Зміни просторової орієнтації αС-регіонів фібриногену в процесі його трансформації в полімерний фібрин
Отримано монАТ FnII-2М, епітоп для яких знаходиться в фрагменті Аα 240–491 αС-регіону фібрин(оген)у людини. З використанням імуноферментного аналізу та методу поверхнево-плазмонного резонансу було показано, що монАТ FnII-2M не реагували з фібриногеном, мономерним і полімерним фібрином desA, але реаг...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Доповіді НАН України |
|---|---|
| Дата: | 2012 |
| Автори: | , , , , , , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Українська |
| Опубліковано: |
Видавничий дім "Академперіодика" НАН України
2012
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/49801 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Зміни просторової орієнтації αС-регіонів фібриногену в процесі його трансформації в полімерний фібрин / Т.А. Позняк, І.М. Колеснікова, Є.М. Макогоненко, Л.М. Литвинова, О.П. Костюченко, Г.К. Гоголінська, М.О. Пидюра, С.І. Андріанов, Е.В. Луговськой, С.В. Комісаренко // Доп. НАН України. — 2012. — № 5. — С. 163-169. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859642357807316992 |
|---|---|
| author | Позняк, Т.А. Колеснікова, І.М. Макогоненко, Є.М. Литвинова, Л.М. Костюченко, О.П. Гоголінська, Г.К. Пидюра, М.О. Андріанов, С.І. Луговськой, Е.В. Комісаренко, С.В. |
| author_facet | Позняк, Т.А. Колеснікова, І.М. Макогоненко, Є.М. Литвинова, Л.М. Костюченко, О.П. Гоголінська, Г.К. Пидюра, М.О. Андріанов, С.І. Луговськой, Е.В. Комісаренко, С.В. |
| citation_txt | Зміни просторової орієнтації αС-регіонів фібриногену в процесі його трансформації в полімерний фібрин / Т.А. Позняк, І.М. Колеснікова, Є.М. Макогоненко, Л.М. Литвинова, О.П. Костюченко, Г.К. Гоголінська, М.О. Пидюра, С.І. Андріанов, Е.В. Луговськой, С.В. Комісаренко // Доп. НАН України. — 2012. — № 5. — С. 163-169. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Доповіді НАН України |
| description | Отримано монАТ FnII-2М, епітоп для яких знаходиться в фрагменті Аα 240–491 αС-регіону фібрин(оген)у людини. З використанням імуноферментного аналізу та методу поверхнево-плазмонного резонансу було показано, що монАТ FnII-2M не реагували з фібриногеном, мономерним і полімерним фібрином desA, але реагували з фібрином desАВ. Отже, лише після відщеплення фібринопептидів В епітоп для монАТ FnII-2M стає доступним. Отримані результати дають змогу припустити, що в фібриногені та мономерному й полімерному фібрині desA αС-регіони зв'язані з фібринопептидами В і відходять від остова молекули лише після їх відщеплення. На підставі отриманих результатів та наведених в науковій літературі даних комп'ютерно побудовано моделі просторової орієнтації αС-регіонів у молекулах фібриногену, фібрину desA й desAB.
Получены монАТ FnII-2М, эпитоп для которых находится во фрагменте Аα 240–491 αС-региона фибриногена человека. С использованием иммуноферментного анализа и метода поверхностно-плазмонного резонанса было показано, что монАТ FnII-2M не реагировали с фибриногеном, мономерным и полимерным фибрином desА, но реагировали с фибрином desАВ. Следовательно, лишь после отщепления фибринопептидов В эпитоп для монАТ FnII-2М становится доступным. Полученные результаты позволяют предположить, что в фибриногене, мономерном и полимерном фибрине desA αС-регионы связаны с фибринопептидами В и отходят от остова молекулы лишь после их отщепления. На основе полученных результатов и данных, приведенных в научной литературе, компьютерно построено модели пространственной ориентации αС-регионов в молекулах фибриногена, фибрина desА и desАВ.
Monoclonal antibody (monAb) FnII-2M with the epitope for them in human fibrin(ogen) fragment Aα 240–491 of the αC-region has been obtained. It is shown by ELISA and the method of surface plasmon resonance that monAb FnII-2M doesn't react with fibrinogen, monomeric and polymeric fibrin desA, but reacts with fibrin desAB. Thus, this proves that the accessibility of the epitope for this monAb appears only in fibrin desAB. These results are a direct experimental evidence that the αC-regions (Aα 220–610) are bound with fibronopeptide B of fibrinogen and fibrin desA molecules but move away from the framework of a molecule only after the removal of fibrinopeptides B by thrombin. These data and the results of other authors allow us to design the computer models of spatial orientation of αC-regions in fibrinogen, fibrin desA, and fibrin desA.
