Нові методики аналізу мутацій у деяких екзонах генів PAG та CFTR людини з використанням денатуруючого градієнтного гель-електрофорезу

Розроблено діагностичні методики для детекції мутантних варіантів деяких екзонів генів РАН (фенілкетонурія) та CFTR (муковісцидоз) методом денатуруючого градієнтного гель-електрофорезу (DGGE). Показано високу ефективність методу для використання у програмах скринінгу цих тяжких спадкових захворювань...

Full description

Saved in:

Bibliographic Details
Date:	2008
Main Authors:	Соловйов, О.О., Голомідов, Д.О., Лівшиць, Л.А.
Format:	Article
Language:	Ukrainian
Published:	Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України 2008
Subjects:	Нові методи
Online Access:	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/4057
Tags:	Add Tag No Tags, Be the first to tag this record!
Journal Title:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Cite this:	Нові методики аналізу мутацій у деяких екзонах генів PAG та CFTR людини з використанням денатуруючого градієнтного гель-електрофорезу / О. О. Соловйов,Д. О. Голомідов, Л. А. Лівшиць // Біотехнологія. — 2008. — Т. 1, № 2. — С. 99-103. — Бібліогр.: 11 назв. — укр.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-4057
record_format	dspace
spelling	Соловйов, О.О. Голомідов, Д.О. Лівшиць, Л.А. 2009-07-15T11:06:14Z 2009-07-15T11:06:14Z 2008 Нові методики аналізу мутацій у деяких екзонах генів PAG та CFTR людини з використанням денатуруючого градієнтного гель-електрофорезу / О. О. Соловйов,Д. О. Голомідов, Л. А. Лівшиць // Біотехнологія. — 2008. — Т. 1, № 2. — С. 99-103. — Бібліогр.: 11 назв. — укр. https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/4057 577.213.3 Розроблено діагностичні методики для детекції мутантних варіантів деяких екзонів генів РАН (фенілкетонурія) та CFTR (муковісцидоз) методом денатуруючого градієнтного гель-електрофорезу (DGGE). Показано високу ефективність методу для використання у програмах скринінгу цих тяжких спадкових захворювань серед населення України. Разработаны диагностические методики для детекции мутантных вариантов некоторых экзонов генов РАН (фенилкетонурия) и CFTR (муковисцидоз) методом денатурирующего градиентного гель-электрофореза (DGGE). Показана высокая эффективность метода для применения в программах скрининга этих тяжелых наследственных заболеваний среди населения Украины. Diagnostic methods for mutant variants detection of some exons in PAH gene (phenylketonuria) and CFTR gene (cystic fibrosis) using denaturing gradient gel-electrophoresis (DGGE) were developed. High effectiveness method for the application in the screening programs of these severe hereditary diseases among the population of Ukraine was shown. uk Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України Нові методи Нові методики аналізу мутацій у деяких екзонах генів PAG та CFTR людини з використанням денатуруючого градієнтного гель-електрофорезу Новые методики анализа мутаций в некоторых экзонах генов PAH и CFTR с использованием денатурирующего градиентного гель-электрофореза New techniques for mutation analysis in some exons of PAH and CFTR gene of men using denaturing gradient gel-electrophoresis Article published earlier
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
title	Нові методики аналізу мутацій у деяких екзонах генів PAG та CFTR людини з використанням денатуруючого градієнтного гель-електрофорезу
spellingShingle	Нові методики аналізу мутацій у деяких екзонах генів PAG та CFTR людини з використанням денатуруючого градієнтного гель-електрофорезу Соловйов, О.О. Голомідов, Д.О. Лівшиць, Л.А. Нові методи
title_short	Нові методики аналізу мутацій у деяких екзонах генів PAG та CFTR людини з використанням денатуруючого градієнтного гель-електрофорезу
title_full	Нові методики аналізу мутацій у деяких екзонах генів PAG та CFTR людини з використанням денатуруючого градієнтного гель-електрофорезу
title_fullStr	Нові методики аналізу мутацій у деяких екзонах генів PAG та CFTR людини з використанням денатуруючого градієнтного гель-електрофорезу
title_full_unstemmed	Нові методики аналізу мутацій у деяких екзонах генів PAG та CFTR людини з використанням денатуруючого градієнтного гель-електрофорезу
title_sort	нові методики аналізу мутацій у деяких екзонах генів pag та cftr людини з використанням денатуруючого градієнтного гель-електрофорезу
author	Соловйов, О.О. Голомідов, Д.О. Лівшиць, Л.А.
