Криоконсервирование тромбоцитов. 2. Эффективность криоконсервантов на основе комбинаций криопротекторов при различных режимах замораживания
В работе исследовано влияние различных режимов замораживания концентрата тромбоцитов с комбинированными криозащитными средами на сохранность показателей морфофункциональной полноценности тромбоцитов. Наиболее высокие и стабильные результаты получены при режиме замораживания с высокими скоростями о...
Saved in:
| Date: | 2010 |
|---|---|
| Main Authors: | , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2010
|
| Series: | Проблемы криобиологии |
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/44876 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Криоконсервирование тромбоцитов. 2. Эффективность криоконсервантов на основе комбинаций криопротекторов при различных режимах замораживания / О.А. Богданчикова, В.А. Киреев, А.Т. Ходько, А.М. Компаниец // Пробл. криобиологии. — 2010. — Т. 20, № 4. — С. 443-451. — Бібліогр.: 23 назв. — рос., англ. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-44876 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-448762025-02-23T17:50:58Z Криоконсервирование тромбоцитов. 2. Эффективность криоконсервантов на основе комбинаций криопротекторов при различных режимах замораживания Platelet Cryopreservation. 2. Efficiency of Cryopreservatives Based on Cryoprotectant Combinations Under Different Freezing Regimens Богданчикова, О.А. Киреев, В.А. Ходько, А.Т. Компаниец, А.М. Криоконсервирование биообъектов В работе исследовано влияние различных режимов замораживания концентрата тромбоцитов с комбинированными криозащитными средами на сохранность показателей морфофункциональной полноценности тромбоцитов. Наиболее высокие и стабильные результаты получены при режиме замораживания с высокими скоростями охлаждения, а также при отсутствии переохлаждения и быстром прохождении плато кристаллизации. У роботі досліджено вплив різних режимів заморожування концентрату тромбоцитів з комбінованими кріозахисними середовищами на збереженість показників морфофункціональної повноцінності тромбоцитів. Найбільш високі і стабільні результати отримані при режимі заморожування з високими швидкостями охолодження, а також при відсутності переохолодження і швидкому проходженні плато кристалізації. The effect of different freezing regimens of platelet concentrate with combined cryoprotective media on the indices of platelet morphofunctional integrity was studied in the research. The highest and the most stable results were obtained at freezing regimen with high cooling rates as well as with the absence of overcooling and rapid passing through the crystallization plateau. 2010 Article Криоконсервирование тромбоцитов. 2. Эффективность криоконсервантов на основе комбинаций криопротекторов при различных режимах замораживания / О.А. Богданчикова, В.А. Киреев, А.Т. Ходько, А.М. Компаниец // Пробл. криобиологии. — 2010. — Т. 20, № 4. — С. 443-451. — Бібліогр.: 23 назв. — рос., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/44876 612.111.7:615.014.41 ru Проблемы криобиологии application/pdf Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Криоконсервирование биообъектов Криоконсервирование биообъектов |
| spellingShingle |
Криоконсервирование биообъектов Криоконсервирование биообъектов Богданчикова, О.А. Киреев, В.А. Ходько, А.Т. Компаниец, А.М. Криоконсервирование тромбоцитов. 2. Эффективность криоконсервантов на основе комбинаций криопротекторов при различных режимах замораживания Проблемы криобиологии |
| description |
В работе исследовано влияние различных режимов замораживания концентрата тромбоцитов с комбинированными
криозащитными средами на сохранность показателей морфофункциональной полноценности тромбоцитов. Наиболее высокие
и стабильные результаты получены при режиме замораживания с высокими скоростями охлаждения, а также при отсутствии
переохлаждения и быстром прохождении плато кристаллизации. |
| format |
Article |
| author |
Богданчикова, О.А. Киреев, В.А. Ходько, А.Т. Компаниец, А.М. |
| author_facet |
Богданчикова, О.А. Киреев, В.А. Ходько, А.Т. Компаниец, А.М. |
| author_sort |
Богданчикова, О.А. |
| title |
Криоконсервирование тромбоцитов. 2. Эффективность криоконсервантов на основе комбинаций криопротекторов при различных режимах замораживания |
| title_short |
Криоконсервирование тромбоцитов. 2. Эффективность криоконсервантов на основе комбинаций криопротекторов при различных режимах замораживания |
| title_full |
Криоконсервирование тромбоцитов. 2. Эффективность криоконсервантов на основе комбинаций криопротекторов при различных режимах замораживания |
| title_fullStr |
Криоконсервирование тромбоцитов. 2. Эффективность криоконсервантов на основе комбинаций криопротекторов при различных режимах замораживания |
| title_full_unstemmed |
Криоконсервирование тромбоцитов. 2. Эффективность криоконсервантов на основе комбинаций криопротекторов при различных режимах замораживания |
| title_sort |
криоконсервирование тромбоцитов. 2. эффективность криоконсервантов на основе комбинаций криопротекторов при различных режимах замораживания |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| publishDate |
2010 |
| topic_facet |
Криоконсервирование биообъектов |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/44876 |
| citation_txt |
Криоконсервирование тромбоцитов.
2. Эффективность криоконсервантов на основе комбинаций
криопротекторов при различных режимах замораживания / О.А. Богданчикова, В.А. Киреев, А.Т. Ходько, А.М. Компаниец // Пробл. криобиологии. — 2010. — Т. 20, № 4. — С. 443-451. — Бібліогр.: 23 назв. — рос., англ. |
| series |
Проблемы криобиологии |
| work_keys_str_mv |
AT bogdančikovaoa kriokonservirovanietrombocitov2éffektivnostʹkriokonservantovnaosnovekombinacijkrioprotektorovprirazličnyhrežimahzamoraživaniâ AT kireevva kriokonservirovanietrombocitov2éffektivnostʹkriokonservantovnaosnovekombinacijkrioprotektorovprirazličnyhrežimahzamoraživaniâ AT hodʹkoat kriokonservirovanietrombocitov2éffektivnostʹkriokonservantovnaosnovekombinacijkrioprotektorovprirazličnyhrežimahzamoraživaniâ AT kompaniecam kriokonservirovanietrombocitov2éffektivnostʹkriokonservantovnaosnovekombinacijkrioprotektorovprirazličnyhrežimahzamoraživaniâ AT bogdančikovaoa plateletcryopreservation2efficiencyofcryopreservativesbasedoncryoprotectantcombinationsunderdifferentfreezingregimens AT kireevva plateletcryopreservation2efficiencyofcryopreservativesbasedoncryoprotectantcombinationsunderdifferentfreezingregimens AT hodʹkoat plateletcryopreservation2efficiencyofcryopreservativesbasedoncryoprotectantcombinationsunderdifferentfreezingregimens AT kompaniecam plateletcryopreservation2efficiencyofcryopreservativesbasedoncryoprotectantcombinationsunderdifferentfreezingregimens |
| first_indexed |
2025-11-24T05:32:49Z |
| last_indexed |
2025-11-24T05:32:49Z |
| _version_ |
1849648605855481856 |
| fulltext |
443
* Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию:
ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина 61015; тел.: (+380
57) 373-30-07, факс: (+380 57) 373-30-84, электронная почта:
bogdanchik_11@mail.ru
* To whom correspondence should be addressed: 23,
Pereyaslavskaya str., Kharkov, Ukraine 61015; tel.:+380 57 373
3007, fax: +380 57 373 3084, e-mail: bogdanchik_11@mail.ru
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the Na-
tional Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
Институт проблем криобиологии и криомедицины
НАН Украины, г. Харьков
УДК 612.111.7:615.014.41
О.А БОГДАНчИКОВА, В.А. КИРЕЕВ, А.Т. ХОДЬКО, А.М. КОМПАНИЕЦ*
Криоконсервирование тромбоцитов.
