Особенности влияния криоконсервирования на функциональный потенциал стволовых кроветворных клеток фетальной печени разных сроков гестации
Способность криоконсервирования модифицировать структурно-функциональный статус биообъекта, в том числе клеток фетальной печени (КФП), может использоваться для оптимизации клеточной и тканевой терапии. Эффективность применения КФП определяется присутствием в них широкого спектра клеточных популяций,...
Збережено в:
| Дата: | 2009 |
|---|---|
| Автори: | , , , , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | English |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2009
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/5401 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Особенности влияния криоконсервирования на функциональный потенциал стволовых кроветворных клеток фетальной печени разных сроков гестации / А.Н. Гольцев, Т.Г. Дубрава, Л.В. Останкова, В.И. Грищенко, Е.Е. Ямпольская, М.В. Останков, Н.А. Бондарович, М.А. Сироус // Пробл. криобиологии. — 2009. — T. 19, № 2. — С. 186-199. — Бібліогр.: 37 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-5401 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Гольцев, А.Н. Дубрава, Т.Г. Останкова, Л.В. Грищенко, В.И. Ямпольская, Е.Е. Останков, М.В. Бондарович, Н.А. Сироус, М.А. 2010-01-18T17:32:20Z 2010-01-18T17:32:20Z 2009 Особенности влияния криоконсервирования на функциональный потенциал стволовых кроветворных клеток фетальной печени разных сроков гестации / А.Н. Гольцев, Т.Г. Дубрава, Л.В. Останкова, В.И. Грищенко, Е.Е. Ямпольская, М.В. Останков, Н.А. Бондарович, М.А. Сироус // Пробл. криобиологии. — 2009. — T. 19, № 2. — С. 186-199. — Бібліогр.: 37 назв. — рос. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/5401 615.014.41:611.36.013.018.1 Способность криоконсервирования модифицировать структурно-функциональный статус биообъекта, в том числе клеток фетальной печени (КФП), может использоваться для оптимизации клеточной и тканевой терапии. Эффективность применения КФП определяется присутствием в них широкого спектра клеточных популяций, в которых ключевую роль играют стволовые кроветворные клетки . Установлено изменение фенотипических и функциональных характеристик КФП с пролонгацией срока гестации, что выражалось в снижении их колониеобразующего потенциала, количества CD34+- и одновременном увеличении Mac-1+- и LFA-1+-клеток. Показано, что криоконсервирование селективно обогащает КФП 18 суток гестации кроветворными предшественниками с большим пролиферативным потенциалом. Данный факт может быть определяющим в проявлении их терапевтического эффекта. Здатність кріоконсервування модифікувати структурно-функціональний статус біооб’єкта, у тому числі клітин фетальної печінки (КФП), може використовуватися для оптимізації клітинної і тканинної терапії. Ефективність застосування КФП визначається присутністю в них широкого спектра клітинних популяцій, в яких ключову роль відіграють стовбурові кровотворні клітини. Установлено зміну фенотипічних і функціональних характеристик КФП з пролонгацією терміну гестації, що виражалося в зниженні їх колонієутворюючого потенціалу, кількості CD34+- і одночасному збільшенні Mac-1+- і LFA-1+-клітин. Показано, що кріоконсервування селективно збагачує КФП 18 діб гестації кровотворними попередниками з великим проліферативним потенціалом. Даний факт може бути визначальним в прояві їхнього терапевтичного ефекту. The capability of cryopreservation to modify structural and functional status of bioobject, including fetal liver cells (FLCs), may be applied for cell and tissue therapy optimisation. The efficiency of FLCs application is determined by the presence in them of a wide spectrum of cell populations, including hemopoietic stem cells. There has been established a change in phenotypic and functional characteristics of FLCs with gestation term prolongation, manifesting in a decrease in their colony-forming potential, CD34+ number and a simultaneous increase in Mac-1+ and LFA-1+ cells. Cryopreservation was shown as capable for a selective enrichment of 18 gestation day’s FLCs by hemopoietic precursors with a high proliferative potential. This fact may be determining one in their therapeutic effect manifestation. en ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Теоретическая и экспериментальная криобиология Особенности влияния криоконсервирования на функциональный потенциал стволовых кроветворных клеток фетальной печени разных сроков гестации Peculiarities of Cryopreservation Effect on Functional Potential of Fetal Liver Hemopoietic Stem Cells of Various Gestation Terms Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Особенности влияния криоконсервирования на функциональный потенциал стволовых кроветворных клеток фетальной печени разных сроков гестации |
| spellingShingle |
Особенности влияния криоконсервирования на функциональный потенциал стволовых кроветворных клеток фетальной печени разных сроков гестации Гольцев, А.Н. Дубрава, Т.Г. Останкова, Л.В. Грищенко, В.И. Ямпольская, Е.Е. Останков, М.В. Бондарович, Н.А. Сироус, М.А. Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| title_short |
Особенности влияния криоконсервирования на функциональный потенциал стволовых кроветворных клеток фетальной печени разных сроков гестации |
| title_full |
Особенности влияния криоконсервирования на функциональный потенциал стволовых кроветворных клеток фетальной печени разных сроков гестации |
| title_fullStr |
Особенности влияния криоконсервирования на функциональный потенциал стволовых кроветворных клеток фетальной печени разных сроков гестации |
| title_full_unstemmed |
Особенности влияния криоконсервирования на функциональный потенциал стволовых кроветворных клеток фетальной печени разных сроков гестации |
| title_sort |
особенности влияния криоконсервирования на функциональный потенциал стволовых кроветворных клеток фетальной печени разных сроков гестации |
| author |
Гольцев, А.Н. Дубрава, Т.Г. Останкова, Л.В. Грищенко, В.И. Ямпольская, Е.Е. Останков, М.В. Бондарович, Н.А. Сироус, М.А. |
| author_facet |
Гольцев, А.Н. Дубрава, Т.Г. Останкова, Л.В. Грищенко, В.И. Ямпольская, Е.Е. Останков, М.В. Бондарович, Н.А. Сироус, М.А. |
| topic |
Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| topic_facet |
Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| publishDate |
2009 |
| language |
English |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Peculiarities of Cryopreservation Effect on Functional Potential of Fetal Liver Hemopoietic Stem Cells of Various Gestation Terms |
| description |
Способность криоконсервирования модифицировать структурно-функциональный статус биообъекта, в том числе клеток фетальной печени (КФП), может использоваться для оптимизации клеточной и тканевой терапии. Эффективность применения КФП определяется присутствием в них широкого спектра клеточных популяций, в которых ключевую роль играют стволовые кроветворные клетки . Установлено изменение фенотипических и функциональных характеристик КФП с пролонгацией срока гестации, что выражалось в снижении их колониеобразующего потенциала, количества CD34+- и одновременном увеличении Mac-1+- и LFA-1+-клеток. Показано, что криоконсервирование селективно обогащает КФП 18 суток гестации кроветворными предшественниками с большим пролиферативным потенциалом. Данный факт может быть определяющим в проявлении их терапевтического эффекта.
Здатність кріоконсервування модифікувати структурно-функціональний статус біооб’єкта, у тому числі клітин фетальної печінки (КФП), може використовуватися для оптимізації клітинної і тканинної терапії. Ефективність застосування КФП визначається присутністю в них широкого спектра клітинних популяцій, в яких ключову роль відіграють стовбурові кровотворні клітини. Установлено зміну фенотипічних і функціональних характеристик КФП з пролонгацією терміну гестації, що виражалося в зниженні їх колонієутворюючого потенціалу, кількості CD34+- і одночасному збільшенні Mac-1+- і LFA-1+-клітин. Показано, що кріоконсервування селективно збагачує КФП 18 діб гестації кровотворними попередниками з великим проліферативним потенціалом. Даний факт може бути визначальним в прояві їхнього терапевтичного ефекту.
The capability of cryopreservation to modify structural and functional status of bioobject, including fetal liver cells (FLCs), may be applied for cell and tissue therapy optimisation. The efficiency of FLCs application is determined by the presence in them of a wide spectrum of cell populations, including hemopoietic stem cells. There has been established a change in phenotypic and functional characteristics of FLCs with gestation term prolongation, manifesting in a decrease in their colony-forming potential, CD34+ number and a simultaneous increase in Mac-1+ and LFA-1+ cells. Cryopreservation was shown as capable for a selective enrichment of 18 gestation day’s FLCs by hemopoietic precursors with a high proliferative potential. This fact may be determining one in their therapeutic effect manifestation.