|
| first_indexed | 2025-12-07T13:23:18Z |
| format | Article |
| fulltext |
оповiдi
НАЦIОНАЛЬНОЇ
АКАДЕМIЇ НАУК
УКРАЇНИ
5 • 2012
БIОХIМIЯ
УДК 577.112:612.115
© 2012
Т.А. Позняк, I.М. Колеснiкова, Є. М. Макогоненко,
Л.М. Литвинова, О. П. Костюченко, Г. К. Гоголiнська,
М. О. Пидюра, С. I. Андрiанов,
член-кореспондент НАН України Е. В. Луговськой,
академiк НАН України С. В. Комiсаренко
Змiни просторової орiєнтацiї αС-регiонiв фiбриногену
в процесi його трансформацiї в полiмерний фiбрин
Отримано монАТ FnII-2М, епiтоп для яких знаходиться в фрагментi Аα 240–491 αС-ре-
гiону фiбрин(оген)у людини. З використанням iмуноферментного аналiзу та методу
поверхнево-плазмонного резонансу було показано, що монАТ FnII-2M не реагували з фiб-
риногеном, мономерним i полiмерним фiбрином desA, але реагували з фiбрином desАВ.
Отже, лише пiсля вiдщеплення фiбринопептидiв В епiтоп для монАТ FnII-2M стає
доступним. Отриманi результати дають змогу припустити, що в фiбриногенi та мо-
номерному й полiмерному фiбринi desA αС-регiони зв’язанi з фiбринопептидами В i вiд-
ходять вiд остова молекули лише пiсля їх вiдщеплення. На пiдставi отриманих ре-
зультатiв та наведених в науковiй лiтературi даних комп’ютерно побудовано моделi
просторової орiєнтацiї αС-регiонiв у молекулах фiбриногену, фiбрину desA й desAB.
Молекула фiбриногену є центральним бiлком системи зсiдання кровi, в якому розрiз-
няють центральний регiон Е, два периферичних регiони D та два αС-регiони (Аα 220–610).
В αС-регiонi умовно видiляють конекторну (Аα 220–391) та доменну (Аα 392–610) частини.
Тромбiн, який утворюється при активацiї системи зсiдання кровi, вiдщеплює вiд фiбриноге-
ну два фiбринопептиди А та перетворює його на фiбрин desА, що спонтанно полiмеризуєть-
ся з утворенням протофiбрил [1]. При подальшiй дiї тромбiну фiбрин desА у протофiбрилах
перетворюється в фiбрин desАВ, що прискорює їх латеральну асоцiацiю з утворенням бiльш
товстих фiбрил. На сьогоднi повнiстю ще не з’ясовано механiзми внутрiшньомолекулярної
перебудови фiбриногену в фiбрин та мiжмолекулярних взаємодiй останнього в процесi фор-
мування фiбринового каркасу тромбу. Наприклад, важливим i до кiнця не з’ясованим зали-
шається питання про функцiональну роль та просторову орiєнтацiю αС-регiонiв у молекулi
фiбриногену на рiзних етапах його перетворення в полiмерний фiбрин.
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2012, №5 163
В.О. Белiцер вперше вказав на важливу роль αС-регiонiв (Аα 220–610) молекули фiб-
рин(оген)у в процесi полiмеризацiї фiбрину [2]. Через високу рухливiсть структуру αС-ре-
гiонiв у нативнiй молекулi фiбрин(оген)у методом рентгеноструктурного аналiзу вiзуалi-
зувати не вдалося [3]. Р. I. Лiтвiновим iз спiвробiтниками [4], дослiджуючи рекомбiнант-
нi αС-фрагменти фiбриногену, встановлено, що рекомбiнантнi αС-доменнi дiлянки взаємо-
дiють з фiбринопептидами В, мiж собою та меншою мiрою з фiбринопептидами А. Однак
на сьогоднi не було встановлено просторову орiєнтацiю αС-регiонiв у мономерному й по-
лiмерному фiбринi desА.
У даному повiдомленнi викладено результати дослiдження змiни просторової орiєнта-
цiї αС-регiонiв при послiдовному перетвореннi фiбриногену в фiбрини desА й desАВ та
функцiональної ролi αС-регiонiв у процесi полiмеризацiї фiбрину з використанням моно-
клональних антитiл (монАТ) з епiтопом у αС-регiонi фiбрин(оген)у.
Для отримання монАТ з епiтопом в αС-регiонi молекули фiбриногену як антигени для
iмунiзацiї двох груп мишей лiнiї ВАLB/c було використано частково денатурований фiбрин
(3 моль/л сечовини) та фрагмент (Аα 240–491) αС-регiону молекули фiбрин(оген)у в кiль-
костi 100 мкг на дослiдну тварину (мишу). αС-фрагмент видiляли з плазмiнового гiдролiза-
ту фiбриногену людини шляхом гель-фiльтрацiї на колонцi Superdex G-75 iз застосуванням
хроматографiчної системи FPLC. Молекулярна маса αС-фрагмента дорiвнювала 24 кДа,
що вiдповiдає дiлянцi αС-регiону фiбрин(оген)у людини з амiнокислотною послiдовнiстю
Аα 240–491 [5].
