Влияние криоэкстракта плаценты на индукцию суперовуляции у лабораторных мышей с хроническим воспалением яичников
Исследовано влияние препарата "Криоцелл-криоэкстракт плаценты"(КП) на индукцию суперовуляции у лабораторных мышей при реактивном хроническом воспалении яичников. Показано, что хроническое воспаление яичников у самок мышей оказывает выраженное влияние на результаты индукции суперовуляции....
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Проблемы криобиологии |
|---|---|
| Datum: | 2010 |
| Hauptverfasser: | , , , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Russian |
| Veröffentlicht: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2010
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/44519 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Влияние криоэкстракта плаценты на индукцию суперовуляции у лабораторных мышей с хроническим воспалением яичников / Н.Г. Грищенко, В.И. Грищенко, Е.И. Смольянинова, Л.Г. Чернышенко, Н.А. Волкова // Пробл. криобиологии. — 2010. — Т. 20, № 3. — С. 327-337. — Бібліогр.: 20 назв. — рос., англ. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-44519 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Грищенко, Н.Г. Грищенко, В.И. Смольянинова, Е.И. Чернышенко, Л.Г. Волкова, Н.А. 2013-06-02T11:55:53Z 2013-06-02T11:55:53Z 2010 Влияние криоэкстракта плаценты на индукцию суперовуляции у лабораторных мышей с хроническим воспалением яичников / Н.Г. Грищенко, В.И. Грищенко, Е.И. Смольянинова, Л.Г. Чернышенко, Н.А. Волкова // Пробл. криобиологии. — 2010. — Т. 20, № 3. — С. 327-337. — Бібліогр.: 20 назв. — рос., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/44519 57.043:611.013.85:616-002.2:612.621.9 Исследовано влияние препарата "Криоцелл-криоэкстракт плаценты"(КП) на индукцию суперовуляции у лабораторных мышей при реактивном хроническом воспалении яичников. Показано, что хроническое воспаление яичников у самок мышей оказывает выраженное влияние на результаты индукции суперовуляции. При этом существенно снижается количество ооцитов, зигот и 2-клеточных эмбрионов, а также отмечается ухудшение морфологии эмбрионов. Введение животным КП оказывает выраженный терапевтический эффект и способствует более эффективной индукции суперовуляции под влиянием экзогенных гонадотропных гормонов, в результате чего увеличивается общий уровень выхода гамет и ранних эмбрионов, улучшается их морфологическое качество. Досліджено вплив препарату "Кріоцелл-кріоекстракт плаценти" (КП) на індукцію суперовуляції у лабораторних мишей при реактивному хронічному запаленні яєчників. Показано, що хронічне запалення яєчників у самок мишей виразно впливає на результати індукції суперовуляції. При цьому суттєво зменшується кількість ооцитів, зигот та 2-клітинних ембріонів, а також відмічається погіршення морфології ембріонів. Введення тваринам КП має значний терапевтичний вплив та сприяє більш ефективній індукції суперовуляції під дією гонадотропних гормонів, в результаті чого збільшується загальний рівень виходу гамет і ранніх ембріонів, покращується їхня морфологічна якість. The effect of placental cryoextract (PC) on the results of superovulation in laboratory mice with syndrome of chronic ovary inflammation was studied. It is shown that chronic ovary inflammation in mice females affects significantly the results of superovulation. The quantity of oocytes, zygotes and 2-cell embryos as well as morphologic quality of the embryos decrease significantly. PC administration in the animals manifests pronounced therapeutic action and promotes more effective superovulation under exogenous gonadotropic hormones administration The increase in the total number of gametes and early embryos was found. It was also found that the morphology of gametes and early embryos after application of CP improved signisicantly. Авторы благодарят ст.н.с. Коваленко И.Ф., н.с. Холодного В.С. за методическую помощь в работе, ст.н.с. Гончарук Е.И. – за помощь в планировании и обсуждении результатов эксперимента. ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Влияние криоэкстракта плаценты на индукцию суперовуляции у лабораторных мышей с хроническим воспалением яичников Effect of Placental Cryoextract on Superovulation Induction in Mice with Chronic Ovary Inflammation Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Влияние криоэкстракта плаценты на индукцию суперовуляции у лабораторных мышей с хроническим воспалением яичников |
| spellingShingle |
Влияние криоэкстракта плаценты на индукцию суперовуляции у лабораторных мышей с хроническим воспалением яичников Грищенко, Н.Г. Грищенко, В.И. Смольянинова, Е.И. Чернышенко, Л.Г. Волкова, Н.А. Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| title_short |
Влияние криоэкстракта плаценты на индукцию суперовуляции у лабораторных мышей с хроническим воспалением яичников |
| title_full |
Влияние криоэкстракта плаценты на индукцию суперовуляции у лабораторных мышей с хроническим воспалением яичников |
| title_fullStr |
Влияние криоэкстракта плаценты на индукцию суперовуляции у лабораторных мышей с хроническим воспалением яичников |
| title_full_unstemmed |
Влияние криоэкстракта плаценты на индукцию суперовуляции у лабораторных мышей с хроническим воспалением яичников |
| title_sort |
влияние криоэкстракта плаценты на индукцию суперовуляции у лабораторных мышей с хроническим воспалением яичников |
| author |
Грищенко, Н.Г. Грищенко, В.И. Смольянинова, Е.И. Чернышенко, Л.Г. Волкова, Н.А. |
| author_facet |
Грищенко, Н.Г. Грищенко, В.И. Смольянинова, Е.И. Чернышенко, Л.Г. Волкова, Н.А. |
| topic |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| topic_facet |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| publishDate |
2010 |
| language |
Russian |
| container_title |
Проблемы криобиологии |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Effect of Placental Cryoextract on Superovulation Induction in Mice with Chronic Ovary Inflammation |
| description |
Исследовано влияние препарата "Криоцелл-криоэкстракт плаценты"(КП) на индукцию суперовуляции у лабораторных
мышей при реактивном хроническом воспалении яичников. Показано, что хроническое воспаление яичников у самок мышей
оказывает выраженное влияние на результаты индукции суперовуляции. При этом существенно снижается количество ооцитов,
зигот и 2-клеточных эмбрионов, а также отмечается ухудшение морфологии эмбрионов. Введение животным КП оказывает
выраженный терапевтический эффект и способствует более эффективной индукции суперовуляции под влиянием экзогенных
гонадотропных гормонов, в результате чего увеличивается общий уровень выхода гамет и ранних эмбрионов, улучшается их
морфологическое качество.
Досліджено вплив препарату "Кріоцелл-кріоекстракт плаценти" (КП) на індукцію суперовуляції у лабораторних мишей
при реактивному хронічному запаленні яєчників. Показано, що хронічне запалення яєчників у самок мишей виразно впливає
на результати індукції суперовуляції. При цьому суттєво зменшується кількість ооцитів, зигот та 2-клітинних ембріонів, а
також відмічається погіршення морфології ембріонів. Введення тваринам КП має значний терапевтичний вплив та сприяє
більш ефективній індукції суперовуляції під дією гонадотропних гормонів, в результаті чого збільшується загальний рівень
виходу гамет і ранніх ембріонів, покращується їхня морфологічна якість.
The effect of placental cryoextract (PC) on the results of superovulation in laboratory mice with syndrome of chronic ovary
inflammation was studied. It is shown that chronic ovary inflammation in mice females affects significantly the results of superovulation.
