. A., Zayets V. N., Galkina L. A., Blume Y. B. The phytohormone�mediated action of the synthetic regulators on cell extension growth in higher plants // Biopolymers and cell. — 1999. — V. 15. — P. 432–441. 28. Tsygankova V. A., Blume Ya. B. Screening and peculiarity of the biological action of synthetic plant growth regulators // Ibid. — 1997. — V. 13, N 6. — P. 484–492. ОСОБЛИВОСТІ ДІЇ РЕГУЛЯТОРІВ РОСТУ НА ЕКСПРЕСІЮ ГЕНІВ У КЛІТИНАХ ЗАРОДКІВ НАСІННЯ В РАННЬОМУ ПОСТЕМБРІОГЕНЕЗІ В. А. Циганкова1 Л. І. Мусатенко2 Л. О. Галкіна1 А. П. Галкін1 С. П. Пономаренко1 К. М. Ситник2 Д. Є. Ікін3 1Інститут біоорганічної хімії та нафтохімії НАН України, Київ Е)mail: sponom @ukr.net 2Інститут ботаніки ім. М. Г. Холодного НАН України, Київ 3Тихоокеанська північно�західна лабораторія, США Е)mail: david.eakin @pnl.gov За допомогою α�аманітину — специфічного інгібітору синтезу мРНК і АD, що блокує пере� важно синтез рРНК, показано, що до завершен� ня лаг�фази проростання насіння квасолі (18 год) на тлі пригнічення синтезу мРНК і рРНК, після їх набухання (із 6�ї год), включаються й активізуються у часі в клітинах зародкової THE PECULIARITY OF GROWTH REGULATOR ACTION ON GENE EXPRESSION IN CELL OF EMBRYO OF SEEDS IN EARLY POSTEMBRYOGENESIS V. A. Tsygankova1 L. I. Musatenko2 L. O. Galkina1 A. P. Galkin1 S. P. Ponomarenko1 K. M. Sytnik2 D. E. Eakin3 1Institute of Bioorganic Chemistry and Petro� chemistry of National Academy of Sciences of Ukraine, Kyiv Е)mail: sponom @ukr.net 2Kholodny Institute of Botany of National Academy of Sciences of Ukraine, Kyiv 3Pacific Northwest National Laboratory, USA Е)mail: david.eakin @pnl.gov α�Amanitin (a specific inhibitor of mRNA synthesis) and Actinomycin D (that blocks pri� marily rRNA synthesis) were used to inhibit mRNA and rRNA synthesis in sprouting bean seeds. It was demonstrated that prior to comple� tion of the bean seed germination lag�phase (18 hours) with inhibited mRNA and rRNA synthe� sis following seed upswelling (after 6 hours), БІОТЕХНОЛОГІЯ, Т. 1, №2, 2008 92 protein biosynthesis processes are triggered and their duration actively increases in embryonic axis cells. Based on the above, we came to the conclusion that during the earliest stage of postembryogenesis, mRNA and rRNA tran� scripts stocked during late embryogenesis are involved in the initiation of protein biosynthe� sis; and newly synthesized mRNA and rRNA are also involved in the biosynthesis before root emergence (after 18 hours). Aphidicolin that selectively suppresses DNA replication helped to determine that increasing needs in gene expression products (proteins) at early stages of postembryogenesis are satisfied by amplification of both structural and riboso� mal genes. Stimulating effect of plant growth regulators is not related to additional amount of gene copies, but rather to gene activation through intensification of promoter and enhancer func� tions of gene regulatory sequences via activation of protein transfactors. The concept of exogenous plant growth regula� tors behavior at genetic level has been formulated. Key words: embryonic axis, RNA synthesis, gene amplification, growth regulators. осі процеси біосинтезу білка. На цій підставі нами зроблено висновок, що в ініціації біосин� тезу білків у найраніший період постембріоге� незу беруть участь відкладені в запас у пізньо� му ембріогенезі транскрипти мРНК і рРНК, а вже після 18�ї год у біосинтез білка включа� ються й новосинтезовані мРНК і рРНК. За допомогою афідиколіну, що вибірково пригнічує реплікативний синтез ДНК, вста� новлено, що зростаючі потреби в продуктах експресії генів (білках) на стартових стадіях постембріогенезу забезпечуються ампліфі� кацією і структурних, і рибосомних генів. Стимулювальна дія регуляторів росту рос� лин пов’язана не з додатковим збільшенням числа копій генів, а з активацією генів шля� хом посилення функцій промоторних і ен� хансерних регуляторних послідовностей генів, через активацію трансфакторів білко� вої природи. Сформульовано концепцію щодо ме� ханізмів дії екзогенних регуляторів росту рослин на генетичному рівні. Ключові слова: зародкова вісь, синтез РНК, амплі� фікація генів, регулятори росту.