author_facet	Соловйов, О.О. Голомідов, Д.О. Лівшиць, Л.А.
topic	Нові методи
topic_facet	Нові методи
publishDate	2008
language	Ukrainian
publisher	Інститут біохімії ім. О. В. Палладіна НАН України
format	Article
title_alt	Новые методики анализа мутаций в некоторых экзонах генов PAH и CFTR с использованием денатурирующего градиентного гель-электрофореза New techniques for mutation analysis in some exons of PAH and CFTR gene of men using denaturing gradient gel-electrophoresis
description	Розроблено діагностичні методики для детекції мутантних варіантів деяких екзонів генів РАН (фенілкетонурія) та CFTR (муковісцидоз) методом денатуруючого градієнтного гель-електрофорезу (DGGE). Показано високу ефективність методу для використання у програмах скринінгу цих тяжких спадкових захворювань серед населення України. Разработаны диагностические методики для детекции мутантных вариантов некоторых экзонов генов РАН (фенилкетонурия) и CFTR (муковисцидоз) методом денатурирующего градиентного гель-электрофореза (DGGE). Показана высокая эффективность метода для применения в программах скрининга этих тяжелых наследственных заболеваний среди населения Украины. Diagnostic methods for mutant variants detection of some exons in PAH gene (phenylketonuria) and CFTR gene (cystic fibrosis) using denaturing gradient gel-electrophoresis (DGGE) were developed. High effectiveness method for the application in the screening programs of these severe hereditary diseases among the population of Ukraine was shown.
url	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/4057
citation_txt	Нові методики аналізу мутацій у деяких екзонах генів PAG та CFTR людини з використанням денатуруючого градієнтного гель-електрофорезу / О. О. Соловйов,Д. О. Голомідов, Л. А. Лівшиць // Біотехнологія. — 2008. — Т. 1, № 2. — С. 99-103. — Бібліогр.: 11 назв. — укр.
work_keys_str_mv	AT soloviovoo novímetodikianalízumutacíiudeâkihekzonahgenívpagtacftrlûdinizvikoristannâmdenaturuûčogogradíêntnogogelʹelektroforezu AT golomídovdo novímetodikianalízumutacíiudeâkihekzonahgenívpagtacftrlûdinizvikoristannâmdenaturuûčogogradíêntnogogelʹelektroforezu AT lívšicʹla novímetodikianalízumutacíiudeâkihekzonahgenívpagtacftrlûdinizvikoristannâmdenaturuûčogogradíêntnogogelʹelektroforezu AT soloviovoo novyemetodikianalizamutaciivnekotoryhékzonahgenovpahicftrsispolʹzovaniemdenaturiruûŝegogradientnogogelʹélektroforeza AT golomídovdo novyemetodikianalizamutaciivnekotoryhékzonahgenovpahicftrsispolʹzovaniemdenaturiruûŝegogradientnogogelʹélektroforeza AT lívšicʹla novyemetodikianalizamutaciivnekotoryhékzonahgenovpahicftrsispolʹzovaniemdenaturiruûŝegogradientnogogelʹélektroforeza AT soloviovoo newtechniquesformutationanalysisinsomeexonsofpahandcftrgeneofmenusingdenaturinggradientgelelectrophoresis AT golomídovdo newtechniquesformutationanalysisinsomeexonsofpahandcftrgeneofmenusingdenaturinggradientgelelectrophoresis AT lívšicʹla newtechniquesformutationanalysisinsomeexonsofpahandcftrgeneofmenusingdenaturinggradientgelelectrophoresis
first_indexed	2025-11-25T21:33:20Z
last_indexed	2025-11-25T21:33:20Z
_version_	1850558949187649536