The quantity of oocytes, zygotes and 2-cell embryos as well as morphologic quality of the embryos decrease significantly. PC
administration in the animals manifests pronounced therapeutic action and promotes more effective superovulation under exogenous
gonadotropic hormones administration The increase in the total number of gametes and early embryos was found. It was also found
that the morphology of gametes and early embryos after application of CP improved signisicantly.
|
| issn |
0233-7673 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/44519 |
| citation_txt |
Влияние криоэкстракта плаценты на индукцию суперовуляции у лабораторных мышей с хроническим воспалением яичников / Н.Г. Грищенко, В.И. Грищенко, Е.И. Смольянинова, Л.Г. Чернышенко, Н.А. Волкова // Пробл. криобиологии. — 2010. — Т. 20, № 3. — С. 327-337. — Бібліогр.: 20 назв. — рос., англ. |
| work_keys_str_mv |
AT griŝenkong vliâniekrioékstraktaplacentynaindukciûsuperovulâciiulaboratornyhmyšeishroničeskimvospaleniemâičnikov AT griŝenkovi vliâniekrioékstraktaplacentynaindukciûsuperovulâciiulaboratornyhmyšeishroničeskimvospaleniemâičnikov AT smolʹâninovaei vliâniekrioékstraktaplacentynaindukciûsuperovulâciiulaboratornyhmyšeishroničeskimvospaleniemâičnikov AT černyšenkolg vliâniekrioékstraktaplacentynaindukciûsuperovulâciiulaboratornyhmyšeishroničeskimvospaleniemâičnikov AT volkovana vliâniekrioékstraktaplacentynaindukciûsuperovulâciiulaboratornyhmyšeishroničeskimvospaleniemâičnikov AT griŝenkong effectofplacentalcryoextractonsuperovulationinductioninmicewithchronicovaryinflammation AT griŝenkovi effectofplacentalcryoextractonsuperovulationinductioninmicewithchronicovaryinflammation AT smolʹâninovaei effectofplacentalcryoextractonsuperovulationinductioninmicewithchronicovaryinflammation AT černyšenkolg effectofplacentalcryoextractonsuperovulationinductioninmicewithchronicovaryinflammation AT volkovana effectofplacentalcryoextractonsuperovulationinductioninmicewithchronicovaryinflammation |
| first_indexed |
2025-11-25T21:33:23Z |
| last_indexed |
2025-11-25T21:33:23Z |
| _version_ |
1850559012969381888 |
| fulltext |
327
1Kharkov National Medical University, Kharkov, Ukraine
2Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the Na-
tional Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
1Харьковский национальный медицинский университет
2Институт проблем криобиологии и криомедицины
НАН Украины, г. Харьков
УДК 57.043:611.013.85:616-002.2:612.621.9
Н.Г. ГРИЩЕНКО1, В.И. ГРИЩЕНКО2, Е.И. СМОЛЬЯНИНОВА2*, Л.Г. ЧЕРНЫШЕНКО2, Н.А. ВОЛКОВА2
Влияние криоэкстракта плаценты на индукцию суперовуляции
у лабораторных мышей с хроническим воспалением яичников
UDC 57.043:611.013.85:616-002.2:612.621.9
N.G. GRISCHENKO1, V.I. GRISCHENKO2,
YE.I. SMOLYANINOVA2*, L.G. CHERNYSHENKO2, N.A. VOLKOVA2
Effect of Placental Cryoextract on Superovulation Induction
in Mice with Chronic Ovary Inflammation
Исследовано влияние препарата "Криоцелл-криоэкстракт плаценты"(КП) на индукцию суперовуляции у лабораторных
мышей при реактивном хроническом воспалении яичников. Показано, что хроническое воспаление яичников у самок мышей
оказывает выраженное влияние на результаты индукции суперовуляции. При этом существенно снижается количество ооцитов,
зигот и 2-клеточных эмбрионов, а также отмечается ухудшение морфологии эмбрионов. Введение животным КП оказывает
выраженный терапевтический эффект и способствует более эффективной индукции суперовуляции под влиянием экзогенных
гонадотропных гормонов, в результате чего увеличивается общий уровень выхода гамет и ранних эмбрионов, улучшается их
морфологическое качество.
Ключевые слова: криоэкстракт плаценты, суперовуляция, ооцит, эмбрион, воспаление, мышь.
Досліджено вплив препарату "Кріоцелл-кріоекстракт плаценти" (КП) на індукцію суперовуляції у лабораторних мишей
при реактивному хронічному запаленні яєчників. Показано, що хронічне запалення яєчників у самок мишей виразно впливає
на результати індукції суперовуляції. При цьому суттєво зменшується кількість ооцитів, зигот та 2-клітинних ембріонів, а
також відмічається погіршення морфології ембріонів. Введення тваринам КП має значний терапевтичний вплив та сприяє
більш ефективній індукції суперовуляції під дією гонадотропних гормонів, в результаті чого збільшується загальний рівень
виходу гамет і ранніх ембріонів, покращується їхня морфологічна якість.
Ключові слова: кріоекстракт плаценти, суперовуляція, ооцит, ембріон, запалення, миша.
The effect of placental cryoextract (PC) on the results of superovulation in laboratory mice with syndrome of chronic ovary
inflammation was studied. It is shown that chronic ovary inflammation in mice females affects significantly the results of superovulation.
The quantity of oocytes, zygotes and 2-cell embryos as well as morphologic quality of the embryos decrease significantly. PC
administration in the animals manifests pronounced therapeutic action and promotes more effective superovulation under exogenous
gonadotropic hormones administration The increase in the total number of gametes and early embryos was found. It was also found
that the morphology of gametes and early embryos after application of CP improved signisicantly.
Key words: placenta cryoextract, superovulation, oocyte, embryo, inflammation, mice.
Воспалительные процессы органов малого таза
у женщин составляют 74–80% гинекологических
заболеваний [5]. Часто острые воспалительные про-
цессы переходят в хронические с длительным
вялотекущим течением.
Актуальной проблемой современной гинеколо-
гии является определение особенностей лечения
бесплодия с использованием вспомогательных
репродуктивных технологий (ВРТ) у пациенток с
хроническими воспалительными заболеваниями
органов малого таза с целью повышения эффек-
тивности их лечения. Данная группа больных
имеет клинико-анамнестические особенности и
отличия гормонального и иммунного гомеостаза
от пациенток с другими причинами бесплодия.
Имеются сообщения о том, что хронические
воспалительные заболевания органов малого таза
Inflammatory processes of small pelvis organs in
women make 74–80% of the diseases [5]. Frequently
acute inflammatory processes pass into chronic ones,
proceeding lastingly and slowly.
An actual task of current gynecology is the deter-
mining the peculiarities of infertility treatment using
assisted reproductive technologies (ART) in the pa-
tients with small pelvis organs' chronic inflammatory
diseases to increase their treatment efficiency. This
group of patients has clinical anamnestic peculiarities
and differences of hormonal and immune homeostasis
from the patients with other infertility causes. There
are the reports that small pelvis organs' chronic inflam-
matory diseases are the factors aggravating the ART
results [18].