Методом турбiдиметричного аналiзу було встановлено, що отриманий αС-фрагмент (Аα
240–491), як i його аналог, описаний в статтi [5], iнгiбує полiмеризацiю фiбрину людини
в системi фiбриноген + тромбiн, пiдвищуючи лаг-перiод (час побудови протофiбрил) та
iстотно знижуючи швидкiсть зростання мутностi (швидкiсть латеральної асоцiацiї прото-
фiбрил), а також кiнцеву мутнiсть утвореного згустку. Отже, цей фрагмент зберiгає сайт
нативної молекули фiбрину, який бере участь в його полiмеризацiї.
Отриманi нами гiбридоми продукували монАТ, що реагували з фрагментом фiбриногену
Аα 240–491, фiбрином desАВ i не реагували з фiбриногеном у розчинi. МонАТ належать
до iмуноглобулiнiв класу М та отримали назву “FnII-2M”.
Iмунохiмiчну специфiчнiсть монАТ FnII-2M характеризували за допомогою методу твер-
дофазного iмуноферментного аналiзу (тIФА) з використанням таких бiлкiв та їх фрагмен-
тiв, як фiбриноген [6], фiбрин desAВ [7], Е3-фрагмент фiбрину [8], D-димер [9] та фрагмент
Аα 240–491 αС-регiону. Вказанi бiлки в концентрацiї 10 мкг/мл адсорбували на полiсти-
рольних мiкропланшетах впродовж 18 год при 4 ◦С за таких оптимальних умов: для фiб-
риногену — 0,2 моль/л ацетатного буфера, pH 8,5; для фiбрину i αС-фрагмента цей буфер
з 3 моль/л сечовиною; для Е3-фрагмента i D-димеру — 0,02 моль/л бiкарбонатного буфе-
ра з pH 9,5. Пiсля вiдмивання бiлкiв, якi не адсорбувалися на плашцi, вносили очищенi
монАТ FnII-2M та iнкубували при 37 ◦С впродовж 1 год. Далi мiкропланшети вiдмивали,
а монАТ, якi зв’язалися з бiлками, виявляли за допомогою мiчених пероксидазою антитiл
кроля проти всiєї молекули Ig G мишi (“Sigma”, США). Монат FnII-2M найсильнiше реагу-
вали з αС-фрагментом (Аα 240–491), фiбрином desAB, слабiше з адсорбованим на мiкро-
планшетi фiбриногеном та зовсiм не реагували з D-димером й Е3-фрагментом (рис. 1, а).
МонАТ FnII-2M, згiдно з результатами подальших дослiджень, проявляють вибiркову
специфiчнiсть вiдносно фiбрину: вони реагували з фiбрином desАВ i не реагували з фiбри-
ногеном у розчинi (див. б на рис. 1). Наявнiсть реакцiї монАТ FnII-2M у тIФА з сорбова-
ним на мiкропланшетах фiбриногеном пов’язана, очевидно, з його частковою денатурацiєю
164 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2012, №5
Рис. 1. Iмуноферментний аналiз зв’язування монАТ FnII-2 М (tag-АТ) з рiзними бiлками та їх фрагментами:
а — з iммобiлiзованими на мiкропланшетi [1 — αС-фрагмент; 2 — фiбрин desА; 3 — фiбриноген; 4 — Е-фраг-
мент; 5 — D-димер]; б — з фiбриногеном, який знаходиться в розчинi (“catch”-антитiла — фiбриногенспе-
цифiчнi монАТ 2d-2a) [1 — “tag”-антитiла — монАт II-4d (позитивний контроль зв’язування фiбриногену
з монАТ 2d-2a); 2 — “tag”-антитiла — монАт FnII-2M]
Рис. 2. Електрофореграма (10%-й ПААГ з 0,1%-м ДС-Na, Сoomassie R-250) (а) та iмуноферментний аналiз
(б ) кiнетики гiдролiзу фiбрину desАВ плазмiном у рiзнi промiжки часу: 1 — 0 хв, 2 — 10 хв, 3 — 30 хв, 4 —
60 хв, 5 — 90 хв, 6 — 120 хв, 7 — 240 хв при молярному спiввiдношеннi фiбрин desАВ : плазмiн — 1000 : 1;
8 — маркери молекулярної маси
внаслiдок сорбцiї на поверхню мiкропланшета, що змiнює його конформацiю та експонує
епiтоп [10].
Для встановлення локалiзацiї епiтопа монАТ FnII-2M у молекулi фiбрину було проведено
Вестерн-блот аналiз iз використанням фiбрину desАВ, вiдновленого β-меркаптоетанолом як
антигену. Виявилося, що монАТ FnII-2M реагують лише з α-ланцюгом фiбрину (α 17–610).
В iмуноферментному аналiзi була показана вiдсутнiсть зв’язування монАТ FnII-2M
з Х2-фрагментом, який утворювався в результатi вiдщеплення αС-регiонiв плазмiном вiд
молекули фiбрину desАВ (рис. 2).