id	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-4056
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
language	Russian
last_indexed	2025-12-02T12:09:58Z
publishDate	2008
publisher	Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України
record_format	dspace
spelling	Цыганкова, В.А. Мусатенко, Л.И. Галкина, Л.А. Галкин, А.П. Пономаренко, С.П. Сытник, К.М. Икин, Д.Е. 2009-07-15T11:05:36Z 2009-07-15T11:05:36Z 2008 Особенности действия регуляторов роста на експрессию генов в клетках зародышей семян в раннем постэмбриогенезе / В. А. Цыганкова, Л. И. Мусатенко, Л. А. Галкина, А. П. Галкин, С. П. Пономаренко, К. М. Сытник, Д. Е. Икин, // Біотехнологія. — 2008. — Т. 1, № 2. — С. 81-92. — Бібліогр.: 33 назв. — рос. https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/4056 631.811.98 С помощью α-аманитина — специфического ингибитора синтеза мРНК и актиномицина D, блокирующего преимущественно синтез рРНК, показано, что до завершения лаг-фазы прорастания семян фасоли (18 ч) на фоне подавления синтеза мРНК и рРНК после их набухания (с 6 ч) включаются и активизируются во времени в клетках зародышевой оси процессы биосинтеза белка. На основании этого сделан вывод о том, что в инициацию биосинтеза белков в самый ранний период постэмбриогенеза вовлекаются отложенные в запас в позднем эмбриогенезе транскрипты мРНК и рРНК, а перед проклевыванием корешка (после 18 ч) в биосинтез белка включаются и новосинтезированные мРНК и рРНК. С помощью афидиколина, избирательно подавляющего репликативный синтез ДНК, установлено, что возрастающие потребности в продуктах экспрессии генов (белках) на стартовых стадиях постэмбриогенеза обеспечиваются амплификацией и структурных, и рибосомных генов. Стимулирующее действие регуляторов роста растений связано не с дополнительным увеличением числа копий генов, а с активацией генов путем усиления функций промоторных и энхансерных регуляторных последовательностей генов через активацию трансфакторов белковой природы. Сформулирована концепция действия экзогенных регуляторов роста растений на генетическом уровне. За допомогою α-аманітину — специфічного інгібітору синтезу мРНК і АD, що блокує переважно синтез рРНК, показано, що до завершення лаг фази проростання насіння квасолі (18 год) на тлі пригнічення синтезу мРНК і рРНК, після їх набухання (із 6-ї год), включаються й активізуються у часі в клітинах зародкової осі процеси біосинтезу білка. На цій підставі нами зроблено висновок, що в ініціації біосинтезу білків у найраніший період постембріогенезу беруть участь відкладені в запас у пізньому ембріогенезі транскрипти мРНК і рРНК, а вже після 18-ї год у біосинтез білка включаються й новосинтезовані мРНК і рРНК. За допомогою афідиколіну, що вибірково пригнічує реплікативний синтез ДНК, встановлено, що зростаючі потреби в продуктах експресії генів (білках) на стартових стадіях постембріогенезу забезпечуються ампліфікацією і структурних, і рибосомних генів. Стимулювальна дія регуляторів росту рослин пов’язана не з додатковим збільшенням числа копій генів, а з активацією генів шляхом посилення функцій промоторних і енхансерних регуляторних послідовностей генів, через активацію трансфакторів білкової природи. Сформульовано концепцію щодо механізмів дії екзогенних регуляторів ростурослин на генетичному рівні. α-Amanitin (a specific inhibitor of mRNA synthesis) and Actinomycin D (that blocks primarily rRNA synthesis) were used to inhibit mRNA and rRNA synthesis in sprouting bean seeds. It was demonstrated that prior to completion of the bean seed germination lag phase (18 hours) with inhibited mRNA and rRNA synthesis following seed upswelling (after 6 hours),protein biosynthesis processes are triggered and their duration actively increases in embryonic axis cells. Based on the above, we came to the conclusion that during the earliest stage of postembryogenesis, mRNA and rRNA transcripts stocked during late embryogenesis are involved in the initiation of protein biosynthesis; and newly synthesized mRNA and rRNA are also involved in the biosynthesis before root emergence (after 18 hours). Aphidicolin that selectively suppresses DNA replication helped to determine that increasing needs in gene expression products (proteins) at early stages of postembryogenesis are satisfied by amplification of both structural and ribosomal genes. Stimulating effect of plant growth regulators is not related to additional amount of gene copies, but rather to gene activation through intensification of promoter and enhancer functions of gene regulatory sequences via activation of protein transfactors. The concept of exogenous plant growth regulators behavior at genetic level has been formulated. ru Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України Експериментальні статті Особенности действия регуляторов роста на експрессию генов в клетках зародышей семян в раннем постэмбриогенезе Особливості дії регуляторів росту на експресію генів у клітинах зародків насіння в ранньому постембріогенезі The peculiarity of growth regulator action on gene expression in cell of embryo of seeds in early postembryogenesis Article published earlier