|
| issn |
0233-7673 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/5401 |
| citation_txt |
Особенности влияния криоконсервирования на функциональный потенциал стволовых кроветворных клеток фетальной печени разных сроков гестации / А.Н. Гольцев, Т.Г. Дубрава, Л.В. Останкова, В.И. Грищенко, Е.Е. Ямпольская, М.В. Останков, Н.А. Бондарович, М.А. Сироус // Пробл. криобиологии. — 2009. — T. 19, № 2. — С. 186-199. — Бібліогр.: 37 назв. — рос. |
| work_keys_str_mv |
AT golʹcevan osobennostivliâniâkriokonservirovaniânafunkcionalʹnyipotencialstvolovyhkrovetvornyhkletokfetalʹnoipečeniraznyhsrokovgestacii AT dubravatg osobennostivliâniâkriokonservirovaniânafunkcionalʹnyipotencialstvolovyhkrovetvornyhkletokfetalʹnoipečeniraznyhsrokovgestacii AT ostankovalv osobennostivliâniâkriokonservirovaniânafunkcionalʹnyipotencialstvolovyhkrovetvornyhkletokfetalʹnoipečeniraznyhsrokovgestacii AT griŝenkovi osobennostivliâniâkriokonservirovaniânafunkcionalʹnyipotencialstvolovyhkrovetvornyhkletokfetalʹnoipečeniraznyhsrokovgestacii AT âmpolʹskaâee osobennostivliâniâkriokonservirovaniânafunkcionalʹnyipotencialstvolovyhkrovetvornyhkletokfetalʹnoipečeniraznyhsrokovgestacii AT ostankovmv osobennostivliâniâkriokonservirovaniânafunkcionalʹnyipotencialstvolovyhkrovetvornyhkletokfetalʹnoipečeniraznyhsrokovgestacii AT bondarovična osobennostivliâniâkriokonservirovaniânafunkcionalʹnyipotencialstvolovyhkrovetvornyhkletokfetalʹnoipečeniraznyhsrokovgestacii AT sirousma osobennostivliâniâkriokonservirovaniânafunkcionalʹnyipotencialstvolovyhkrovetvornyhkletokfetalʹnoipečeniraznyhsrokovgestacii AT golʹcevan peculiaritiesofcryopreservationeffectonfunctionalpotentialoffetalliverhemopoieticstemcellsofvariousgestationterms AT dubravatg peculiaritiesofcryopreservationeffectonfunctionalpotentialoffetalliverhemopoieticstemcellsofvariousgestationterms AT ostankovalv peculiaritiesofcryopreservationeffectonfunctionalpotentialoffetalliverhemopoieticstemcellsofvariousgestationterms AT griŝenkovi peculiaritiesofcryopreservationeffectonfunctionalpotentialoffetalliverhemopoieticstemcellsofvariousgestationterms AT âmpolʹskaâee peculiaritiesofcryopreservationeffectonfunctionalpotentialoffetalliverhemopoieticstemcellsofvariousgestationterms AT ostankovmv peculiaritiesofcryopreservationeffectonfunctionalpotentialoffetalliverhemopoieticstemcellsofvariousgestationterms AT bondarovična peculiaritiesofcryopreservationeffectonfunctionalpotentialoffetalliverhemopoieticstemcellsofvariousgestationterms AT sirousma peculiaritiesofcryopreservationeffectonfunctionalpotentialoffetalliverhemopoieticstemcellsofvariousgestationterms |
| first_indexed |
2025-11-25T22:31:30Z |
| last_indexed |
2025-11-25T22:31:30Z |
| _version_ |
1850565421854359552 |
| fulltext |
186 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 19, 2009, ¹2
ÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
Ò. 19, 2009, ¹2
УДК 615.014.41:611.36.013.018.1
À.Í. ÃÎËÜÖÅÂ*, Ò.Ã. ÄÓÁÐÀÂÀ, Ë.Â. ÎÑÒÀÍÊÎÂÀ, Â.È. ÃÐÈÙÅÍÊÎ,
Å.Å. ßÌÏÎËÜÑÊÀß, Ì.Â. ÎÑÒÀÍÊÎÂ, Í.À. ÁÎÍÄÀÐÎÂÈ÷, Ì.À. ÑÈÐÎÓÑ
Îñîáåííîñòè âëèÿíèÿ êðèîêîíñåðâèðîâàíèÿ íà ôóíêöèîíàëüíûé
ïîòåíöèàë ñòâîëîâûõ êðîâåòâîðíûõ êëåòîê ôåòàëüíîé ïå÷åíè
ðàçíûõ ñðîêîâ ãåñòàöèè
UDC 615.014.41:611.36.013.018.1
A.N. GOLTSEV*, T.G. DUBRAVA, L.V. OSTANKOVA, V.I. GRISCHENKO,
E.YE. YAMPOLSKAYA, M.V. OSTANKOV, N.A. BONDAROVICH, M.A. SIROUS
Peculiarities of Cryopreservation Effect on Functional Potential of Fetal
Liver Hemopoietic Stem Cells of Various Gestation Terms
Способность криоконсервирования модифицировать структурно-функциональный статус биообъекта, в том числе клеток
фетальной печени (КФП), может использоваться для оптимизации клеточной и тканевой терапии. Эффективность применения
КФП определяется присутствием в них широкого спектра клеточных популяций, в которых ключевую роль играют стволовые
кроветворные клетки . Установлено изменение фенотипических и функциональных характеристик КФП с пролонгацией срока
гестации, что выражалось в снижении их колониеобразующего потенциала, количества CD34+- и одновременном увеличении
Mac-1+- и LFA-1+-клеток. Показано, что криоконсервирование селективно обогащает КФП 18 суток гестации кроветворными
предшественниками с большим пролиферативным потенциалом. Данный факт может быть определяющим в проявлении их
терапевтического эффекта.
Ключевые слова: клетки фетальной печени, криоконсервирование, кроветворные предшественники.
Здатність кріоконсервування модифікувати структурно-функціональний статус біооб’єкта, у тому числі клітин фетальної
печінки (КФП), може використовуватися для оптимізації клітинної і тканинної терапії. Ефективність застосування КФП виз-
начається присутністю в них широкого спектра клітинних популяцій, в яких ключову роль відіграють стовбурові кровотворні
клітини. Установлено зміну фенотипічних і функціональних характеристик КФП з пролонгацією терміну гестації, що виражалося
в зниженні їх колонієутворюючого потенціалу, кількості CD34+- і одночасному збільшенні Mac-1+- і LFA-1+-клітин. Показано,
що кріоконсервування селективно збагачує КФП 18 діб гестації кровотворними попередниками з великим проліферативним
потенціалом. Даний факт може бути визначальним в прояві їхнього терапевтичного ефекту.
Ключові слова: клітини фетальної печінки, кріоконсервування, кровотворні попередники.
The capability of cryopreservation to modify structural and functional status of bioobject, including fetal liver cells (FLCs), may
be applied for cell and tissue therapy optimisation. The efficiency of FLCs application is determined by the presence in them of a wide
spectrum of cell populations, including hemopoietic stem cells. There has been established a change in phenotypic and functional
characteristics of FLCs with gestation term prolongation, manifesting in a decrease in their colony-forming potential, CD34+ number
and a simultaneous increase in Mac-1+ and LFA-1+ cells. Cryopreservation was shown as capable for a selective enrichment of 18
gestation day’s FLCs by hemopoietic precursors with a high proliferative potential. This fact may be determining one in their
therapeutic effect manifestation.
Key-words: fetal liver cells, cryopreservation, hemopoietic precursors.
Application of fetal liver cells (FLCs) is one of
therapeutic strategies, directed to minimise the
development of many pathological states. The
efficiency of FLCs transplantation is stipulated by the
presence in them of hemopoietic stem elements [10,
21]. FLCs application for autoimmune disease
treatment is based on their capability to correct not
only hemopoietic, but immune competent sphere of
recipient’s organism as well [7, 9]. Recently of quite
intensive studying are the immunotropic and immu-
noregulatory potentials of hemopoietic precursors of
* Àâòîð, êîòîðîìó íåîáõîäèìî íàïðàâëÿòü êîððåñïîíäåíöèþ:
óë. Ïåðåÿñëàâñêàÿ, 23, ã. Õàðüêîâ, Óêðàèíà 61015; òåë.:+38
(057) 373-30-39, ôàêñ: +38 (057) 373-30-84, ýëåêòðîííàÿ ïî÷òà:
cryo@online.kharkov.ua
* To whom correspondence should be addressed: 23, Pereyaslavskaya
str., Kharkov, Ukraine 61015; tel.:+380 57 3733039, fax: +380 57
373 3084, e-mail: cryo@online.kharkov.ua
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the Na-
tional Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
Èíñòèòóò ïðîáëåì êðèîáèîëîãèè è êðèîìåäèöèíû
ÍÀÍ Óêðàèíû, ã. Õàðüêîâ
Использование клеток фетальной печени (КФП)
является одной из терапевтических стратегий,
направленных на минимизацию развития многих
патологических состояний. Эффективность транс-
плантации КФП обусловлена присутствием в них
стволовых кроветворных элементов [10, 21].
Использование КФП при лечении аутоиммунных
заболеваний основано на их способности корреги-
ровать не только гемопоэтическую, но и иммуно-
компетентную сферу организма реципиента [7, 9].
В последнее время достаточно интенсивно изу-
187 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 19, 2009, ¹2
ÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
Ò. 19, 2009, ¹2
different maturity degree from various hemopoietic
“base area” [5, 9, 10, 27]. FLCs capability to inhibit in
vivo and in vitro immune responses is not restricted
by antigens of major histocompatibility complex and is
realised with no preliminary contact with target cells
(tissues) [6].
Such a phenomenon is considered as the stipulated
one by FLCs production of biologically active substan-
ces with a suppressive activity [2, 10]. Transforming
growth factor β, nitric oxide, erythroid suppressive
factor, prostaglandins etc. are referred to the factors
of natural immune suppression [2, 30, 31, 37]. Cells,
producing these factors are identified in tissues of he-
mopoietic “base area” of adult rodents [25, 30], human
[37], as well as embryonic liver [31].
In addition, the criterion for substantiating the
application of cell-tissue substrates of hemopoietic
“base area” to treat dysfunctions of immune competent
sphere is a potential possibility of transplanted hemo-
poietic stem cells (HSCs) to “restore” a recipient’s
immune system by renewing own compartment of simi-
lar cells [5, 10]. This property is of direct relevance to
FLCs, since the most primitive hemopoietic precursors
are more prone to the mentioned potential realisation.
Of note is the fact, that even among FLCs the hemo-
poietic precursors significantly change their structural
and functional status at different stages of gestation
period [24, 27]. HSCs of early gestation terms both in
human [19, 21] and experimental animals [17, 24] are
considered as the most potent ones.
Cryobiological technologies proved their worth as
ones of the most important component in applying cell
and tissue therapy for clinical practice. However the
cryopreservation as the way to modify a structural and
functional status of bioobject, including FLCs, is one
of the important moments in this direction. In some
cases a therapeutic effect of cryopreserved material
exceeds a native one by some parameters [7, 8]. Basing
on the experiments, related to cryopreservation of the
products of embryofetoplacental complex (PEFPC) we
made some suggestions, confirming its capability to
change a component composition of cell-tissue sub-
strates and, in particular, to modify their structural and
functional status [8, 12, 22].
The research was aimed to comparatively estimate
a quantitative composition and functional potential of
HSCs of fetal liver (FL) of different gestation terms
prior to and after cryopreservation.
Materials and methods
Experiments were carried out in 22–24 g CBA/H
mice of 12–14 week age. Mice were decapitated under
light ether narcosis according to the international
principles of the “European Convention for the Protec-
чаются иммунотропный и иммунорегуляторный
потенциалы гемопоэтических предшественников
разной степени зрелости из различных гемопоэти-
ческих „плацдармов” [5, 9, 10, 27]. Способность
КФП ингибировать иммунные реакции в системах
in vivo и in vitro не рестриктирована по антигенам
главного комплекса гистосовместимости и реали-
зуется без предварительного контакта с клетками
(тканями) – мишенями [6].
Считается, что такой феномен обусловлен про-
дукцией КФП биологически активных субстанций
с супрессорной активностью [2, 10]. К факторам
естественной иммунной супрессии относятся
трансформирующий фактор роста β, оксид азота,
эритроидный супрессорный фактор, простаглан-
дины и т. д. [2, 30, 31, 37]. Клетки, продуцирующие
эти факторы, идентифицированы в тканях гемопоэ-
тического „плацдарма” взрослых грызунов [25, 30],
человека [37], а также в печени эмбрионов [31].