У цьому експериментi за “catch”-антитiла було використано ранiше отриманi фiбрин-
специфiчнi монАТ FnI-3C [11], за “tag”-АТ — монАТ FnII-2M, що мiченi бiотином. Данi
iмуноферментного аналiзу, демонструють зниження iнтенсивностi реакцiї монАТ FnII-2M
з фiбрином desАВ у мiру перетворення фiбрину у Х2-фрагмент (див. б на рис. 2). При
цьому загальна кiлькiсть плазмiнових фрагментiв фiбрину, зв’язаних з “catch”-АТ FnI-3C,
не зменшувалася.
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2012, №5 165
Рис. 3. Зв’язування монАТ FnII-2M з фiбриногеном, фiбрином desА та фiбрином desАВ (фiбриноген +
+тромбiн 0,25 NIH/1 мг бiлка) за допомогою методу: а — des тIФА (“catch”-АТ — фiбринспецифiчнi монАТ
I-3C, “tag”-АТ — монАТ FnII-2M); ∗ — p < 0,05 порiвняно з фiбриногеном (Fg) та фiбрином desА (fdesA);
б — ППР-аналiз (монАТ FnI-3C, що ковалентно iммобiлiзованi на поверхнi iмуносенсорного бiочiпа
Таким чином, отриманi результати свiдчать, що монАТ FnII-2M є фiбрин desАВ-специ-
фiчними i не реагують з нативним фiбриногеном та фрагментами фiбрин(оген)у, в яких
вiдсутнi αС-регiони: Х2-фрагментом, D-димером, Е3-фрагментом. Враховуючи, що монАТ
FnII-2M реагували з α-ланцюгом фiбрину (Аα 17–610) та найсильнiша реакцiя спостерiга-
лась з фрагментом Аα 240–491 αС-регiону молекули, можна стверджувати таке: епiтоп для
них знаходиться в Аα 240–491. Однак у ходi дослiдження виявилося, що монАТ FnII-2M не
реагують з плазмою кровi хворих людей, в якiй було виявлено значну кiлькiсть розчинного
фiбрину. Як вiдомо, розчинний фiбрин є олiгомерами фiбрину desA та його комплексами
з фiбриногеном [12]. Оскiльки було показано, що монАТ FnII-2M не реагують з фiбрино-
геном у розчинi, ми припустили, що вони не реагують i з фiбрином desА. Це припущення
виявилося вiрним i було пiдтверджене двома методами: т-IФА та поверхнево-плазмонного
резонансу (ППР) (рис. 3).
Дослiдження взаємодiї фiбринiв desА, desАВ з монАТ FnI-3C у реальному часi про-
водили методом ППР-аналiзу на двоканальному оптоелектронному спектрометрi “Плаз-
мон-6” (виготовлений в Iнститутi фiзики напiвпровiдникiв iм. В.Є. Лашкарьова НАН
України). У робочу комiрку iмуносенсорного бiочiпа, що мiстив фiбринспецифiчнi кова-
лентно iмобiлiзованi монАТ FnI-3C, вводили розчин фiбриноген + анцистрон (5 мкг/мл
фiбриногену та 0,05 NIH/мл анцистрону), в якому in situ утворювався фiбрин desА.
Зв’язування фiбрину desА з монАТ FnI-3C проводили до досягнення насичення антитiл
фiбрином desА (див. 1 на рис. 3, б ). Пiсля вiдмивання бiочiпа буфером (0,02 моль/л
HEPES, pH 7,4, 0,15 моль/л NaCl, 0,005% Tween-20) у робочу комiрку додавали монАТ
FnII-2M (1 мкг/мл), реакцiя зв’язування була повнiстю вiдсутня (див. 2 на рис. 3, б ).
Однак пiсля оброблення iммобiлiзованого фiбрину desА пiдвищеною концентрацiєю тром-
бiну (1 NIH/1 мл), що призводить до утворення фiбрину desАВ, спостерiгалося збiль-
шення зв’язування монАТ FnII-2M з утвореним фiбрином desАВ (див. 3 на рис. 3, б ).
Цей результат вказує на експозицiю епiтопа для монАТ FnII-2M у αС-регiонах молеку-
ли фiбрину desА пiсля вiдщеплення фiбринопептидiв В та перетворення його на фiб-
рин desАВ. Методом тIФА отримали аналогiчнi результати (див. а на рис. 3). Отже,
двома незалежними методами було доведено, що монАТ FnII-2M не реагують з фiбри-
ном desА, але реагують з фiбрином desАВ, в якому вiдщепленi фiбринопептиди В (див.
рис. 3).
166 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2012, №5
Рис. 4. Структурнi моделi просторової орiєнтацiї αС-регiонiв у молекулi фiбриногену (а); фiбрину desА (б )
та фiбрину desАВ (в)
За допомогою тIФА було також показано, що монАТ FnII-2M не реагують не тiльки
з мономерним фiбрином desА, а й з полiмерною його формою, яку отримували в системi
фiбриноген+тромбiн (0,0025 NIH/1 мг фiбриногену) у 0,03 моль/л трiс-ацетатного буфера,
pH 5,3, 0,3 моль/л NaCl на рiзних промiжках часу: 5, 10, 20, 30 хв (данi не наведено) [13].