In presence of chronic inflammatory process the
necessity of its correction is of no doubt. Widely used
problems
of cryobiology
Vol. 20, 2010, №3
проблемы
криобиологии
Т. 20, 2010, №3
* Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию:
ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина 61015; тел.: (+380
57) 373-38-71, факс: (+380 57) 373-30-84, электронная почта:
cryo@online.kharkov.ua
* To whom correspondence should be addressed: 23,
Pereyaslavskaya str., Kharkov, Ukraine 61015; tel.:+380 57 373
3871, fax: +380 57 373 3084, e-mail: cryo@online.kharkov.ua
328
являются фактором, который ухудшает результаты
ВРТ [18].
При наличии хронического воспалительного
процесса необходимость его коррекции не вызы-
вает сомнений. Широко используемые методы
лечения, основанные на антибиотикотерапии, не
дают и не могут дать стойкого положительного
эффекта, так как у таких пациентов нарушены ме-
ханизмы иммунного гомеостаза и показана не
только этиотропная, но и патогенетическая тера-
пия.
В связи с развитием новых направлений в крио-
биологии расширились возможности клиницистов
по использованию препаратов из тканей фетопла-
центарного комплекса, которые даже при длитель-
ном хранении сохраняют свои биологические
эффекты [2, 3, 6, 7, 9].
Криоэкстракт плаценты (КП), являясь одним
из наиболее простых в хранении и использовании
криопрепаратов, обладает выраженными иммуно-
корригирующими и регенеративными свойствами
и выгодно отличается от препаратов, подвергнутых
термической обработке [6, 7, 12, 13]. Экстракты
плаценты долгое время использовались как актива-
торы физиологических функций организма челове-
ка [16].
Поскольку изучение функционального состояния
репродуктивных клеток человека сопряжено с ря-
дом морально-этических и технических сложнос-
тей, особую актуальность приобретает проблема
моделирования процессов хронического воспаления
репродуктивных органов экспериментальных жи-
вотных, максимально приближённых к тем, которые
происходят в организме женщины. Общепринято,
что лабораторная мышь является адекватной кли-
нической моделью для изучения эмбриологичес-
кого этапа процедуры IVF как одного из основных
этапов ВРТ, в частности – влияния экзогенных гона-
дотропных гормонов, применяемых для индукции
суперовуляции, на качество гамет и последующее
развитие эмбрионов [14, 15].
Цель работы – изучение влияния криоэкс-
тракта плаценты на индукцию суперовуляции у
лабораторных мышей с синдромом хронического
воспаления яичников.
Материалы и методы
Опыты проводили на самках мышей гибрида
F1 (CBA×C57Bl) c массой 18–20 г. Животных раз-
делили на три группы: контрольную (14 животных)
и две экспериментальные (21 животное). Хроничес-
кое воспаление яичников у животных эксперимен-
тальных групп моделировали одноразовым введе-
нием внутрибрюшинно 1 мг λ-карагинена (Sigma,
США) в 0,5 мл изотонического раствора хлорида
натрия [4]. Самкам мышей экспериментальной
treatment methods, based on antibiotic therapy do not
provide and can not provide the stable positive effect,
since in such patients the mechanisms of immune
homeostasis are impaired and they are prescribed both
with etiotropic and pathogenetic therapy.
Development of new trends in cryobiology extended
the possibilities of clinical workers in using the prepa-
rations derived from the tissues of fetoplacental com-
plex, which even after long-term storage preserve their
biological effects [2, 3, 6, 7, 9].
Placental cryoextract (PC) being one of the sim-
plest in storage and usage preparations possesses mani-
fested immune correcting and regenerative properties
and compares favourably with the preparations sub-
jected to thermal processing [6, 7, 12, 13]. Placental
extracts for a long time have been used as the activat-
ing agents of human physiological functions [16].
Since the study of functional state of human repro-
ductive cells is associated with some moral and ethi-
cal, as well as technical complications a special actu-
ality is gained by the problem of simulating the chronic
inflammation of reproductive organs of experimental
animals under conditions maximally approached to those
occurring in woman's organism during the ART. It is
well known that a laboratory mouse is an adequate
clinical model to study embryological stage of IVF pro-
cedure as the main ART stage, in particular, the effect
of exogenic gonadotropic hormones, applied for the
induction of superovulation, the quality of gametes and
following development of embryos [14, 15].
The research aim is to study the effect of placental
cryoextract on superovulation induction in laboratory
mice with the syndrome of chronic ovary inflamma-
tion.
Materials and methods
The experiments were carried-out in female mice
of hybrid F1 (CBA×C57Bl) with the mass of 18–20 g.
The animals were divided into three groups: control
(14 animals) and two experimental (21 animals).
Chronic ovary inflammation in the animals of experi-
mental groups was simulated with single intraperito-
neal introduction of 1 mg λ-carrageenan (Sigma, USA)
in 0.5 ml of isotonic sodium chloride [4]. Female mice
of experimental group 1 (12 animals) once a day dur-
ing 5 days were subcutaneously introduced with 0.2 ml
sodium chloride isotonic solution, the first introduction
was done just after the injection of λ-carrageenan. The
animals of experimental group 2 (9 animals) once a
day for 5 days were subcutaneously introduced with
0.2 ml "Cryocell-placental cryoextract" preparation
(Certificate of State Registration of Ukraine N604/
06300200000 dated of 04.07.2006), the first introduc-
tion was done just after injection of λ-carrageenan.
The volume of the introduced preparation for labora-
tory animals was calculated on the method of dosing
problems
of cryobiology
Vol. 20, 2010, №3
проблемы
криобиологии
Т. 20, 2010, №3
329
группы 1 (12 животных) раз в сутки на протяжении
5 дней вводили подкожно 0,2 мл изотонического
раствора хлорида натрия, первое введение – сразу
после инъекции λ-карагинена. Животным экспери-
ментальной группы 2 (9 животных) раз в сутки на
протяжении 5 дней вводили подкожно 0,2 мл препа-
рата “Криоцелл – криоэкстракт плаценты” (сер-
тификат о государственной регистрации Украины
№604/06300200000 от 04.07.2006), первое введе-
ние – непосредственно после инъекции λ-карагине-
на. Объем вводимого препарата для лабораторных
животных рассчитывали по методу дозирования
веществ для млекопитающих с учетом констант
биологической активности и коэффициента видовой
устойчивости. Характеризуя резистентность мле-
копитающих к ксенобиотикам, коэффициент видо-
вой устойчивости учитывает такие параметры, как
основной обмен, объем сердечной деятельности,
уровень развития центральной нервной системы
[8]. Расчетная величина дозы КП составила 0,2 мл
для мыши массой 20 г.
На 21-е сутки воспаления у экспериментальных
животных вызывали суперовуляцию путем внутри-
брюшинной инъекции 5 МЕ гонадотропина сыво-
ротки жеребых кобыл (ГСЖК) (“Folligon”, Голлан-
дия) и 7,5 МЕ человеческого хорионического
гонадотропина (чХГ) (“Сhorulon”, Голландия) с ин-
тервалом между инъекциями 46–48 ч. У животных
контрольной группы суперовуляцию индуцировали
аналогичным образом. Ооциты и эмбрионы мыши
выделяли по стандартной методике [1]. Ооциты в
составе ооцит-кумулюсных комплексов выделяли
через 12–13 ч после инъекции чХГ путем прока-
лывания ампулярного отдела отпрепарированных
яйцеводов в теплой фосфатно-буферной среде
Дюльбекко с добавлением 10% фетальной теля-
чьей сыворотки (“Sigma”, США). Для удаления
клеток кумулюса ооциты экспонировали в течение
2–5 мин в теплом растворе (37°С) гиалуронидазы
(“Sigma”, США) с концентрацией 0,1 мг/мл
(150 ед/мл), приготовленном на физиологической
среде Дюльбекко. Для получения эмбрионов самок
после инъекции чХГ подсаживали к самцам той
же линии на ночь для осеменения. День обнаруже-
ния копуляционной пробки считался первым днем
беременности. Зиготы выделяли через 24 ч после
инъекции чХГ, 2-клеточные эмбрионы получали
через 48 ч после инъекции чХГ. Полученные ооци-
ты и эмбрионы трижды отмывали в среде и немед-
ленно использовали в эксперименте.