Кроме того, критерием обоснования применения
клеточно-тканевых субстратов гемопоэтического
“плацдарма” для лечения дисфункции иммуноком-
петентной сферы является потенциальная возмож-
ность трансплантируемых стволовых кроветвор-
ных клеток (СКК) “реставрировать” иммунную
систему реципиента через обновление собствен-
ного компартмента подобных клеток [5, 10]. Это
свойство имеет непосредственное отношение к
КФП, поскольку наиболее примитивные предшест-
венники гемопоэза более склонны к реализации
описанного потенциала. Необходимо обратить
внимание на то, что даже среди КФП гемопоэти-
ческие предшественники существенно меняют
свой структурно-функциональный статус на раз-
личных этапах гестационного периода [24, 27].
Наиболее потентными принято считать СКК ран-
них сроков гестации как у человека [19, 21], так и
у экспериментальных животных [17, 24].
Криобиологические технологии зарекомен-
довали себя одним из важнейших компонентов
аппликации клеточной и тканевой терапии в кли-
нической практике. Вместе с тем криоконсерви-
рование как способ модификации структурно-
функционального статуса биообъекта, в том числе
КФП, является одним из существенных моментов
в этом направлении. В некоторых случаях терапев-
тический эффект криоконсервированного мате-
риала по ряду параметров превосходит таковой
нативного [7, 8]. На основании экспериментальных
исследований, касающихся криоконсервирования
продуктов эмбриофетоплацентарного комплекса
(ПЭФПК), были высказаны предположения, кото-
рые подтверждают его возможность изменять
компонентный состав клеточно-тканевых субстра-
188 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 19, 2009, ¹2
ÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
Ò. 19, 2009, ¹2
tion of Vertebrate Animals Used for Experimental and
Other Scientific Purposes” (Strasbourg, 1985).
Fetal liver cells of 15 and 18 gestation days (FLCs-15
and FLCs-18, correspondingly), procured with me-dium
199 with 10% embryonic calf serum and 2% sodium
citrate, served the research object.
Content of CD34+, Mac-1+ and LFA-1+ cells in
FLCs population was determined with FACS Calibur
flow cytometer (Becton Dickinson, USA) using anti-
mouse MAT (Abcam): CD34 (PE) and Biolegend:
Mac-1 (CD11a; FITC), LFA-1 (CD11b; FITC). Data
were statistically processed with WinMDI 2.8 software.
Alpha-fetoprotein (AFP) content in blood serum
was determined using immune-enzyme method by
means of Stat Fax 2100 analyser (USA) with reagent
kit of “Protein Contour” Ltd (Russia).
Fetal liver cells were cryopreserved under 10%
DMSO protection with programmed freezer UOP-06
(Special Designing and Technical Bureau with Experi-
mental Unit at the Institute for Problems of Cryobiology
and Cryomedicine) with 1°C/min rate down to –25°C
with following immersion into liquid nitrogen [8].
The content of colony-forming units (CFUs) in FL
was in vivo assessed using the method of spleen
colony-formation in lethally irradiated recipients to the
8th and 12th days (CFUs-8 and CFUs-12, correspon-
dingly) after transplantation to animals of 1×105 FLCs/
mouse according to the standard technique [35].
Content of granulomonocytopoiesis precursors (CFU-
GM) was determined in vitro by the number of formed
colonies (CFU) and clusters (ClFU) in semisolid agar
[14]. Their identification in native and cryopreserved
materials was realised to the 7th and 14th days, cor-
respondingly, because of a temporary inhibition of CFU-
GM proliferative activity under cryopreservation factor
effect [11]. Preparations were studied under inverted
microscope (×40).
To assess the distribution peculiarities of hemo-
poietic cells of various differentiation extent [1] there
was introduced the index of proliferative activity (IPA),
representing the ratio of CFUs-12/CFUs-8 or CFU/
ClFU [11].
The results obtained were statistically processed
using the Student’s method with Excel software.
Results and discussion
Studying structural and functional charac-
teristics of FLCs of different gestation terms. Taking
into account the significance of FLCs heterogeneous
composition in manifesting their therapeutic effect [10],
there was recognised an unique role of certain cell
populations, including hepatoblasts, similar to oval cells,
liver hematopoietic stem cells [32]. Studying the FLCs
morphological composition demonstrated the content
тов и, главное, модифицировать их структурно-
функциональный статус [8, 12, 22].
Цель исследования – сравнительная оценка
количественного состава и функционального потен-
циала СКК фетальной печени (ФП) разных сроков
гестации до и после криоконсервирования.
Ìàòåðèàëû è ìåòîäû
Эксперименты проводили на мышах линии
СВА/Н 12–14-недельного возраста массой 22–24 г.
Мышей декапитировали под легким эфирным нар-
козом в соответствии с Международными прин-
ципами “Европейской конвенции о защите позво-
ночных животных, используемых для эксперимен-
тальных и других научных целей” (Страсбург,
1985).
Объектом исследования служили клетки фе-
тальной печени 15-х (КФП-15) и 18-х (КФП-18) су-
ток гестации, полученные на среде 199 с 10%-й
эмбриональной телячьей сывороткой и 2%-м цит-
ратом натрия.
Содержание в популяции КФП CD34+-, Mac-1+ –
и LFA-1+ – клеток определяли на проточном цито-
флуориметре FACS Calibur (Becton Dickinson,
USA), используя anti-mouse – моноклональные ан-
титела CD34 (PE-конъюгаты; Abcam, США),
Mac-1 (CD11a, FITC-конъюгаты; Biolegend, США)
и LFA-1 (CD11b, FITC-конъюгаты; Biolegend,
США). Статистический учет данных осуществля-
ли с помощью программы WinMDI 2.8.
Содержание альфа-фетопротеина (АФП) в
сыворотке крови определяли иммуноферментным
методом на анализаторе Stat Fax 2100 (USA) с по-
мощью набора реактивов фирмы “Протеиновый
контур” (Санкт-Петербург).
Клетки фетальной печени криоконсервировали
под защитой криопротектора ДМСО в концентра-
ции 10% на программном замораживателе УОП-06
(СКТБ с ОП ИПКиК НАН Украины) со скоростью
1°С/мин до –25°С с последующим погружением
образцов в жидкий азот [8].
Оценку содержания колониеобразующих еди-
ниц (КОЕс) в ФП осуществляли in vivo методом
селезеночного колониеобразования у летально
облученных реципиентов на 8-е (КОЕс-8) и 12-е
(КОЕс-12) сутки после трансплантации животным
1×105 КФП/мышь по общепринятой методике [35].
Содержание предшественников грануломоноци-
топоэза (КОЕ-ГМ) в системе in vitro определяли
по количеству формируемых колоний (КОЕ) и
кластеров (КлОЕ) в полужидком агаре [14]. Их
идентификацию в нативном материале осущест-
вляли на 7-е, в криоконсервированном – на 14-е
сутки культивирования, поскольку пролифера-
189 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 19, 2009, ¹2
ÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
Ò. 19, 2009, ¹2
of non-differentiated blasts in FLCs-15 to make
8.70 ± 1.20%. This index in FLCs-18 reduced almost
in 1.5 times at the background of increased content of
mature forms (Table 1). These data coincide with the
results of other authors about the maximum hepatoblast
content in murine FL since the 12–13th to 15–16th
gestation days and further decrease in their concentra-
tion and hemopoietic potential [29].
FLCs hemopoietic precursors under gestation term
rise are known as changing their phenotypic charac-
teristics and functional status [21, 24]. Actually this
occurs during fetal liver HSCs differentiation. In order
to identify hemopoietic precursors among FLCs there
are used different markers, namely CD34, Mac-1,
Sca-1, Thy-1, CD117 etc. Their expression degree ei-
ther as independent tracer, or combined with other
membrane structures, characterises the level of precur-
sor functional potential (differentiation degree) [24].
For example, with HSCs differentiation there is a
decrease in expression degree of CD34 marker [19].
The research performed demonstrated almost twi-
ce decrease of CD34+ cell content in FL under gesta-
tion term rise (Fig. 1), that corresponded to the notions
about the fact that in total HSCs compartment the ratio
of pool of slightly differentiated cells with a high
proliferative potential and those, advanced in differen-
tiation, changed with gestation term increase [19].
The obtained results of comparative estimation of
CD34+ cells and AFP quantitative content in mice of
different gestation term demonstrated a high match of
their change dynamics since 15th to 18th days (Fig. 1).
In spite of the fact, that AFP concentration within this
period reduced more intensively (in 5 times), the com-
mon tendency of changes in both indices might testify
to the interdependence of AFP production and multi-
potent precursor content in embryogenesis.
Of known is the AFP regulatory role as for immune
system, consisting in activation of immune suppressive
Таблица 1. Морфологический состав КФП-15 и КФП-18
Table 1. FLCs-15 and FLCs-18 morphological composition
Примечание: * – достоверные различия (P < 0,05) при сравнении с КФП-15; Недиф. – недифференцированные.
Notes: * – statistically significant differences (P < 0.05) compared to FLCs-15; Non-dif. – nondifferentiated.
тивная активность КОЕ-ГМ временно ингиби-
рована под действием факторов криоконсервиро-
вания [11]. Препараты исследовали под инвер-
тированным микроскопом (×40).
Для оценки особенностей распределения кро-
ветворных клеток различной степени дифферен-
цировки [1] был введен индекс пролиферативной
активности (ИПА), представляющий собой от-
ношение КОЕс-12/КОЕс-8 или КОЕ/КлОЕ [11].
Полученные данные статистически обраба-
тывали по методу Стьюдента с применением ком-
пьютерной программы MS Excel.
Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèå
Изучение структурно-функциональных
характеристик КФП разных сроков гестации.
Учитывая значимость гетерогенного состава КФП
в проявлении их лечебного эффекта [10], признана
уникальная роль определенных популяций клеток,
в том числе гепатобластов, которые подобны
овальным клеткам, печеночным гемопоэтическим
стволовым клеткам [32]. Исследование морфо-
логического состава КФП показало, что в КФП-15
содержание недифференцированных бластов сос-
тавляло 8,70 ± 1,20%. В КФП-18 этот показатель
снижался почти в 1,5 раза на фоне увеличения
содержания зрелых форм (табл. 1). Эти данные
совпадают с результатами других авторов о макси-
мальном содержании гепатобластов в ФП мышей
с 12–13-х по 15–16-е сутки гестации и дальнейшем
снижении их концентрации и гемопоэтического
потенциала [29].
Известно, что кроветворные предшественники
КФП при увеличении сроков гестации изменяют
свои фенотипические характеристики и функцио-
нальный статус [21, 24]. Фактически это проис-
ходит при дифференцировке СКК ФП. Для иден-
тификации среди КФП кроветворных предшест-
èèöàòñåãèêîðÑ
èêòóñ,ÏÔÊ
noitatsegCLF
syad,smret
ÏÔÊâàòñîñéèêñå÷èãîëîôðîÌ
noitisopmoclacigolohpromCLF
ûòñàëÁ
stsalB àòåÌ -
ûòèöîëåèì
ateM -
setycoleym
îëóíàðà -
ûòèö
olunarG -
setyc
ûòèöîíîÌ
setyconoM
îôìèË -
ûòèö
ohpmyL -
setyc
îòàïåà -
ûòèö
otapeH -
setyc.ôèäåÍ
noN - .fid
îðòèðÝ -
orhtyrE -
îìðîÍ -
omroN -
îëåèÌ -
oleyM -
51 2,1±7,8 8,2±0,92 20,3±03,64 08,0±8,2 08,0±09,1 52,0±01,1 4,0±0,2 10,0±02,1 05,0±03,7
81 33,0±01,6 * 5,0±1,01 54,2±08,64 46,0±08,21 * 10,0±00,1 2,0±04,3 *0 - 02,0±04,3 * 49,0±05,81
190ÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
Ò. 19, 2009, ¹2
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 19, 2009, ¹2
link and T-effector function inhibition [13, 16]. Our
data and results of other authors [18, 20, 23] confirm
this protein participation in maintaining FL homeostasis
and, mainly, in providing HSCs functional status.
Wide spectrum of FLCs biological activity is realised
at the level of a direct intercellular cooperation or dis-
tant mediator interactions with participation of different
adhesive molecules: Mac-1, LFA-1, ICAM-1, VCAM,
L-selectin, VLA-4, VLA-5 etc. [36]. These molecules
are identified and characterised as the structures, invol-
ved in regulating functional state primarily of leuko-
cytes. Further, adhesive molecules of immunoglobulin
family and production of chemokine series were shown
as being inherent to many cells and participating in
migration and settlement of stem cells in bone mar-
row microenvironment as well. In particular, Mac-1
as heterodimers of CD11b and CD18, is the member
of integrin family. CD11b and CD18 represent adhesive
molecules, playing an important role in multipotent
HSCs interaction with bone marrow stroma [22, 28,
36]. One believes, that differences in Mac-1 expression
on HSCs of adult BM and FL are related to a change
in the spectrum of microenvironment signals [22, 24].
Mac-1+ hemopoietic precursors are assumed to be the
most prone to proliferation, meanwhile their resting state
is provided when this marker is absent [24]. With HSCs
differentiation there is an increase in cell number and
expression extent of adhesive molecules on their
surface, including Mac-1 structure. Our own data, testi-
fying to the fact, that the number of Mac-1+ cells in
FL really augmented in 2.2 times with gestation term
rise since 15th to 18th days, corresponded to this concept
completely (Fig. 2).
The process of FLCs precursor progress from less
to more differentiated ones during gestation term
prolongation is confirmed by an increased concentration
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1,6
1,8
2
С
од
ер
жа
ни
е
C
D
34
+
кл
ет
ок
,
%
C
D
34
+ c
el
l c
on
te
nt
, %
С
од
ер
жа
ни
е
АФ
П
, м
г/м
л
AF
P
co
nt
en
t,
m
g/
m
l
КФП-15
FLCs-15
КФП-18
FLCs-18
Рис. 1. Содержание CD34+-клеток (а) и АФП (б) на разных стадиях гестационного периода.
Fig. 1. CD34+ cells (a) and AFP (b) content at various gestation stages.
венников используют различные маркеры, а именно
СD34, Mac-1, Sca-1, Thy-1, СD117 и т. д. Степень
их экспрессии либо как самостоятельного сви-
детеля, либо в сочетании с другими мембранными
структурами характеризует уровень функциональ-
ного потенциала предшественников (степень
дифференцировки) [24]. Например, по мере диффе-
ренцировки СКК снижается степень экспрессии
СD34-маркера [19].
Проведенные исследования продемонстриро-
вали почти двукратное снижение содержания
СD34+-клеток в ФП при увеличении срока гестации
(рис. 1). Это соответствует представлениям о том,
что в общем компартменте СКК соотношение пула
малодифференцированных, обладающих высоким
пролиферативным потенциалом, и клеток, продви-
нутых в дифференцировке, изменяется при увели-
чении срока гестации [19].
Полученные результаты сравнительной оценки
количественного содержания СD34+-клеток и АФП
у мышей разного срока гестации показали высо-
кую степень совпадения динамики их изменения с
15-х по 18-е сутки (рис. 1). Несмотря на то, что кон-
центрация АФП в этот период снижалась более
интенсивно (в 5 раз), общая тенденция изменения
обоих показателей может свидетельствовать о
взаимообусловленности продукции АФП и содер-
жания мультипотентных предшественников в
эмбриогенезе.
Известна регуляторная роль АФП в отношении
иммунной системы, заключающаяся в активации
супрессорного звена иммунитета и ингибиции
функции Т-эффекторов [13, 16]. Наши данные и
результаты других авторов [18, 20, 23] подтверж-
дают, что этот белок участвует в поддержании ге-
мопоэза в ФП и прежде всего в обеспечении функ-
а а б bКФП-15
FLCs-15
КФП-18
FLCs-18
191 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 19, 2009, ¹2
ÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
Ò. 19, 2009, ¹2
0
2
4
6
8
С
од
ер
ж
ан
ие
к
ле
то
к,
%
C
el
l c
on
te
nt
, %
КФП-15
FLCs-15
КФП-18
FLCs-18
Рис. 2. Содержание CD34+- (1), Мас-1+– (2) и LFA1+– (3)
клеток в ФП в зависимости от срока гестации.
Fig. 2. Content of CD34+ (1), Mac-1+ (2) and LFA-1+ (3) cells
in FL depending on gestation term.
of LFA-1+ cells among them. Magnification ratio of
their content was 1.5 times lower than Mac-1+ cells,
but evident (Fig. 2). The LFA-1, a lymphocytic functio-
nally associated antigen is known as expressed on
HSCs as well [33, 34]. The spread of its functional
potential is quite a large, but the key role consists in
making HSCs (with maturation) capable for interaction
with endothelial cells of microvessels and forming so-
called “migration pore” to release from a niche of
hemopoietic microenvironment [26]. Therefore it is rea-
sonable to believe, that an increase in LFA-1+ FLC
content within the 15th to 18th days (Fig. 2) reflects the
dynamics of change in LFA-1+ hemopoietic precursor
content among them. So, by the results of assessment
of FLCs phenotypic characteristics of selected gesta-
tion terms, the concentration of more potent hemo-
poietic precursors was established to be higher in
FLCs-15. This correlated with the data of other authors
[24], which demonstrated a sharp decrease in the con-
centration of hemopoietic multipotent precursors with
a long-term potential of self-maintaining (LT-HSC)
after 15th gestation day in FL.
This fact was confirmed when evaluating the func-
tional status of FL hemopoietic precursors of different
differentiation rate. Fig. 3 shows that FLCs did not
possess a high colony forming activity in vivo indepen-
dently on gestation term. However, a distinct redist-
ribution of subpopulation composition of precursors
when increasing the gestation term with a decrease in
more potent CFUs-12 content, was traced. If com-
paring this result with FLCs phenotypic characteristics
(see Fig. 2) we may note, that the similar dynamics
was only in a change of CD34+ cell content. At this
background there was an increase in the content of
1
2
3
1
2
3
ционального статуса СКК.
Широкий спектр биологической активности
КФП реализуется на уровне непосредственной
межклеточной кооперации или дистантных ме-
диаторных взаимодействий с участием различных
молекул адгезии: Mac-1, LFA-1, ICAM-1, VCAM,
L-селектин, VLA-4, VLA-5 и др. [36]. Эти моле-
кулы идентифицированы и охарактеризованы как
структуры, задействованные в регуляции функцио-
нального состояния, в первую очередь лейкоцитов.
В дальнейшем было показано, что молекулы ад-
гезии семейства иммуноглобулинов и продукция
ряда хемокинов присущи многим клеткам и участ-
вуют также в миграции и расселении стволовых
клеток в костномозговом микроокружении. В част-
ности, Mac-1 в виде гетеродимеров СD11b и CD18
является членом семейства интегринов. СD11b и
CD18 представляют собой молекулы адгезии,
которые играют важную роль во взаимодействии
мультипотентных СКК со стромой костного мозга
(КМ) [22, 28, 36]. Существует мнение, что различия
в экспрессии Mac-1 на СКК взрослого КМ и ФП
связаны с изменением спектра сигналов микро-
окружения [22, 24]. Предполагается, что Mac-1+ –
кроветворные предшественники в большей степени
склонны к пролиферации, тогда как отсутствие
этого маркера обеспечивает состояние их покоя
[24]. По мере дифференцировки СКК увеличивает-
ся количество клеток и повышается степень экс-
прессии молекул адгезии на их поверхности,
включая Mac-1 – структуру. В полном соответствии
с данной концепцией находятся полученные нами
данные, которые свидетельствуют, что количество
Mac-1+ – клеток в ФП действительно повышалось
при увеличении сроков гестации с 15-х по 18-е
сутки в 2,2 раза (рис. 2).
Процесс продвижения предшественников КФП
от менее к более дифференцированным при про-
лонгации срока гестации подтверждается и увели-
чением концентрации среди них LFA-1+ – клеток.
Кратность увеличения их содержания была при-
мерно в 1,5 раза меньшей, чем Mac-1+ – клеток,
тем не менее она была очевидной (рис. 2). Извест-
но, что LFA-1 – лимфоцитарный функционально-
ассоциированный антиген – экспрессируется и на
СКК [33, 34]. Широта его функционального потен-
циала достаточно велика, но ключевая роль – при-
дание СКК (по мере созревания) способности
взаимодействовать с эндотелиальными клетками
микрососудов и формировать так называемую
“миграционную пору” для выхода из ниши крове-
творного микроокружения [26]. Поэтому логично
считать, что увеличение концентрации LFA-1+ –
КФП с 15-х по 18-е сутки (рис. 2) отражает и дина-
ÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
Ò. 19, 2009, ¹2
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 19, 2009, ¹2
в системе in vivo независимо от срока гестации.