Дiю тромбiну зупиняли сумiшшю антитромбiну з гепарином в 5%-му сухому знежирено-
му молоцi [14]. У цих дослiдах як “catch”-антитiла використовували фiбринспецифiчнi мо-
нАТ FnI-3C, а як “tag”-АТ — монАТ FnII-2M (у позитивному контролi — монАТ FnII-4d).
Оскiльки отриманi монАТ FnII-2M не реагували з фiбриногеном та мономерним i полi-
мерним фiбрином desА, то цiлком очевидно, що в цих бiлках епiтоп є закритим внаслiдок
взаємодiї αС-регiонiв з фiбринопептидами В [5]. Лише пiсля вiдщеплення фiбринопептидiв
В вiд молекули фiбриногену та утворення фiбрину desАВ епiтоп для монАТ FnII-2M вiд-
кривається.
При конкурентному iмуноферментному аналiзi в лунках мiкропланшета з адсорбова-
ним фiбрином desАВ змiшували рiзнi концентрацiї розчинiв (вiд 200 мкг/мл до 1 мкг/мл):
1) фiбрину desАВ; 2) αС-фрагмента Аα 240–491 з однаковою кiлькiстю бiотинильованих
монАТ FnII-2M. Результати тIФА показали, що епiтоп для монАТ FnII-2M (Аα 240–491) вiд-
критий у молекулi фiбрину desАВ, але закривається у фрагментi Аα 240–491, αС-регiону,
коли вiн знаходиться в розчинi. Це можна пояснити схильнiстю фрагментiв Аα 240–491 до
утворення гетеродимерiв, як i у випадку утворення субфрагментiв αС-регiону Аα 221–610,
Аα 221–391 й Аα 392–610 [3]. Крiм того, як вiдомо, фрагменти Аα 221–610 здатнi утворюва-
ти олiгомери [15]. Отже, внаслiдок димеризацiї або олiгомеризацiї фрагментiв Аα 240–491
епiтопи для монАТ FnII-2M закриваються i фрагменти втрачають здатнiсть до конкуренцiї.
Саме у фрагментi Аα 240–491 αС-регiону молекули фiбрину знаходиться сайт, яким вони
взаємодiють один з одним.
На пiдставi отриманих даних та комп’ютерного моделювання було спроектовано три
можливi моделi просторової орiєнтацiї αС-регiонiв у молекулi фiбриногену, фiбрину desА
та фiбрину desАВ (рис. 4). Так, у молекулi фiбриногену αС-регiони зв’язанi з фiбрино-
пептидами А й В та мiж собою (див. а на рис. 4). Вiдщеплення фiбринопептидiв А вiд
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2012, №5 167
фiбриногену в утворенiй молекулi фiбрину desА спричинює їх розходження один вiд одного
(див. б на рис. 4), вiдкриваючи центр полiмеризацiї А, пiд час полiмеризацiї фiбрину, i лише
пiсля вiдщеплення фiбринопептидiв В αС-регiони вiдходять вiд остова молекули (див. в на
рис. 4).
Таким чином, за допомогою монАТ FnII-2M з епiтопом у αС-фрагментi Аα 240–491 фiб-
рин(оген)у людини отримано прямий експериментальний доказ того, що в молекулi фiб-
риногену людини, а також в мономерних та полiмерних формах фiбрину desА αС-регiо-
ни зв’язанi з фiбринопептидами В. При цьому, очевидно, що зона контакту знаходиться
в фрагментi Аα 240–491. Пiсля вiдщеплення фiбринопептидiв А αС-регiони вiдходять один
вiд одного, вiдкриваючи центри А, однак залишаються зв’язаними з фiбринопептидами В
та можливо беруть участь у первиннiй полiмеризацiї. Пiсля вiдщеплення фiбринопепти-
дiв В αС-регiони вiдходять вiд остова молекули, що супроводжується переключенням внут-
рiшньомолекулярних зв’язкiв на мiжмолекулярнi, та залучаються до процесу полiмеризацiї
фiбрину, прискорюючи латеральну асоцiацiю протофiбрил i фiбрил.
1. Ryan E.A., Mockros L. F., Weisel J.W., Lorand L. Structural origins of fibrin clot rheology // Biophys.
J. – 1999. – 77. – P. 2813–2826.
2. Медведь Л.В., Горкун О.В., Маняков В.Ф., Белицер В.А. αС-домены молекулы фибриногена как
структуры, ускоряющие самосборку фибрина // Молекул. биология. – 1986. – 20, вып. 2. – P. 461–470.
3. Doolittle R. F. X-ray crystallographic studies on fibrinogen and fibrin // J. Thromb. Haemost. – 2003. –
1(7). – P. 1559–1565.