Качество ооцитов и ранних эмбрионов оценивали
по морфологическим критериям, а также по сос-
тоянию хромосомного аппарата клеток после
окрашивания ДНК-специфическим красителем
Hoechst 33342 (“Sigma”, США). Эмбрионы экспо-
the substances for mammals taking into account the
constants of biological activity and coefficient of spe-
cies resistance. When characterizing the resistance of
mammals to xenobiotics, the coefficient of species re-
sistance comprise such parameters as main exchange,
volume of cardiac activity, level of development of
central nervous system [8]. The calculated PC dose
made 0.2 ml for 20 g' mouse.
To the 21st day of inflammation in experimental
animals the superovulation was initiated by means of
injection of 5 IU pregnant mare serum gonadotropin
(PMSG) ("Folligon", Holland) and 7.5 IU human cho-
rionic gonadotropin (hCG) ("Chorulon", Holland) with
the interval between the injections of 46–48 hrs. In
the animals of the control group superovulation was
induced by the similar way. Oocytes and embryos of
mice were isolated according to the standard methods
[1]. Oocytes as the part of oocyte-cumulus complexes
were isolated in 12–13 hrs after injection of hCG by
means of puncture of ampular part of the oviducts sub-
jected to preparation in warm phosphate buffered
Dulbecco’s medium supplemented with 10% fetal calf
serum (Sigma, USA). To remove the cumulus cells
the oocytes were exposed for 2–5 min in warm solu-
tion (37°C) of hyaluronidase (Sigma, USA) with the
concentration of 0.1 mg/ml (150 units/ml) prepared with
Dulbecco’s physiological medium. To obtain embryos
after injection of hCG the females were placed to-
gether with males of the same breed for a night for
insemination. The day of revealing the copulation plug
was considered as the first day of pregnancy. Zygotes
were isolated in 24 hrs after injection of hCG, two-cell
embryos were obtained 48 hrs later the injection of
hCG. The resulted oocytes and embryos were thrice
washed in the medium and immediately used in the
experiment.
The quality of oocytes and early embryos was as-
sessed on morphological criteria as well as on the state
of chromosome apparatus of cells after staining with
DNA-specific dye Hoechst 33342 (Sigma, USA). The
embryos were exposed for 30 min at 37°C in 0.1%
solution of Hoechst 33342, prepared with Dulbecco
medium (Sigma, USA). Final concentration of the dye
in incubation medium made 10–5 mol/l. The state of
nuclear material of embryos after staining was esti-
mated with microscope LSM510 META (Carl Zeiss,
Germany) at excitation wavelength of 405 nm. Emis-
sion was recorded at 465 nm.
The experiments in animals were done in accord-
ance with "General principles of the experiments in
animals", approved at the 3rd National Congress on
Bioethics (Kiev, Ukraine, 2007) and coordinated with
the statements of "European Convention on Protec-
tion of Vertebrate Animals Used for Experimental and
Other Scientific Purposes" (Strasbourg, France, 1985).
problems
of cryobiology
Vol. 20, 2010, №3
проблемы
криобиологии
Т. 20, 2010, №3
хынтовижыппурГ
slaminafopuorG
овтсечилоK
вхынтовиж
еппург
slaminaforebmuN
puorgrep
)IIМ(вотицоохылерзовтсечилоK
)IIM(setycooderutamforebmuN
еещбО
овтсечилок
вотицоо
forebmunlatoT
setycoo
овтсечилоK
1анвотицоо
еонтовиж
setycooforebmuN
laminarep
ьлортноK
lortnoC 5 28 60,1±4,61
1аппурГ
1puorG 4 34 *1,7±7,01
2аппурГ
2puorG 3 74 0,8±76,51
#
330
нировали в течение 30 мин при 37°С в 0,1%-м
растворе Hoechst 33342, приготовленном на среде
Дюльбекко (“Sigma”, США). Конечная концен-
трация красителя в среде инкубирования составля-
ла 10–5 моль/л. Состояние ядерного материала
эмбрионов после окрашивания исследовали под
микроскопом LSM510 META (Carl Zeiss, Герма-
ния) при длине волны возбуждения 405 нм. Эмис-
сию регистрировали на длине волны 465 нм.
Эксперименты на животных выполняли в соот-
ветствии с “Общими принципами экспериментов
на животных”, одобренными ІII Национальным
конгрессом по биоэтике (Киев, Украина, 2007) и
согласованными с положениями “Европейской Кон-
венции о защите позвоночных животных, которые
используются для экспериментальных и других
научных целей” (Страсбург, Франция, 1985).
Статистическую обработку данных проводили
с использованием t-критерия Стьюдента. В расче-
тах применяли пакет статистического анализа
данных программы “Excel-2007”.
Результаты и обсуждение
При анализе полученных данных наиболее
значимые и достоверные различия между выде-
ленными группами были установлены по таким
показателям, как уровень выхода зрелых ооцитов
на стадии МII мейоза и количество ранних эмбрио-
нов, полученных после гормональной стимуляции
яичников.
В табл. 1 представлены результаты количест-
венной оценки выхода зрелых ооцитов мыши (через
13 ч после введения чХГ) в контрольной и экспе-
Таблица 1. Количественные результаты индукции суперовуляции у
мышей в контрольной и экспериментальных группах
Table 1. Quantitative results of superovulation induction in mice in the
control and experimental groups
Примечание: * – p < 0,05 по сравнению с контролем; # – p < 0,05 по срав-
нению с группой 1.
Notes: * – p < 0.05 if compared with the control; # – p < 0.05 if compared with
the group 1.
риментальных группах животных. Как
видно, в группе 1 получено статисти-
чески достоверно меньше ооцитов в
пересчете на одно животное, чем в
контрольной. Уровень выхода ооцитов
в экспериментальной группе 2 был
достоверно выше по сравнению с тако-
вым в экспериментальной группе 1.
Достоверных различий по этим показа-
телям между животными контрольной
группы и экспериментальной группы 2
получено не было (p > 0,05). Следует от-
метить, что в выделенном материале
как в контрольной, так и в эксперимен-
тальной группе 2 наряду с ооцит-куму-
люсными комплексами присутствова-
ли в небольшом количестве ооциты
без клеток кумулюса, что, по всей види-
мости, связано с непосредственным
влиянием процедуры индукции супер-
овуляции, а также “ответом” яичников
на гонадотропную стимуляцию.
The data were statistically processes using the Stu-
dent's t-criterion. In calculations for statistical analysis
the MS Excel 2007 software was used.
Results and discussion
When analyzing the findings the most statistically
significant differences between the chosen groups were
revealed on such parameters as the yield of mature
oocytes at meiosis stage MII and number of early
embryos obtained in the result of ovary hormonal stimu-
lation.