Однако прослеживалось четкое перераспределение
субпопуляционного состава предшественников при
увеличении срока гестации со снижением содержа-
ния более потентных КОЕс-12. Сопоставляя этот
результат с фенотипическими характеристиками
КФП (см. рис. 2), можно заметить, что такую же
динамику имело лишь изменение содержания
CD34+-клеток. На этом фоне увеличивалось содер-
жание более дифференцированных КОЕс-8 , что
совпадало с повышением концентрации в КФП
Мас-1+ – и LFA-1+ – клеток и снижением ИПА.
Подобное изменение прослеживалось при оценке
in vitro содержания образующих колонии в агаре
КОЕ-ГМ, еще более дифференцированных, чем
КОЕс-8 – кроветворных предшественников
(рис. 4). К 18-м суткам достоверно снижалась кон-
центрация более потентной субпопуляции КОЕ.
Содержание дифференцированных КлОЕ изменя-
лось недостоверно.
Итак, изменение фенотипических и функцио-
нальных характеристик КФП по мере увеличения
срока гестации очевидно. Возникает вопрос: вли-
яют ли такого рода изменения на устойчивость
КФП к факторам криоконсервирования, ответ на
который представлен ниже.
Оценка характера влияния факторов крио-
консервирования на КФП разных сроков гес-
тации. Результаты данного исследования под-
тверждают основные постулаты криобиологии:
характер и степень влияния физико-химических
факторов, реализуемых в процессе криоконсер-
вирования, определяются исходным состоянием
биообъекта [4, 15].
192
Рис. 3. Колониеобразующий потенциал КОЕс фетальной печени
разных сроков гестации. – КОЕс-8; – КОЕс-12; ◆– ИПА.
Fig. 3. Colony forming potential of fetal liver CFUs of different gestation
terms. – CFUs-8; – CFUs-12; ◆– IPA.
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
С
од
ер
жа
ни
е
КО
Ес
, а
бс
.е
д.
н
а
10
5 к
ле
то
к
C
FU
s
co
nt
en
t,
ab
s.
u
ni
ts
p
er
1
05
ce
lls
И
П
А
(К
О
Е-
12
/К
О
Е-
8)
, у
сл
. е
д
IP
A
(C
FU
s-
12
/C
FU
-8
),
ar
bi
tra
ry
u
ni
ts
КФП-15
FLCs-15
КФП-18
FLCs-18
more differentiated CFUs-8, coinciding with augmen-
tation of Mac-1+ and LFA-1+ cell concentration in
FLCs as well as the IPA reduction. The same change
was traced when assessing in vitro the content of
CFU-GM, forming the colonies in agar, much more
differentiated, than CFUs-8 of hemopoietic precursors
(Fig. 4). To the 18th day there was a statistically
significant decrease in the concentration of more potent
CFU subpopulation. Change in the content of differen-
tiated ClFU was not statistically significant.
Thus, a change in phenotypic and functional
characteristics of FLCs with gestation term rise is evi-
dent. The question about the fact whether such changes
affect the FLCs resistance to cryopreservation factors,
is answered below.
Assessment of effect character of cryo-
preservation factors on FLCs of different gestation
terms. The results of the study confirm the main
cryobiological postulates: the character and degree of
the effect of physical and chemical factors, realised
during cryopreservation, are determined by the initial
state of the biological object [4, 15].
Really, a morphological composition of FLCs of
different gestation terms, having the certain differences
before cryotreatment, was much more manifested after
cryopreservation (Table 2). In particular, if the change
in a number of non-differentiated blasts in cryopreser-
ved FLCs-15 (cFLCs-15) was insignificant, it increased
by 26% in cFLCs-15. More manifested changes in
content of myeloblasts, lymphocytes, mature hepato-
cytes etc. in cFLCs-18 are also evident. Considerable
differences were traced when evaluating the integrity
and number of nucleated cells after FLCs cryopreserva-
tion (Fig. 5). These indices for cFLCs-15 reduced not
мику изменения содержания среди них
LFA-1+ – кроветворных предшественни-
ков. Итак, по результатам оценки фено-
типических характеристик КФП выбран-
ных сроков гестации установлено, что
концентрация более потентных крове-
творных предшественников была выше
в КФП-15. Это согласуется с данными
других авторов [24], которые показали,
что после 15-х суток гестации в ФП резко
снижается концентрация кроветворных
мультипотентных предшественников с
длительным потенциалом самоподдер-
жания (LT-HSC).
Данный факт нашел свое подтвержде-
ние при оценке функционального статуса
кроветворных предшественников ФП
разного уровня дифференцировки. Из
рис. 3 следует, что КФП не обладали вы-
сокой колониеобразующей активностью
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
200
0
0,5
1
193 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 19, 2009, ¹2
ÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
Ò. 19, 2009, ¹2
Таблица 2. Морфологический состав КФП-15 и КФП-18 до и после криоконсервирования
Table 2. Morphological composition of FLCs-15 and FLCs-18 prior to and after cryopreservation
Примечание: * – достоверные различия (P<0,05) между группами: нативные КФП-15 с криконсервированными КФП-15 или
нативные КФП-18 с криоконсервированными КФП-18; # – криоконсервированные КФП-15 с криоконсервированными КФП-18;
Недиф. – недифференцированные.
Notes: * – statistically significant differences (P<0.05) between groups: # – is nFLCs-15 with cFLCs-15 or nFLCs-18 with cFLCs-18;
Non-dif. – nondifferentiated.
Рис. 4. Колониеобразующий потенциал КОЕ-ГМ фетальной печени
разных сроков гестации: – КлОЕ; – КОЕ; ◆– ИПА.
Fig. 4. Colony forming potential of fetal liver CFU-GM of different
gestation terms: – ClFU; – CFU; ◆– IPA.
С
од
ер
жа
ни
е
КО
Е-
ГМ
, а
бс
.е
д.
н
а
10
5 к
л.
C
FU
-G
M
c
on
te
nt
, a
bs
. u
ni
ts
p
er
1
05
ce
lls
И
П
А
(К
О
Е/
Кл
О
Е)
, у
сл
. е
д
IP
A
(C
FU
/C
lF
U
),
ar
bi
tra
ry
u
ni
ts
Действительно, морфологический состав КФП
разных сроков гестации, имея определенные отли-
чия до криообработки, еще в большей степени ма-
нифестировался после криоконсервирования
(табл. 2). В частности, если количество недиффе-
КФП-15
FLCs-15
КФП-18
FLCs-18
ренцированных бластов в криоконсер-
вированных КФП-15 (кКФП-15) изменя-
лось несущественно, то в кКФП-18 повы-
шалось на 26%. Очевидны также более
выраженные изменения в кКФП-18 содер-
жания миелобластов, лимфоцитов, зрелых
гепатоцитов и т. д. Значительные разли-
чия прослеживались при оценке сохран-
ности и количества ядросодержащих
клеток после криоконсервирования КФП
(рис. 5). Эти показатели для кКФП-15
снижались не более чем на 10%, подчер-
кивая “оптимальность” выбранного ре-
жима криоконсервирования. Менее “ком-
фортным” этот режим был для КФП-18,
при котором количество сохранных и яд-
росодержащих клеток было на уровне не
выше 55–65% от контроля.
Исследование фенотипических марке-
ров также показало, что один и тот же
режим криоконсервирования по-разному
more than by 10%, by emphasising the “optimal” way
of selected cryopreservation regimen. This regimen
was less “comfortable” for FLCs-18, when the number
of integral and nucleated cells was at the level not
higher than 55–65% of the control.
èêòåëÊ
éîíüëàòåô
èíå÷åï
sllecrevillateF
ÏÔÊâàòñîñéèêñå÷èãîëîôðîÌ
noitisopmoclacigolohpromCLF
ûòñàëÁ
stsalB àòåÌ -
ûòèöîëåèì
ateM -
setycoleym
îëóíàðà -
ûòèö
olunarG -
setyc
îíîÌ -
ûòèö
onoM -
setyc
îôìèË -
ûòèö
ohpmyL -
setyc
îòàïåà -
ûòèö
otapeH -
setyc.ôèäåÍ
noN - .fid
îðòèðÝ -
orhtyrE -
îìðîÍ -
omroN -
îëåèÌ -
oleyM -
ÔÏÊ - 51
sCLF - 51
åûíâèòàÍ
evitaN 02,1±07,8 08,2±00,92 20,3±03,64 08,0±08,2 08,0±09,1 52,0±01,1 04,0±00,2 04,0±02,1 05,0±03,7
-ðåñíîêîèðK
åûííàâîðèâ
devreserpoyrC
2,1±5,01 0,2±0,82 03,4±02,75 * 10,0±02,1 - - 10,0±02,1 04,0±02,2 * -
ÔÏÊ - 81
sCLF - 81
åûíâèòàÍ
evitaN 33,0±01,6 05,0±01,01 54,2±08,64 46,0±08,21 10,0±00,1 02,0±04,3 - 02,0±04,3 49,0±05,81
-ðåñíîêîèðK
åûííàâîðèâ
devreserpoyrC
04,0±07,7 *,# 46,0±07,11 # 32,2±05,64 # 22,0±05,4 *,# - 31,0±02,2 * - 48,0±07,51 *,# 15,0±08,9 *
194 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 19, 2009, ¹2
ÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
Ò. 19, 2009, ¹2
Study of phenotypic markers also demonstrated the
fact, that the same cryopreservation regimen differently
affected the content of cells being a “candidates” for
hemopoietic precursors among FLCs of different
gestation terms (Fig. 6). So, the index of CD34+ cell
content in cFLCs-15 did not statistically and signifi-
cantly differ from the native control. The content of
CD34+ cells in cFLCs-18 augmented by 16%, that
correlated to the similar increase in subpopulation of
non-differentiated blasts. Such an increase may be fully
stipulated by their relative augmentation at the
background of almost twice decrease in a number of
nucleated cells: myeloblasts, metamyelocytes, granulo-
cytes and hepatocytes) (Table 2). We can not also
exclude the fact, that a relative rise of CD34+ cell
content in cFLCs-18 is related to a selective augmen-
tation of lymphocyte concentration, which morphology
is associated to the certain subpopulations of hemo-
poietic precursors [3].