2. Эффективность криоконсервантов на основе комбинаций
криопротекторов при различных режимах замораживания
UDC 612.111.7:615.014.41
O.A. BOGDANCHIKOVA, V.A. KIREEV, A.T. KHOD’KO, A.M. KOMPANIETS*
Platelet Cryopreservation.
2. Efficiency of Cryopreservatives Based on Cryoprotectant
Combinations Under Different Freezing Regimens
В работе исследовано влияние различных режимов замораживания концентрата тромбоцитов с комбинированными
криозащитными средами на сохранность показателей морфофункциональной полноценности тромбоцитов. Наиболее высокие
и стабильные результаты получены при режиме замораживания с высокими скоростями охлаждения, а также при отсутствии
переохлаждения и быстром прохождении плато кристаллизации.
Ключевые слова: концентрат тромбоцитов, комбинированные криозащитные среды, режимы замораживания, скорости
охлаждения, плато кристаллизации, переохлаждение.
У роботі досліджено вплив різних режимів заморожування концентрату тромбоцитів з комбінованими кріозахисними
середовищами на збереженість показників морфофункціональної повноцінності тромбоцитів. Найбільш високі і стабільні
результати отримані при режимі заморожування з високими швидкостями охолодження, а також при відсутності переохолодження
і швидкому проходженні плато кристалізації.
Ключові слова: концентрат тромбоцитів, комбіновані кріозахисні середовища, режими заморожування, швидкості
охолодження, плато кристалізації, переохолодження.
The effect of different freezing regimens of platelet concentrate with combined cryoprotective media on the indices of platelet
morphofunctional integrity was studied in the research. The highest and the most stable results were obtained at freezing regimen with
high cooling rates as well as with the absence of overcooling and rapid passing through the crystallization plateau.
Key words: platelet concentrate, combined cryoprotective media, freezing regimens, cooling rates, crystallization plateau, overcooling.
problems
of cryobiology
Vol. 20, 2010, №4
проблемы
криобиологии
Т. 20, 2010, №4
Анализ научных публикаций по проблеме крио-
консервирования концентратов тромбоцитов (КТ)
свидетельствует о том, что основное внимание ис-
следователей было уделено выбору криопротекто-
ра и созданию на его основе эффективной криоза-
щитной среды [20]. Результаты изучения различ-
ных скоростей охлаждения и их влияния на криокон-
сервирование КТ описаны лишь в единичных рабо-
тах. Представлены данные замораживания КТ с
низкими [3, 4, 9, 16, 22] и высокими [13, 14] скорос-
тями охлаждения в различных криозащитных
средах; предложены ступенчатые режимы замора-
живания КТ с разными скоростями охлаждения в
определенных температурных диапазонах [12] и
инициацией кристаллизации для предотвращения
переохлаждения внеклеточной среды [5, 12, 15, 17].
В практике криоконсервирования КТ для кли-
нических целей наибольшее распространение полу-
чил способ замораживания контейнеров с суспен-
зией тромбоцитов в морозильной камере (–80°C)
или парах жидкого азота (–120…–150°C) [19, 21,
Analysis of scientific publications on the task of
the cryopreservation of platelet concentrates (PCs)
testified to the fact that the main attention of the resear-
chers was targeted to the cryoprotectant selection and
development of effective cryoprotective medium on
its base [20]. The results on studying different cooling
rates and their effect on PC cryopreservation were
described only in the single papers. There were pre-
sented the data on freezing of PCs with low [3, 4, 9,
16, 22] and rapid [13, 14] cooling rates in various cryo-
protective media; there were proposed the step-wise
freezing regimens of PCs with different cooling rates
within the established temperature ranges [12] and
crystallization initiation for prevention of extracellular
medium overcooling [5, 12, 15, 17].
In the practice of PC cryopreservation for the
clinical purposes the container freezing method with
platelet suspension in freezing chamber (−80°C) or
liquid nitrogen vapors (−120…−150°C) [19, 21, 23] was
widespread. The cooling rate under these conditions
is not controlled and may vary from 1 to 35°C/min.
444 problems
of cryobiology
Vol. 20, 2010, №4
проблемы
криобиологии
Т. 20, 2010, №4
It should be noted that practically all the researches
directed to the search of platelet freezing the optimal
regimens were based on the application of one of the
cryoprotectants as: dimethyl sulfoxide (DMSO), dime-
thyl acetamide (DMAc), glycerol, 1,2-propane diol
(1,2-PD) etc.
Recently the perspective of combined cryoprotec-
tive media application at platelet freezing [2, 6] has
been shown, the cryopreservative composition with a
high level of cryoprotective effect has been determined
[3].
The research aim was to study the effect of different
regimens of PC freezing with combined cryoprotective
media on the indices of platelet morphofunctional
integrity.
Materials and methods
PCs derived from 500 ml of donor’s blood (hemo-
preservative “Glygicir”) by leukocyte-platelet layer
method [1] were the research object. Prior to carrying-
out the experiment PCs were stored for 12–16 hrs in
the automated mixer (IPC&C) with 2 rot/min mixing
rate at 22 ± 2°C.
Cryoprotectants DMSO, DMAc, 1,2-PD, glycerol
and oxyethylated glycerol with polymerization degree
n = 5 (OEGn = 5), purified and identified at the IPC&C
of the National Academy of Sciences of Ukraine were
used in the research.
For studying the effect of freezing regimens on the
result of cryopreserved PC integrity the DMAC/1,2-PD,
DMAC/glycerol, DMAC/OEGn=5 (1:1) combined me-
dia in 10% total initial cryoprotectant concentration in
plasma were used.
Prior to freezing the PC samples were slowly
(under a constant agitating) mixed with cryoprotective
media in 1:1 ratio and exposed for 30 min at room
temperature. The concentration of each cryoprotectant
in the frozen platelet suspension made 2.5%.
The platelet suspension samples (6 ml) were frozen
in 10 ml rectangular polymer containers (30×100 mm).