Table 1 shows the results of qualitative estimation
of the yield of mature murine oocytes (13 hrs later
introduction of hCG) in the control and experimental
groups of animals. It is seen, that amount of oocytes
per one animal in the group 1 was statistically and sig-
nificantly lower than in the control group. The level of
yield of oocytes in the experimental group 2 was sig-
nificantly higher if compared with that in experimental
group 1. No statistically significant differences on these
indices between animals of the control group and ex-
perimental group 2 were found (p < 0.05). It should be
noted that in isolated material both in the control and
experimental group 2 along with oocyte-cumulus com-
plexes the oocytes without cumulus cells were present
in a small amount, that is probably related to direct
effect of the procedure of superovulation induction, as
well as the "response" of ovaries to gonatropic stimu-
lation.
Thus comparative estimation of the rates of oocyte
yield in the animals of the control and experimental
groups enables to state that chronic inflammatory proc-
ess results in the aggravation of the "response" of
problems
of cryobiology
Vol. 20, 2010, №3
проблемы
криобиологии
Т. 20, 2010, №3
хынтовижыппурГ
slaminafopuorG
воноирбмэхынчотелкондоовтсечилоK
soyrbmellec1forebmuN
еещбО
овтсечилок
rebmunlatoT
воноирбмЭ
еонтовиж1ан
soyrbmE
laminarep
котелK
йоньламона
ииголофром
огещбото%(
)автсечилок
lamronbahtiwslleC
fo%(ygolohprom
)rebmunlatot
ьлортноK
lortnoC
)3=n(
27 2,4±0,42 )%5,03(22
1аппурГ
1puorG
)4=n(
54 *2,2±3,11 )%6,62(21
2аппурГ
2puorG
)3=n(
56 8,5±7,12 # )%1,32(51
331
Таким образом, сравнительная оценка уровней
выхода ооцитов у животных контрольной и экспе-
риментальных групп позволяет утверждать, что
хронический воспалительный процесс приводит к
ухудшению “ответа” яичников на стимуляцию гона-
дотропинами, выражающуюся в достоверном
уменьшении количества получаемых ооцитов. При
введении КП восстанавливается способность яич-
ника реагировать на индукцию суперовуляции на
фоне хронического воспалительного процесса, что
отражается в достоверном увеличении количества
ооцитов. Наличие в получаемом материале “бес-
кумулюсных” ооцитов свидетельствует о более
активном “ответе” яичников животных контроль-
ной и экспериментальной группы 2 на действие
гонадотропных гормонов.
В табл. 2 представлены результаты морфологи-
ческой оценки презумптивных зигот, полученных
от животных контрольной и экспериментальных
групп.
Как видно из представленных данных, в
контрольной группе количество одноклеточных
эмбрионов, приходящееся на одно животное, досто-
верно выше, чем в экспериментальной группе 1
(24,0 ± 4,2 и 11,3 ± 2,3, p < 0,001) и сравнимо с уров-
нем выхода зигот в экспериментальной группе 2
(21,7 ± 5,8, р > 0,05). Достоверные различия по это-
му показателю установлены и между эксперимен-
тальными группами (p < 0,001). Для более полного
анализа качества получаемого материала в нашей
Таблица 2. Количественная и морфологическая оценка
одноклеточных эмбрионов, полученных в результате индукции
суперовуляции в выделенных группах животных.
Table 2. Quantitative and morphological assessment of one-cell em-
bryos obtained as the result of superovulation induction in the selected
groups of animals
Примечание: * – p < 0,001 по сравнению с контролем; # – p < 0,001 по
сравнению с группой 1.
Notes: * – p < 0.001 if compared with the control; # – p < 0.001 if compared
with the group 1.
работе мы использовали окрашивание
презумптивных зигот флуоресцентным
красителем Hoescht-33342 с целью
оценки ядерного материала эмбрионов.
На рис. 1 представлены характерные
микроскопические изображения зигот
мыши контрольной и эксперименталь-
ных групп.
Как видно из представленных дан-
ных (табл. 2) в контрольной группе жи-
вотных 69,4% зигот находились на ста-
дии сближающихся пронуклеусов, что
соответствовало нормальной морфоло-
гии зигот, выделенных через 24 ч после
введения чХГ. В экспериментальных
группах животных эти показатели дос-
товерно не отличались от контроля и
составили 73 и 76,9% соответственно.
Количество эмбрионов аномальной
морфологии согласно визуальной оцен-
ке (наличие фрагментарных форм по
типу “виноградной грозди”) в контроль-
ной и экспериментальных группах 1 и 2
составило 30,5, 26,6 и 23,1% соответ-
ственно. Окрашивание Hoechst 33342
позволило выявить в одноклеточных
oocytes to stimulation with gonadotropins, manifested
in statistically significant lessening the number of the
resulted oocytes. During introduction of PC the ability
of ovary to respond to the superovulation induction re-
stores on the background of chronic inflammatory proc-
ess, that is reflected in statistically significant rise in
the number of oocytes. The presence of "cumulus-free"
oocytes in the obtained material testifies to more ac-
tive "response" of animal ovaries of both the control
and experimental group 2 to the effect of gonadotropic
hormones.
Table 2 demonstrates the results of morphological
estimation of presumptive zygotes, derived from the
animals of the control and experimental groups.
As it is seen from the presented data in the control
group the number of one-cell embryos per one animal
is statistically and significantly higher than in the ex-
perimental group 1 (24.0 ± 4.2 and 11.3 ± 2.3, p < 0.001)
and comparable with the yield rate of zygotes in ex-
perimental group 2 (21.7 ± 5.8, p > 0.05). Statistical
differences on these indices have been found also be-
tween experimental groups (p < 0.001). For more com-
plete analysis of the quality of the material obtained in
our research we used the staining of presumptive zy-
gotes with fluorescent dye Hoescht-33342 to assess
the nuclear material of the embryos. Figure 1 presents
the characteristic microscopic images of mice zygotes
of the control and experimental groups.
As it is seen from the data (Table 2) in the control
group of animals 69.4% zygotes were at the stage of
problems
of cryobiology
Vol. 20, 2010, №3
проблемы
криобиологии
Т. 20, 2010, №3
хынтовижыппурГ
slaminafopuorG
воноирбмэхынчотелкхувдовтсечилоK
soyrbmellec2forebmuN
еещбО
овтсечилок
rebmunlatoT
воноирбмЭ
еонтовиж1ан
soyrbmE
laminarep
котелK
йоньламона
ииголофром
огещбото%(
)автсечилок
lamronbahtiwslleC
fo%(ygolohprom
)rebmunlatot
ьлортноK
lortnoC
)6=n(
661 4,0±7,72 )%5,62(44
1аппурГ
1puorG
)4=n(
85 *6,7±5,41 )%3,92(71
2аппурГ
2puorG
)3=n(
83 *8,1±7,21 )%7,32(9
332
что в группе 2 наблюдалась тенденция
к увеличению выхода морфологически
интактных эмбрионов (рис. 2)
Известно, что качество ооцитов и
дальнейшее развитие эмбрионов зави-
сят от множества факторов: состояния
и возраста самок-доноров, генетической
линии мышей, условий и состава сре-
ды инкубации, влияния экзогенных
гонадотропных гормонов на процесс
овуляции. Качество ооцитов, в свою
очередь, влияет на способность эмбрио-
нов после оплодотворения к последую-
щему делению дробления. Эмбрионы,
имеющие различные повреждения,
удаляются в процессе деления дроб-
ления в результате апоптоза [19, 20].