4. Litvinov R. I., Yakovlev S., Tsurupa G. et al. Direct evidence for specific interactions of the fibrinogen
αC-domains with the central E region and each other // Biochem. – 2007. – 46(31). – P. 9133–9142.
5. Lau H.K.F. Anticoagulant function of a 24-Kd fragment isolated from human fibrinogen A chain //
Blood. – 1993. – 81, No 12. – P. 3277–3284.
6. Varetskaya T.V. Microheterogeneity of fibrinogen. Cryofibrinogen // Ukr. Biokhim. Zhurn. – 1960. – 32. –
P. 13–24.
7. Belitser V.A., Varetskaja T.V., Malneva G.V. Fibrinogen – fibrin interaction // Biochim. et Biophys.
Acta. – 1968. – 154(2). – P. 367–375.
8. Ugarova T. P., Budzynski A. Z. Interaction between complementary polymerization sites in the structural
D and E domains of human fibrin // J. Biol. Chem. – 1992. – 267, No 19. – P. 13687–13693.
9. Marder V. J., Budzynski A. Z., Barlow G.H. Comparison of the physiochemical properties of fragment D
derivatives of fibrinogen and fragment D-D of cross-linked fibrin // Biochim. et Biophys. Acta. – 1976. –
427(1). – P. 1–14.
10. Riedel T., Suttnar J., Brynda E. et al. Fibrinopeptides A and B release in the process of surface fibrin
formation // Blood. – 2011. – 117, No 5. – P. 1700–1706.
11. Колеснiкова I.М., Луговська Н.Е., Луговськой Е. В. та iн. Моноклональнi антитiла, специфiчнi до
фiбрину людини // Доп. НАН України. – 2006. – № 9. – С. 181–185.
12. Луговской Э. В., Гриценко П.Г., Комисаренко С. В. Молекулярные механизмы полимеризации фиб-
рина и формирования его трехмерной сети // Биоорган. химия. – 2009. – 35, № 4. – С. 437–456.
13. Lougovskoi E.V., Gogolinskaya G.R. Preparation of fibrin desA by thrombin // Укр. бiохiм. журн. –
1999. – 71, Nо 4. – P. 107–108.
14. Desai U.R. New antithrombin-based anticoagulants // Med. research Rev. – 2003. – 24, No 2. – P. 151–181.
15. Tsuruba G., Mahid A., Veklich Y. et al. Structure, Stability and Interaction of fibrin αC-Domain Poly-
mers // J. Biochem. – 2011. – 50. – P. 8028–8037.
Надiйшло до редакцiї 14.12.2011Iнститут бiохiмiї iм. О.В. Палладiна
НАН України, Київ
168 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2012, №5
Т. А. Позняк, И.Н. Колесникова, Е. М. Макогоненко, Л. М. Литвинова,
Е.П. Костюченко, Г. К. Гоголинская, Н. А. Пыдюра, С.И. Андрианов,
член-кореспондент НАН Украины Э.В. Луговской,
академик НАН Украины С.В. Комисаренко
Изменения пространственной ориентации αС-регионов
фибрин(оген)а в процессе его трансформации в полимерный фибрин
Получены монАТ FnII-2М, эпитоп для которых находится во фрагменте Аα 240–491 αС-ре-
гиона фибриногена человека. С использованием иммуноферментного анализа и метода по-
верхностно-плазмонного резонанса было показано, что монАТ FnII-2M не реагировали с фиб-
риногеном, мономерным и полимерным фибрином desА, но реагировали с фибрином desАВ.
Следовательно, лишь после отщепления фибринопептидов В эпитоп для монАТ FnII-2М
становится доступным. Полученные результаты позволяют предположить, что в фибри-
ногене, мономерном и полимерном фибрине desA αС-регионы связаны с фибринопептида-
ми В и отходят от остова молекулы лишь после их отщепления. На основе полученных
результатов и данных, приведенных в научной литературе, компьютерно построено мо-
дели пространственной ориентации αС-регионов в молекулах фибриногена, фибрина desА
и desАВ.
T.A. Pozniak, I.N. Kolesnikova, E. M. Makogonenko, L. M. Litvinova,
O.P. Kostiuchenko, G.K. Gogolinskaya, M. O. Pydiura, S. I. Andrianov,
Corresponding Member of the NAS of Ukraine E.V. Lugovskoy,
Academician of the NAS of Ukraine S.V. Komisarenko
Changes of the spatial orientation of αC-regions of fibrinogen during its
transformation in polymeric fibrin
Monoclonal antibody (monAb) FnII-2M with the epitope for them in human fibrin(ogen) fragment
Aα 240–491 of the αC-region has been obtained. It is shown by ELISA and the method of surface
plasmon resonance that monAb FnII-2M doesn’t react with fibrinogen, monomeric and polymeric
fibrin desA, but reacts with fibrin desAB. Thus, this proves that the accessibility of the epitope
for this monAb appears only in fibrin desAB. These results are a direct experimental evidence
that the αC-regions (Aα 220–610) are bound with fibronopeptide B of fibrinogen and fibrin desA
molecules but move away from the framework of a molecule only after the removal of fibrinopeptides
B by thrombin. These data and the results of other authors allow us to design the computer models
of spatial orientation of αC-regions in fibrinogen, fibrin desA, and fibrin desA.