spellingShingle	Особенности действия регуляторов роста на експрессию генов в клетках зародышей семян в раннем постэмбриогенезе Цыганкова, В.А. Мусатенко, Л.И. Галкина, Л.А. Галкин, А.П. Пономаренко, С.П. Сытник, К.М. Икин, Д.Е. Експериментальні статті
title	Особенности действия регуляторов роста на експрессию генов в клетках зародышей семян в раннем постэмбриогенезе
title_alt	Особливості дії регуляторів росту на експресію генів у клітинах зародків насіння в ранньому постембріогенезі The peculiarity of growth regulator action on gene expression in cell of embryo of seeds in early postembryogenesis
title_full	Особенности действия регуляторов роста на експрессию генов в клетках зародышей семян в раннем постэмбриогенезе
title_fullStr	Особенности действия регуляторов роста на експрессию генов в клетках зародышей семян в раннем постэмбриогенезе
title_full_unstemmed	Особенности действия регуляторов роста на експрессию генов в клетках зародышей семян в раннем постэмбриогенезе
title_short	Особенности действия регуляторов роста на експрессию генов в клетках зародышей семян в раннем постэмбриогенезе
title_sort	особенности действия регуляторов роста на експрессию генов в клетках зародышей семян в раннем постэмбриогенезе
topic	Експериментальні статті
topic_facet	Експериментальні статті
url	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/4056
work_keys_str_mv	AT cygankovava osobennostideistviâregulâtorovrostanaekspressiûgenovvkletkahzarodyšeisemânvrannempostémbriogeneze AT musatenkoli osobennostideistviâregulâtorovrostanaekspressiûgenovvkletkahzarodyšeisemânvrannempostémbriogeneze AT galkinala osobennostideistviâregulâtorovrostanaekspressiûgenovvkletkahzarodyšeisemânvrannempostémbriogeneze AT galkinap osobennostideistviâregulâtorovrostanaekspressiûgenovvkletkahzarodyšeisemânvrannempostémbriogeneze AT ponomarenkosp osobennostideistviâregulâtorovrostanaekspressiûgenovvkletkahzarodyšeisemânvrannempostémbriogeneze AT sytnikkm osobennostideistviâregulâtorovrostanaekspressiûgenovvkletkahzarodyšeisemânvrannempostémbriogeneze AT ikinde osobennostideistviâregulâtorovrostanaekspressiûgenovvkletkahzarodyšeisemânvrannempostémbriogeneze AT cygankovava osoblivostídííregulâtorívrostunaekspresíûgenívuklítinahzarodkívnasínnâvrannʹomupostembríogenezí AT musatenkoli osoblivostídííregulâtorívrostunaekspresíûgenívuklítinahzarodkívnasínnâvrannʹomupostembríogenezí AT galkinala osoblivostídííregulâtorívrostunaekspresíûgenívuklítinahzarodkívnasínnâvrannʹomupostembríogenezí AT galkinap osoblivostídííregulâtorívrostunaekspresíûgenívuklítinahzarodkívnasínnâvrannʹomupostembríogenezí AT ponomarenkosp osoblivostídííregulâtorívrostunaekspresíûgenívuklítinahzarodkívnasínnâvrannʹomupostembríogenezí AT sytnikkm osoblivostídííregulâtorívrostunaekspresíûgenívuklítinahzarodkívnasínnâvrannʹomupostembríogenezí AT ikinde osoblivostídííregulâtorívrostunaekspresíûgenívuklítinahzarodkívnasínnâvrannʹomupostembríogenezí AT cygankovava thepeculiarityofgrowthregulatoractionongeneexpressionincellofembryoofseedsinearlypostembryogenesis AT musatenkoli thepeculiarityofgrowthregulatoractionongeneexpressionincellofembryoofseedsinearlypostembryogenesis AT galkinala thepeculiarityofgrowthregulatoractionongeneexpressionincellofembryoofseedsinearlypostembryogenesis AT galkinap thepeculiarityofgrowthregulatoractionongeneexpressionincellofembryoofseedsinearlypostembryogenesis AT ponomarenkosp thepeculiarityofgrowthregulatoractionongeneexpressionincellofembryoofseedsinearlypostembryogenesis AT sytnikkm thepeculiarityofgrowthregulatoractionongeneexpressionincellofembryoofseedsinearlypostembryogenesis AT ikinde thepeculiarityofgrowthregulatoractionongeneexpressionincellofembryoofseedsinearlypostembryogenesis

Особенности действия регуляторов роста на експрессию генов в клетках зародышей семян в раннем постэмбриогенезе

Institution

Similar Items