Показано, что разработанный ранее
и использованный в данной работе
метод моделирования реактивного
хронического воспаления яичников с
использованием λ-карагинена сущест-
венно влияет на функцию яичников
мышей и окружающих их тканей [4].
Результаты данного исследования по-
эмбрионах аномалии ядерного материала: фраг-
ментация хромосом и их рассеивание по цито-
плазме, отсутствие пронуклеусов. Достоверных
различий между группами по этим показателям не
было выявлено (р > 0,05). Следует отметить, что
эмбрионы экспериментальных групп были менее
устойчивы к самой процедуре инкубации в раст-
воре красителя, чем контрольные. Это косвенно
свидетельствует о снижении резистентности ооци-
тов к химическим и физическим воздействиям на
фоне хронического воспалительного процесса.
При оценке количественных показателей выхо-
да эмбрионов на стадии двух бластомеров уста-
новлено, что количество 2-клеточных эмбрионов,
приходящихся на одно животное, в контрольной
группе было достоверно выше, чем в эксперимен-
тальных (p < 0,001) (табл. 3).
Достоверных различий по уровню выхода 2-кле-
точных эмбрионов между экспериментальными
группами обнаружено не было (p > 0,05).
При оценке морфологии 2-клеточных эмбрионов
к аномальным относили тех, в которых наблюда-
лась полная либо частичная фрагментация одного
или двух бластомеров по типу “виноградной гроз-
ди”, что свидетельствует о поздней стадии апоп-
тоза. Окрашивание Hoechst 33342 позволило обна-
ружить остановку (блок) некоторых эмбрионов на
стадии зиготы, а также наличие фрагментации
ядерного материала.
Количество эмбрионов с аномальной морфоло-
гией в экспериментальных и контрольной группах
было сравнимо (табл. 3), однако следует отметить,
Таблица 3. Количественная и морфологическая оценка
двухклеточных эмбрионов, полученных в результате индукции
суперовуляции в выделенных группах животных
Table 3. Quantitative and morphological assessment of two-cell
embryos obtained as the result of superovulation induction in the
selected groups of animals
Примечание: * – p < 0,001 по сравнению с контролем.
Notes: * – p < 0.001 if compared with the control.
approaching pronuclei, that corresponded to normal
morphology of zygotes, isolated 24 hrs later hCG intro-
duction. In experimental groups of animals these indi-
ces statistically and significantly did not differ from the
control and made 73 and 76.9%, correspondingly.
The number of embryos of abnormal morphology
according to visual estimation (presence of fragmen-
tary forms like "grape bunch") in the control and ex-
perimental groups 1 and 2 made 30.5, 26.6 and 23.1%,
correspondingly. The staining with Hoechst 33342 ena-
bled to reveal in one-cell embryos the abnormalities of
nuclear material: fragmentation of chromosomes and
their dissemination in cytoplasm and absence of pro-
nuclei. No statistically significant differences between
the groups on these indices were revealed (p > 0.05).
It should be noted that embryos of experimental groups
were less resistance to the procedure of incubation
itself in dye solution if compared with the control ones.
This indirectly testifies to a reduced resistance of
oocytes to chemical and physical effects on the back-
ground of chronic inflammatory process.
When estimating the quantitative parameters of em-
bryos' yield at the stage of two blastomeres it has been
found that the number of two-cell embryos per one
animal in the control group was statistically and signifi-
cantly higher than in experimental ones (p < 0.001)
(Table 3).
No statistical and significant differences in the rate
of yield of two-cell embryos between experimental
groups were revealed (p > 0.05).
When assessing the morphology of two-cell em-
bryos those were referred as abnormal wherein com-
problems
of cryobiology
Vol. 20, 2010, №3
проблемы
криобиологии
Т. 20, 2010, №3
333
Рис. 1. Микрофотографии презумптивных зигот мыши.
Fig. 1. Microphotos of murine presumptive zygotes.
Неокрашенные клетки
Non-stained cells
Клетки, окрашенные Hoechst 33342
Hoechst 33342 stained cells
Контроль Control
Группа 1 Group 1
Группа 2 Group 2
problems
of cryobiology
Vol. 20, 2010, №3
проблемы
криобиологии
Т. 20, 2010, №3
334
Неокрашенные клетки
Non-stained cells
Клетки, окрашенные Hoechst 33342
Hoechst 33342 stained cells
Контроль Control
Группа 1 Group 1
Группа 2 Group 2
Рис. 2. Микрофотографии 2-клеточных эмбрионов мыши.
Fig. 2. Microphotos of two-cell murine embryos.
problems
of cryobiology
Vol. 20, 2010, №3
проблемы
криобиологии
Т. 20, 2010, №3
335
казали, что индукция хронического воспаления у
самок мышей существенно снижает количество
ооцитов, зигот и 2-клеточных эмбрионов, а также
приводит к ухудшению морфологии эмбрионов, что
свидетельствует о запуске апоптотических реак-
ций как в яичниках, так и в ооцитах, полученных в
результате индукции суперовуляции. Можно пред-
положить, что основной каскад апоптотических
реакций, вызванный хроническим воспалением,
проявляется главным образом в атрезии примор-
диальных фолликулов, снижении их рецептивности
к гонадотропинам и, как следствие, в уменьшении
количества ооцитов после индукции суперовуляции.
Введение препарата “Криоцелл – криоэкстракт пла-
центы” самкам мышей с реактивным воспалением
яичников способствует более эффективной индук-
ции суперовуляции гонадотропными гормонами.
Этот факт подтверждается достоверным увеличе-
нием количества ооцитов и одноклеточных эмбрио-
нов в пересчете на одно животное в эксперимен-
тальной группе 2 по сравнению с группой 1 и
фактически достижением уровня соответствую-
щих показателей контрольной группы. Один из
механизмов позитивного влияния КП, по-видимо-
му, связан с действием его гормональных компо-
нентов – прогестерона, эстрадиола, пролактина,
гонадотропинов. Хотя объяснить эффект подобной
терапии исключительно гормональной составляю-
щей невозможно.
Достоверные отличия в морфологических ха-
рактеристиках эмбрионов между контрольными и
экспериментальными группами животных в нашей
работе не обнаружены, однако была отмечена
тенденция к снижению качества эмбрионов в груп-
пе 1 и возврату к показателям контроля в группе
2. Известно, что на качество ооцитов и последую-
щее развитие эмбрионов существенное влияние
оказывает также и гормональная стимуляция
экзогенными гонадотропными гормонами. В поль-
зу этого свидетельствует тот факт, что в общем
пуле гамет, полученных от животных контрольной
группы и экспериментальной группы 2, присут-
ствуют ооциты без кумулюса. Неоднократно пока-
зано, что введение экзогенных гонадотропных
гормонов (ГСЖК и чХГ) оказывает существенное
влияние на качество и степень зрелости ооцитов
[11, 16, 20]. Препараты с фолликулостимулирующей
активностью (ГСЖК) влияют на фолликулы двояко:
увеличивают митотическую активность в мелких
фолликулах и защищают от атрезии более крупные.