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2012, №5 169
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-49801 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 1025-6415 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-12-07T13:23:18Z |
| publishDate | 2012 |
| publisher | Видавничий дім "Академперіодика" НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Позняк, Т.А. Колеснікова, І.М. Макогоненко, Є.М. Литвинова, Л.М. Костюченко, О.П. Гоголінська, Г.К. Пидюра, М.О. Андріанов, С.І. Луговськой, Е.В. Комісаренко, С.В. 2013-09-28T01:18:24Z 2013-09-28T01:18:24Z 2012 Зміни просторової орієнтації αС-регіонів фібриногену в процесі його трансформації в полімерний фібрин / Т.А. Позняк, І.М. Колеснікова, Є.М. Макогоненко, Л.М. Литвинова, О.П. Костюченко, Г.К. Гоголінська, М.О. Пидюра, С.І. Андріанов, Е.В. Луговськой, С.В. Комісаренко // Доп. НАН України. — 2012. — № 5. — С. 163-169. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. 1025-6415 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/49801 577.112:612.115 Отримано монАТ FnII-2М, епітоп для яких знаходиться в фрагменті Аα 240–491 αС-регіону фібрин(оген)у людини. З використанням імуноферментного аналізу та методу поверхнево-плазмонного резонансу було показано, що монАТ FnII-2M не реагували з фібриногеном, мономерним і полімерним фібрином desA, але реагували з фібрином desАВ. Отже, лише після відщеплення фібринопептидів В епітоп для монАТ FnII-2M стає доступним. Отримані результати дають змогу припустити, що в фібриногені та мономерному й полімерному фібрині desA αС-регіони зв'язані з фібринопептидами В і відходять від остова молекули лише після їх відщеплення. На підставі отриманих результатів та наведених в науковій літературі даних комп'ютерно побудовано моделі просторової орієнтації αС-регіонів у молекулах фібриногену, фібрину desA й desAB. Получены монАТ FnII-2М, эпитоп для которых находится во фрагменте Аα 240–491 αС-региона фибриногена человека. С использованием иммуноферментного анализа и метода поверхностно-плазмонного резонанса было показано, что монАТ FnII-2M не реагировали с фибриногеном, мономерным и полимерным фибрином desА, но реагировали с фибрином desАВ. Следовательно, лишь после отщепления фибринопептидов В эпитоп для монАТ FnII-2М становится доступным. Полученные результаты позволяют предположить, что в фибриногене, мономерном и полимерном фибрине desA αС-регионы связаны с фибринопептидами В и отходят от остова молекулы лишь после их отщепления. На основе полученных результатов и данных, приведенных в научной литературе, компьютерно построено модели пространственной ориентации αС-регионов в молекулах фибриногена, фибрина desА и desАВ. Monoclonal antibody (monAb) FnII-2M with the epitope for them in human fibrin(ogen) fragment Aα 240–491 of the αC-region has been obtained. It is shown by ELISA and the method of surface plasmon resonance that monAb FnII-2M doesn't react with fibrinogen, monomeric and polymeric fibrin desA, but reacts with fibrin desAB. Thus, this proves that the accessibility of the epitope for this monAb appears only in fibrin desAB. These results are a direct experimental evidence that the αC-regions (Aα 220–610) are bound with fibronopeptide B of fibrinogen and fibrin desA molecules but move away from the framework of a molecule only after the removal of fibrinopeptides B by thrombin. These data and the results of other authors allow us to design the computer models of spatial orientation of αC-regions in fibrinogen, fibrin desA, and fibrin desA. uk Видавничий дім "Академперіодика" НАН України Доповіді НАН України Біохімія Зміни просторової орієнтації αС-регіонів фібриногену в процесі його трансформації в полімерний фібрин Изменения пространственной ориентации αС-регионов фибрин(оген)а в процессе его трансформации в полимерный фибрин Changes of the spatial orientation of αC-regions of fibrinogen during its transformation in polymeric fibrin Article published earlier |
| spellingShingle | Зміни просторової орієнтації αС-регіонів фібриногену в процесі його трансформації в полімерний фібрин Позняк, Т.А. Колеснікова, І.М. Макогоненко, Є.М. Литвинова, Л.М. Костюченко, О.П. Гоголінська, Г.К. Пидюра, М.О. Андріанов, С.І. Луговськой, Е.В. Комісаренко, С.В. Біохімія |
| title | Зміни просторової орієнтації αС-регіонів фібриногену в процесі його трансформації в полімерний фібрин |