fulltext	Нові методи 99 С. Фішером і Л. Лерманом [4,5]. Він ґрун� тується на розділенні дволанцюгових фраг� ментів ДНК за допомогою електрофорезу в стандартному акриламідному гелі з ліній� ним градієнтом денатуруючих факторів – сечовини, формаміду або температури. Під час електрофорезу дволанцюгових ДНК у гелі з лінійно зростаючим градієнтом кон� центрацій денатуруючих агентів плавлення ланцюгів ДНК відбувається у строго спе� цифічній для даної послідовності ділянці, при еквівалентній температурі плавлення. У результаті відбувається поділ фрагментів ДНК, що розрізняються за нуклеотидним складом. Метою роботи було розробити діагнос� тичні методики детекції мутантних варіан� тів 7�го та 12�го экзонів гена РАН та 20�го екзона гена CFTR методом DGGE. Матеріали і методи Матеріалом для досліджень слугували зразки периферичної крові хворих із різних регіонів України. Виділення та очищення ДНК зі зразків проводили шляхом гідролізу лізатів клітин протеїназою К з наступною фенольною екстракцією [6]. Для проведення ампліфікації in vitro послідовностей 7�го і 12�го екзонів гена РАН та 20�го екзона гена CFTR нами було розроблено дизайн олігонуклеотид� них праймерів. Аналіз послідовності праймерів на специфічність виконували з використан� ням комп’ютерної бази даних BLAST SEARCH Генетичне тестування муковісцидозу (МВ, CFTR) і фенілкетонурії (ФКУ, РАН) є акту� альною проблемою медичної генетики. В Ук� раїні на 8 300 новонароджених одна дитина хвора на ФКУ. Частота носіїв мутантного гена РАН серед населення України стано� вить 1:43 [1]. На 2006 рік кількість іденти� фікованих мутацій гена РАН досягла 513. В Україні й у багатьох країнах Європи аналіз мажорної мутації R408W [2], локалізованої в 12�му екзоні, є вкрай важливим для моле� кулярно�генетичної діагностики. Також ду� же актуальним є аналіз мутацій 7�го екзона гена РАН, оскільки в ньому ідентифіковано близько 90 мутацій. Частота захворювання на муковісцидоз у різних популяціях суттєво варіює і стано� вить у середньому 1:2–2,5 тис. новонародже� них серед представників білої раси та 1:9–10 тис. новонароджених серед представників афри� канської раси (Goodchild, Dodge,1987). Ви� ходячи із цих показників гетерозиготними носіями патологічного гена є близько 5% населення світу. В Україні частота МВ ста� новила 1:2200 [3]. З огляду на це збільшується потреба в розробленні ефективних методик для ма� сового та селективного скринінгу хворих і гетерозиготних носіїв мутантних алелів, що спричинюють дані захворювання. Денатуруючий градієнтний гель�електро� форез (DGGE) вважається одним із найефек� тивніших сучасних методів для детекції мутацій. Метод DGGE був розроблений Ключові слова: DGGE, ген, мутації, ДНК�діагностика, фенілкетонурія, муковісцидоз. Розроблено діагностичні методики для детекції мутантних варіантів деяких екзонів генів РАН (фенілкето� нурія) та CFTR (муковісцидоз) методом денатуруючого градієнтного гель�електрофорезу (DGGE). Показано ви� соку ефективність методу для використання у програмах скринінгу цих тяжких спадкових захворювань серед населення України. О. О. Соловйов Д. О. Голомідов Інститут молекулярної біології і генетики НАН України, Київ Л. А. Лівшиць E)mail: livshits@imbg.org.ua УДК 577.213.3 НОВІ МЕТОДИКИ АНАЛІЗУ МУТАЦІЙ НОВІ МЕТОДИКИ АНАЛІЗУ МУТАЦІЙ У ДЕЯКИХ ЕКЗОНАХ ГЕНІВУ ДЕЯКИХ ЕКЗОНАХ ГЕНІВ РАН ТА CFTR ЛЮДИНИРАН ТА CFTR ЛЮДИНИ З ВИКОРИСТАННЯМ ДЕНАТУРУЮЧОГОЗ ВИКОРИСТАННЯМ ДЕНАТУРУЮЧОГО ГРАДІЄНТНОГО ГЕЛЬ@ЕЛЕКТРОФОРЕЗУГРАДІЄНТНОГО ГЕЛЬ@ЕЛЕКТРОФОРЕЗУ БІОТЕХНОЛОГІЯ, Т. 1, №2, 2008 100 сечовини з формамідом, температура 55 0С, постійна напруга 240В, тривалість — 5 год; – 7)й та 12)й екзони гена РАН: 7%�й полі� акриламідний гель, градієнт денатурантів 25–55% сечовини з формамідом, температу� ра 60 0С, постійна напруга 180В, трива� лість — 3 год. Забарвлення гелів після DGGE здійсню� вали водним розчином броміду етидію та барвником Barva NA, синтезованим у відділі комбінаторної хімії Інституту молекулярної біології і генетики НАН України. Для проведення рестрикційного аналізу продуктів ПЛР у зразки додавали 1 од.ак� тивності відповідної ендонуклеази рест� рикції, 1 мкл специфічного для рестриктази стандартного буфера та інкубували при тем� пературі 55 0С упродовж 2 год або при темпе� ратурі 37 0С 12 год. Продукти гідролізу ампліфікованих послідовностей аналізува� ли за допомогою електрофорезу в 10%�му поліакриламідному гелі (співвідношення акриламід:бісакриламід — 29:1). Як марке� ри молекулярної маси використовували 100 Base�Pair Ladder. Візуалізацію гелів після фарбування проводили, застосовуючи УФ�трансілюмі� натор (λ = 290 нм) та прилад Dark Reader, Clare Chemical Research, США (λ = 470 нм). Результати та обговорення Під час проведення DGGE 12�го та 7�го екзонів гена РАН і 20�го екзона гена CFTR зразками слугували ДНК носіїв мутацій R408W, Y414C (12�й екзон гена РАН), P281L, R252W, R261Q (7�й екзон гена РАН), W1282X (20�й екзон гена CFTR) із колекції відділу геноміки людини Інституту молеку� лярної біології і генетики НАН України. Результати експерименту наведено на рис. 1. У разі присутності мутації R408W та Y414C у гетерозиготному стані DGGE�про� філь представлений двома гомодуплексами та двома гетеродуплексами, присутність яких збільшує інформативність розділення (рис. 1, А). На рис.1, Б зображено DGGE�профіль мутацій P281L, R252W, R261Q у гетерози� готному стані. DGGE�профіль мутації W1282X у гетерозиготному стані подано на рис. 1, В. З використанням розроблених методів аналізу мутацій 7�го і 12�го екзонів гена РАН та 20�го екзона гена CFTR нами було прове� дено пілотний скринінг цих послідовностей у групі дітей, хворих на фенілкетонурію і муковісцидоз, та їхніх батьків, кров яких надходила з усіх регіонів України. Методом за умов сканування геномної послідовності ДНК генів РАН і CFTR. Для оптимізації роз� дільної здатності методу DGGE до 5′� або 3′� кінця одного з пари праймерів приєднували GC�багатий фрагмент (GC�clamp). Позицію для приєднання GC�фрагмента визначали за допомогою комп’ютерного алгоритму Melt 87 [7, 8]. Аналіз термодинамічних парамет� рів праймерів здійснювали за програмою Vector NTI Suite 6. Праймери були синтезовані твердофазним фосфоамідитним методом на олігосинтеза� торі Biosset (Росія). Полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР) проводили в автоматичному режимі на тер� моциклері Perkin Elmer (Cetus) за таких умов: – 20)й екзон гена CFTR: ініціювальна де� натурація — при 94 0С протягом 5 хв; 39 цик� лів: денатурація — 1хв, 94 