Three regimens of cooling were investigated: 1 – in
liquid nitrogen vapors at –40…−45°C; 2 – in liquid
nitrogen vapors at –188…−193°C; 3 – direct plunging
into liquid nitrogen (−196°C). The samples were cooled
in wide-neck Dewar’s vessel, by placing the containers
onto foam thermo-insulating stowage fixed on the
certain experimentally established level above the
liquid nitrogen surface (model laboratory freezer). The
frozen samples of PCs were stored from 3 days to 3
months.
The temperature change was recorded with dif-
ferential copper constantan thermocouple (diameter
of copper and constantan conductors is 0.15 mm) pla-
ced in the center of frozen sample of the simulating
model system. When measuring the standard thermo-
couple junction was in flask at 0°C. Error of tempe-
23]. Скорость охлаждения в таких условиях не регу-
лируется и может варьировать от 1 до 35°C/мин.
Следует отметить, что практически все иссле-
дования, направленные на поиск оптимальных ре-
жимов замораживания тромбоцитов, основаны на
использовании в криозащитном растворе одного из
криопротекторов: диметилсульфоксида (ДМСО),
диметилацетамида (ДМАц), глицерина, 1,2-про-
пандиола (1,2-ПД) и т.д.
В работах последних лет показана перспектив-
ность использования комбинированных криозащит-
ных сред при замораживании тромбоцитов [2, 6],
определен состав криоконсервантов с высоким
уровнем криозащитного действия [3].
Цель работы – исследование влияния различ-
ных режимов замораживания КТ с комбинирован-
ными криозащитными средами на сохранность
показателей морфофункциональной полноценности
тромбоцитов.
Материалы и методы
Объектом исследования служили КТ, выделен-
ные из 500 мл донорской крови (гемоконсервант
“Глюгицир”) методом из лейкотромбоцитарного
слоя [1]. Перед проведением эксперимента КТ хра-
нили в течение 12–16 ч на автоматической мешал-
ке (ИПКиК НАН Украины) со скоростью пере-
мешивания 2 об/мин при 22 ± 2°С .
В работе использовали криопротекторы ДМСО,
ДМАц, 1,2-ПД, глицерин и оксиэтилированный гли-
церин со степенью полимеризации n = 5 (ОЭГn = 5),
очищенные и идентифицированные в ИПКиК НАН
Украины.
Для изучения влияния режимов замораживания
на результат сохранности криоконсервированных
КТ использовали комбинированные среды ДМАц/
1,2-ПД, ДМАц/глицерин, ДМАц/ОЭГn=5 (1:1) в
10%-й суммарной начальной концентрации крио-
протекторов в плазме.
Перед замораживанием образцы КТ медленно
(при постоянном перемешивании) соединяли с
криозащитными средами в соотношении 1:1 и
выдерживали 30 мин при комнатной температуре.
Концентрация каждого криопротектора в замора-
живаемой суспензии тромбоцитов составляла 2,5%.
Образцы суспензии тромбоцитов (6 мл) замо-
раживали в полимерных контейнерах прямоугольной
формы (30×100 мм) вместимостью 10 мл. Исследо-
вали три режима замораживания: 1 – в парах жид-
кого азота при температуре –40…–45°С; 2 – в па-
рах жидкого азота при температуре –188… –193°C;
3 – непосредственное погружение в жидкий азот
(–196°C). Образцы КТ охлаждали в широкогорлом
сосуде Дьюара, располагая контейнеры на пено-
пластовой термоизолирующей укладке, фиксиро-
ванной на определенном экспериментально уста-
445 problems
of cryobiology
Vol. 20, 2010, №4
проблемы
криобиологии
Т. 20, 2010, №4
новленном уровне над зеркалом жидкого азота
(лабораторная модель замораживателя). Заморо-
женные образцы КТ хранили в жидком азоте от 3
суток до 3 месяцев.
Изменение температуры регистрировали диф-
ференциальной медь-константановой термопарой
(диаметр медного и константанового проводников
0,15 мм), расположенной в центре замораживаемо-
го образца модельной системы-имитатора. При из-
мерениях эталонный спай термопары находился в
термосе при температуре 0°C. В данных условиях
погрешность измерения температуры в диапазоне
20…–40°C составляла не более ± 0,35°C.
Образцы КТ размораживали на водяной бане
при температуре 37°С и подсчитывали в них коли-
чество тромбоцитов [10]. Сохранность показате-
лей морфофункциональной полноценности крио-
консервированных КТ оценивали после удаления
криопротекторов [11] по комплексу тестов in vitro:
реакция на гипотонический шок (РГШ) [7], агре-
гация, индуцированная аденозин-дифосфат динат-
риевой солью (АДФ, 200 мкМ, “Serva” Германия)
[18], ретракция тромбоцитарного сгустка [7]. Сте-
пень РГШ и агрегации измеряли на анализаторе
“Colysagraph” (“Damon/IEC Division”, США) с гра-
фической регистрацией процесса на самописце
“Endim” 622.01 (Германия). Полученные данные
выражали в процентном соотношении к соответст-
вующим показателям свежевыделенных КТ, кото-
рые принимали за 100%.
Статистический анализ результатов проводили
с помощью программного пакета “Statgraphic plus
for Windows” версия 5.1 с использованием критерия
Манна-Уитни.
Результаты и обсуждение
На первом этапе исследований был проведен
анализ термограмм охлаждения имитаторов – мо-
дельной криобиологической системы, представля-
ющей собой 5%-й раствор ДМСО или 5%-е ком-
бинированные растворы криопротекторов ДМАц/
1,2-ПД, ДМАц/глицерин, ДМАц/ОЭГn=5 в плазме
(рис. 1).
В результате реализации режимов заморажива-
ния 1 и 2 получены термограммы, демонстри-
рующие разные скорости охлаждения до и после
периода начальной кристаллизации, различную дли-
тельность плато кристаллизации, наличие или от-
сутствие переохлаждения. Анализ термограмм ох-
лаждения модельных криобиологических систем
в парах жидкого азота при температуре –40…
–45°C (табл. 1) и –188…–193°C (табл. 2) свидетель-
ствует о том, что режим замораживания 1 обеспе-
чивает низкие скорости охлаждения (1–3°С/мин),
а режим 2 – высокие (12–25°С/мин). При низких
скоростях охлаждения отмечалась длительная за-
rature measurement within the range of 20…–40°C
made less than ± 0.35°C under these conditions.
The samples of PCs were frozen-thawed on water
bath at 37°C and a number of platelets were calculated
[10]. Preservation of the morphofunctional indices of
cryopreserved PC was estimated after cryoprotec-
tants’ removal [11] by in vitro tests: hypotonic shock
reaction (HSR) [7]; aggregation, induced by adenosine
diphosphate disodium salt (ADP, 200 µM, Serva Ger-
many) [18]; retraction of platelet clot [7]. HSR and
aggregation rate was measured with Colysagraph
(Damon/IEC Division, USA) analyser with graphic re-
cording of the process with Endim plotter 622.01
(Germany). The obtained data were expressed as the
percentage ratio to the corresponding indices of freshly
isolated PCs assumed as 100%.