| title_alt | Изменения пространственной ориентации αС-регионов фибрин(оген)а в процессе его трансформации в полимерный фибрин Changes of the spatial orientation of αC-regions of fibrinogen during its transformation in polymeric fibrin |
| title_full | Зміни просторової орієнтації αС-регіонів фібриногену в процесі його трансформації в полімерний фібрин |
| title_fullStr | Зміни просторової орієнтації αС-регіонів фібриногену в процесі його трансформації в полімерний фібрин |
| title_full_unstemmed | Зміни просторової орієнтації αС-регіонів фібриногену в процесі його трансформації в полімерний фібрин |
| title_short | Зміни просторової орієнтації αС-регіонів фібриногену в процесі його трансформації в полімерний фібрин |
| title_sort | зміни просторової орієнтації αс-регіонів фібриногену в процесі його трансформації в полімерний фібрин |
| topic | Біохімія |
| topic_facet | Біохімія |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/49801 |
| work_keys_str_mv | AT poznâkta zmíniprostorovoíoríêntacííαsregíonívfíbrinogenuvprocesíiogotransformacíívpolímerniifíbrin AT kolesníkovaím zmíniprostorovoíoríêntacííαsregíonívfíbrinogenuvprocesíiogotransformacíívpolímerniifíbrin AT makogonenkoêm zmíniprostorovoíoríêntacííαsregíonívfíbrinogenuvprocesíiogotransformacíívpolímerniifíbrin AT litvinovalm zmíniprostorovoíoríêntacííαsregíonívfíbrinogenuvprocesíiogotransformacíívpolímerniifíbrin AT kostûčenkoop zmíniprostorovoíoríêntacííαsregíonívfíbrinogenuvprocesíiogotransformacíívpolímerniifíbrin AT gogolínsʹkagk zmíniprostorovoíoríêntacííαsregíonívfíbrinogenuvprocesíiogotransformacíívpolímerniifíbrin AT pidûramo zmíniprostorovoíoríêntacííαsregíonívfíbrinogenuvprocesíiogotransformacíívpolímerniifíbrin AT andríanovsí zmíniprostorovoíoríêntacííαsregíonívfíbrinogenuvprocesíiogotransformacíívpolímerniifíbrin AT lugovsʹkoiev zmíniprostorovoíoríêntacííαsregíonívfíbrinogenuvprocesíiogotransformacíívpolímerniifíbrin AT komísarenkosv zmíniprostorovoíoríêntacííαsregíonívfíbrinogenuvprocesíiogotransformacíívpolímerniifíbrin AT poznâkta izmeneniâprostranstvennoiorientaciiαsregionovfibrinogenavprocesseegotransformaciivpolimernyifibrin AT kolesníkovaím izmeneniâprostranstvennoiorientaciiαsregionovfibrinogenavprocesseegotransformaciivpolimernyifibrin AT makogonenkoêm izmeneniâprostranstvennoiorientaciiαsregionovfibrinogenavprocesseegotransformaciivpolimernyifibrin AT litvinovalm izmeneniâprostranstvennoiorientaciiαsregionovfibrinogenavprocesseegotransformaciivpolimernyifibrin AT kostûčenkoop izmeneniâprostranstvennoiorientaciiαsregionovfibrinogenavprocesseegotransformaciivpolimernyifibrin AT gogolínsʹkagk izmeneniâprostranstvennoiorientaciiαsregionovfibrinogenavprocesseegotransformaciivpolimernyifibrin AT pidûramo izmeneniâprostranstvennoiorientaciiαsregionovfibrinogenavprocesseegotransformaciivpolimernyifibrin AT andríanovsí izmeneniâprostranstvennoiorientaciiαsregionovfibrinogenavprocesseegotransformaciivpolimernyifibrin AT lugovsʹkoiev izmeneniâprostranstvennoiorientaciiαsregionovfibrinogenavprocesseegotransformaciivpolimernyifibrin AT komísarenkosv izmeneniâprostranstvennoiorientaciiαsregionovfibrinogenavprocesseegotransformaciivpolimernyifibrin AT poznâkta changesofthespatialorientationofαcregionsoffibrinogenduringitstransformationinpolymericfibrin AT kolesníkovaím changesofthespatialorientationofαcregionsoffibrinogenduringitstransformationinpolymericfibrin AT makogonenkoêm changesofthespatialorientationofαcregionsoffibrinogenduringitstransformationinpolymericfibrin AT litvinovalm changesofthespatialorientationofαcregionsoffibrinogenduringitstransformationinpolymericfibrin AT kostûčenkoop changesofthespatialorientationofαcregionsoffibrinogenduringitstransformationinpolymericfibrin AT gogolínsʹkagk changesofthespatialorientationofαcregionsoffibrinogenduringitstransformationinpolymericfibrin AT pidûramo changesofthespatialorientationofαcregionsoffibrinogenduringitstransformationinpolymericfibrin AT andríanovsí changesofthespatialorientationofαcregionsoffibrinogenduringitstransformationinpolymericfibrin AT lugovsʹkoiev changesofthespatialorientationofαcregionsoffibrinogenduringitstransformationinpolymericfibrin AT komísarenkosv changesofthespatialorientationofαcregionsoffibrinogenduringitstransformationinpolymericfibrin |