0С, відпалюван� ня праймерів — 1хв, 55 0С, елонгація — 1хв, 72 0С; фінальна елонгація при 72 0С протя� гом 3 хв; формування гетеродуплексів: дена� турація при 94 0С упродовж 5 хв з наступ� ним відпалюванням при температурі 55 0С та швидке охолодження; – 7)й екзон гена РАН: pre PCR : денатура� ція при 94 0С — 4 хв, відпалювання прайме� рів — 59 0С, 2 хв, елонгація — 72 0С, 2 хв; 5 циклів: денатурація ДНК — 45 с, 94 0С, відпалювання праймерів — 45 с, 58 0С, елон� гація — 45 с, 72 0С; 5 циклів: денатурація ДНК — 45 с, 94 0С, відпалювання прайме� рів — 45 с, 56 0С, елонгація — 45 с, 72 0С; 25 циклів: денатурація ДНК — 45 с, 94 0С, відпалювання праймерів — 45 с, 55 0С, елон� гація — 45 с, 72 0С; фінальна елонгація: 72 0С — 3 хв; – 12)й екзон гена РАН: ініціювальна де� натурація — 3 хв, 94 0С; 5 циклів: денату� рація ДНК — 45 с, 94 0С, відпалювання праймерів — 45 с, 53 0С, елонгація — 45 с, 72 0С; 28 циклів: денатурація ДНК — 30 с, 94 0С, відпалювання праймерів — 30 с, 51 0С, елонгація — 45 с, 72 0С; фінальна елон� гація: 72 0С — 2 хв. Робоча суміш об’ємом 25 мкл містила: Тris�НСl — 67 мМ (рН 8,8, 25 0С); (NH4)2SO4 — 16,7 мМ; ЕДТА — 6,7 мкМ; MgCl2 — 2,5–4 мM; бичачий сироватковий альбумін — 170 мкг/мл; dNTP — 400 мкМ кожного типу; прайме� ри — 4,5 pмол/мл; ДНК — 1 мкг; Taq�полі� мераза — 0,5 од. активності на пробу. Денатуруючий градієнтний гель�електро� форез (DGGE) проводили з використанням методик [9,10] за такими параметрами: – 20)й екзон гена CFTR: 7%�й поліакри� ламідний гель, градієнт денатурантів 10–60% Нові методи 101 пацієнтів та контрольних зразків ДНК з мутаціями (електрофореграму наведено на рис. 3); виявлено 5 гетерозиготних носіїв мутації P281L, 3 носії R252W та 2 носії R261Q. Ці результати підтверджено за допо� могою рестрикційного аналізу продуктів ПЛР ендонуклеазами рестрикції MspI, Eco88I, HinfI, відповідно [1, 2]. Було також виявлено 3 мутантні варіанти 7�го екзона ге� на РАН (рис. 3), які не вдалося ідентифіку� вати за допомогою рестрикційного аналізу. Планується проведення прямого секвену� вання послідовностей 7�го екзона з метою визначення знайденої мутації. DGGE було досліджено 35 пацієнтів на фе� нілкетонурію та 25 пацієнтів — на муковіс� цидоз. Під час аналізу електрофореграм 12�го екзона гена ФАГ виявлено 12 гетерозигот� них носіїв мутації R408W та один носій цієї мутації у гомозиготному стані, 2 гетерози� готних носії мутації Y414C (рис. 2, А, Б). Ці результати підтверджено за допомогою рест� рикційного аналізу продуктів ПЛР із засто� суванням ендонуклез рестрикції MnlI, RsaI, відповідно [1,2]. У результаті аналізу 7�го екзона гена РАН методом денатуруючого градієнтного гель� електрофорезу було одержано DGGE�профілі Рис. 1. DGGE+електрофореграми послідовностей 12+го екзона гена РАН, 7+го екзона гена РАН та 20+го екзона гена CFTR: А — DGGE�еклектрофореграма мутацій 12�го екзона гена РАН (7%�й поліакриламідний гель, градієнт денату� рантів 25–60%): 1 — R408W/норма; 2 — норма/норма; 3 — Y414C / норма; Б — DGGE�електрофореграма мутацій 7�го екзона гена РАН (7%�й поліакриламідний гель, градієнт денату� рантів 25–60%): 1— норма/норма; 2— P281L/ норма; 3 — R252W/норма; 4 — R261Q/ норма; 5 — норма/норма; В — DGGE�електрофореграма