Indices of Mac-1+ and LFA-1+ cell content in
cFLCs-18, in contrast to cFLCs-15, were augmented,
exceeding the control by 2.5–3 times. Of importance
is to note the fact, that more manifested increase in
Mac-1+ and LFA-1+ cell content occurs in that FL,
which even in native state comprised them in much
higher quantity, i. e. in FLCs-18 (see Fig. 2). This
augmentation is not clearly comparable with cell content
redistribution due to death of nucleated elements. Fetal
liver of 18 gestation days appear to comprise the cells,
being “liable” for undergoing the activation of the
expression of these markers under the effect of
0
20
40
60
80
100
120
0
50
100
150
200
250
300
350
кКФП-15
сFLCs-15
кКФП-18
сFLCs-18
С
од
ер
жа
ни
е
кл
ет
ок
,
%
о
т
ко
нт
ро
ля
C
el
l c
on
te
nt
, %
o
f n
at
iv
e
co
nt
ro
l
С
од
ер
жа
ни
е
кл
ет
ок
,
%
о
т
ко
нт
ро
ля
C
el
l c
on
te
nt
, %
o
f n
at
iv
e
co
nt
ro
l
кКФП-15
сFLCs-15
кКФП-18
сFLCs-18
Рис. 5. Количество сохранных (1) и ядросодержащих (2)
клеток в криоконсервированной ФП разных сроков
гестации (за 100% принято их количество в нативном
материале каждого срока гестации соответственно).
Fig. 5. Number of integral (1) and nucleated (2) cells in
cryopreserved FL of different gestation terms (for 100% we
assumed their number in native material of each gestation
term, correspondingly).
Рис. 6. Содержание СD34+- (1), Мас-1+– (2) и LFA-1+– (3)
клеток в криоконсервированной ФП в зависимости от
срока гестации (за 100% принято их количество в
нативном материале каждого срока гестации соответ-
ственно).
Fig. 6. Content of CD34+ (1), Mac-1+ (2) LFA-1+ (3) cells in
cryopreserved FL depending on gestation term (for 100%
we assumed their number in native material of each gestation
term, correspondingly).
1 2
1
2
1
2
3 1
2
3
влиял на содержание “клеток-кандидатов” в крове-
творные предшественники среди КФП разных
сроков гестации (рис. 6). Так, в кКФП-15 показа-
тель содержания CD34+-клеток достоверно не
отличался от нативного контроля. В кКФП-18
содержание CD34+-клеток увеличивалось на 16%,
что согласуется со схожим увеличением субпопу-
ляции недифференцированных бластов. Такое
повышение вполне может быть обусловлено отно-
сительным их увеличением на фоне почти дву-
кратного снижения количества ядросодержащих
клеток: миелобластов, метамиелоцитов, грануло-
цитов и гепатоцитов (табл. 2). Нельзя также иск-
лючить того, что относительное увеличение содер-
жания CD34+-клеток в кКФП-18 связано с селек-
тивным повышением концентрации лимфоцитов,
морфологию которых ассоциируют с определен-
ными субпопуляциями кроветворных предшест-
венников [3].
Показатели содержания Mac-1+ – и LFA-1+ –
клеток в кКФП-18, в отличие от кКФП-15 (рис. 6),
увеличивались, превосходя контроль в 2,5-3 раза.
Важно заметить, что более выраженное повыше-
ние концентрации Mac-1+ – и LFA-1+ – клеток
происходило в той ФП, которая уже в нативном
виде содержала их значительно больше, т. е. в
КФП-18 (см. рис. 2). Это увеличение явно не
соизмеримо с перераспределением клеток за счет
гибели ядерных элементов. По-видимому, в ФП
18-х суток гестации присутствуют клетки, “пред-
расположенные” к активации экспрессии этих мар-
0
50
100
150
200
0
0,5
1
1,5
2
195 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 19, 2009, ¹2
ÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
Ò. 19, 2009, ¹2
cryopreservation factors. The probability of realisation
of such a supposition is based on the concept about a
possible revert of functional potential of late gestation
term FLCs back to the level of earlier terms under
cryopreservation factors.
Taking into account the fact of expression of mentio-
ned markers on certain types of HSCs, the question
arises if such an increase in concentration of Mac-1+
(as well as LFA-1+) cells after cryopreservation is
accompanied by enrichment of FLCs-18 total popu-
lation with hemopoietic precursors. The results, presen-
ted in Fig. 7 and 8 do not clarify this. For example
after cryopreservation a decrease in the integral
potential of colony formation of FLCs-15, i. e. both
CFUs and CFU-GM, was observed. At the same time
the extent of decrease in the content of precursors of
different differentiation level similarly exceeds the
values of decrease in integrity of FLCs of this gestation
term. In addition, it did not coincide with a decrease
extent of CD34+ cell content as well (see Fig. 5).
Slightly different situation was observed after
FLCs-18 cryopreservation. In this case a distinct re-
distribution of precursor subpopulations was traced.
At the back-ground of a decrease in FCUs-8 and CFU-
GM colony forming activity there was an increase in
CFUs-12 content, coinciding in percentage with a
concentration rise of only CD34+, but not Mac-1+ and
LFA-1+ cells (Fig. 6–8).
These results testify to the fact, that cryopreserva-
tion induces the expression of Mac-1 and LFA-1
Рис. 7. Колониеобразующий потенциал КОЕс фетальной печени
разных сроков гестации после криоконсервирования (за 100%
принято количество колоний, образованных КОЕс нативного
материала каждого срока гестации; за 1 – соответственно ИПА):
– КОЕс-8; – КОЕс-12; ◆– ИПА.
Fig. 7. Colony forming potential of fetal liver CFUs of different gestation
terms after cryopreservation (for 100% we assumed the number of
colonies, formed by CFUs of native material of each gestation term; for
1 we did IPA, correspondingly): – CFUs-8; – CFUs-12; ◆– IPA.
И
П
А
(К
О
Ес
-1
2/
КО
Ес
-8
),
ус
л.
е
д.
IP
A
(C
FU
s-
12
/C
FU
s-
8)
, a
rb
itr
ar
y
un
its
С
од
ер
жа
ни
е
КО
Ес
, %
о
т
ко
нт
ро
ля
C
FU
s
co
nt
en
t,
%
o
f c
on
tro
l
керов под действием факторов криоконсервирова-
ния. Вероятность реализации такого предположе-
ния базируется на концепции о возможности
ревертации под действием факторов криоконсер-
вирования функционального потенциала КФП позд-
них сроков гестации до уровня более ранних сроков.
Учитывая также факт экспрессии указанных
маркеров на определенных формах СКК, возникает
вопрос, не сопровождается ли такое повышение
концентрации Мас-1+ – (как и LFA-1+ –) клеток
после криоконсервирования обогащением общей
популяции КФП-18 кроветворными предшествен-
никами. Представленные на рис. 7 и 8 результаты
не дают, однако, однозначного ответа на этот
вопрос. Так, после криоконсервирования наблюда-
лось снижение интегрального потенциала колоние-
образования КФП-15, т. е. и КОЕс, и КОЕ-ГМ. При
этом степень снижения примерно в равной мере
содержания предшественников разного уровня
дифференцировки превосходила показатели сниже-
ния сохранности КФП этого срока гестации. Более
того, она не совпадала и со степенью снижения
содержания CD34+-клеток (см. рис. 5).
Несколько иная картина наблюдалась после
криоконсервирования КФП-18. В данном случае
прослеживалось четкое перераспределение субпо-
пуляций предшественников. На фоне снижения
колониеобразующей активности КОЕс-8 и КОЕ-ГМ
повышалось содержание КОЕс-12, которое в
процентном выражении совпадало с повышением
концентрации только CD34+-, но не
Мас-1+ – и LFA-1+ – клеток (рис. 6–8).
Эти результаты свидетельствуют о
том, что криоконсервирование индуци-
рует экспрессию структур Мас-1 и LFA-
1 не на кроветворных предшественниках
КФП-18, по крайней мере тех, функцио-
нальный статус которых аттестовался
указанными методами. Другими слова-
ми, появляющиеся после криоконсер-
вирования КФП-18 дополнительные
фракции Мас-1+ – и LFA-1+ – клеток не
являются кроветворными предшест-
венниками. Хотя очевидно, что криокон-
сервирование вызывает перераспреде-
ление клеточных субпопуляций за счет
придания новых качественных свойств
КФП, индуцируя, например, экспрессию на
них маркеров СD34, Мас-1 и LFA-1. При
этом важен факт более выраженных в
КФП-18 такого рода модификаций. Су-
щественно также, что в разной степени
выраженная после криоконсервирования
для разных сроков гестации КФП “супер-
кКФП-15
сFLCs-15
кКФП-18
сFLCs-18
196 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 19, 2009, ¹2
ÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
Ò. 19, 2009, ¹2
Рис. 8. Колониеобразующий потенциал КОЕ-
ГМ фетальной печени разных сроков геста-
ции после криоконсервирования (за 100%
принято количество колоний, образованных
КОЕс нативного материала каждого срока
гестации; за 1 – соответственно ИПА): –
КлОЕ; – КОЕ; ◆ – ИПА.
Fig. 8. Colony forming potential of fetal liver
CFU-GM of different gestation terms after
cryopreservation (for 100% we assumed the
number of colonies, formed by CFUs of native
material of each gestation term; for 1 we did IPA,
correspondingly): – ClFU; – CFU; ◆ –
IPA.
structures in cells not being the hemopoietic precursors
of FLCs-18, at least those, which functional status was
attested by the mentioned methods. By other words,
additional fractions of Mac-1+ and LFA-1+ cells,
appearing after cryopreservation, are not hemopoietic
precursors. Although it is evident, that cryopreservation
causes redistribution of cell subpopulations due to
conferring the new qualitative properties to FLCs, by
inducing, for example, the expression of CD34, Mac-1
and LFA-1 markers on them. At the same time of
importance is the fact that such modifications are more
manifested in FLCs-18. It is also important, that this
“super expression” of mentioned markers in cells was
differently manifested after cryopreservation for FLCs
of various gestation terms, but did not correlate (exclu-
ding CD34 and CFUs-12 among FLCs-18) with chan-
ges of in vivo and in vitro colony forming activity of
the FLCs. This fact testifies that the HSCs may express
Mac-1 and LFA-1 markers, but not all Mac-1+ or LFA-1+
cells are hemopoietic precursors. The similar observa-
tion was made for CD34 marker. Furthermore the
native cells showed the coincidence in character of
changes in cell content vs. gestation terms and chan-
ges in FLC colony forming activity only for two of
three markers: in vivo these are CD34 with CFUs-12
and Mac-1 with CFUs-8; in vitro – CD34 with CFU.