The statistical analysis of results was carried-out
with Statgraphic plus for Windows software version
5.1 using Mann-Whitney’s criterion.
Results and discussion
At the first stage of the researches we analysed
the cooling thermograms of the model cryobiological
system simulators, representing either 5% solution of
DMSO or 5% combined solutions of DMAc/1,2-PD,
DMAc/glycerol, DMAc/OEGn = 5 cryoprotectants in
plasma (Fig. 1).
After the realization of freezing regimens 1 and 2
the thermograms were obtained, which demonstrated
different cooling rates prior to and after initial crystal-
lization; various duration of crystallization plateau;
either presence or absence of supercooling. The ana-
Рис. 1. Термограммы, полученные при охлаждении
5%-го раствора ДМСО в парах жидкого азота при темпе-
ратуре –40…–45°C (кривая 1) и –188…–193°C (кривая 2),
n = 3.
Fig. 1. Thermograms, obtained when cooling 5% DMSO
solution in liquid nitrogen vapors within the ranges −40…
−45°C (curve 1) and −188…–193°C (curve 2), n = 3.
-80
-60
-40
-20
0
20
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
Время, мин Time, min
Те
м
пе
ра
ту
ра
, °
C
Te
m
pe
ra
tu
re
,
°C 1
2
ртемараП
retemaraP
ОСМД
OSMD
ГЭО/цАМД
5=n
GEО/cAMD
5=n
нирецилг/цАМД
lorecylg/cAMD
2,1/цАМД - ДП
2,1/cAMD - DP
ьтсорокС
,яинеджалхо
ним/сударг
,etargnilooC
nim/eerged
02тО oC
Тод
рк
02morF oC
Тotnwod
rc
53,1±52,21 5,1±8,11 2±9,21 1±7,41
ТтО
рк
7-...6-од oC
ТmorF
rc
7-...6-otnwod oC
9,1±50,4 58,0±7,1 57,1±58,3 2±5
7-...6-тО
04-од oC
7-...6-morF
04-otnwod oC
2,5±52 0,5±7,42 56,4±52,22 3,5±2,02
Т
рк
, oC
Т
rc
, oC 0,3- 2,2- 4,2- 3-
,Т oC 0 0 0oC 0
ним,иицазиллатсиркоталпанакжредаЗ
nim,uaetalpnoitazillatsyrctayaleD 52,0±57,0 573,0±521,2 52,0±0,1 52,0±5,1
ртемараП
retemaraP
ОСМД
OSMD
ГЭО/цАМД
5=n
GEО/cAMD
5=n
нирецилг/цАМД
lorecylg/cAMD
2,1/цАМД - ДП
2,1/cAMD - DP
ьтсорокС
,яинеджалхо
ним/сударг
,etargnilooC
nim/eerged
02тО oC
Тод
рк
02morF oC
Тotnwod
rc
7,0±4,2 6,0±1,2 5,0±0,3 3,0±7,2
ТтО
рк
7-...6-од oC
ТmorF
rc
7-...6-otnwod oC
2,0±53,0 2,0±4,0 80,0±72,0 80,0±52,0
7-...6-тО
04-од oC
7-...6-morF
04-otnwod oC
5,0±2,1 6,0±0,2 5,0±2,1 8,0±8,1
Т
рк
, oC
Т
rc
, oC 3- 2- 5,2- 4,2-
∆ ,Т oC 1 0 1oC 2,1
ним,иицазиллатсиркоталпанакжредаЗ
nim,uaetalpnoitazillatsyrctayaleD 2±02 2±71 2±11 2±61
446 problems
of cryobiology
Vol. 20, 2010, №4
проблемы
криобиологии
Т. 20, 2010, №4
lysis of cooling thermograms of model cryobiological
systems in liquid nitrogen vapors at –40…−45°C (Table 1)
and –188…−193°C (Table 2) testifies to the fact that
freezing regimen 1 provides low cooling rates (1–
3 degree/min), and regimen 2 does high ones (12–
25 degree/min). At low cooling rates there was noted
the long-term temperature delay at the level of crystalli-
zation plateau (11–20 min) with previous superrcooling
of extracellular medium (Table 1); at high rates the
duration of crystallization plateau reduced and super-
Таблица 1. Параметры термограмм охлаждения криозащитных сред в парах азота при температуре –40…–45°C
Table 1. Thermogramms’ parameters of cryoprotective media cooling in liquid nitrogen vapors under –40…–45°C
Примечание: Ткр – температура начала кристаллизации; ДТ – степень переохлаждения.
Note: Tcr – crystallization onset temperature; ∆T – supercooling rate.
держка температуры на уровне плато кристалли-
зации (11–20 мин) с предшествующим переохлаж-
дением внеклеточной среды (см. табл. 1); при
высоких – длительность плато кристаллизации со-
кращалась, переохлаждение отсутствовало (см.
табл. 2). При замораживании образцов непосред-
ственным погружением в жидкий азот скорость
охлаждения составляет 210 градусов/мин (харак-
теристика данного режима замораживания 3 не
представлена).
Таблица 2. Параметры термограмм охлаждения криозащитных сред в парах азота при температуре –188…–193°C
Table 2. Thermogramms’ parameters of cryoprotective media cooling in liquid nitrogen vapors under −188…−193°C
Примечание: Ткр – температура начала кристаллизации; ДТ – степень переохлаждения.
Note: Tcr – crystallization onset temperature; ∆T – supercooling rate.
ватсоС
атнавреснокоирк
noitisopmoC
evitavreserpoyrcfo
яинавижаромазмижеР
nemigergnizeerF
1 2 3
2,1/цАМД - ДП
2,1/cAMD - DP 2,9±0,68 6,2±0,19 2,4±7,98
нирецилг/цАМД
lorecylg/cAMD 0,4±7,19 0,5±0,09 9,5±3,68
ГЭО/цАМД
5=n
GEО/cAMD
5=n
5,6±3,09 0,5±5,59 2,8±0,19
ОСМД
OSMD 9,5±8,29 8,3±4,39 3,4±4,68
447 problems
of cryobiology
Vol. 20, 2010, №4
проблемы
криобиологии
Т. 20, 2010, №4
Таблица 3. Количество криоконсервированных тромбоцитов в
зависимости от режима замораживания (% от свежевыделенных,
М ± у, n=5)
Table 3. Frozen-thawed platelet amount depending on freezing regimen
(% of fresh platelets, М ± у, n=5)
Наличие или отсутствие в модели
криобиологической системы (плазма/
криопротектор) тромбоцитов практи-
чески не влияет на параметры термо-
грамм охлаждения, что позволяет ис-
пользовать полученные эксперимен-
тальные данные при анализе резуль-
татов криоконсервирования суспензии
тромбоцитов.