Однако наряду с увеличением общего количества
ооцитов в результате суперовуляции увеличивается
количество ооцитов с признаками дегенерации или
скрытыми нарушениями [10]. По всей видимости,
эти воздействия усугубляются, наслаиваясь на
патологический фон, сопутствующий хроническому
воспалительному процессу.
plete or partial fragmentation of one or two blastomeres
on type of "grape bunch" was observed, testifying to
late apoptosis stage. Staining with Hoechst 33342 ena-
bled the revealing of the blocking of some embryos at
the zygote stage, as well as the presence of fragmen-
tation of nuclear material.
The number of embryos with abnormal morphol-
ogy in experimental and control groups was compara-
ble (Table 3), however it should be noted that in the
group 2 the tendency to a rise in the yield of morpho-
logically intact embryos was observed (Fig. 2).
It is known that the quality and further develop-
ment of embryos depend on numerous factors: state
and age of donor females, genetic line of mice, condi-
tions and composition of incubation medium, effect of
exogenous gonadotropic hormones on ovulation proc-
ess. Quality of oocytes, in its turn, affects the ability of
embryos after fertilization to following fission. The
embryos with different impairments are withdrawn
during fission process as a result of apoptosis [19, 20].
It has been shown that developed previously and
used in this research method of modelling a reactive
chronic inflammation of mice ovaries using λ-carra-
geenan significantly affects the function of ovaries and
surrounding tissues [4]. The results of this study have
shown that induction of chronic inflammation in female
mice significantly reduces the number of oocytes, zy-
gotes and two-cell embryos, as well leads to aggrava-
tion of embryo morphology, testifying to initiation of
apoptotic reactions both in ovaries and oocytes, de-
rived as the result of ovulation induction. One may sup-
pose that the main cascade of apoptotic reactions
caused with chronic inflammation is basically mani-
fested in atresia of primordial follicles, reduction of their
receptivity to gonadotropins and as a consequence in
lessening the number of oocytes after superovulation
induction. Introduction of the "Cryocell – placental
cryoextract" preparation to female mice with reactive
ovary inflammation contributes to more effective in-
duction of superovulaiton with gonadotropic hormones.
This fact is confirmed with statistical and significant
rise in the number of oocytes and one-cell embryos
per one animal in experimental group 2 if compared
with group 1 and actually approaching the level of cor-
responding indices of the control group. One of the
mechanisms of PC positive effect is likely related to
the effect of its hormonal components: progesterone,
estradiol, prolactin, gonadotropins. Though the explain-
ing of the effect of this therapy with hormonal compo-
nent is impossible.
No statistically significant differences in morpho-
logical characteristics of embryos between the control
and experimental groups of animals in our research
were found, however the tendency to the reduction of
the quality of embryos in the group 1 and reversion to
the control indices in the group 2 was noted. It is known
that quality of oocytes and following development of
problems
of cryobiology
Vol. 20, 2010, №3
проблемы
криобиологии
Т. 20, 2010, №3
336
Выводы
Проведенные исследования показали, что хро-
ническое реактивное воспаление яичников у самок
мышей оказывает выраженное влияние на резуль-
таты индукции суперовуляции. У животных с
моделированным воспалением яичников сущест-
венно снижается количество ооцитов, зигот и 2-
клеточных эмбрионов, а также отмечается ухуд-
шение морфологии эмбрионов при индукции супер-
овуляции.
Введение криоэкстракта плаценты самкам мы-
шей с синдромом реактивного воспаления яичников
оказывает выраженное терапевтическое действие
и способствует более эффективной индукции су-
перовуляции под влиянием экзогенных гонадотроп-
ных гормонов, вследствие чего увеличивается
относительное количество гамет и ранних эмбрио-
нов. Отмечены тенденции к ухудшению морфоло-
гических характеристик эмбрионов на фоне воспа-
лительного процесса и их улучшению после терапии
криоэкстрактом плаценты.
Авторы благодарят ст.н.с. Коваленко И.Ф., н.с.
Холодного В.С. за методическую помощь в работе,
ст.н.с. Гончарук Е.И. – за помощь в планировании и
обсуждении результатов эксперимента.
Литература
Биология развития млекопитающих. Методы / Под ред.
М. Манк.– Москва: Мир, 1990.– 406 с.
Грищенко В.І., Пітько В.А., Нерадовська О.В. Застосу-
вання тканинних біопрепаратів в лікуванні хворих з
запальними процесами придатків матки // Збірник
наукових праць Асоціації акушерів-гінекологів України.–
Київ, 2000.– С. 420–422.
Грищенко В.И., Юрченко Т.Н., Прокопюк О.С. Новые
криобиологические технологии получения клеточных и
тканевых фетоплацентарных трансплантатов и их
использование в медицине // Трансплантологія.– 2004.–
Т. 7, №3.– С. 123–129.
Грищенко Н.Г., Клименко Н.А., Гоголь Н.И., Татарко С.В.
Обоснование модели реактивного хронического воспа-
ления яичников у мышей // Теоретична і експеримен-
тальна медицина.– 2009.– №4.– С. 10–17.
Дубоссарская З.М., Миляновский А.И., Коляденко В.Г.
Хронические воспалительные процессы внутренних
женских половых органов.– Київ: Здоров'я, 1991.– 151 с.
Питько В.А., Грищенко В.И., Суббота Н.П. Влияние
криоэкстракта хориона на состояние иммунитета у
женщин с подострым сальпингоофоритом // Пробл.
криобиологии.– 2000.– №1.– С. 81–85.
Питько В.А. Динамика биохимических показателей в
плазме крови женщин с подострым сальпингоофоритом
при трансплантации криоконсервированной хориальной
ткани // Пробл. криобиологии.– 2001.– №1.– С. 76–79.
Рыболовлев Ю.Р., Рыболовлев Р.С. Дозирование веществ
для млекопитающих по константам биологической актив-
ности // Докл. АН СССР.– 1979.– Т. 247, №6.– С. 1513– 1516.
Юрченко Т.Н., Прокопюк О.С., Ломако В.В. Клеточная и
тканевая трансплантация. Биопрепараты.– Харьков,
2003.– 67 с.
embryos is affected significantly by hormonal stimula-
tion with exogenous hormones. The fact that in total
pool of gametes derived from animals of the control
group and in the experimental group 2 there are cumu-
lus-free oocytes testifies to this favour. Not once it has
been shown that introduction of exogenous gonado-
tropic hormones (PMSG and hCG) affects significantly
the quality and maturity rate of oocytes [11, 16, 20].
Medicines with follicle stimulating activity (PMSG) af-
fect the follicles doubly: increase mitotic activity in small
follicles and protect bigger ones against atresia. How-
ever, along with the increase of total number of oocytes
as a result of superovulation the number of oocytes
with the signs of degeneration or hidden impairments
[10] rises. These effects are apparently aggravated
due to superposition of pathological background accom-
panying chronic inflammatory process.
Conclusions
The performed investigations have shown that
chronic reactive inflammation of ovaries in female mice
rendered the manifested effect on the results of su-
perovulation induction. In the animals with simulated
inflammation of ovaries the number of oocytes, zygotes
and two-cell embryos significantly reduces, as well the
aggravation of the morphology of embryos during su-
perovulation induction was found.
Introduction of placental cryoextract to female mice
with the syndrome of reactive inflammation of ovaries
causes manifested therapeutic effect and contributes
to more effective induction of superovulation under the
influence of exogenous gonadotrophic hormones, due
to which the relative number of gametes and early
embryos increases. There has been found the tendency
to aggravation of morphological characteristics of em-
bryos on the background of inflammation process and
their improvement after therapy with placental cryo-
extract.