Conclusions
The investigation showed the changes in FLC
phenotypic and functional characteristics due to
elongation of gestation terms, that was manifested in
the decrease in CD34+ cell content and in vivo and in
vitro colony forming potential with a simultaneous
increase in cell content and expression rate of Mac-1
and LFA-1 molecules. In the case of FLCs with
changed initial state due to gestation term there was
экспрессия” клеток с указанными маркерами не
коррелировала (за исключением СD34 и КОЕс-12
среди КФП-18) с изменением колониеобразующей
активности КФП в системах in vivo и in vitro.
Данный факт свидетельствует о том, что СКК
могут экспрессировать маркеры Мас-1 и LFA-1 , но
не все Мас-1+ – или LFA-1+ – клетки являются
кроветворными предшественниками. Подобный
вывод был нами сделан и в отношении СD34-
маркера. К тому же для нативного материала
только по двум из трех маркеров характер
изменения содержания клеток по срокам гестации
совпадал с изменением колониеобразующей
активности КФП: in vivo – СD34 с КОЕс-12 и Мас-1
с КОЕс-8; in vitro – СD34 с КОЕ.
Âûâîäû
Установлено изменение фенотипических и
функциональных характеристик КФП с увеличе-
нием срока гестации, что выражалось в снижениии
количества CD34+-клеток и их колониеобразующего
потенциала в системах in vivo и in vitro с одновре-
менным увеличением количества Mac-1+ – и
LFA-1+ – клеток. На примере КФП с измененным
исходным состоянием в зависимости от срока
гестации показана способность факторов криокон-
сервирования модифицировать структурно-функ-
циональное состояние различных клеточных ком-
партментов. Установлено, что криоконсервиро-
вание способно проявлять эффект селективного
обогащения КФП-18 клетками с фенотипическими
признаками кроветворных предшественников.
Полученные результаты являются основанием
для исследования в дальнейшем особенностей
терапевтического потенциала криоконсервирован-
ных КФП разных сроков гестации.
0
50
100
150
200
0
0,5
1
1,5
2
И
П
А
(К
О
Е/
Кл
О
Е)
, у
сл
.е
д.
IP
A
(C
FU
/C
lF
U
),
ar
bi
tra
ry
u
ni
ts
С
од
ер
жа
ни
е
КО
Е-
ГМ
, %
о
т
ко
нт
ро
ля
C
FU
-G
M
c
on
te
nt
, %
o
f c
on
tro
l
кКФП-15
сFLCs-15
кКФП-18
сFLCs-18
197 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 19, 2009, ¹2
ÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
Ò. 19, 2009, ¹2
References
Afanasiev B.V., Almazov V.A. Human germline hemopoietic cells:
physiology and pathology.– Leningrad: Nauka, 1985.– 204 p.
Belsky Yu.P., Danilets M.G., Belskaya N.V. Role of nitrogen
oxide in immune suppressive and anti-tumour activity of
embryonic liver cells // Bull. of Siberian Branch of Russian
Academy of Medical Sciences.– 2005.– N2.– P. 75–78.
Butenko Z.A., Zak K.P. Achievements and difficulties of
morphological identification of hemopoietic stem cells // Stem
and immune competent cells in norm and under tumour
growth.– Kiev: Nauk. dumka, 1981.– P. 70–81.
Goltsev A.N., Lutsenko E.D., Ostankova L.V. et al. Membrane
structures, determining phenotypical characteristics and
functional state of hemopoietic cells; their possible modification
under the action of cryopreservation factors. Part II //
Problems of Cryobiology.– 1995.– N3.– P. 19–30.
Goltsev A.N. Study of pathophysiological mechanisms of
immunoreactivity manifestation of hemopoetic tissue //
Problems of Cryobiology.– 1997.– N2.– P. 37–41.
Goltsev A.N., Lutsenko E.D., Dubrava T.G. et al. Experimental
substantiation of a possible application of products of
fetoplacental complex (PFPC) to treat autoimmune diseases //
Imunologiya ta Alergologiya.– 1999.– N3.– P. 47.
Goltsev A.N., Rassokha I.V., Lutsenko E.D et al. Intercellular
interactions in immunocompetent sphere at rheumatoid arthritis
following the application of hematopoietic embryonic liver
cells // Problems of Cryobiology.– 2003.– N3.– P. 45–53.
Goltsev A.N., Dubrava T.G., Babenko N.N. et al. Modification
of structural and functional organisation of stem hemopoietic
cells of bone marrow after the effect of factors of low
temperature preservation // Problems of Cryobiology.– 2005.–
Vol. 15, N3.– P. 362–366.
Gorskaya A.Yu., Lutsenko E.D., Ostankova L.V. et al.
Peculiarities of modulating activity manifestation of embryonic
liver cells on murine lymphohemopoietic complex with
autoimmune hemolytic anemia // Problems of Cryobiology.–
2003.– N2.– P. 31–37.
Grischenko V.I., Goltsev A.N. Transplantation of the products
of embryofetoplacental complex. From understanding of
mechanism of the effect to increasing the efficiency of ap-
plication // Problems of Cryobiology.– 2002.– N1.– P. 54–84.
Dubrava T.G. Efficiency of hemopoietic cell cryopreservation
depending on their initial properties: Author’s abstract of the-
sis of candidate of biological sciences.– Kharkov, 1986.– 14p.
Kozlova Yu.A. Study of effect of cryopreservation factors
on hemopoietic system cells under development of autoimmu-
ne diseases: Author’s abstract of thesis of candidate of bio-
logical sciences.– Kharkov, 2005.– 19 p.
Chereshnev V.A., Khaitov R.M., Sidorovich I.G., Rodionov
S.Yu. Effect of human α-fetoprotein on immune reactivity
under tissue transplantation in experiment // Immunologiya.–
2003.– N6.– P. 330–332.
Shereshkov S.I. Culturing of hemopoietic cells on semisolid
nutrient media // Lab. Delo.– 1974.– N3.– P. 146–150.
Литература
Афанасьев Б.В., Алмазов В.А. Родоначальные кровет-
ворные клетки человека: физиология и патология.– Л.:
Наука, 1985.– 204с.
Бельский Ю.П., Данилец М.Г., Бельская Н.В. Роль оксида
азота в иммуносупрессорной и противоопухолевой
активностях клеток эмбриональной печени // Бюллетень
СО РАМН.– 2005.– № 2.– С. 75–78.
Бутенко З.А., Зак К.П. Достижения и трудности морфоло-
гической идентификации стволовых кроветворных кле-
ток // Стволовые и иммунокомпетентные клетки в норме
и при опухолевом росте.– Киев: Наукова думка, 1981.–
С. 70–81.
Гольцев А.Н., Луценко Е.Д., Останкова Л.В. и др. Мемб-
ранные структуры, определяющие фенотипические
характеристики и функциональное состояние кровет-
ворных клеток; возможная их модификация под дейст-
вием факторов криоконсервирования. Часть I // Пробл.
криобиологии.– 1995.– №3.– С. 19–30.
Гольцев А.Н. Изучение патофизиологических механиз-
мов проявления иммунореактивности гемопоэтической
ткани // Пробл. криобиологии.– 1997.– №2.– С. 37–41.
Гольцев А.Н., Луценко Е.Д., Дубрава Т.Г. и др. Эксперимен-
тальное обоснование возможности применения продук-
тов фетоплацентарного комплекса (ПФПК) для лечения
аутоиммунных заболеваний // Імунологія та алергологія.–
1999.– №3.– С. 47.
Гольцев А.Н., Рассоха И.В., Луценко Е.Д. и др. Межкле-
точные взаимодействия в иммунокомпетентной сфере
при ревматоидном артрите после применения гемо-
поэтических клеток эмбриональной печени // Пробл. крио-
биологии.– 2003.– №3.– С. 45–53.
Гольцев А.Н., Дубрава Т.Г, Бабенко Н.Н. и др. Модификация
структурно-функциональной организации стволовых
кроветворных клеток костного мозга после действия
факторов низкотемпературного консервирования //
Пробл. криобиологии.– 2005.– Т. 15, №3.– С. 362–366.
Горская А.Ю., Луценко Е.Д., Останкова Л.В. и др. Осо-
бенности проявления модулирующей активности клеток
эмбриональной печени на лимфогемопоэтическом
комплексе мышей с аутоиммунной гемолитической
анемией // Пробл. криобиологии.– 2003.– №2.– С. 31–37.
Грищенко В.И., Гольцев А.Н. Трансплантация продуктов
эмбриофетоплацентарного комплекса. От понимания
механизма действия к повышению эффективности при-
менения // Пробл. криобиологии.– 2002.– №1.– С. 54–84.
Дубрава Т.Г. Эффективность криоконсервирования
кроветворных клеток в зависимости от их исходных
свойств: Автореф. дис…канд. биол. наук.– Харьков,
1986.– 14 с.
Козлова Ю.О. Вивчення впливу факторів кріоконсер-
вування на клітини гемопоетичної системи в умовах роз-
витку аутоімунних захворювань: Автореф. дис… канд.
біол. наук.– Харків, 2005.– 19 с.
Черешнев В.А., Хаитов Р.М., Сидорович И.Г., Родионов С.Ю.
Влияние α-фетопротеина человека на иммунореактив-
ность при трансплантации тканей в эксперименте //
Иммунология.– 2003.– №6.– С. 330–332.
Шерешков С.И. Культивирование гемопоэтических кле-
ток на полутвердых питательных средах // Лаб. дело.–
1974.– №3.– С. 146–150.
Anderson E.M., Jones D.R.E, Liu D.T.Y., Evans A.A. Gestation
age and cell viability determine the effect of frozen storage
on human fetal HPC preparations // Fetal Diagn.& Ther.– 1996.–
Vol. 11, N6.– P. 427–432.
Bartha J.I., Romero-Carmona R., Comino- Delgado R. et al.
Alpha-fetoprotein and hematopoietic growth factors in amnio-
tic fluid // Obstetrics and Gynecology.– 2000.– Vol. 96, N4.–
P. 588–592.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
shown the capability of cryopreservation factors to
modify structural and functional state of different cell
compartments. Cryopreservation was established as
capable to manifest the effect of selective enrichment
of FLCs-18 with the cells having phenotypic signs of
hemopoietic precursors.
The results obtained are the reason for further
research of peculiarities of therapeutic potential of
cryopreserved FLCs of different gestation terms.
Ema H., Nakauchi H. Expansion of hematopoietic stem cells
in the developing liver of a mouse embryo // Blood.– 2000.–
Vol. 95, N7.– P. 2284–2288.