После криоконсервирования образ-
цов КТ с применением разных режи-
мов замораживания в 5%-м растворе
ДМСО и 5%-х комбинированных крио-
защитных средах ДМАц/1,2-ПД,
ДМАц/глицерин и ДМАц/ОЭГn=5 опре-
делена высокая количественная со-
хранность тромбоцитов (табл. 3). Сме-
на режима замораживания КТ не ока-
cooling was absent (Table 2). During the sample freez-
ing by direct plunging into liquid nitrogen the cooling
rate was 210 degree/min (details of freezing regimen
3 are not presented).
Either presence or absence of the platelets in the
model of cryobiological system (plasma/cryoprotectant)
do not practically affect the parameters of cooling ther-
mogram, enabling to use the obtained experimental data
when analyzing the platelet suspension cryopreserva-
tion results.
After cryopreservation of PC samples using diffe-
rent freezing regimens in 5% DMSO solution and 5%
combined cryoprotective media as DMAc/1,2-PD,
DMAc/glycerol, DMAc/OEGn = 5 there was established
a high level of platelet number preservation (Table 3).
The change of PC freezing regimen did not significantly
affect the level of platelet number preservation in the
frozen-thawed samples.
The indices of platelet morphofunctional integrity
(ADP-aggregation, HSR and retraction clot rate) de-
pended on cooling parameters such as: cooling rate
within the different temperature ranges, supercooling
rate, duration of crystallization plateau.
The rate of ADP-induced aggregation of platelets,
cryopreserved with combined media was significantly
higher with freezing regimen 2 if compared with the
freezing regimen 1 (Fig. 2), whereas in case of DMSO
the established differences were not similar. The ana-
lysis of typical aggregatograms (Fig. 3) testifies to the
fact that freezing regimen 2 enables to obtain the higher
post-thaw values of platelet aggregation activity: ADP
aggregation rate, initial rate of aggregate formation,
shape changing phase (lag-phase, discosphere transfor-
mation), that indirectrly points to the presence of disco-
cytes in platelet frozen-thawed suspension. The highest
studied parameters were obtained for the DMAc/
OEGn = 5 cryopreservative.
It was established the dependence of HSR rate
preservation on freezing regimens (Fig. 4). A higher
зывала существенного влияния на результат
количественной сохранности тромбоцитов в декон-
сервированных образцах.
Показатели морфофункциональной полноцен-
ности тромбоцитов – степень АДФ-агрегации, сте-
пень РГШ и ретракции сгустка зависели от таких
параметров охлаждения, как скорость охлаждения
в разных температурных диапазонах, степень
переохлаждения, длительность плато кристалли-
зации.
Степень АДФ-индуцированной агрегации тром-
боцитов, криоконсервированных с комбиниро-
ванными средами, была значительно выше при
режиме замораживания 2 по сравнению с режимом 1
(рис. 2), тогда как для ДМСО подобных различий
не установлено. Анализ типичных агрегатограмм
(рис. 3) свидетельствует о том, что режим замора-
живания 2 позволяет получить после криоконсер-
вирования более высокие параметры агрегацион-
ной активности тромбоцитов: степени АДФ-агре-
гации, начальной скорости образования агрегатов,
фазы изменения формы (lag-фаза) – дискосферо-
трансформации, которая косвенно подтверждает
наличие дискоцитов в суспензии деконсервирован-
ных тромбоцитов. Самые высокие исследуемые пара-
метры получены для криоконсерванта ДМАц/ОЭГn = 5.
Установлена зависимость сохранности степени
РГШ от режимов замораживания (рис. 4). Для ком-
бинированных криозащитных сред ДМАц/1,2-ПД
и ДМАц/ОЭГn=5 большая степень РГШ получена
при использовании режима замораживания 2 (54,9 ±
5,5 и 69,7 ± 11,5% соответственно); ДМСО – режи-
ма 1 (49,0 ± 9,6%). Для криоконсерванта ДМАц/
глицерин подобной зависимости не установлено.
После криоконсервирования образцов КТ с
растворами ДМАц/1,2-ПД, ДМАц/глицерин и
ДМАц/ОЭГn = 5 ретракция тромбоцитарного сгуст-
ка была значительно выше при режиме заморажи-
вания 2.
448 problems
of cryobiology
Vol. 20, 2010, №4
проблемы
криобиологии
Т. 20, 2010, №4
Рис. 3. Типичные агрегатограммы, полученные при регистрации АДФ-индуцируемой агрегации тромбоцитов до
и после замораживания в парах жидкого азота: а – режим 1; б – режим 2; 1 – ДМАц/1,2-ПД; 2 – ДМАц/глицерин; 3 –
ДМАц/ОЭГn=5; 4 – ДМСО.
Fig. 3. Typical aggregatograms, obtained under recording of ADP-induced platelet aggregation prior to and after freezing
in liquid nitrogen vapors: a – regimen 1; b – regimen 2; 1 – DMAc/1,2-PD; 2 – DMAc/ glycerol; 3 – DMAc/ОEGn = 5; 4 –
DMSO.
После замораживания образцов КТ путем пря-
мого погружения контейнеров в жидкий азот
(режим 3) тромбоциты практически полностью
утрачивали агрегационную способность, харак-
теризовались низкой степенью РГШ и ретракции
тромбоцитарного сгустка (см. рис. 2, 4, 5).
Анализ особенностей термограмм двух режи-
мов замораживания и их сопоставление с резуль-
татами криоконсервирования КТ позволяют пред-
положить, что неблагоприятными факторами при
режиме замораживания 1 являются длительное
плато кристаллизации и наличие переохлаждения.
Это подтверждается сходными показателями мор-
фофункциональной полноценности тромбоцитов,
полученными после замораживания образцов КТ
с медленной регулируемой скоростью охлаждения
на программном замораживателе [2]. Криокон-
сервирование КТ с использованием режима замо-
раживания 2 предпочтительнее, так как обеспе-
чивает более высокие показатели морфофункцио-
нальной полноценности тромбоцитов. Полагаем,
что размещение контейнеров с суспензией тромбо-
цитов на укладке в парах жидкого азота при темпе-
ратуре –188…–193°C обеспечивает сильное ло-
кальное охлаждение стенок контейнера, что позво-
ляет в режиме замораживания 2 полностью избе-
гать переохлаждения и способствует быстрому
прохождению плато кристаллизации (1–2,5 мин).
Отметим, что такой прием используется при управ-
лении началом фазового перехода вода-лед для
предотвращения нежелательного переохлаждения
внеклеточной среды [8].