The authors express their thanks to senior scientist
Kovalenko I.F., scientific worker Kholodnyy V.S. for me-
thodical assistance, to senior scientist Goncharuk E.I. for the
help in designing and discussing the experimental results.
References
Biology of mammals' development. Methods/ Ed. by M. Mank.–
Moscow: Mir, 1990.– 406 p.
Grischenko V.I., Pit'ko V. A., Neradovskaya O.V. Application
of tissue biopreparations in treatment of patients with
inflammatory processes of uterine appendages// Collected
volume of scientif ic papers of the Association of
Obstetricians-Gynaecologists of Ukraine.– Kiev, 2000.–
P. 420–422.
Grischenko V.I., Yurchenko T.N., Prokopyuk O.S. New
cryobiological technologies of obtaining cell and tissue
fetoplacental transplants and their usage in medicine//
Transplantologiya.– 2004.– Vol. 7, N3.– P. 123–129.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
1.
2.
3.
problems
of cryobiology
Vol. 20, 2010, №3
проблемы
криобиологии
Т. 20, 2010, №3
337
Ertizeid G., Storeng R. Adverse effects of gonadotrophin
treatment on pre- and postimplantation development in mice //
J. Reprod. Fert.– 1992.– Vol. 96, N4.– P. 649–655.
Krisher R.L. The effect of oocyte quality on development //
J. Anim. Sci.– 2004.– Vol. 82, E-Suppl.– P. E14–E23.
Liu K.X., Kato Y., Kaku T., Sugiyama Y. Human placental
extract stimulates liver regeneration in rats // Biol.Pharmaceut.
Bull.– 1998.– Vol. 21, N1.– P. 44–49.
Neo S., Ishikawa T., Ogiwara K. et al. Canine bone marrow
cells differentiate into hepatocyte-like cells and placental
hydrolysate is a potential inducer // Res. Veterin. Sci.– 2009.–
Vol. 87, N1.– P. 1–6.
Neuber E., Powers R.D. Is the mouse a clinically relevant
model for human fertilization failures // Hum. Reprod.– 2000.–
Vol.15, N1.– P. 171–174.
Quinn P., Horstman F.C. Is the mouse a good model for the
human with respect to the development of the preimplantation
embryo in vitro? // Hum. Reprod.– 1998.– Vol. 13, Suppl. 4.–
P. 173–183.
Redina O.E., Amstislavsky S.Ya., Maksimovsky L.F. Induction
of superovulation in DD mice at different stages of the oest-
rous cycle// J. Reprod. Fert.– 1994.– Vol. 102, N2.– P. 263–
267.
Seo T.B.,Han I.S., Yoon J.H. et al. Growth-promoting activity
of hominis placenta extract on regenerating sciatic nerve //
Acta Pharmacol. Sin.– 2006.– Vol. 27, N1.– P. 50–58.
Strandell A., Bergh C., Lundin K. Selection of patients suitable
for one-embryo transfer may reduce the rate of multiple births
by half without impairment of overall birth rates // Hum.
Reprod.– 2000.– Vol. 15, N12.– P. 2520–2525.
Takase K., Ishikawa M., Hoshiai H. Apoptosis in the degene-
ration process of unfertilized mouse ova // Tohoku J. Exp.
Med.– 1995.– Vol. 175, N1.– P. 69–76.
Van der Auvera, D'Hooghe T. Superovulation of female mice
delays embryonic and fetal development // Hum. Reprod.–
2001.– Vol. 16, N6.– P. 1237–1243.
Поступила 17.08.2010
Grischenko V.I., Klimenko N.A., Gogol N.I., Tatarko S.V.
Substantiation of the model of reactive chronic inflammation
of murine ovaries// Theoretical and experimental medicine.–
2009.– N4.– P. 10–17.
Dubossarskaya Z.M., Milyanovskiy A.I., Kolyadenko V.G.,
Chronic inflammatory processes of female internal genital
organs.– Kiev: Zdoroviya, 1991.– 151 p.
Pit'ko V.A., Grischenko V.I., Subbota N.P. Action of chorion
cryoextract on the immunity state of females with subacute
salpingo-oophoritis// Problems of Cryobiology.– 2000.– N1.–
P. 81–85
Pit'ko V.A. Dynamics of biochemical indices in blood plasm of
women with subacute salpingo-oophoritis during trans-
plantation of cryopreserved chorionic tissue// Problems of
Cryobiology. – 2001.– N1.– P. 76–79.
Rybolovlev Yu. R., Rybolovlev R.S. Dosage of substances
mammals on biological activity constants // Doklady AN SSSR.–
1976.–Vol. .247, N6.– P. 1513–1516.
Yurchenko T.N., Prokopyuk O.S., Lomako V.V. Cell and tissue
transplantation. Biopreparations.– Kharkov, 2003.– 67 p.
Ertizeid G., Storeng R. Adverse effects of gonadotrophin
treatment on pre- and postimplantation development in mice //
J. Reprod. Fert.– 1992.– Vol. 96, N4.– P. 649–655.
Krisher R.L. The effect of oocyte quality on development //
J. Anim. Sci.– 2004.– Vol. 82, E-Suppl.– P. E14–E23.
Liu K.X., Kato Y., Kaku T., Sugiyama Y. Human placental
extract stimulates liver regeneration in rats // Biol.Pharmaceut.
Bull.– 1998.– Vol. 21, N1.– P. 44–49.
Neo S., Ishikawa T., Ogiwara K. et al. Canine bone marrow
cells differentiate into hepatocyte-like cells and placental
hydrolysate is a potential inducer // Res. Veterin. Sci.– 2009.–
Vol. 87, N1.– P. 1–6.
Neuber E., Powers R.D. Is the mouse a clinically relevant
model for human fertilization failures // Hum. Reprod.– 2000.–
Vol.15, N1.– P. 171–174.
Quinn P., Horstman F.C. Is the mouse a good model for the
human with respect to the development of the preimplantation
embryo in vitro? // Hum. Reprod.– 1998.– Vol. 13, Suppl. 4.–
P. 173–183.
Redina O.E., Amstislavsky S.Ya., Maksimovsky L.F. Induction
of superovulation in DD mice at different stages of the oest-
rous cycle// J. Reprod. Fert.– 1994.– Vol. 102, N2.– P. 263–
267.
Seo T.B.,Han I.S., Yoon J.H. et al. Growth-promoting activity
of hominis placenta extract on regenerating sciatic nerve //
Acta Pharmacol. Sin.– 2006.– Vol. 27, N1.– P. 50–58.
Strandell A., Bergh C., Lundin K. Selection of patients suitable
for one-embryo transfer may reduce the rate of multiple births
by half without impairment of overall birth rates // Hum.
Reprod.– 2000.– Vol. 15, N12.– P. 2520–2525.
Takase K., Ishikawa M., Hoshiai H. Apoptosis in the degene-
ration process of unfertilized mouse ova // Tohoku J. Exp.
Med.– 1995.– Vol. 175, N1.– P. 69–76.
Van der Auvera, D'Hooghe T. Superovulation of female mice
delays embryonic and fetal development // Hum. Reprod.–
2001.– Vol. 16, N6.– P. 1237–1243.
Accepted in 17.08.2010
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
problems
of cryobiology
Vol. 20, 2010, №3
проблемы
криобиологии
Т. 20, 2010, №3
|