Emoto M., Kaufmann S.H. Establishment characterization and
long-term maintenance of cultures of human fetal hepatocy-
tes // Trends Immunol. – 2003. – Vol. 24, N7.– P. 364–369.
Frans T.H. Lim., Humphrey H.H., Frederic J.H. Charac-
terization of the human CD 34+ hematopoietic progenitor cell
compartment during the second trimester of pregnancy //
Haematologica.–2005.– Vol. 90, N2.– P. 173–179.
Freitas I., Fracchiolla S., Baronzio G. et al. Stem cell recru-
itment and liver de-differentiation in MMTV-neu (ErbB-2)
transgenic mice // Anticancer Res.– 2003.– Vol. 23, N5.–
P. 3783–3794.
Gilles J.M., Divon M.Y., Bentolia E. et al. Immunophenotypic
characterization of human fetal liver hematopoietic stem cells
during the midtrimester of gestation // Am. J. Obstet.– 1997.–
Vol. 177, N3.– P. 619–625.
Goltsev A.N., Babenko N.N., Dubrava T.G. et. al. Modification
of the state of bone marrow hematopoietic cells after cryo-
preservation // International Journal of Refrigeration.– 2006.–
Vol. 29, N3.– P. 358–367.
Lazaro C.A., Croager E.J., Mitchell C. et al. Liver NKT cells:
an account of heterogeneity // Hepatology.– 2003.– Vol. 38,
N4.– P. 333–362.
Morrison S.J., Hemmati H.D., Wandycz A.M., Weissman I.L.
The purification and characterization of fetal liver hema-
topoietic stem cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.– 1995.–
Vol. 92, N22.– Р. 10302–10306.
Philips R.L., Ernst R.E., Brunk B. et al. The genetic program
of hematopoietic stem cells // Science.– 2000.– Vol. 288,
N5471.– P. 1635–1640.
Prosper F., Stroncek D., McCarthy J. B. et al. Mobilization and
homing of peripheral blood progenitors is related to rever-sible
downregulation of alpha 4 beta 1 integrin expression and func-
tion // J. Clin. Invest.– 1998.– Vol. 101, N11.– P. 2456–2467.
Roy V., Miller J.S., Verfaille C.M. Phenotypic and functional
characterization of committed and primitive myeloid and
lymphoid hematopoietic precursors in human fetal liver // Exp.
Hematol.– 1997.– Vol. 25, N5.– P. 387–394.
Roy V., Verfaille C.M. Expression and function of cell adhesion
molecules on fetal liver, cord blood and bone marrow hema-
topoietic progenitors: implication for anatomical localization
and developmental stage specific regulation of hematopoiesis //
Exp. Hematol.– 1999.– Vol. 27, N2.– P. 302–312.
Sasaki K., Sonoda Y. Histometrical and three-dimensional
analysis of liver hematopoiesis in the mouse embryo // Arch.
histol. – 2000.–Vol. 63, N2.– P.137–146.
Stopka T., Zivny J.H., Stopkova P. et al. Human hematopoietic
progenitors express erythropoietin // Blood.– 1998.– Vol. 91,
N10.– P. 3766–3772.
Surbek D.V., Steinman C., Burk M. et al. Developmental
changes in adhesion molecule expression in umbilical cord
blood CD 34+ hematopoietic progenitor and stem cells // Am.
J. Obstet. Gynecol.– 2000.– Vol. 183, N5.– P. 1152–1157.
Suzuki A., Zheng Y., Kaneko S. et al. Clonal identification and
characterization of self-renewing pluripotent stem cells in
the developing liver // J. Cell Biol.– 2002.– Vol. 156, N1.–
P. 173–184.
Tavassoli M., Hardy C.L. Molecular basis of homing of
intravenously transplanted stem cells // Blood. – 1990. –
Vol. 76, N6.– Р. 1059.
Teixido J., Hemier M.E., Greenberg J.S., Ankelesaria P.
Role of β1 and β2 integrins in the adhesion of human CD 34hi
stem cells to bone marrow stroma // J. Clin Invest.–1992.–
Vol. 90, N2.– P. 358–367.
Till J.E., McCulloch E.A. A direct measurement of the radiation
sensitivity of normal mouse bone marrow cells // Rad. Res.–
1961.– Vol. 14, N12.– P. 213–222.
Anderson E.M., Jones D.R.E, Liu D.T.Y., Evans A.A. Gestation
age and cell viability determine the effect of frozen storage
on human fetal HPC preparations // Fetal Diagn.& Ther.– 1996.–
Vol. 11, N6.– P. 427–432.
Bartha J.I., Romero-Carmona R., Comino- Delgado R. et al.
Alpha-fetoprotein and hematopoietic growth factors in amnio-
tic fluid // Obstetrics and Gynecology.– 2000.– Vol. 96, N4.–
P. 588–592
Ema H., Nakauchi H. Expansion of hematopoietic stem cells
in the developing liver of a mouse embryo // Blood.– 2000.–
Vol. 95, N7.– P. 2284–2288.
Emoto M., Kaufmann S.H. Establishment characterization and
long-term maintenance of cultures of human fetal hepatocy-
tes // Trends Immunol. – 2003. – Vol. 24, N7.– P. 364–369.
Frans T.H. Lim., Humphrey H.H., Frederic J.H. Charac-
terization of the human CD 34+ hematopoietic progenitor cell
compartment during the second trimester of pregnancy //
Haematologica.–2005.– Vol. 90, N2.– P. 173–179.
Freitas I., Fracchiolla S., Baronzio G. et al. Stem cell recru-
itment and liver de-differentiation in MMTV-neu (ErbB-2)
transgenic mice // Anticancer Res.– 2003.– Vol. 23, N5.–
P. 3783–3794.
Gilles J.M., Divon M.Y., Bentolia E. et al. Immunophenotypic
characterization of human fetal liver hematopoietic stem cells
during the midtrimester of gestation // Am. J. Obstet.– 1997.–
Vol. 177, N3.– P. 619–625.
Goltsev A.N., Babenko N.N., Dubrava T.G. et. al. Modification
of the state of bone marrow hematopoietic cells after cryo-
preservation // International Journal of Refrigeration.– 2006.–
Vol. 29, N3.– P. 358–367.
Lazaro C.A., Croager E.J., Mitchell C. et al. Liver NKT cells:
an account of heterogeneity // Hepatology.– 2003.– Vol. 38,
N4.– P. 333–362.
Morrison S.J., Hemmati H.D., Wandycz A.M., Weissman I.L.
The purification and characterization of fetal liver hema-
topoietic stem cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.– 1995.–
Vol. 92, N22.– Р. 10302–10306.
Philips R.L., Ernst R.E., Brunk B. et al. The genetic program
of hematopoietic stem cells // Science.– 2000.– Vol. 288,
N5471.– P. 1635–1640.
Prosper F., Stroncek D., McCarthy J. B. et al. Mobilization
and homing of peripheral blood progenitors is related to rever-
sible downregulation of alpha 4 beta 1 integrin expression
and func-tion // J. Clin. Invest.– 1998.– Vol. 101, N11.– P. 2456–
2467.
Roy V., Miller J.S., Verfaille C.M. Phenotypic and functional
characterization of committed and primitive myeloid and
lymphoid hematopoietic precursors in human fetal liver // Exp.
Hematol.– 1997.– Vol. 25, N5.– P. 387–394.
Roy V., Verfaille C.M. Expression and function of cell adhesion
molecules on fetal liver, cord blood and bone marrow hema-
topoietic progenitors: implication for anatomical localization
and developmental stage specific regulation of hematopoiesis //
Exp. Hematol.– 1999.– Vol. 27, N2.– P. 302–312.
Sasaki K., Sonoda Y. Histometrical and three-dimensional
analysis of liver hematopoiesis in the mouse embryo // Arch.
histol. – 2000.–Vol. 63, N2.– P.137–146.
Stopka T., Zivny J.H., Stopkova P. et al. Human hematopoietic
progenitors express erythropoietin // Blood.– 1998.– Vol. 91,
N10.– P. 3766–3772.
Surbek D.V., Steinman C., Burk M. et al. Developmental
changes in adhesion molecule expression in umbilical cord
blood CD 34+ hematopoietic progenitor and stem cells // Am.
J. Obstet. Gynecol.– 2000.– Vol. 183, N5.– P. 1152–1157.
Suzuki A., Zheng Y., Kaneko S. et al. Clonal identification and
characterization of self-renewing pluripotent stem cells in
the developing liver // J. Cell Biol.– 2002.– Vol. 156, N1.–
P. 173–184.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27.
28.
29.
30.
31.
32.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27.
28.
29.
30.
31.
32.
33.
34.
35.
ÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
Ò. 19, 2009, ¹2
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 19, 2009, ¹2
198
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 19, 2009, ¹2
ÏÐÎÁËÅÌÛ
ÊÐÈÎÁÈÎËÎÃÈÈ
Ò. 19, 2009, ¹2
199
Tavassoli M., Hardy C.L. Molecular basis of homing of
intravenously transplanted stem cells // Blood. – 1990. –
Vol. 76, N6.– Р. 1059.
Teixido J., Hemier M.E., Greenberg J.S., Ankelesaria P.
Role of β1 and β2 integrins in the adhesion of human CD 34hi
stem cells to bone marrow stroma // J. Clin Invest.–1992.–
Vol. 90, N2.– P. 358–367.
Till J.E., McCulloch E.A. A direct measurement of the radiation
sensitivity of normal mouse bone marrow cells // Rad. Res.–
1961.– Vol. 14, N12.– P. 213–222.
Verfaille C. Adhesion receptors as regulators of hemato-
poietic process // Blood.– 1998.– Vol. 92, N8.– P. 2609–2612.
Wickenhauser C., Hillienhof A., Jungheim K. et al. Detection
and quantification of transforming growth factor beta (TGF-
beta) and platelet-derived growth factor (PDGF) release by
normal human megakaryocytes // Leukemia.– 1995.– Vol. 9,
N2.– P. 310–315.
Accepted in 03.03.2009
33.
34.
35.
36.
37.
Verfaille C. Adhesion receptors as regulators of hemato-
poietic process // Blood.– 1998.– Vol. 92, N8.– P. 2609–2612.
Wickenhauser C., Hillienhof A., Jungheim K. et al. Detection
and quantification of transforming growth factor beta (TGF-
beta) and platelet-derived growth factor (PDGF) release by
normal human megakaryocytes // Leukemia.– 1995.– Vol. 9,
N2.– P. 310–315.
Поступила 03.03.2009
Рецензент А.Ю. Петренко
36.
37.
|