Криоконсервирование тромбоцитов в присут-
ствии ДМСО происходило успешнее при использо-
вании как медленного регулируемого охлаждения
HSR rate in the case of using DMAc/1,2-PD and
DMAc/OEGn = 5 combined cryoprotective media was
obtained during the use of freezing regimen 2 (54.9 ±
5.5 and 69.7 ± 11.5%, correspondingly); DMSO with
regimen 1 (49.0±9.6%). No similar dependence was
found for DMAc/glycerol cryopreservative.
-0,5
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
4,5
5
0 100 200 300 400 500 600 700
С
ве
то
пр
оп
ус
ка
ни
е,
о
тн
. е
д.
Li
gh
t
tra
ns
m
is
si
on
,
re
la
tiv
e
un
its
Время, с Time, sec
-0,5
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
4,5
5
0 100 200 300 400 500 600 700
С
ве
то
пр
оп
ус
ка
ни
е,
о
тн
. е
д.
Li
gh
t
tra
ns
m
is
si
on
,
re
la
tiv
e
un
its
Время, с Time, sec
Рис. 2. Степень агрегации криоконсервированных тром-
боцитов, индуцированной АДФ в зависимости от режи-
ма замораживания (М ± у, n = 5): – режим 1; – режим 2;
– режим 3; #, * – отличия статистически достоверны
по сравнению с соответствующим показателем для режи-
мов 1 и 2 соответственно, РU < 0,05.
Fig. 2. ADP induced aggregation extent of frozen-thawed
platelets, depending on freezing regimen (М ± у, n=5): –
regimen 1; – regimen 2; – regimen 3; #, * – differences
are statistically significant if compared with corresponding
index for regimens 1 and 2, correspondingly, PU < 0,05.
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����0
20
40
60
80
100
С
те
пе
нь
а
гр
ег
ац
ии
, %
Ag
gr
eg
at
io
n
le
ve
l,
%
Контроль
Control
ДМАц/
1,2-ПД
DMAс/
1,2-PD
ДМАц/
глицерин
DMAс/
glycerol
ДМАц/
ОЭГn = 5
DMAс/
ОEGn = 5
ДМСО
DMSO
*
#
*
#
*
#
*
#
*
449 problems
of cryobiology
Vol. 20, 2010, №4
проблемы
криобиологии
Т. 20, 2010, №4
After cryopreservation of PC samples with DMAc/
1,2-PD, DMAc/glycerol and DMAc/OEGn = 5 solution
the retraction of platelet clot was significantly higher
in the case of the freezing regimen 2.
After freezing of PC samples by a direct plunging
the containers into liquid nitrogen (regimen 3) the plate-
lets completely lost the aggregation ability, and were
characterized with low HSR rate and retraction of
platelet clot (Fig. 2, 4, 5).
The analysis of peculiarities of thermogram for two
freezing regimens and their correlation with results of
PC cryopreservation enable to suggest that freezing
regi-men 1 has such adverse factors as prolonged
crystalli-zation plateau and appearance of supercooling.
This is confirmed with similar indices of platelet
morphofunctional integrity, obtained after PC samples
freeze-thawing using controlled-rate slow cooling with
the programmed freezer [2]. PC cryopreservation with
the freezing regimen 2 is more preferable, since it
provides higher indices of platelet morphofunctional
integrity. We suggest that placing the containers with
platelet suspension onto the stowage in liquid nitrogen
vapors at –188… −193°C provides an intensive local
cooling of the container walls, that enables the freezing
regimen 2 to avoid completely the supercooling and
promote the rapid passing through the crystallization
plateau (1–2.5 min). It should be noticed that this
method is used to control the onset of water-ice phase
[2], так и медленного нерегулируемого охлаждения
в парах жидкого азота (режим 1). Возможно, это
обусловлено несколькими причинами: предпочти-
тельностью использования медленных скоростей
охлаждения применительно к замораживанию с
криопротектором ДМСО, что справедливо и для
других клеточных суспензий; целесообразностью
выдерживания определенной длительности плато
кристаллизации при замораживании тромбоцитов
с ДМСО [15–17].
Результаты криоконсервирования тромбоцитов,
полученные в данной и других работах [2, 3],
свидетельствуют об эффективности криозащитных
сред, содержащих комбинации криопротекторов.
Тем более, что объектом замораживания были КТ,
хранившиеся 12–16 ч после выделения и в которых
в определенной степени могли развиться повреж-
дения – “storage lesion” [7].
Выводы
Таким образом, данные настоящей серии экспе-
риментов свидетельствуют о более высоких и ста-
бильных результатах криоконсервирования тром-
боцитов с комбинированными криозащитными
средами при использовании режима замора-
живания с высокими скоростями охлаждения, а
также при отсутствии переохлаждения и быстром
прохождении плато кристаллизации.
Рис. 5. Ретракция криоконсервированных тромбоцитов
в зависимости от режима замораживания (М ± у, n = 5):
– режим 1; – режим 2; – режим 3; #, * – отличия ста-
тистически достоверны по сравнению с соответствую-
щим показателем для режимов 1 и 2 соответственно,
Рu < 0,05.
Fig. 5. Retraction of cryopreserved platelets depending on
freezing regimen (М ± у, n = 5): – regimen 1; – regimen 2;
– regimen 3; #, * – differences are statistically significant
if compared with corresponding index for regimens 1 and 2
correspondingly, PU < 0,05.
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
0
20
40
60
80
100
Ре
тр
ак
ци
я,
%
R
et
ra
ct
io
n,
%
*
#
*
#
*
#
*
#
*
Контроль
Control
ДМАц/
1,2-ПД
DMAс/
1,2-PD
ДМАц/
глицерин
DMAс/
glycerol
ДМАц/
ОЭГn = 5
DMAс/
ОEGn = 5
ДМСО
DMSO
Рис. 4. Степень РГШ криоконсервированных тромбо-
цитов в зависимости от режима замораживания (М ± у,
n = 5): – режим 1; – режим 2; – режим 3; #,* – отличия
статистически достоверны по сравнению с соответст-
вующим показателем для режимов 1 и 2 соответственно,
РU < 0,05.
Fig. 4. HSR extent of cryopreserved platelets depending on
freezing regimen (М ± у, n=5): – regimen 1; – regimen 2;
– regimen 3; #, *– differences are statistically significant
if compared with corresponding index for regimens 1 and 2
correspondingly, PU < 0,05.
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
�����
0
20
40
60
80
100
С
те
пе
нь
Р
ГШ
, %
H
SR
le
ve
l,
%
*
#
*
#
*
# *
#
*
Контроль
Control
ДМАц/
1,2-ПД
DMAс/
1,2-PD
ДМАц/
глицерин
DMAс/
glycerol
ДМАц/
ОЭГn = 5
DMAс/
ОEGn = 5
ДМСО
DMSO
450 problems
of cryobiology
Vol. 20, 2010, №4
проблемы
криобиологии
Т. 20, 2010, №4
Литература
Аграненко В.А., Компаниец А.М., Балезина Л.В. Выде-
ление концентратов тромбоцитов из ЛТС донорской кро-
ви и их консервирование // Гематология и трансфу-
зиология.– 1991.– Т.36, №3.– С.29–32.