послідовностей 20�го екзона гена CFTR (7%�й поліакриламідний гель, градієнт денатурантів 10–60%, температура 55оС, напруга 230 В, тривалість 5 год): 1, 2, 4 — норма/норма, 3 — W1282X/норма A ВБ 1 2 3 1 2 3 4 5 1 2 3 4 Рис. 2. DGGE+електрофореграма послідовностей 12+го екзона гена РАН хворих на фенілкетонурію та членів їхніх родин: А — Сім’я I: 1 — мати — носій мутації R408W у гетерозиготному стані; 2 — пробанд — носій мутації R408W у гетерозиготному стані; 3 — негативний контроль ампліфікації; 4 — здоровий індивід; 5 — маркер мутації R408W у гетерозиготному стані. Сім’я II: 5 — пробанд — носій мутації R408W у гомозиготному стані; 6, 7 — ма� ти та батько — носії мутації R408W у гетерозиготному стані; 8, 9,10 — здорові індивіди; Б — 1 — негативний контроль; 2 — носій мутації R408W у гетерозиготному стані; 3 — здоровий індивід; 4 — носій мутації Y414C у гетерозиготному стані; 5 — позитивний контроль на мутацію Y414C; 6 — позитивний контроль на мутацію R408W 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 A Б 1 2 3 4 5 6 БІОТЕХНОЛОГІЯ, Т. 1, №2, 2008 102 і 12�го екзона гена PAH та 20�го екзона гена CFTR за допомогою методу денатуруючого градієнтного гель�електрофорезу (DGGE). Ці робочі методики можуть бути вико� ристані в тест�системах для ДНК�аналізу у програмах селективного та масового скри� нінгу з метою профілактики муковісцидозу та фенілкетонурії в Україні. Дослідивши 25 хворих на муковісцидоз пацієнтів методом DGGE, ми виявили трьох гетерозиготних носіїв мутації W1282Х (рис. 4). Одержані результати підтверджено за допомогою рестрикційного аналізу про� дуктів ПЛР ендонуклеазами рестрикції MnlI [11]. Таким чином, нами було розроблено діагностичні методики детекції мутацій 7�го Рис. 3. DGGE+електрофореграма послідовностей 7+го екзона гена РАН хворих на фенілкетонурію та членів їхніх родин: 1 — позитивний контроль на мутацію P281L; 6 — носій мутації P281L у гетерозиготному стані; 2 — неідентифікований мутантний варіант; 7 — здоровий індивід; 3 — носій мутації P281L у гетерозиготному стані; 8 — неідентифікований мутантний варіант; 4 — неідентифікований мутантний варіант; 9 — позитивний контроль на мутацію R252W; 5 — носій мутації P281L у гетерозиготному стані; 10 — позитивний контроль на мутацію R261Q 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Рис. 4. DGGE + електрофореграма послідовностей 20+го екзона гена CFTR хворих на муковісцидоз та членів їхніх родин на носійство мутації W1282Х 20+го екзона гена CFTR: 1 — негативний контроль; 4, 5, 7, 9, 11 — здорові індивіди; 2 — здоровий індивід; 6, 8, 10 — носій мутації W1282Х у гетерозиготному стані 3 — позитивний контроль на мутацію W1282Х; Нові методи 103 НОВЫЕ МЕТОДИКИ АНАЛИЗА МУТАЦИЙ В НЕКОТОРЫХ ЭКЗОНАХ ГЕНОВ РАН И CFTR ЧЕЛОВЕКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДЕНАТУРИРУЮЩЕГО ГРАДИЕНТНОГО ГЕЛЬ+ЭЛЕКТРОФОРЕЗА А. А. Соловьев Д. А. Голомидов Л. А. Лившиц Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины, Киев Е)mail: livshits@imbg.org.ua Разработаны диагностические методики для детекции мутантных вариантов некото� рых экзонов генов РАН (фенилкетонурия) и CFTR (муковисцидоз) методом денатуриру� ющего градиентного гель�электрофореза (DGGE). Показана высокая эффективность метода для применения в программах скрининга этих тя� желых наследственных заболеваний среди на� селения Украины. Ключевые слова: DGGE, ген, мутации, ДНК�диаг� ностика, фенилкетонурия, муковисцидоз. NEW TECHNIQUES FOR MUTATION ANALYSIS IN SOME EXONS OF PAH AND CFTR GENE OF MEN USING DENA+ TURING GRADIENT GEL+ELECTROPHORESIS O. O. Solovyov D. O. Golomidov L. A. Livshyts Institute of Molecular Biology and Genetics of National Academy of Sciences of Ukraine, Kyiv Е)mail: livshits@imbg.org.ua Diagnostic methods for mutant variants detection of some exons in PAH gene (phenylke� tonuria) and CFTR gene (cystic fibrosis) using denaturing gradient gel�electrophoresis (DGGE) were developed. High effectiveness method for the application in the screening programs of these severe hereditary diseases among the pop� ulation of Ukraine was shown. Key words: DGGE, gene, mutations, DNA diagnos� tics, phenylketonuria, cystic fibrosis. ЛІТЕРАТУРА 1. Нечипоренко М. В., Кравченко С. А., Лів) шиць Л. А. Аналіз мутацій та VNTR�полі� морфізму гена фенілаланінгідроксилази // Укр. біохім. журн. — 2001. — Т. 73, №2. — С. 63–67. 2. Нечипоренко М. В., Лившиц Л. А. Анализ мутаций гена фенилаланингидроксилазы в семьях высокого риска фенилкетонурии в Украине // Цитология и генетика. — 2000. — Т. 34, №6. — С. 59–63. 3. Резник Б. Я., Бабий И. Л., Лившиц Л. А. Муковисцидоз у детей и подростков. — К.: Здоров’я, 1994. — 144 с. 4. Fischer S. G., Lerman L. S. DNA fragments differing by single base�pair substitutions are separated in denaturing gradient gels: Correspondence with melting theory // Proc. Nat Acad. Sci. USA. — 1983. — V. 80. — Р. 1579–1583. 5. Fischer S. G., Lerman L. S. Separation of ran� dom fragments of DNA according to pro� peries of their sequences // Ibid. — 1980. — V. 77, N 8.– Р. 4420–4424. 6. Маниатис Т., Фрич Е. Е., Сэмбрук Ж. Мо� лекулярное клонирование. — М.: Мир, 1985. — 420 с. 7. Myers R. M., Fischer S. G., Maniatis T. et al. Nearly all single base substitutions In DNA fragnents joined to a GC�clamp can be detec� ted by denaturing gradient gel electropho� resis // Nuc. Acid. Res. — 1985. — V. 13, N9. — P. 3131–3145. 8. Lerman L. S., Silverstein K. Computational simulation of DNA melting and is applica� tion to DGGE // Meth. Enzymol. — V. 155. — Р. 482–501. 9. Guldberg P. Guttler F. A simple method for identification of point mutations using denaturing gradient gel electrophoresis // Nucl. Acid. Res. — 1993. — V. 21, N9. — P. 2261–2262. 10. Fanen P. Ghanem N. Vidaud M. et al. Molecular characterization of cystic fibro� sis: 16 novel mutations identified by analy� sis of the whole cystic fibrosis conductance transmembrane regulator (CFTR) coding regions and splice site junctions // Geno� mics. — 1992. — V. 13, N 3. — P. 770–776. 11. Kadasі L., Polakova H., Zatkova A. et al. / INCO–BIOMED Workshop for Central and Eastern European Countrіes «DNA extrac� tіon and Cystіc Fіbrosіs Mutatіon Detectіon Technіques», Prague, September 13–16, 1997. — P. 15–17.

Нові методики аналізу мутацій у деяких екзонах генів PAG та CFTR людини з використанням денатуруючого градієнтного гель-електрофорезу

Institution

Similar Items