Богданчикова О.А., Гурина Т.М., Компаниец А.М. Замора-
живание тромбоцитов в криозащитных средах, содержа-
щих различные комбинации криопротекторов // Пробле-
мы криобиологии.– 2008.– Т. 18, №1.– С.109–113.
Богданчикова О.А., Компаниец А.М. Криоконсерви-
рование тромбоцитов. 1. Разработка криоконсервантов
на основе комбинаций криопротекторов и исследование
их эффективности // Проблемы криобиологии.– 2009.–
Т.19, №3.– С.324–337.
Воробьева Г.С., Компаниец А.М., Ивашков В.И. Разработка
метода криоконсервирования тромбоцитов с ДМАЦ для
клинических целей // Консервирование крови и ее компо-
нентов / Под ред. О.К. Гаврилова, В.А. Аграненко.– М.,
1981.– С. 77–78.
Компанієць А.М., Ніколенко О.В., Кощій С.В. Цитотоксич-
ність і кріозахисна ефективність алкоксипохідних гліце-
рину при заморожуванні тромбоцитів // Тези I З’їзду Укр.
товариства кріобіології і кріомедицини.– Харків, 1995.–
С. 105–107.
Компанієць А.М., Книш О.В., Гуріна Т.М. та інш. Дос-
лідження морфофункціональної збереженості тромбо-
цитів на етапах кріоконсервування // Проблемы криобио-
логии.– 2006.– Т.16, №2.– С. 182–191.
Компаниец А.М. Консервирование концентратов тромбо-
цитов и их лечебная эффективность: Автореф. дис. …
д-ра мед. наук.– М., 1992.– 52 с.
Олейник С.Т. Инициирование фазового перехода вода-
лед в биологических системах при низкотемпературной
консервации: Автореф. дис. … канд. биол. наук. – Харь-
ков, 1987.– 16 с.
Пушкарь Л.Н., Абергауз Н.Н., Воробьева Г.С. и др.
Экспериментальное изучение криоконсервирующих
растворов с ДМАЦ для долгосрочного хранения тромбо-
цитов и лейкоцитов // II Всесоюзный съезд гематологов и
трансфузиологов.– М., 1985.– С. 63–64.
Ронин В.С. Способ окраски тромбоцитов для подсчета в
счетной камере // Лаб. дело.– 1983.– №1.– С. 61–62.
Пат. № 15014 Україна, МПК8 А0N 1/02. Спосіб видалення
кріопротектора із суспензії тромбоцитів / В.І. Грищенко,
А.М. Компанієць, О.В. Книш. Заявлено 18.11.05; Опубл.
15.06.06. – Бюл. №6.
Пат. № 3664 Україна, МПК5 А61К 35/14. Спосіб консерву-
вання тромбоцитів / А.М. Компанієць, О.В. Ніколенко,
С.Т. Олійник та інш. Заявлено 22.03.93; Опубл. 27.12.94.–
Бюл. №6.
Arnaud F.G., Pegg D.E. Cryopreservation of human platelets
with 1.4 M glycerol at –75 degrees C in PVC blood packs //
Thromb. Res.– 1990.– Vol. 57, N6.– P. 919–924.
Arnaud F.G., Pegg D.E. Cryopreservation of human platelets
with propane-1,2-diol // Cryobiology.– 1990.– Vol. 27, N2. –
P. 130–136.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
References
Agranenko V.A., Kompaniets A.M., Balezina L.V. Derivation
of platelet concentrates from LTL of donor’s blood and their
preservation // Gematol. Transfusiol.– 1991.– Vol. 36, N3.–
P. 29–32.
Bogdanchikova O.A., Gurina T.M., Kompaniets A.M. Blood
platelet freezing under cryoprotective media with different
combinations of cryoprotectants // Problems of Cryobiology.–
2008.– Vol. 18, N1.– P. 109–113.
Bogdanchikova O.A., Kompaniets A.M. Platelet cryopreserva-
tion. 1. Development of cryopreservative solutions, based on
cryoprotectant combination and study of their efficiency//
Problems of Cryobiology.– 2009.– Vol. 19, N3.– P. 324–337.
Vorob’eva G.S., Kompaniets A.M., Ivashkov V.I. Designing
the method of platelet cryopreservation with DMAC for clinical
purposes // Preservation of blood and its components / Ed. by
O.K. Gavrilova, V.A. Agranenko.– Moscow, 1981.– P. 77–78.
Kompaniets A.M., Nikolenko O.V., Koschiy S.V. Cytotoxicity
and cryoprotective efficiency of glycerol alkoxyderivatives
under platelet freezing: The 1st Congress of Ukrainian Society
in Cryobiology and Cryomedicine .– Kharkov, 1995.– P. 105–
107.
Kompaniets A.M., Knysh O.V., Gurina T.M. et. al. Study of
morphofunctional integrity of platelets at cryopreservation
stages // Problems of Cryobiology.– 2006.– Vol.16, N2.–
P. 182–191.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
transition when preventing the adverse supercooling
of extracellular medium [8].
Freeze-thawing of platelets in presence of DMSO
was more successful if using either controlled-rate slow
cooling [2] or non-controlled-rate slow cooling in liquid
nitrogen vapors (regimen 1). It is likely caused by some
reasons such as: preference of slow cooling rate usage
during the freezing with DMSO, that is also true for
other cell suspensions; expediency of certain duration
of crystallization plateau during platelet freezing with
DMSO [15–17].
The results of platelets’ cryopreservation, reported
in this and other papers [2, 3] testify to the efficiency
of cryoprotective media, containing cryoprotectants’
combinations. Moreover, the objects of freezing were
PCs, stored for 12–16 hrs after derivation and in which
to some extent the ‘storage lesion’ could develop [7].
Conclusions
Thus, the data of these series of the experiments
testify to higher and more stable results of platelet
cryopreservation with the combined cryoprotective
media using the freezing regimens with rapid cooling
rates, as well as during overcooling and rapid passing
through crystallization plateau.
The presented work points to the necessity to con-
tinue the studies of freezing regimens with controlled
and non-controlled cooling rates within the temperature
ranges for determination of the optimal programs of
PC cryopreservation for the application in clinical
practice.
Представленная работа указывает на необ-
ходимость продолжения исследований режимов
замораживания с регулируемыми и нерегулиру-
емыми скоростями охлаждения в разных темпера-
турных диапазонах для определения оптимальных
программ криоконсервирования КТ с целью исполь-
зования в клинической практике.
451 problems
of cryobiology
Vol. 20, 2010, №4
проблемы
криобиологии
Т. 20, 2010, №4
Balint B., Paunovic D., Vucetic D. еt al. Controlled-rate versus
uncontrolled-rate freezing as predictors for platelet cryopre-
servation efficacy // Transfusion.– 2006.– Vol. 46, N2.–
P. 230–235.
Balint B., Vucetic D., Trajkovic-Lakic Z. et al. Quantitative,
functional, morphological and ultrastructural recovery of
platelets as predictor for cryopreservation // Haematologia
(Budap).– 2002.– Vol.32, N4.– P. 363–375.
Balint B., Vucetic D., Vojvodic D. et al. Cell recovery, cryother-
mal micro-damages and surface antigen expression as
predictors for cold-induced GPIbα/CD42b-cluster mediated
platelet clearance after controlled-rate vs. uncontrolled-rate
cryopreservation // Blood Banking Transfus. Med.– 2004.–
Vol. 2, N1.– P. 22–26.
Born G.V.R., Cross M.J. The aggregation of blood platelets //
J. Physiol.– 1963.– Vol. 168, N1.– P. 178–195.
Borzini P., Lazzaro A., Mazzucco L. et al. Platelet cryopreser-
vation using second-messenger effectors and low-dose
(2%) dimethyl sulfoxide. In vitro evaluation of post-thawing
platelet activity with the platelet function analyzer//
Haematologica.– 2000.– Vol. 85, N8.– P. 885–887.
Gao D.Y., Neff K., Xiao H.Y. et al. Development of optimal
techniques for cryopreservation of human platelets. I. Platelet
activation during cold storage (at 22 and 8 degrees C) and
cryopreservation // Cryobiology.– 1999.– Vol. 38, N3.– P. 225–
235.
Currie L.M., Livesey S.A., Harper J.R. et al. Cryopreservation
of single-donor platelets with a reduced dimethyl sulfoxide
concentration by the addition of second-messenger effec-
tors: enhanced retention of in vitro functional activity// Trans-
fusion.– 1998.– Vol. 38, N2.– P. 160–167.
Schiffer C.A., Anderson K. C., Bennett C. L. et al. Platelet
Transfusion for Patients With Cancer: Clinical Practice Guide-
lines of the American Society of Clinical Oncology // Journal
of Clinical Oncology.–2001. Vol. 19, N5.– Р. 1519–1538.
Xiao H., Harvey K., Labarrere C.A. et al. Platelet cryopreser-
vation using a combination of epinephrine and dimethyl
sulfoxide as cryoprotectants // Cryobiology.– 2000.– Vol. 41,
N2.– P. 97–105.
Поступила 16.11.2010
Рецензент И.П. Высеканцев
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
Kompaniets A.M. Platelet concentrates preservation and their
therapeutic efficiency: Abstract of the thesis of cand. med.
sci.– Moscow, 1992.– 52 p.
Olejnik S.T. Initiation of water-ice phase transition in biological
systems under low-temperature preservation: Author’s
abstract of the thesis of candidate of biological sciences.–
Kharkov, 1987.– 16 p.
Pushkar L.N., Abergauz N.N., Vorob’eva G.S. et. al. Experi-
mental study of cryopreservative solutions with DMAC for
long-term storage of platelets and leukocytes // The 2nd All-
Union Congress of Hematologists and Transfusiologists.–
Moscow, 1985.– P. 63–64.
Ronin V.S. Method of platelet staining for calculation in counting
chamber// Lab. Delo.– 1983.– N1.– P. 61–62.
Patent 15014 (Ukraine), IPC8 AON 1/02. Method of cryoprotec-
tant elimination from platelet suspension / V.I. Grischenko,
A.M. Kompaniets, O.V. Knysh. Applied 18.11.05; Publ.
15.06.06.– Bull. N6.
Patent 3664 (Ukraine), IPC5 A61K 35/14. Method of platelet
preservation / A.V. Kompaniets, O.V. Nikolenko, S.T. Olijnyk
et al. Filed 22.03.93; Publ. 27.12.94.– Bull. N6.
Arnaud F.G., Pegg D.E. Cryopreservation of human platelets
with 1.4 M glycerol at –75 degrees C in PVC blood packs //
Thromb. Res.– 1990.– Vol. 57, N6.– P. 919–924.
Arnaud F.G., Pegg D.E. Cryopreservation of human platelets
with propane-1,2-diol // Cryobiology.– 1990.– Vol. 27, N2. –
P. 130–136.
Balint B., Paunovic D., Vucetic D. еt al. Controlled-rate versus
uncontrolled-rate freezing as predictors for platelet cryopre-
servation efficacy // Transfusion.– 2006.– Vol. 46, N2.–
P. 230–235.
Balint B., Vucetic D., Trajkovic-Lakic Z. et al. Quantitative,
functional, morphological and ultrastructural recovery of
platelets as predictor for cryopreservation // Haematologia
(Budap).– 2002.– Vol.32, N4.– P. 363–375.
Balint B., Vucetic D., Vojvodic D. et al. Cell recovery, cryother-
mal micro-damages and surface antigen expression as
predictors for cold-induced GPIbα/CD42b-cluster mediated
platelet clearance after controlled-rate vs. uncontrolled-rate
cryopreservation // Blood Banking Transfus. Med.– 2004.–
Vol. 2, N1.– P. 22–26.
Born G.V.R., Cross M.J. The aggregation of blood platelets //
J. Physiol.– 1963.– Vol. 168, N1.– P. 178–195.
Borzini P., Lazzaro A., Mazzucco L. et al. Platelet cryopreser-
vation using second-messenger effectors and low-dose
(2%) dimethyl sulfoxide. In vitro evaluation of post-thawing
platelet activity with the platelet function analyzer// Haema-
tologica.– 2000.– Vol. 85, N8.– P. 885–887.
Gao D.Y., Neff K., Xiao H.Y. et al. Development of optimal
techniques for cryopreservation of human platelets. I. Platelet
activation during cold storage (at 22 and 8 degrees C) and
cryopreservation // Cryobiology.– 1999.– Vol. 38, N3.– P. 225–
235.
Currie L.M., Livesey S.A., Harper J.R. et al. Cryopreservation
of single-donor platelets with a reduced dimethyl sulfoxide
concentration by the addition of second-messenger effec-
tors: enhanced retention of in vitro functional activity// Trans-
fusion.– 1998.– Vol. 38, N2.– P. 160–167.
Schiffer C.A., Anderson K. C., Bennett C. L. et al. Platelet
Transfusion for Patients With Cancer: Clinical Practice Guide-
lines of the American Society of Clinical Oncology // Journal
of Clinical Oncology.–2001. Vol.19, N5.– Р. 1519–1538.
Xiao H., Harvey K., Labarrere C.A. et al. Platelet cryopreser-
vation using a combination of epinephrine and dimethyl
sulfoxide as cryoprotectants // Cryobiology.– 2000.– Vol. 41,
N2.– P. 97–105.
Accepted in 16.11.2010
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
|